基于UPLC多指标含量测定和指纹图谱的不同种质金银花药材质量评价研究

目的 建立金银花药材超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱,并对有效成分新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、马钱苷、当药苷、断氧化马钱子苷、芦丁、木犀草苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C的含量进行测定,为不同种质金银花药材的质量评价提供参考。方法 采用超高效液相色谱仪,Thermo Accucore^TM C₁₈色谱柱(100mm×4.6mm,2.6μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,体积流量为0.3mL/min,梯度洗脱,分段检测波长324nm(0～13.5 min)、238 nm(13.5～18 min)、354 nm(18～27 min)、324 nm(27～40 min),柱温30℃,进样量2μL;通过对照品比对,对共有峰进行鉴定,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》软件构建指纹图谱,进行相似度评价;通过主成分分析(principal component analysis,PCA)、正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial leastsquares discrimination analysi...     

基于HPLC指纹图谱和多成分定量结合化学模式识别法评价不同产地抹茶质量

目的 建立不同产地抹茶的HPLC指纹图谱及多成分含量测定,结合化学模式识别法评价不同产地抹茶的质量,为其进一步研究和开发提供依据。方法 Agilent Eclipse Plus C₁₈色谱柱,流动相为乙腈（A）-0.1%磷酸（B）进行梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,检测波长278 nm,柱温35 ℃,进样量10 μL。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版》（国家药典委员会2004版）软件建立27批不同产地抹茶的HPLC指纹图谱并分析相似度。使用IBM SPSS statistics 20和Origin 2023b软件进行聚类分析、主成分分析和偏最小二乘法-判别分析（partial least squares-discriminant analysis,PLS-DA）。通过对照品对比指认化学成分并进行定量测定。结果 27批抹茶HPLC指纹图谱共匹配出23个共有峰,分别指认出,峰4是没食子酸,峰6是表没食子儿茶素（epigallocatechin,EGC）,峰8是儿茶素,峰9是咖啡碱,峰12是表儿茶素,峰13是表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）,峰14是没食子儿茶素没食子酸酯（gallocatechin gallate,GCG）,峰16是芦丁,峰17是表儿茶素没食子酸酯（epicatechin gallate,ECG）,峰21是槲皮素,峰22是山柰酚,指纹图谱相似度范围为0.983～1.000。聚类分析将27批抹茶分为4类。主成分分析得出江口和瓮安产地的抹茶质量较好;经PLS-DA分析筛选出了咖啡碱、EGCG、儿茶素、山柰酚、GCG、没食子酸等8个差异成分。样品中没食子酸、EGC、儿茶素、咖啡碱、表儿茶素、EGCG、GCG、芦丁、ECG、槲皮素、山柰酚11种成分含量分别为0.10～0.85、8.27～4.36、4.21～3.84、42.23～72.37、10.41～16.49、48.52～72.89、0.12～0.73、0.53～1.76、21.43～28.60、0.01～0.04、0.03～0.38 mg/g。结论 建立的抹茶HPLC指纹图谱操作简便、结果可靠,咖啡碱、EGCG、儿茶素、山柰酚、GCG、没食子酸可以作为抹茶质量评价的指标性成分。     

透骨草药材UPLC指纹图谱研究

目的建立透骨草药材来源中狭山野豌豆Vicia amoena超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱,并与其余5种来源品种进行比较,为透骨草药材质量控制提供参考依据。方法用Eclipse Plus C_(18) RRHD(50 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相梯度洗脱,体积流量0.2 m L/min;柱温30℃;检测波长340 nm。测定10个不同产地狭山野豌豆指纹图谱,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)计算相似度,并用对照品和液质联用技术指认色谱峰;同条件下比较鉴别透骨草药材其他5种来源品种。结果建立了狭山野豌豆指纹图谱,采用超高效液相色谱-电喷雾-四级杆-飞行时间串联质谱仪(UPLC-ESI-Q-TOF-MS)对14个共有峰中的6个峰进行初步归属,确定为绿原酸、杨梅苷、金丝桃苷、异槲皮苷、山柰苷、槲皮苷;透骨草药材其他5种来源品种与狭山野豌豆指纹图谱的共有模式明显不同。结论该方法重现性好、特征性强,可用于透骨草药材全面质量评价。     

基于化学指纹图谱和多指标测定的柿叶药材质量研究

目的建立柿Diospyros kaki叶的HPLC指纹图谱,并进行多成分测定,为柿叶及其相关产品的质量控制提供科学依据。方法采用HPLC法,Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.2%甲酸水为流动相梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;柱温35℃;检测波长360 nm;进样量10μL;对22批柿叶药材进行指纹图谱研究,用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)进行评价,系统聚类分析和PCA分析将22批柿叶药材分为两类,同时对金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素和山柰素成分测定方法进行方法学考察。结果建立了柿叶的指纹图谱,共标定了12个色谱峰为柿叶药材指纹图谱的特征峰,金丝桃苷在0.044~0.880μg,异槲皮苷在0.078~1.560μg,槲皮素在0.040~0.800μg,山柰素在0.035~0.700μg线性关系良好,r均大于0.999 8,平均回收率分别为97.59%、98.97%、100.55%、99.96%。结论 HPLC指纹图谱结合多成分测定可为柿叶及其相关产品的质量控制提供参考。     

HPLC指纹图谱和多成分定量结合化学模式识别法评价不同生长期刺山柑果质量

目的 建立不同生长期刺山柑Capparis spinosa果实的HPLC指纹图谱及多成分含量测定,结合化学模式识别法评价不同生长期刺山柑果的质量,为其进一步研究和开发提供依据。方法 采用AgilentZORBAX SB-C18色谱柱,以0.1%磷酸溶液（A）-乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,检测波长为310 nm,柱温为25℃,进样量为10μL。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》建立18批次不同生长期刺山柑果的HPLC指纹图谱并分析相似度。使用SPSS25.0和SIMCA-P14.1软件进行聚类分析、主成分分析和偏最小二乘法-判别分析（partialleast squares-discriminantanalysis,PLS-DA）。通过对照品比对指认化学成分并进行定量测定。结果 18批次刺山柑果HPLC指纹图谱共匹配出14个共有峰,分别指认出2号峰为原儿茶酸、13号峰为芦丁、14号峰为山柰酚-3-O-芸香糖苷,指纹图谱相似度范围为0.924～0.991。聚类分析将18批次刺山柑果分为3类;主成分分析得刺山柑成熟果质量较好;经PLS-D...     

基于抗炎活性成分的苗药羊耳菊药材质量控制研究

目的 基于抗炎活性成分研究苗药羊耳菊药材质量控制方法。方法 建立羊耳菊有效组分中代表性、特征性化学成分作为指标成分的多指标定量指纹图谱研究。通过多指标成分定量结合指纹图谱分析评价贵州不同产地羊耳菊的质量。结果建立了35批贵州产羊耳菊的高效液相指纹图谱和多指标含量测定方法;指认了羊耳菊药材液相色谱指纹图谱17个共有峰中的8个,结果显示相似度在0.898～0.997,以8个化学成分作为指标,对其进行含量测定,结果显示绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、洋蓟素、木犀草苷的质量分数分别为0.353～3.765、0.056～0.495、0.086～0.526、0.306～2.526、0.861～7.353、0.729～4.268、0.052～0.424、0.148～1.102mg/g。结论 所建立的基于抗炎活性成分的指纹图谱和多指标含量测定研究方法,灵敏度高、准确度好、稳定可靠,可用于苗药羊耳菊药材的质量控制。     

基于指纹图谱结合化学模式识别绿萼梅质量标志物的评价研究

目的 利用化学模式识别技术对绿萼梅药材指纹图谱数据进行分析,筛选特征性指标成分从而建立绿萼梅Q-Marker的定量分析策略,为绿萼梅质量评价提供科学依据。方法 采用超高液相色谱法建立3个产地绿萼梅的指纹图谱,运用相似度分析、聚类分析、主成分分析和偏最小二乘判别分析等化学模式识别技术筛选出不同产地绿萼梅化学成分的特征成分作为绿萼梅Q-Marker,并定量分析。结果 30批绿萼梅UPLC指纹图谱标定8个共有峰,相似度在0.816～0.969;通过聚类分析、主成分分析和偏最小二乘判别分析较好的区分各产地绿萼梅,综合分析筛选绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷作为绿萼梅Q-Marker,质量分数分别在3.08%～4.71%、0.41%～0.71%、0.13%～0.25%、0.25%～0.38%。结论 通过指纹图谱结合化学模式识别技术的分析策略可快速有效的筛选绿萼梅Q-Marker,为绿萼梅质量评价提供参考。     

基于UPLC指纹图谱的菟丝子酒炙前后化学模式识别及多成分定量测定

目的 建立生菟丝子Cuscutae Semen与酒菟丝子UPLC指纹图谱,并结合多元统计分析和定量测定研究菟丝子酒炙前后化学成分的变化,为菟丝子质量评价提供参考。方法 采用UPLC法进行测定,色谱柱为Thermo AccucoreTM C18柱(100 mm×4.6 mm,2.6μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,柱温30℃,梯度洗脱,进样体积为2μL,体积流量为0.4m L/min,采用分段波长,建立15批酒菟丝子及15批生菟丝子指纹图谱。通过相似度评价、层次聚类分析(hierarchical clustering analysis,HCA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)来对指纹图谱进行分析评价,同时对9个主要成分进行定量测定,寻找炮制前后差异成分。结果 建立的UPLC指纹图谱中,共匹配了19个共有峰,宁夏产区与内蒙产区的生菟丝子和酒菟丝子相似度均较高,HCA中可将酒菟丝子与生菟丝子明显区分,PCA提取出4个主成分,能够明显区分菟丝子生品及炮制品。正交偏最小二乘-判别分析(orthogonal partial least squ...     

木芙蓉叶质量标准的提升研究

目的 提升木芙蓉叶质量标准。方法 在原标准的基础上,优化供试品制备方法,增加银锻苷TLC鉴别,采用UPLC法同时测定芦丁、异槲皮苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、银锻苷的含量。该药材60%甲醇提取液的分析采用Utimate UPLC AQ-C₁₈色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.8μm);流动相乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.25 mL/min;柱温40℃;检测波长260 nm。结果 银锻苷TLC特征斑点清晰,分离度好。芦丁、异槲皮苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、银锻苷在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 6),平均加样回收率为95.26%～102.52%,RSD为1.05%～2.63%。结论 该方法准确可行,可用于木芙蓉叶的质量控制。建议木芙蓉叶含芦丁、异槲皮苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、银锻苷总含量不得少于2.199 6 mg/g,即0.22%。     

布渣叶HPLC指纹图谱的建立和5种成分含量的同时测定

目的:建立布渣叶HPLC指纹图谱,并同时测定布渣叶中阿魏酸、牡荆苷、异牡荆苷、山柰酚-3-O-β-D-芸香糖苷和水仙苷的含量。方法:采用phenomenex Kinetex~XB-C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-0.5%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长为332 nm;柱温为30℃;流速为0.8 m L/min。结果:建立了分离度和重现性较好的布渣叶HPLC指纹色谱图,相似度均在0.900以上;标定37个共有色谱峰;5种指标成分中阿魏酸在2.048~20.480μg/m L、牡荆苷在4.494~44.940μg/m L、异牡荆苷在16.020~80.100μg/m L、山柰酚-3-O-β-D-芸香糖苷在12.816~89.712μg/m L、水仙苷在117.800~265.050μg/m L范围内线性关系良好,r均>0.9990,平均加样回收率分别为99.32%、98.76%、96.94%、97.47%、99.53%。14批布渣叶样品中阿魏酸含量为0.178~0.250 mg/g、牡荆苷含量为0.173~0.617 mg/g、异牡荆苷含量为0.446~1.247 mg/g、山柰酚-3-O-β-D-芸香糖苷含量为0.967~2.727 mg/g、水仙苷含量为2.803~5.872 mg/g。结论:所建立的布渣叶HPLC指纹图谱和5种指标成分定量测定分析方法简单、准确、专属性强、重复性好,可以有效地综合评价布渣叶的质量。     

基于一测多评法研究畲药食凉茶黄酮类物质动态变化规律

目的一测多评(QAMS)法测定畲药食凉茶中4种黄酮类成分,并以其研究食凉茶黄酮类物质的动态变化规律。方法以芦丁为参照物,分别建立其与山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、山柰素的相对校正因子(f),并计算食凉茶中各成分量,实现QAMS。同时采用外标法验证QAMS法的准确性和可行性。结果芦丁与山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素和山柰素的f分别为1.158、0.475 6、0.431 9,RSD分别为0.73%、1.55%、1.58%;QAMS法测定结果与外标法测定结果无显著差异。不同月份食凉茶中黄酮类成分质量分数差异明显,2个来源食凉茶之间的量差异亦较明显。结论以芦丁为参照物同时测定山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、山柰素的QAMS法可用于畲药食凉茶的定量分析。以黄酮类物质为指标,食凉茶的最佳采收期为7月和8月。     

一测多评法同时测定鱼腥草不同部位中6种活性成分的量

目的 建立鱼腥草不同部位中新绿原酸、绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷及槲皮苷的一测多评测定方法.方法 以Kromasil C18色谱柱(250mm×4.6 mm,5 μm),乙腈-0.1％磷酸溶液梯度洗脱,分段变波长测定.以绿原酸为参照物建立与其余成分的相对校正因子,并计算其量,实现一测多评.同时采用外标法测定该6个成分的量,并比较二者的差异,以验证一测多评法的准确性和可行性.结果 鱼腥草中6个成分的计算值与实测值间无显著差异,鱼腥草不同部位6个成分量有所不同,绿原酸类和黄酮类主要分布在叶中.结论 鱼腥草的药效成分主要集中在叶中,本实验建立的一测多评法可行准确,可以用来对鱼腥草进行质量控制.     

基于网络药理学和指纹图谱的黄柏质量标志物预测分析

目的 为确定质量标志物(quality marker,Q-Marker)体现药材共性的重要度提供数学评价方法,结合网络药理学和指纹图谱方法,并基于Q-Marker五原则,对中药黄柏从化学成分有效性以及可测性等角度进行Q-Marker预测分析.方法 利用现有文献对黄柏药材Q-Marker的来源进行整合,运用网络药理学...     

UPLC-QQQ-MS/MS指纹图谱结合一测多评法的不同品种苦荞麦质量评价

目的 建立18个品种苦荞麦Fagopyrum tataricum指纹图谱,并以芦丁为内标物,采用一测多评法（quantitative analysis of multi-components by single-marker,QAMS）同时检测苦荞麦中葫芦巴碱、表儿茶素、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、山柰酚和大黄素含量,以期对不同产地苦荞麦进行质量控制。方法 采用超高效液相-三重四级杆液质联用技术（UPLC-QQQ-MS/MS）,首次以一级全扫（Full-MS）和多反应监测（multiple reaction monitoring,MRM）2种采集模式相结合的方式建立UPLC-QQQ-MS/MS指纹图谱共有模式,采用夹角余弦法进行相似度评价。以ThermoFisher Accucore^TM C₁₈色谱柱（100 mm×3.0 mm,2.6 μm）;流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液,体积流量0.3 mL/min,柱温30 ℃,梯度洗脱。以芦丁作为内标物,建立苦荞中其他6种指标成分的相对校正因子（f_s/x）,从而计算各待测成分的量,并将QAMS计算值与外标法（external standard method,ESM）实测值进行比较,以验证QAMS的准确性和方法适宜性。运用聚类分析、主成分分析、加权分析等化学计量学分析手段建立苦荞麦综合质量优劣评价方法。结果 建立了苦荞麦的UPLC-QQQ-MS/MS指纹图谱,在Full-MS扫描模式下标定了15个共有峰,各品种间相似度在0.399～0.973;同时以MRM扫描模式结合对照品对其中芦丁等7种指标成分进行了峰指认。以芦丁为内标物,与葫芦巴碱、表儿茶素、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、山柰酚和大黄素6种有效成分的建立的f_s/x重现性良好,分别为0.283、1.338、0.654、1.162、8.509、0.709。且采用QAMS测定的18个品种苦荞麦中7种指标成分含量与ESM的实测值之间无显著性差异（P＞0.05）。化学计量学分析结果表明,芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷和山柰酚是影响苦荞麦质量的主要潜在标志物,质量排序相对靠前的苦荞麦产区主要集中在海拔高、光照强、昼夜温差大的中国西南地区,而指纹图谱相似度差异较明显的荞杂2号、综甜2号和通荞1号排在后3位。结论 所建立的指纹图谱结合QAMS简便可行,结果准确,化学计量学分析方法全面客观,可为苦荞麦品质评价和质量控制提供参考和依据。     

马鞭草HPLC-CAD指纹图谱及主要成分的测定

目的建立马鞭草Verbena officinalis的指纹图谱及同时测定马鞭草中同分异构体齐墩果酸和熊果酸的方法。方法分析柱为Thermo Fisher Acclaim_(TM) C_(30)(150 mm×2.1 mm,3μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.2%醋酸水溶液,梯度洗脱;体积流量为0.3 m L/min;进样量为5μL;柱温20℃;电雾式检测器检测,雾化器温度为40℃。结果 5批不同产地的马鞭草指纹图谱有17个共有峰,共有峰相对保留时间RSD值小于0.35%,相对峰面积RSD值在3.3%～4.40%。5批马鞭草药材中齐墩果酸的量在0.097%～0.136%,熊果酸的量在0.257%～0.478%,总量在0.354%～0.478%。结论首次用高效液相色谱-电雾式检测(HPLC-CAD)方法建立了马鞭草的指纹图谱并同时测定了马鞭草药材中的齐墩果酸和熊果酸的量。该方法简便快捷、重复性好,可用于马鞭草的质量控制。     

基于多模式识别结合指纹图谱的三叶青产地鉴别比较研究

目的比较不同模式识别方法结合化学指纹图谱对不同产地三叶青Tetrastigma hemsleyanum的鉴别效果,提出三叶青产地鉴别的新方法。方法收集浙江、云南和贵州3个产区的72批三叶青样品,采集HPLC指纹图谱,标注18个共有峰,比较主成分分析、正交偏最小二乘法-判别分析和随机森林算法在处理不同产地样品复杂数据中的差异效果。结果 72批三叶青样品经主成分分析只能分为2类,正交偏最小二乘法-判别分析的结果优于主成分分析,随机森林法能将3个产区的样品完全分开。利用随机森林算法结合指纹图谱能有效地对不同产区的三叶青进行鉴别和区分。结论本研究可作为三叶青产区和质量控制的有效方法,为多指标的复杂指纹图谱鉴别不同产地药材提供有效的参考。