调补肺肾三法调控慢性阻塞性肺疾病稳定期大鼠炎症反应的R值综合评价

目的采用R值综合评价法多指标综合评价调补肺肾三法(补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期大鼠全身系统性及肺脏局部炎症反应的调控作用。方法 120只大鼠随机分为对照组、模型组、补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组、氨茶碱组各20只,除对照组外,其余各组采用香烟熏吸联合细菌感染法制备COPD稳定期模型,于第9周起对照组、模型组给予2 ml生理盐水灌胃,其余各组分别给予补肺健脾方4.84 g/(kg·d)、补肺益肾方4.44 g/(kg·d)、益气滋肾方4.84 g/(kg·d)及氨茶碱2.3 mg/(kg·d),每日2次,灌胃至第20周。第20、32周检测全身系统性炎症指标和肺脏局部(肺泡灌洗液和肺组织)炎症指标,采用多指标R值综合评价法对上述指标进行综合评价。结果第20周和综合20、32周,调补肺肾三法对系统性炎症各指标具有明显的纠正作用(P0.05或P0.01);第32周,补肺益肾的纠正强度显著(P0.01),其强度优于氨茶碱(P0.05)。综合20、32周,纠正强度依次为补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾、氨茶碱。第20周及综合20、32周,调补肺肾三法对肺脏局部炎症各指标的纠正强度显著(P0.05或P0.01)。结论调补肺肾三法和氨茶碱均可综合调节COPD炎症指标的表达,其中补肺健脾方在调节系统性及局部炎症反应方面均具有明显的优势,而补肺益肾方在调节系统性炎症反应方面具有较明显的远后效应。     

调补肺肾3法调控COPD大鼠肺脏炎症信号通路的R值综合评价研究

前期研究已证实,调补肺肾(补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾)3法能够调控慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠肺脏炎症信号通路,从而减轻炎症反应,为综合评价调补肺肾3法对炎症信号通路的综合调节作用,本研究采用R值综合评价法对其进行综合评价.将大鼠随机分为空白、模型、补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾、氨茶碱6组,采用香烟熏吸联合细菌感染制备COPD大鼠模型,第9～ 20周给予相应药物灌胃,停药至第32周以观察远后效应,第20,32周分2批取材,检测指标:①连接蛋白/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)通路:JAK2 mRNA和STAT-1,STAT-3,STAT-5,JAK-2蛋白;②核转录因子kappa B(NF-κB)通路:Smad2 mRNA和I-κB,NF-κB及TGF-β1蛋白;③过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)及抗氧化通路:SOD,PGE mRNA和PPARγ蛋白.经多指标R值综合评价法分析显示,第20,32周及综合20,32周,调补肺肾3法和氨茶碱对JAK/STAT通路5指标、NF-κB通路4指标和PPARγ及抗氧化通路3指标均具有较显著的综合纠正强度.综合20,32周,对JAK/STAT通路纠正强度依次为补肺健脾、益气滋肾、补肺益肾、氨茶碱,其中补肺健脾作用尤为显著;对NF-κB通路的纠正强度依次为补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾、氨茶碱,其中补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾的纠正强度均较氨茶碱显著;对PPARγ及抗氧化通路纠正强度均依次为补肺益肾、益气滋肾、补肺健脾、氨茶碱.总之,调补肺肾3法对COPD肺脏炎症信号通路具有较好的纠正作用及远后效应,补肺健脾方在JAK/STAT,NF-κB信号通路方面占优势,而补肺益肾方和益气滋肾方在调节PPARγ及抗氧化通路方面略占优势.可见,R值综合评价法不仅能评价药物的综合疗效,而且能够得出多种研究药物优劣顺序及药物主要作用靶点.     

调补肺肾三法对慢性阻塞性肺疾病大鼠右心室重构的影响和远后效应

目的评价调补肺肾三法对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠右心室重构的影响和远后效应。方法 120只大鼠随机分为对照组、模型组、补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组和氨茶碱组,每组20只。除对照组外其余各组采用香烟暴露联合细菌感染法制作COPD模型8周,于第9周起分别给予补肺健脾方、补肺益肾方、益气滋肾方及氨茶碱灌胃至第20周。于第20、32周分批取材,观察大鼠心肌组织超微结构,计算右心肥大指数(RVHI)和心肌组织细胞因子的表达。结果第20、32周时,各给药组及对照组大鼠RVHI均低于模型组(P<0.01);补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组大鼠RVHI较氨茶碱组显著降低(P<0.05或P<0.01)。第20、32周时,模型组大鼠肌节长度较对照组缩短(P<0.05),补肺健脾组较模型组增长(P<0.01)。第20、32周时,模型组大鼠心脏组织细胞因子表达高于其余各组(P<0.01);补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组大鼠内皮素-1(ET-1)表达较氨茶碱组明显降低(P<0.01)。结论调补肺肾三法可改善COPD右心室重构并有明显远后效应,其中以补肺健脾方和补肺益肾方尤为显著,其作用机制可能与调节细胞因子有关。     

调补肺肾三法对慢性阻塞性肺疾病稳定期模型大鼠肺胶原和蛋白酶调节作用的R值综合评价

目的采用R值综合评价法多指标综合评价调补肺肾三法(补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期大鼠肺胶原和蛋白酶的调节作用。方法采用香烟熏吸联合细菌感染法制备COPD稳定期大鼠模型,于实验第9周起分别给予补肺健脾方、补肺益肾方、益气滋肾方及氨茶碱灌胃治疗至第20周,于实验第20、32周检测大鼠肺胶原和蛋白酶的9个指标,包括Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Ⅳ型胶原、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)积分光密度(IOD)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)IOD、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)IOD,MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA、TIMP-1 mRNA。建立R值综合评价法,并以此对肺胶原和蛋白酶的调节作用进行综合评价。结果第20、32周及综合20、32周,调补肺肾三法和氨茶碱对肺胶原和蛋白酶综合9指标的纠正强度显著(P0.01)。第20、32周,综合纠正强度依次为补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾、氨茶碱,且第32周补肺健脾、补肺益肾的纠正强度较氨茶碱显著,补肺益肾的纠正强度较本组第20周显著(P0.05)。综合20、32周,综合纠正强度依次为补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾、氨茶碱,且补肺健脾和补肺益肾纠正强度较氨茶碱显著(P0.05或P0.05)。结论调补肺肾三法对COPD稳定期大鼠肺胶原和蛋白酶的综合调节作用显著,且具有较好的远后效应,以补肺健脾、补肺益肾效果更佳。     

调补肺肾三法调节慢性阻塞性肺疾病稳定期大鼠T淋巴细胞亚群的R值综合评价

目的 采用R值综合评价法多指标综合评价调补肺肾三法(补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期大鼠T淋巴细胞亚群的调节作用.方法 采用香烟熏吸联合细菌感染法制备COPD模型,于第9周分别给予补肺健脾方、补肺益肾方、益气滋肾方及氨茶碱至第20周.于第20、32周测定外周血和肺泡灌洗液中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及CD4+ CD25+表达.采用R值综合评价法,对调补肺肾三法调节COPD稳定期T淋巴细胞亚群进行综合评价.结果 第20、32周及综合20、32周,调补肺肾三法和氨茶碱对外周血和肺泡灌洗液中T淋巴细胞亚群各指标均具有较显著的综合纠正作用(P＜0.01).综合20、32周,各治疗方案对外周血T淋巴细胞亚群的纠正强度依次为补肺健脾、氨茶碱、补肺益肾、益气滋肾;对肺泡灌洗液中T淋巴细胞亚群纠正强度依次为补肺健脾、氨茶碱、益气滋肾、补肺益肾,其中补肺健脾的纠正强度较补肺益肾显著(P＜0.05).结论 调补肺肾三法和氨茶碱对COPD稳定期大鼠外周血和肺脏局部T淋巴细胞亚群均具有明显的调节作用,并具有良好的远后效应,以补肺健脾方尤为显著.     

调补肺肾法对COPD大鼠JAK/STAT信号转导的影响及远后效应

目的:评价调补肺肾3种方法(补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾法)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠JAK/STAT信号转导的影响及远后效应.方法:大鼠随机分为对照组、模型组、补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组和氨茶碱组,采用香烟暴露联合反复细菌感染法制备COPD大鼠模型.于第9周对照组、模型组给予生理盐水,其余组分别给予相应药物灌胃,于第20,32周分批取材,观察肺组织病理,p-JAK2,p-STAT1,p-STAT3,p-STAT5蛋白表达及JAK2和SOCS3 mRNA表达.结果:第20,32周时,模型组JAK2 mRNA和p-JAK2,p-STAT1,p-STAT3,p-STAT5蛋白表达较对照组升高(P＜0.01),3个中药(补肺健脾方、补肺益肾方、益气滋肾方)组及氨茶碱组较模型组显著降低(P ＜0.05,P＜0.01).模型组SOCS3 mRNA较对照组升高(P＜0.01),3个中药组及氨茶碱组较模型组明显升高(P＜0.01),3个中药组明显高于氨茶碱组(P ＜0.05,P＜0.01).与第20周比较,第32周补肺健脾组JAK2mRNA和p-JAK2,p-STAT3,p-STAT5蛋白表达均显著降低(P ＜0.05,P＜0.01),补肺益肾组p-STAT3降低(P＜0.01),益气滋肾组p-STAT3,p-STAT5降低(P ＜0.05,P＜0.01),氨茶碱组上述指标均无显著性差异.结论:调补肺肾3法可明显减轻COPD肺组织损伤,且具有良好的远后效应,可能与调控JAK/STAT信号转导有关,其中补肺健脾方在降低p-JAK2,p-STAT3,p-STAT5表达方面,补肺益肾方在降低p-STAT3,益气滋肾方在降低p-STAT3,p-STAT5表达方面具有良好的远后效应.     

调补肺肾三法治疗慢性阻塞性肺疾病大鼠疗效及远后效应

目的:评价调补肺肾(补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾)三法治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期大鼠的疗效和远后效应。方法:大鼠随机分为对照组、模型组、补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组和氨茶碱组,采用香烟熏吸联合细菌感染法制作COPD稳定期模型,于第9周起分别给予补肺健脾方、补肺益肾方、益气滋肾方及氨茶碱至第20周。于第20、32周分批取材,观察大鼠肺功能和肺组织形态学变化。结果:模型组潮气量(TV)、呼气峰流速(PEF)和50%潮气量呼气流量(EF50)较对照组显著降低(P0.01),病理损伤严重。第20、32周时,3个中药组上述指标均较模型组明显改善(P0.05,P0.01)。第20周时,3个中药可明显减轻肺组织病理损伤,表现在改善大鼠支气管壁增厚、支气管狭窄、肺泡破裂和融合、肺小动脉壁增厚(P0.05,P0.01),并在32周仍有显著疗效(P0.05,P0.01)。结论:调补肺肾三法治疗COPD稳定期大鼠具有良好的疗效和远后效应。     

调补肺肾三法调节COPD大鼠右心室重塑的R值综合评价研究

目的：基于所建立的R值综合评价法,多指标综合评价调补肺肾（补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾）三法对慢性阻塞性肺疾病（COPD）合并右心室重塑的疗效及机制的纠正作用。方法：基于前期研究数据,选取以下指标：①右心室组织形态学指标：右心肥大指数（RVHI）,心肌肌节长度,心肌线粒体体密度（Vv）、比表面（δ）、比膜面（δm）,心脏小动脉线粒体Vv、δ、δm;②右心室重塑机制：右心组织内皮素-1（ET-1）、转化生长因子-β （TGF-β）、血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和组织金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）。采用R值综合评价法,多指标综合评价调补肺肾三法对COPD合并右心室重塑的效果及对其机制的纠正作用。结果：①右心室重塑的改善作用：第20周,纠正强度依次为补肺健脾、补肺益肾、氨茶碱、益气滋肾。第32周和综合20、32周,纠正强度均依次为补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾、氨茶碱。其中综合20、32周补肺健脾的纠正强度较氨茶碱显著（P<0.01）。各治疗组第32周时仍维持第20周状态,表示各治疗组均有较好的远后效应。②右心室重塑机制的纠正作用：第20周,综合纠正强度依次为补肺健脾、补肺益肾、氨茶碱、益气滋肾,其中补肺健脾的纠正强度较氨茶碱、益气滋肾显著（P<0.01）;补肺益肾的纠正强度较益气滋肾显著（P<0.05）。第32周,纠正强度依次为益气滋肾、氨茶碱、补肺健脾、补肺益肾。综合20、32周,纠正强度依次为补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾、氨茶碱。调补肺肾三法和氨茶碱第32周时仍维持第20周纠正强度,表示各治疗方案均有较好的远后效应。结论：本研究经R值综合评价法发现调补肺肾三法可改善COPD合并右心室重塑状态,调节心脏重塑相关因子的表达,以补肺健脾较显著,且均有较好的远后效应。     

调补肺肾三法对COPD大鼠T淋巴细胞亚群及CD4+CD25+的影响及远后效应

目的评价调补肺肾（补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾）三法对慢性阻塞性肺疾病（chronicob—structivepulmonarydisease,COPD）大鼠T淋巴细胞亚群及CD4＋CD25＋的影响及远后效应。方法120只大鼠随机分为对照组、模型组、补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组和氨茶碱组,每组20只。除对照组外,其余大鼠均采用香烟熏吸联合细菌感染法制备COPD模型,于第9周起3个中药组及氨茶碱组分别给予补肺健脾方、补肺益肾方、益气滋肾方及氨茶碱灌胃至第20周。分别于第20、32周观察肺组织病理、外周血和支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolarlavagefluid,BALF）中T淋巴细胞亚群（CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋／CD8＋）及CD4＋CD25＋的变化。结果第20、32周时,模型组肺组织损伤明显,外周血和BALF中CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋CD25＋水平较对照组明显降低（P〈0．05,P〈0．01）,3个中药组及氨茶碱组上述指标较模型组升高（P〈0．05,P〈0．01）;3个中药组外周血和BALF中CD3＋、CD4＋显著高于氨茶碱组（P〈0．05,P〈0．01）;补肺健脾组外周血CD4＋较补肺益肾组、益气滋肾组升高（P〈0．01）。第20周时,补肺健脾组较氨茶碱组升高（P〈0．01）;3个中药组CD4＋水平较氨茶碱组明显升高（P〈0．05,P〈0．01）。第32周时,3个中药组和氨茶碱组CD4＋／CD8＋水平较模型组升高（P〈0．05）;补肺健脾组和补肺益肾组CD4＋较氨茶碱组升高（P〈0．05,P〈0．01）。与第20周比较,补肺健脾组第32周BALF中CD4＋／CD8＋显著升高（P〈0．05）,益气滋肾组外周血和BALF中CD4＋CD25＋显著降低（P〈0．05）。结论调补肺肾三法治疗COPD的疗效和远后效应机制可能与调节T淋巴细胞亚群及CD4＋CD25＋水平有关,其中补肺健脾方在调节外周血和BALF中CD4＋、CD4＋／CD8＋方面疗效突出。     

补肺益肾组分方对PM2.5诱发慢性阻塞性肺疾病加重模型大鼠上皮-间质转化的影响

目的 观察PM2.5及补肺益肾组分方对慢性阻塞性肺疾（COPD）大鼠上皮-间质转化（EMT）的作用，并探讨其作用机制。方法 将50只健康SD大鼠随机分为：空白组、COPD组、大气颗粒物（PM2.5）组、补肺益肾组分方组（组分方组）和氨茶碱组，每组10只。除空白组外采用香烟熏吸联合反复克雷伯杆菌感染制备COPD大鼠模型，除空白组和COPD组外以大气实时浓缩PM2.5对其进行全身暴露。自暴露第1天起，组分方组和氨茶碱组分别给予补肺益肾组分方[6.48 mg/（kg·d）]或氨茶碱[54 mg/（kg·d）]灌胃，其余各组给予生理盐水，1次/天，持续8周。检测大鼠最大呼气中期流速（MMEF）和功能残气量（FRC）；免疫组化法检测肺组织α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（COL Ⅰ）、Ⅲ型胶原蛋白（COL Ⅲ）表达；Western Blot检测肺组织E-钙黏附蛋白（E-cad）、N-钙黏附蛋白（N-cad）、α-SMA、COL Ⅰ、Smad家族成员（Smad）4、p-Smad2/3表达；ELISA法检测血清和肺组织匀浆中TGF-β1水平。结果 与空白组比较，COPD组MMEF及E-c...     

补肺益肾方对COPD大鼠气道黏液高分泌及肺组织Notch3，HES1的影响

目的:观察补肺益肾方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道黏液高分泌及Notch信号通路相关蛋白Notch3,HES家族发状分裂相关增强子1(HES1)的影响,探讨其作用机制。方法:将48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、补肺益肾方组和氨茶碱组,每组12只。第1~12周,采用香烟烟雾暴露联合反复细菌感染方法制备COPD稳定期大鼠模型;第13~20周,空白组和模型组给予生理盐水灌胃,治疗组给予相应药物灌胃(补肺益肾方组3.7 g·kg^-1·d-1,氨茶碱组54 mg·kg^-1·d-1)。第20周灌胃结束后取材,观察肺组织病理,检测大鼠肺功能,肺泡灌洗液肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),黏蛋白5AC(MUC5AC)和肺组织Notch3,HES1,MUC5AC mRNA与蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠肺功能显著降低(P<0.05,P<0.01),平均肺泡数显著降低(P<0.01),肺泡平均截距显著升高(P<0.01),肺泡灌洗液TNF-α,IL-6和MUC5AC显著升高(P<0.01),肺组织Notch3,HES1和MUC5AC基因与蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,补肺益肾方组和APL组肺功能和肺病理损伤显著改善(P<0.05,P<0.01),肺泡灌洗液TNF-α,IL-6和MUC5AC显著降低(P<0.01),肺组织Notch3,HES1和MUC5AC基因与蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:补肺益肾方抑制COPD大鼠气道黏液高分泌,其机制与调控Notch3,HES1蛋白有关。     

调补肺肾三法对香烟烟雾提取物和脂多糖刺激单核巨噬细胞THP-1分泌细胞因子的影响

目的 探讨调补肺肾三法治疗慢性阻塞性肺疾病的分子机理. 方法 用香烟烟雾提取物(CSE)和脂多糖(LPS)及两者联合(LC)体外刺激单核巨噬细胞THP-1,每种刺激物下分为正常组(加入20％正常大鼠血清)、刺激物组(加入20％正常大鼠血清和5％CSE,或75pg/ml LPS,或5％CSE和75pg/ml LPS)、补肺益肾组、补肺健脾组和益气滋肾组(加20％相应方药大鼠含药血清和5％CSE,或75pg/ml LPS,或5％CSE和75pg/ml LPS),检测各组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-3(IL 3)、巨噬细胞-粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)、转化生长因子-β(TGF-β)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)、超氧化物歧化酶(SOD)、CD36、磷脂酸磷酸酶2B(PPAP2B),应用网络工具分析细胞因子的转录因子.结果 与正常组比较,CSE组、LPS组和LC组分泌MMP-9增加,分泌TNF-α和PPAP2B减少;CSE组分泌TIMP-1减少,LPS组分泌TGF-β增加,LC组GM-CSF分泌增加(P＜0.05或P＜0.01).3个复方对细胞分泌的各因子调节明显不同(P＜0.05或P＜0.01),其中补益肺肾方在各条件下,所调节分泌的因子和涉及转录因子较为广泛. 结论 CSE和LPS对THP-1分泌细胞因子影响不同,调补肺肾三法在一定程度上都对CSE和LPS刺激下分泌细胞因子有调控作用,补益肺肾方药作用最明显而广泛,补肺健脾方次之.     

中药补肺活血胶囊对PM2.5模型小鼠肺炎性损伤的影响

目的观察补肺活血胶囊对PM2.5致小鼠肺组织炎性损伤的影响。方法采用鼻腔滴注PM2.5悬液的方法建立PM2.5小鼠肺损伤修复模型,分为空白对照组,低、中、高剂量染毒组,低、中、高剂量染毒中药组,每组10只。运用免疫组化法、ELISA法检测各组小鼠肺组织中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的蛋白表达,及IL-1β、IL-10等炎性因子的含量。结果鼻腔滴注PM2.5悬液可以成功建立肺损伤模型,肺组织炎性损伤程度随染毒剂量的增加而加重;中药补肺活血胶囊干预后,小鼠肺间质HMGB1蛋白表达降低(P0.05),肺组织IL-1β、IL-10等炎性因子的含量降低(P0.05)。结论补肺活血胶囊可以减少肺组织中炎性因子的分泌,改善肺炎性损伤程度。     

补肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病稳定期模型小鼠肺组织炎症反应的影响

目的:观察补肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期模型小鼠肺组织炎症反应的影响,从该角度初步阐释补肺颗粒治疗COPD稳定期的作用机制。方法:80只C57BL/6J小鼠随机分为两组,空白对照组20只和COPD造模组60只,后者采用香烟烟雾暴露制作COPD模型,造模后两组各随机抽取10只取材,而后将COPD造模组剩余50只小鼠随机分为5组,即空白治疗组、地塞米松组、补肺颗粒低剂量组、补肺颗粒中剂量组和补肺颗粒高剂量组,每组10只。空白对照组和空白治疗组给予蒸馏水灌胃,地塞米松组给予地塞米松水溶液灌服,补肺颗粒低、中、高剂量组分别给予含不同生药浓度的补肺颗粒水溶液灌胃,剂量均为10 mL/kg,1次/d,疗程4周。观察各组小鼠肺组织病理学变化(HE染色),肺组织炎症评分和肺泡平均内衬间隔,应用酶联免疫吸附法测定小鼠肺泡灌洗液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-10(IL-10)表达水平。结果:造模后,与空白对照组比较,COPD造模组小鼠肺组织病理学切片光镜下观察可见明显炎症和肺气肿改变,肺组织炎症评分和肺泡平均内衬间隔明显增高(P 0. 05),肺泡灌洗液TNF-α和IL-1β表达水平显著增高(P 0. 05),而IL-4和IL-10表达水平明显降低(P 0. 05)。治疗后,与空白治疗组比较,地塞米松组、补肺颗粒中、高剂量组小鼠肺组织炎症和肺气肿病变程度减轻,肺组织炎症评分和肺泡平均内衬间隔降低(P 0. 05),肺泡灌洗液TNF-α和IL-1β表达水平显著下降(P 0. 05),IL-4和IL-10表达水平明显升高(P 0. 05)。补肺颗粒高剂量组效果与地塞米松组相似(P 0. 05),优于补肺颗粒中剂量组(P 0. 05)。结论:补肺颗粒通过下调肺泡灌洗液中促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β水平,上调抗炎性细胞因子IL-4和IL-10表达,进而抑制肺组织炎症反应,可能是其治疗COPD稳定期的作用机制之一。     

清肺益肾方对肺炎克雷伯杆菌致老龄大鼠肺炎细胞因子的影响

目的:观察清肺益肾方对肺炎克雷伯杆菌致老龄大鼠肺炎外周血肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β),白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)表达的影响,揭示清肺益肾方对老年肺炎肺脏保护与治疗作用机制。方法:利用肺炎克雷伯杆菌制作老龄大鼠肺炎模型,分为空白组,模型组,左氧氟沙星组,清肺益肾方组高剂量组,清肺益肾方中剂量组,清肺益肾方低剂量组,造模成功后第2天开始灌胃给药。空白组,模型组均给予生理盐水10 g·(kg·d)~(-1);左氧氟沙星组给予左氧氟沙星混悬液42 mg·(kg·d)~(-1);清肺益肾方高剂量组每天给予清肺益肾方提取液30.66 g·(kg·d)~(-1),清肺益肾方中剂量组每天给予清肺益肾方提取液15.33 g·(kg·d)~(-1),清肺益肾方低剂量组每天给予清肺益肾方提取液7.67 g·(kg·d)~(-1),同时给药左氧氟沙星42 mg·(kg·d)~(-1),连续给药6 d。分别于造模后第2天,第6天尾部取血并计数白细胞总数和中性粒细胞数,并用ELISA方法检测外周血中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α分泌水平,同时通过细菌培养计算肺组织中菌落数。结果:造模后2 d和6 d,模型组大鼠外周血白细胞(white blood cell,WBC)和多形核白细胞(polymorphonuclear,PMN)均高于空白组(P0.01);模型组大鼠BALF中WBC,多形核白细胞(polymorphonuclear,PMN)计数和肺组织菌落计数均高于空白组(P0.05或P0.01);左氧氟沙星组、清肺益肾方高剂量组、清肺益肾方中剂量组、清肺益肾方低剂量组WBC和PMN均低于模型组(P0.01);清肺益肾方高剂量组,清肺益肾方中剂量组,清肺益肾方低剂量组低于左氧氟沙星组(P0.05);模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平均高于空白组(P0.01),左氧氟沙星组、清肺益肾方高剂量组、清肺益肾方中剂量组、清肺益肾方低剂量组TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平均低于模型组(P0.01);清肺益肾方高剂量组、清肺益肾方中剂量组、清肺益肾方低剂量组、TNF-α分泌量低于左氧氟沙星组,但无统计学意义(P0.05);清肺益肾方中剂量组和清肺益肾方高剂量组IL-1β分泌量低于左氧氟沙星组(P0.05),清肺益肾方低剂量组IL-1β含量低于左氧氟沙星组,但无统计学意义(P0.05),清肺益肾方高剂量组、清肺益肾方中剂量组、清肺益肾方低剂量组IL-6分泌量均低于左氧氟沙星组(P0.01);清肺益肾方高剂量组、清肺益肾方中剂量组、清肺益肾方低剂量组IL-8分泌量低于左氧氟沙星组,但清肺益肾方低剂量组和清肺益肾方高剂量组IL-8分泌量组间比较无统计学意义(P0.05)。结论:清肺益肾方复合左氧氟沙星能够较好地治疗肺炎克雷伯杆菌致老龄大鼠肺炎,减少炎性细胞因子分泌。     

补肺健脾方含药血清对香烟烟雾提取物诱导L6细胞中ROS、MnSOD和CAT表达的影响

目的探讨补肺健脾方治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)骨骼肌功能障碍的可能作用机制。方法50只大鼠分为空白对照组、补肺健脾方组各25只。空白对照组大鼠给予生理盐水2 ml/只灌胃,补肺健脾方组给予补肺健脾方悬乳液4. 51 g/(kg·d)的10倍剂量灌胃,每日1次。于第7日灌胃后1 h腹主动脉取血制备含药血清。正常培养的L6细胞分为正常组(10%空白对照组血清)、模型组[10%空白对照组血清+10%香烟烟雾提取物(CSE)]、补肺健脾组(10%补肺健脾方组血清+10%CSE)、西药组[10%空白对照组血清+10%CSE+5 mmol/L抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)]、补肺健脾+西药组(10%补肺健脾方组血清+10%CSE+5 mmol/L NAC)分别加入相应药物后,培养24 h。检测各组细胞中活性氧(ROS)水平及锰超氧化物歧化酶(MnSOD)、过氧化氢酶(CAT) mRNA和蛋白表达。结果模型组细胞中ROS水平、Mn SOD和CAT mRNA和蛋白表达较正常组明显升高(P 0. 05或P 0. 01),补肺健脾组、西药组和补肺健脾+西药组ROS水平、Mn SOD mRNA和蛋白及补肺健脾组CAT mRNA的表达较模型组降低(P 0. 05或P 0. 01)。与补肺健脾组比较,西药组和补肺健脾+西药组MnSOD和CAT mRNA表达下降更为明显(P 0. 05或P 0. 01)。结论补肺健脾方和NAC均能降低L6细胞中ROS水平,减轻氧化应激,且两者联合运用效果更佳,这可能是其改善COPD骨骼肌功能障碍的机制之一。     

补肺益肾方对肾精亏虚证大鼠睾丸支持细胞和生精功能的影响

目的观察补肺益肾方对肾精亏虚证大鼠睾丸支持细胞和生精功能的影响。方法25只SD大鼠随机分为5组:正常组、模型组、五子衍宗方组、补肺益肾方低剂量组、补肺益肾方高剂量组,每组5只。正常组每天早晚给予5%羧甲基纤维素钠[CMC-Na,100 mg/(kg·d)],其余各组每早给予雷公藤多甙[GTW,20 mg/(kg·d)],模型组每晚给予5%CMC-Na,50 mg/(kg·d),五子衍宗方组每晚给予五子衍宗汤[15.8 g/(kg·d)],补肺益肾方低、高剂量组每晚给予补肺益肾方[6.6 g/(kg·d)、26.6 g/(kg·d)],均灌胃30天。计算脏器指数;采用Western Blot检测睾丸支持细胞波形蛋白(vimentin)、紧密连接蛋白11(claudin-11)和转铁蛋白(TF)表达;ELISA法测定血清抑制素B(INHB)水平;HE染色法和Johnsen评分观察并评价睾丸组织病理学变化。结果与正常组比较,模型组附睾指数、睾丸支持细胞vimentin、claudin-11、TF表达、INHB水平和Johnsen评分下降(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,五子衍宗方组和补肺益肾方高剂量组睾丸支持细胞vimentin、claudin-11、TF表达升高(P<0.05,P<0.01),各给药组INHB水平和Johnsen评分均升高(P<0.01)。与五子衍宗方组比较,补肺益肾方高剂量组睾丸支持细胞vimentin表达、INHB水平和Johnsen评分升高(P<0.05,P<0.01)。结论补肺益肾方高剂量可显著改善肾精亏虚证大鼠睾丸支持细胞和生精功能,其疗效优于五子衍宗方。     

芹菜素预处理对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用及机制研究

目的探讨芹菜素对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用及可能作用机制。方法将180只实验用SD大鼠按随机数字表法分为6组各30只,假手术组和模型组给予0.9%氯化钠溶液腹腔注射,芹菜素低、中、高剂量预处理组分别给予10 mg/(kg·d)、20 mg/(kg·d)、40 mg/(kg·d)芹菜素腹腔注射,地塞米松预处理组给予5 mg/(kg·d)地塞米松腹腔注射,均1次/d,连续注射7 d后,采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症大鼠模型(假手术组不结扎和穿孔)。造模手术24 h后,检测肺功能(呼吸频率、肺泡通透指数、动脉血氧分压),计算肺组织湿/干重比,HE染色法行肺组织病理学检查并行损伤评分,检测肺组织中内毒素(LPS)、炎症因子指标[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)]、氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)]水平,Western bolt法检测肺组织中磷酸化核因子-κB(p-NF-κB)表达水平。结果模型组大鼠呼吸频率、肺泡通透指数、肺组织湿/干重比、肺组织病理损伤评分和LPS、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平及p-NF-κB蛋白表达量均明显高于假手术组(P均0.05),动脉血氧分压及肺组织中SOD、CAT、T-AOC活性均明显低于假手术组(P均0.05);芹菜素中、高剂量预处理组和地塞米松预处理组呼吸频率、肺泡通透指数、肺组织湿/干重比、肺组织病理损伤评分和LPS、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平及p-NF-κB蛋白表达量均明显低于模型组(P均0.05),动脉血氧分压及肺组织中SOD、CAT、T-AOC活性均明显高于模型组(P均0.05);芹菜素高剂量预处理组上述各指标改善情况均优于地塞米松预处理组(P均0.05)。结论芹菜素预处理可抑制脓毒症大鼠急性肺损伤,保护肺功能,可能与其抑制炎症反应、氧化应激及NF-κB信号通路有关。     

利金方对慢性阻塞性肺疾病肺气虚证大鼠IL-8及TNF-α表达的影响

目的 观察利金方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺气虚证大鼠血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法 将50只SPF级wistar大鼠随机分为空白组、模型组、补肺汤组、利金方高剂量组及利金方低剂量组,每组10只.采用复合因素造模法建立COPD大鼠模型.各药物组分别以相应剂量连续给药14d,检测各组大鼠血清和BALF中IL-8、TNF-α的含量,并通过HE染色和光镜观察气管、支气管及肺组织病理形态学改变.结果 模型组大鼠支气管内有明显慢性支气管炎特征性病理学改变,肺组织显示肺泡结构紊乱,肺泡壁变薄或破裂,肺泡呈囊状扩张,部分融合成肺大疱,符合COPD形态学诊断指标,大鼠血清及BALF中IL-8、TNF-α的含量明显升高;与模型组比较,利金方高、低剂量组和补肺汤组COPD大鼠气管、支气管及肺组织病理学改变均有所减轻,血清及BALF中IL-8、TNF-α的含量均明显下降;利金方高剂量组的病理学减轻程度优于利金方低剂量组和补肺汤组;利金方高剂量组血清及BALF中IL-8、TNF-α的含量较补肺汤组均明显下降.结论 利金方可以降低血及BALF中IL-8、TNF-α的表达,抑制气道炎症,从而达到治疗COPD的目的 .     

补肺益肾方联合舒肺贴对COPD大鼠肺脏Jagged1/notch1通路的影响

目的:评价补肺益肾方联合舒肺贴对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)稳定期大鼠肺脏Jagged1/notch1通路的影响。方法:大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、舒肺贴组、补肺益肾组、补肺益肾联合舒肺贴组和氨茶碱组。采用熏烟和细菌感染制备COPD模型。分别于第0,8,20周观察肺功能,第20周检测肺jagged1、notch1mRNA和蛋白表达。结果:模型对照组大鼠肺潮气量(tidal volume,VT)、呼气峰流速(peak expiratory flow,PEF)及肺脏Jagged1、Notch1基因及蛋白表达降低(P0.01)。各治疗组VT、PEF、Jagged1、Notch1基因和蛋白较模型对照组升高,以联合组升高明显(P0.05)。结论:补肺益肾联合舒肺贴可调控肺组织Jagged1、Notch1基因及蛋白表达,参与细胞分化过程,作用优于单独使用补肺益肾方或舒肺贴。