阳和化岩汤联合LY294002对裸鼠乳腺癌及微淋巴管生成的干预作用研究

目的:探讨阳和化岩汤与胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)抑制剂LY294002对人表皮生长因子(HER-2)高表达型裸鼠荷瘤肿瘤及微淋巴管密度(LMVD)生成的干预作用及机制的研究。方法:建立裸鼠荷瘤模型,随机分为对照组、阳和化岩汤18g/kg组、LY294002 7. 5mg/kg组、LY294002 7. 5mg/kg+阳和化岩汤18g/kg组,药物干预4周后处死裸鼠,取出肿瘤标本及腋下淋巴结,计算抑瘤率和淋巴结转移抑制率。免疫组化法观察内皮生长因子C(VEGFC)表达,Podoplanin抗体标记淋巴管内皮,计数微淋巴管密度(LMVD),观察微淋巴管在癌灶及周围间质组织分布特点及形态学结构改变,RT-PCR法检测分析关键靶蛋白PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、VEGFC的表达。结果:与对照组相比,阳和化岩汤18g/kg组、LY294002 7. 5mg/kg组、LY294002 7. 5mg/kg+阳和化岩汤18g/kg组抑瘤率与淋巴结转移抑制率均不同程度增加;镜下观察VEGFC与LMVD染色,对照组染色程度最高,分布密集,阳和化岩汤组、LY294002组次之,LY294002+阳和化岩汤组染色程度最浅,分布最少;各用药组均可降低PI3K、p-Akt、VEGFC的表达,阳和化岩汤组的效果不及LY294002组,LY294002+阳和化岩汤组作用最明显。结论:阳和化岩汤、LY294002能有效抑制肿瘤生成及淋巴结转移,与抑制PI3K/Akt通路活化及VEGFC相关。虽然阳和化岩汤组对抑制PI3K、p-Akt、VEGFC的能力不如LY294002组,但两者联用体现了良好的治疗效果。     

阳和化岩汤对HER-2高表达型裸鼠荷瘤模型肿瘤血管生成的影响及机制研究

目的:研究阳和化岩汤与与曲妥珠单抗对乳腺癌细胞株SK-BR-3(HER-2高表达型)裸鼠荷瘤模型血管生成情况的影响及对干预脉管生成机制。方法:建立裸鼠荷瘤模型,随机分为模型组、阳和化岩汤组、曲妥珠单抗组、阳和化岩汤+曲妥珠单抗组4组,药物干预1 w后处死裸鼠,免疫荧光双染法观察组织血管生成,Western blot法检测分析PI3K/Akt交互调控通路中关键靶蛋白PI3K、p-Akt、HER-2、VEGFC的表达。结果:各给药组肿瘤血管生成及PI3K、p-AKT、HER-2、VEGFC蛋白表达均受到抑制,且阳和化岩汤+曲妥珠单抗作用优于单用曲妥珠单抗(P0.05)。结论:阳和化岩汤能有效抑制血管生成,其干预PI3K/Akt信号通路的能力不如曲妥珠单抗,但能进一步增强曲妥珠单抗的疗效。     

阳和化岩汤对HER-2高表达型裸鼠荷瘤模型肿瘤血管生成的影响及机制的研究

目的:研究阳和化岩汤与与曲妥珠单抗对乳腺癌细胞株SK-BR-3(HER-2高表达型)裸鼠荷瘤模型血管生成情况的影响及对干预脉管生成机制研究。方法:建立裸鼠荷瘤模型,随机分为模型组、阳和化岩汤组、曲妥珠单抗组、阳和化岩汤+曲妥珠单抗组4组,药物干预1 w后处死裸鼠,免疫荧光双染法观察组织血管生成,westernblot法检测分析PI3K/Akt交互调控通路中关键靶蛋白PI3K、p-Akt、HER-2、VEGFC的表达。结果:各给药组肿瘤血管生成及PI3K、p-AKT、HER-2、VEGFC蛋白表达均受到抑制,且阳和化岩汤+曲妥珠单抗作用优于单用曲妥珠单抗(P0.05)。结论:阳和化岩汤能有效抑制血管生成,干预PI3K/Akt通路活化其抑制PI3K/Akt信号通路的能力不如曲妥珠单抗,但能进一步增强曲妥珠单抗的疗效。     

阳和化岩汤联合曲妥珠对HER-2高表达型乳腺癌细胞PTEN-PI3K/Akt通路及VEGFC的影响研究

目的:观察阳和化岩汤联合曲妥珠体外对乳腺癌细胞株SK-BR-3(HER-2高表达型)PTEN-PI3K/Akt通路及血管内皮生长因子(VEGFC)的影响。方法:制备阳和化岩汤肠吸收液,将乳腺癌细胞株SK-BR-3随机分为对照组、中药组、曲妥珠组、中药+曲妥珠组,分别予相应药物干预72h后,应用westernblot法及RT-PCR法检测人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因(PTEN)、磷脂酞肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(p-Akt)、血管内皮生长因子(VEGFC)蛋白及其m RNA表达。结果:与对照组比较,曲妥珠组、曲妥珠+中药组乳腺癌细胞株PTEN蛋白与m RNA表达明显升高,PI3K、p-Akt、VEGFC蛋白与m RNA表达明显降低(P0.05,P0.01);中药组p-Akt蛋白表达明显降低(P0.05),VEGFC蛋白与m RNA表达明显降低(P0.05)。与曲妥珠组比较,中药+曲妥珠组PTEN蛋白与m RNA表达明显升高(P0.05),PI3K、p-Akt蛋白与m RNA表达明显降低(P0.05),VEGFC蛋白表达明显降低(P0.05)。各药物组效果曲妥珠+中药组最佳,曲妥珠组次之,中药组作用稍弱。结论:阳和化岩汤肠吸收液联合曲妥珠能有效干预PTEN-PI3K/Akt通路,增强PTEN表达,降低PI3K、p-Akt、VEGFC表达,效果优于单用曲妥珠,提示温阳散结中药对曲妥珠在HER-2高表达型乳腺癌的治疗中可能存在辅助作用。     

阳和化岩汤对HER-2高表达型乳腺癌细胞PI3K/Akt通路HER-2,PI3K,p-Akt表达的机制

目的:观察阳和化岩汤与磷脂酰肌醇-3羟基激酶(PI3K)抑制剂LY294002对乳腺癌细胞株SK-BR-3[人表皮生长因子受体-2(HER-2)高表达型]PI3K/蛋白激酶B(Akt)信号通路中HER-2,PI3K,磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达的影响,研究阳和化岩汤的干预机制。方法:制备阳和化岩汤肠吸收液,将乳腺癌细胞株SK-BR-3分为空白组,阳和化岩汤组,LY294002组,LY294002+阳和化岩汤组,阳和化岩汤(125 g·L-1),LY294002 (0. 05 g·L-1),阳和化岩汤+LY294002 (阳和化岩汤125 g·L-1,LY294002 0. 05 g·L-1),用药干预24 h后通过免疫组化、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HER-2,PI3K,p-Akt蛋白表达,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测HER-2,PI3K,p-Akt mRNA表达。结果:与空白组比较,LY294002组,LY294002+阳和化岩汤组均能抑制乳腺癌细胞株HER-2,PI3K,p-Akt蛋白及mRNA表达(P 0. 05);阳和化岩汤组能抑制乳腺癌细胞株HER-2,p-Akt蛋白及mRNA表达(P 0. 05),但对PI3K的抑制作用不明显;联用LY294002较单用LY294002具有进一步抑制PI3K表达的作用(P 0. 05)。与阳和化岩汤组,LY294002组比较,LY294002+阳和化岩汤组能够明显抑制HER-2,PI3K,p-Akt蛋白及mRNA表达(P 0. 05)。结论:阳和化岩汤能够抑制乳腺癌脉管生成和侵袭,主要作用机制为通过干预PI3K/Akt通路,降低通路中HER-2,PI3K,p-Akt表达。     

阳和化岩汤联合曲妥珠对HER-2高表达型乳腺癌细胞PTEN-PI3K/Akt通路及

目的：观察阳和化岩汤联合曲妥珠体外对乳腺癌细胞株SK-BR-3（HER-2高表达型） PTEN-PI3K/Akt通路及血管内皮生长因子（VEGFC）的影响。方法：制备阳和化岩汤肠吸收液,将乳腺癌细胞株SK-BR-3随机分为对照组、中药组、曲妥珠组、中药+曲妥珠组,分别予相应药物干预72h后,应用westernblot法及RT-PCR法检测人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因（PTEN）、磷脂酞肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶（p-Akt）、血管内皮生长因子（VEGFC）蛋白及其mRNA表达。结果：与对照组比较,曲妥珠组、曲妥珠+中药组乳腺癌细胞株PTEN蛋白与mRNA表达明显升高,PI3K、p-Akt、VEGFC蛋白与mRNA表达明显降低（P<0.05,P<0.01）;中药组p-Akt蛋白表达明显降低（P<0.05）,VEGFC蛋白与mRNA表达明显降低（P<0.05）。与曲妥珠组比较,中药+曲妥珠组PTEN蛋白与mRNA表达明显升高（P<0.05）,PI3K、p-Akt蛋白与mRNA表达明显降低（P<0.05）,VEGFC蛋白表达明显降低（P<0.05）。各药物组效果曲妥珠+中药组最佳,曲妥珠组次之,中药组作用稍弱。结论：阳和化岩汤肠吸收液联合曲妥珠能有效干预PTEN-PI3K/Akt通路,增强PTEN表达,降低PI3K、p-Akt、VEGFC表达,效果优于单用曲妥珠,提示温阳散结中药对曲妥珠在HER-2高表达型乳腺癌的治疗中可能存在辅助作用。     

阳和化岩汤通过ER/PI3K/Akt/mTOR通路逆转乳腺癌他莫昔芬耐药

目的:通过观察阳和化岩汤对他莫昔芬(TAM)耐药型乳腺癌移植瘤的作用,及对雌激素受体(ER)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)交互通路的影响,探讨阳和化岩汤逆转乳腺癌TAM耐药的可能机制。方法:50只小鼠随机分为5组,空白组、模型组、阳和化岩汤组、依维莫司组以及阳和化岩汤+依维莫司组。通过切除双侧卵巢建立肾虚模型,其中空白组行假手术处理。造模后恢复3 d,5组小鼠均通过皮下肿瘤接种乳腺癌TAM耐药细胞(MCF-7/TAM-)建立乳腺癌TAM耐药型移植瘤模型。建模成功后,阳和化岩汤组给予阳和化岩汤灌胃(给药剂量为中药制剂20 mL·kg^-1),依维莫司组给予依维莫司腹腔注射(10 mg·kg^-1),阳和化岩汤+依维莫司组给予阳和化岩汤灌胃+依维莫司腹腔注射,空白组、模型组给予磷酸盐缓冲液(PBS)灌胃+腹腔注射;均连续给药28 d,1次/d。给药结束后分离肿瘤组织、称质量,计算抑瘤率;苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织病理学改变;免疫荧光和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测肿瘤组织PI3K,Akt,mTOR,ER蛋白和mRNA表达情况。结果:与模型组比较,阳和化岩汤组d12,d20,d28肿瘤体积、瘤质量显著降低(P<0.01),抑瘤率显著增加(P<0.01);阳和化岩汤组能明显降低肿瘤细胞密度,引起肿瘤细胞坏死;与模型组比较,阳和化岩汤组、依维莫司组和阳和化岩汤+依维莫司组均能抑制PI3K,Akt,mTOR蛋白及mRNA的表达(P<0.05,P<0.01);与空白组比较,阳和化岩汤组、依维莫司组和阳和化岩汤+依维莫司组均能抑制ER蛋白及mRNA的表达(P<0.01);与模型组比较,阳和化岩汤+依维莫司组ER mRNA表达量显著减少(P<0.01)。结论:阳和化岩汤可抑制TAM耐药型乳腺癌移植瘤生长,其机制可能是通过下调ER/PI3K/Akt/mTOR交互信号通路关键分子的表达,从而达到逆转乳腺癌TAM耐药的作用。     

解毒化浊方对HER-2阳性乳腺癌细胞PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达的影响

目的观察解毒化浊方血清对HER-2阳性乳腺癌细胞PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达的影响,探讨解毒化浊方治疗HER-2阳性乳腺癌的作用机制。方法将雌性Wistar大鼠分为对照组、中药组、西药组、联合组4组,分别给药制备含药血清,再以给药血清干预SK-BR-3细胞,采用Western blot检测HER-2、p-HER-2蛋白表达以及PI3K/Akt通路相关蛋白p-Akt、Bad、p-Bad表达。结果 Western blot检测显示,中药组、西药组、联合组HER-2、p-HER-2灰度比较对照组均降低;西药组、联合组HER-2、p-HER-2、p-Akt灰度比较对照组明显降低,西药组、联合组较对照组HER-2、p-HER-2、p-Akt表达含量差异有统计学意义(P0.05)。中药组、西药组、联合组Bad、p-Bad灰度比较对照组降低,总Bad表达含量各组间差异无统计学意义(P0.05)。西药组、联合组p-Bad表达含量差异有统计学意义(P0.05)。结论解毒化浊方具有下调PI3K/Akt信号通路中相关蛋白表达,协同抑制剂发挥减毒增效的抗肿瘤作用。     

蝎毒多肽对卵巢癌抑制作用机制研究

目的研究蝎毒多肽抑制卵巢癌裸鼠肿瘤生长的作用机制,为恶性肿瘤临床治疗提供理论依据。方法制备人SKOV3裸鼠异种移植瘤模型,蝎毒多肽高、低剂量(20、10 mg/kg)ig给药2周,绘制肿瘤体积增长曲线,并计算抑瘤率;HE染色法观察各组肿瘤组织病理变化;免疫组化法检测肿瘤组织中PTEN、PI3K、p-Akt的表达水平;ELISA法检测各组裸鼠血清中PTEN、PI3K、p-Akt水平。结果蝎毒多肽高、低剂量组的抑瘤率分别为50.8%和31.5%。与对照组相比,蝎毒多肽高、低剂量组裸鼠肿瘤组织中PI3K和p-Akt的表达明显下调(P0.05、0.01),PTEN的表达明显上调(P0.05、0.01);血清中各因子的变化与免疫组化结果一致。结论蝎毒多肽可抑制卵巢癌肿瘤的生长,其机制可能与抑制肿瘤微环境中PI3K、p-Akt的表达,上调PTEN的表达有关。     

敦煌医学古方大补脾汤对放射性肺损伤大鼠PI3K/Akt信号通路的影响

目的观察敦煌医学古方大补脾汤对放射性肺损伤大鼠PI3K/Akt信号通路的影响,探讨其作用机制。方法 40只SPF级SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、单次给药组、两次给药组,每组10只。各给药组每日予大补脾汤灌胃,空白对照组和模型组予等量生理盐水灌胃。2周后,模型组、单次给药组、两次给药组大鼠右肺予8 Gy X射线单次照射,空白对照组不予照射。照射后,两次给药组继续每日予大补脾汤灌胃,其余各组灌胃等量生理盐水。2周后处死所有大鼠,ELISA检测大鼠血清PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt含量,Western blot及免疫组化检测大鼠右肺组织PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白表达,qPCR检测大鼠右肺组织PI3K、Akt mRNA表达。结果与空白对照组比较,模型组大鼠血清PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt含量明显增加(P0.01),右肺组织PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Aktm RNA表达明显升高(P0.01);与模型组比较,单次给药组和两次给药组大鼠血清PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt含量明显减少(P0.05,P0.01),右肺组织PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt mRNA表达显著降低(P0.05,P0.01)。结论大补脾汤对放射性肺损伤大鼠具有保护作用,其机制与抑制PI3K、Akt磷酸化,调控PI3K/Akt信号通路相关。     

灭幽汤对幽门螺杆菌相关性胃炎脾胃湿热证小鼠PTEN-PI3K-Akt-FoxO凋亡信号通路的影响

目的观察灭幽汤对幽门螺杆菌相关性胃炎脾胃湿热证小鼠胃组织中PTEN、PI3K、p-Akt、Akt、FoxO3a蛋白及mRNA表达的影响,探讨灭幽汤治疗脾胃湿热证可能的作用机制。方法将60只BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、灭幽汤低剂量组、灭幽汤中剂量组、灭幽汤高剂量组、胃四联组,每组10只。除对照组外,其余组均采用复合病因方法造模。造模成功后,对照组和模型组小鼠给予蒸馏水灌胃,1次/d;灭幽汤低、中、高剂量组小鼠分别给予灭幽汤6.2 g/kg、12.4 g/kg、24.8 g/kg灌胃,1次/d;胃四联组小鼠给予泮托拉唑肠溶胶囊+枸橼酸铋钾片+替硝唑片+克拉霉素片280.6 mg/kg灌胃,早晚各1次。各组均连续灌胃14 d,观察各组小鼠一般情况。灌胃结束后,HE染色观察胃黏膜组织病理学表现,TUNEL法检测胃黏膜细胞凋亡情况,采用Western blot法检测胃组织中PTEN、PI3K、p-Akt、FoxO3a蛋白表达情况,采用RT-PCR法检测胃组织中PTEN、PI3K、Akt、FoxO3a mRNA表达情况。结果模型组小鼠出现懒动、食欲下降、皮毛松弛无光泽、体质量减轻、肛温升高,胃黏膜组织HE染色表现为慢性浅表性胃炎;胃四联组、灭幽汤中剂量组、灭幽汤高剂量组小鼠给予相应药物灌胃后各种临床表现均好转,体质量较模型组稍有增加,胃黏膜组织病理改变明显好转;灭幽汤低剂量组小鼠灌胃后症状、病理改变较之模型组没有显著变化。模型组胃黏膜细胞大量凋亡,除灭幽汤低剂量组外,其余药物干预组细胞凋亡情况较模型组显著减少。模型组小鼠胃组织中PTEN、FoxO3a蛋白及mRNA表达水平均明显高于对照组(P均0.01),PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt mRNA表达水平均明显低于对照组(P均0.01);胃四联组、灭幽汤中剂量组、灭幽汤高剂量组小鼠胃组织中PTEN、FoxO3a蛋白及mRNA表达水平均明显低于模型组(P均0.01),PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt mRNA表达水平均明显高于模型组(P均0.01);灭幽汤中剂量组、灭幽汤高剂量组小鼠胃组织中PTEN、FoxO3a蛋白及mRNA表达水平均明显高于胃四联组(P均0.01),PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt mRNA表达水平均明显低于胃四联组(P均0.01),灭幽汤中剂量组与灭幽汤高剂量组各指标比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论灭幽汤可能通过PTEN-PI3K-Akt-FoxO信号通路抗幽门螺杆菌诱导的胃黏膜细胞凋亡而发挥治疗幽门螺杆菌相关性胃炎脾胃湿热证的作用。     

基于PI3K/Akt/eNOS信号通路探讨补阳还五汤对大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的影响

目的:探讨补阳还五汤改善蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的相关分子机制。方法:将雄性SD大鼠80只随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤低、高剂量组(13,26 g·kg~(-1)·d~(-1)),每组20只。按照10 mL·kg~(-1)每天灌胃给药2次,连续7 d。采用二次枕大池注血法制作蛛网膜下腔出血模型,评估各组大鼠1,3,5,7 d的神经功能评分,利用苏木素-伊红(HE)染色对各组大鼠基底动脉直径进行测量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测基底动脉脑组织磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),内皮型一氧化氮合酶(eNOS),神经型一氧化氮合酶(n NOS)蛋白的表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠脑脊液中一氧化氮(NO),内皮素-1(ET-1)的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分明显下降(P 0. 05),基底动脉直径明显缩小(P 0. 05),基底动脉脑组织p-PI3K,p-Akt,eNOS,n NOS蛋白的表达明显降低(P 0. 05),脑脊液中NO明显减少(P 0. 05),ET-1明显升高(P 0. 05);与模型组比较,不同剂量补阳还五汤组(26,13 g·kg~(-1)·d~(-1))在治疗后3～5 d后大鼠神经功能评分均有不同程度升高,基底动脉直径明显增宽(P 0. 05),p-PI3K,p-Akt,eNOS蛋白的表达明显升高(P 0. 05),NO明显升高(P 0. 05),ET-1明显下降(P 0. 05);与低剂量组比较,经过7 d的补阳还五汤治疗后高剂量组神经功能评分明显升高(P 0. 05),基底动脉直径增宽更明显(P 0. 05),p-PI3K,p-Akt,eNOS蛋白的表达更高(P 0. 05),NO升高更明显(P 0. 05),ET-1下降更明显(P 0. 05)。结论:补阳还五汤对蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的保护作用可能与上调PI3K/Akt/eNOS信号通路中的p-PI3K,p-Akt,eNOS的表达,从而增加NO产生有关。     

补阳还五汤对局灶性缺血模型大鼠认知能力及PI3/KAKT信号通路的影响

目的:观察补阳还五汤对局灶性缺血模型大鼠认知能力的改善作用,同时探讨其对PI3K-AKT信号通路的影响。方法:选取30只SD大鼠按数字随机法分为假手术组、模型组及中药组,每组10只。模型组及中药组接受改良急性局灶性缺血模型制备(MCAO术)成模后中药组大鼠接受补阳还五汤灌胃,1次/d,连续干预14 d。假手术组及模型组大鼠接受等剂量的生理盐水灌胃,时间同中药组。干预结束后,比较各组行为学、脑梗死体积、海马形态学、脑组织PI3K、Akt、p-Akt蛋白/mRNA水平变化。结果:补阳还五汤可明显缩短大鼠游泳轨迹路程及逃避潜伏期,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05);补阳还五汤可缩小MCAO大鼠的脑梗死体积,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05);补阳还五汤可减少MCAO后大鼠海马组织病理损伤征象,上调PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白及mRNA表达,降低Bax蛋白及mRNA水平,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:补阳还五汤可改善MCAO大鼠认知能力,其作用机制可能与介导PI3K-AKT信号通路有关。     

阳和化岩汤对乳腺癌癌前病变细胞Fas、Caspase-3和Caspase-8表达的影响

目的体外实验观察阳和化岩汤对乳腺癌癌前病变MCF-10AT细胞Fas、Caspase-3和Caspase-8表达的影响,探讨阳和化岩汤对乳腺癌癌前病变的干预作用机制。方法制备阳和化岩汤及其拆方肠吸收液,将MCF-10AT细胞分为7组,阳和化岩汤组、温阳组、活血组、化痰组、解毒组、三苯氧胺组给予相应肠吸收液培养,空白对照组常规培养。培养72 h后,应用Western blot法检测细胞凋亡调控因子Fas、Caspase-3和Caspase-8蛋白表达量,采用RT-PCR法检测Fas、Caspase-3和Caspase-8 mRNA相对表达量。结果阳和化岩汤、三苯氧胺组Fas、Caspase-3和Caspase-8蛋白和mRNA表达量均明显高于空白对照组(P均0.05),阳和化岩汤、三苯氧胺组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论阳和化岩汤能通过死亡受体途径抑制MCF-10AT细胞增殖及诱导凋亡,能够阻断乳腺癌癌变的进展。     

补阳还五汤对高血压模型大鼠心肌组织中AngⅡ/AT1R与PI3K/AKt轴的影响

目的:观察补阳还五汤对Dahl盐敏感大鼠介导的高血压模型大鼠心肌组织AngⅡ/AT1R与PI3K/AKt信号通路的作用。方法:选取7周龄盐抵抗(SS)大鼠和盐敏感大鼠(DS)随机分为正常组、模型组、中药组、西药组4组各10只。各组大鼠给予8%Nacl高盐饲料喂养,期间采用智能无创血压计检测大鼠尾动脉收缩压(SBP),高血压模型大鼠造模成功后,停止高盐喂饲改为普通饲料喂养,中药组和西药组分别给予补阳还五汤和缬沙坦灌胃治疗,每日1次,连续5周。治疗结束后取大鼠左心室心肌组织,WESTERN BLOT和ELISA法测定AT1R和AngⅡ含量表达,荧光定量PCR法检测PI3K、AKt的mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠AT1R和AngⅡ的含量明显升高,PI3K、AKt的mRNA表达显著降低;与模型组比较,中药组和西药组大鼠AT1R和AngⅡ的含量显著降低,PI3K、AKt的mRNA表达显著升高,且西药组优于中药组。结论:补阳还五汤通过抑制AngⅡ/AT1R轴激活,缓解AngⅡ/AT1R与PI3K/AKt信号通路的失衡状态,降低血压,保护心肌组织的损伤,延缓高血压对靶器官的损伤。     

“调神畅志”法针刺对帕金森伴便秘模型大鼠结肠组织PI3K/AKT/eNOS信号通路的影响

目的：探讨“调神畅志”针法对帕金森(PD)伴便秘大鼠结肠组织磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(PI3K/AKT/eNOS)信号通路关键标志物(PI3K、AKT、p-Akt及eNOS)的影响,并探究此针法治疗的机制。方法：采用颈背部皮下注射鱼藤酮的方法制造PD伴便秘大鼠模型,并用APO诱导检测。40只造模成功大鼠随机分为模型组、西药组、常规针刺组与调神畅志组,每组10只,另空白组、假手术组各10只,共计60只,予相应干预4周。采用Western blot法检测各组大鼠远端结肠组织中PI3K、AKT、p-Akt蛋白表达和eNOS含量。结果：与空白组相比,模型组大鼠远端结肠组织中PI3K、AKT及p-Akt蛋白表达显著降低,eNOS含量显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,西药组、常规针刺组和调神畅志组远端结肠组织PI3K、AKT及p-Akt蛋白表达均明显升高,eNOS含量均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与常规针刺组比较,调神畅志组PI3K、AKT及p-Akt蛋白表达明显较高,eNOS含量显著较低,差异具...     

相关因子2信号通路的影响

目的 通过观察大黄牡丹汤联合柳氮磺胺吡啶肠溶片对溃疡性结肠炎(UC)小鼠氧化应激及Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1-核因子E2相关因子2(Keap1-Nrf2)信号通路的影响,探讨其作用机制。方法 将50只雄性BALB/c小鼠按照随机数字表法分为空白组、模型组、西药组、中药组及中西药组,每组10只。除空白组外,其余各组小鼠均采用葡聚糖硫酸钠盐诱导制备UC模型。造模成功观察3 d后,空白组及模型组予双蒸水10 m L/kg灌胃,西药组予柳氮磺胺吡啶肠溶片药液0. 8 g/kg灌胃,中药组予大黄牡丹汤颗粒剂5. 7 g生药/kg灌胃,中西药组上午予柳氮磺胺吡啶肠溶片药液灌胃,下午予大黄牡丹汤颗粒剂灌胃,灌胃剂量分别同西药组、中药组,均每日1次,连续灌胃7 d。比较各组小鼠灌胃后疾病活动指数(DAI)评分及结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分变化情况,比较各组小鼠结肠Keap-1及Nrf2蛋白平均光密度值,比较各组小鼠氧化应激指标活性氧(ROS)、髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)及谷胱甘肽(GSH)水平变化情况。结果 与空白组比较,模型组小鼠DAI评分明显升高(P 0. 05);与模型组比较,中药组和中西药组小鼠DAI评分均明显降低(P 0. 05)。与空白组比较,模型组小鼠CMDI评分明显升高(P 0. 05);与模型组比较,西药组、中药组和中西药组小鼠CMDI评分均明显降低(P 0. 05),且中西药组小鼠CMDI评分均明显低于西药组和中药组(P 0. 05)。与空白组比较,模型组小鼠结肠组织Keap-1及Nrf2蛋白平均光密度值均明显升高(P 0. 05);与模型组比较,西药组、中药组和中西药组小鼠Keap-1蛋白平均光密度值均明显降低(P 0. 05),且中西药组小鼠Keap-1蛋白平均光密度值均明显低于西药组和中药组(P 0. 05),Nrf2蛋白平均光密度值明显高于西药组(P 0. 05)。与空白组比较,模型组小鼠ROS、MPO及MDA水平均明显升高(P 0. 05),T-AOC水平明显降低(P 0. 05);与模型组比较,西药组小鼠ROS、MPO、MDA及T-AOC水平均有明显改善(P 0. 05),中药组小鼠ROS、MDA、T-AOC及GSH水平均有明显改善(P 0. 05),中西药组小鼠ROS、MPO、MDA、T-AOC及GSH水平均有明显改善(P 0. 05),且中西药组ROS、MDA、T-AOC及GSH水平改善优于西药组(P 0. 05),ROS、MPO、MDA及T-AOC水平改善优于中药组(P 0. 05)。结论 大黄牡丹汤和柳氮磺胺吡啶肠溶片对UC均有确切的治疗作用,能改善小鼠的临床症状及结肠黏膜损伤程度,且两者联合应用具有协同效应,作用机制可能与调节Keap1-Nrf2信号通路,启动机体氧化应激调节程序,提高机体抗氧化能力有关。     

益气扶正复方联合依维莫司对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞株裸鼠移植瘤的影响

目的研究益气扶正复方联合依维莫司对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞株裸鼠移植瘤的抑制作用及其作用机制。方法体外培养三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞株,将细胞悬液接种于雌性BALB/C裸鼠第二乳腺乳垫处,建立皮下移植瘤模型。将造模成功的裸鼠随机分为对照组、益气扶正复方(中药复方)组(40mg/kg)、依维莫司组(2mg/kg)和联合组,每组6只。各组灌胃给予相应药物干预,连续30d。比较各组移植瘤体积和质量的变化,计算各组肿瘤抑制率。采用Real-time PCR检测各组mTor、Akt、P70s6k、4Ebp-1 mRNA的表达水平,Western blot检测各组Akt、p-Akt、m-TOR、p-mTOR、PTEN及mTOR下游底物p-4EBP-1、p-P70S6K的蛋白表达水平。结果与中药复方组相比,联合组移植瘤体积和质量显著减小(P0.05,P0.01),肿瘤抑制率明显升高,且联合组mTor和P70s6k mRNA表达及p-mTOR和P70S6K蛋白表达水平明显低于中药复方组,而联合组PTEN蛋白表达高于中药复方组(P0.05)。结论益气扶正复方与依莫维司联用能抑制MDA-MB-468荷瘤裸鼠的肿瘤组织生长,与益气扶正复方单用相比效应更为显著,其作用机制可能与抑制p-mTOR、p-Akt、p-P70S6K活性,提高p-4EBP-1、PTEN表达有关。     

补肾填精中药仙子益真胶囊对卵巢早衰模型小鼠卵巢PI3K/AKT通路的影响

目的研究补肾填精中药仙子益真胶囊对卵巢早衰小鼠磷酯酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、Ki67蛋白表达及各级卵泡数量的影响。方法选用动情周期规律的57只SPF级雌性C57BL/6J型小鼠随机分为空白对照组(7只)、模型组(50只)。模型组使用雷公藤多苷片造模,将成功造模的35只小鼠随机分为模型组、益真低剂量组[仙子益真胶囊0. 75 g/(kg·d)]、益真中剂量组[仙子益真胶囊1. 5 g/(kg·d)]、益真高剂量组[仙子益真胶囊3. 0 g/(kg·d)]和西药组[戊酸雌二醇片0. 15 mg/(kg·d)],每组7只。给予相应药物治疗,治疗21天后采用HE染色法检测卵巢组织的形态变化,计算各级卵泡数目,免疫组化方法检测Ki67蛋白表达,Western blot法检测小鼠卵巢AKT及PI3K蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组原始卵泡、次级卵泡、窦状卵泡百分比降低,Ki67表达、AKT及PI3K蛋白表达降低(P 0. 05,P 0. 01),闭锁卵泡百分比升高(P 0. 01)。与模型组比较,益真低、中、高剂量组及西药组原始卵泡、次级卵泡、窦状卵泡百分比升高,闭锁卵泡百分比降低(P 0. 05,P 0. 01),Ki67表达、AKT及PI3K蛋白表达增高(P 0. 05)。结论补肾填精中药仙子益真胶囊改善卵巢功能的机制可能与提高了卵巢细胞中PI3K/AKT通路活性及细胞增殖状态相关,从而增加了原始卵泡、次级卵泡、窦状卵泡的含量,降低了闭锁卵泡的含量。     

健脾消癌方对大肠癌肝转移裸鼠模型肝组织PI3K/Akt通路相关蛋白表达的影响

目的:研究健脾消癌方对大肠癌肝转移裸鼠模型肝组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路相关蛋白表达的影响,探讨其拮抗大肠癌肝转移的作用机制。方法:随机抽取10只BALB/C-nu裸鼠作为空白组,其余裸鼠建立人大肠癌细胞肝转移裸鼠模型,建模3 d后取存活裸鼠30只,随机分为模型组,健脾消癌方组(41.6 g·kg-1),人参皂苷Rg3组(5.2 mg·kg-1),各组裸鼠灌胃相应药物及生理盐水4周后脱颈处死,观察各组裸鼠肝转移情况,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定肝组织第10号染色体同源缺失性磷酸酶和张力蛋白基因(PTEN),磷酸化第10号染色体同源缺失性磷酸酶和张力蛋白基因(p-PTEN),Akt,磷酸化蛋白激酶(p-Akt)蛋白表达情况。结果:健脾消癌方及人参皂苷Rg3组肝转移率明显低于模型组(P0.05);与空白组比较,模型组中p-PTEN,p-Akt蛋白表达明显升高(P0.05),与模型组比较,健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组肝组织中p-PTEN,p-Akt蛋白表达明显降低(P0.05);健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组p-PTEN,p-Akt表达差异无统计学意义。与空白组比较,模型组PTEN,Akt蛋白表达明显降低(P0.05);与模型组比较,健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组PTEN,Akt蛋白表达量明显升高(P0.05);健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组PTEN,Akt蛋白表达差异无统计学意义。结论:健脾消癌方可拮抗大肠癌肝转移,其作用机制可能与升高PTEN蛋白表达,降低p-PTEN,p-Akt蛋白表达有关。