人乳头瘤病毒预防性疫苗病毒样颗粒的研究与应用

人乳头瘤病毒(HPV)感染与尖锐湿疣、宫颈上皮瘤样增生和宫颈癌的发生关系密切，由于该病毒尚不能在体外有效培养，所以限制了疫苗的研究进展。通过分子生物学方法在体外表达的HPV病毒样颗粒(VLP)成为疫苗研究的主要方向。本文对VLP作为预防HPV感染疫苗的研究进展、VLP来源的镶嵌样病毒颗粒的相关研究和树突细胞在VLP免疫过程中的作用进行了综述。     

重组人乳头瘤病毒6型病毒样颗粒的免疫原性分析

目的　研究重组人乳头瘤病毒 6型 (humanpapillomavirustype 6 ,HPV 6 )病毒样颗粒(virus likeparticle ,VLP)的免疫原性。方法　重组杆状病毒在昆虫细胞中表达制备的HPV 6L1VLP(L1 VLP)和HPV 6L1+L2VLP(L1+2 VLP)经鉴定后 ,用于免疫BALB/c小鼠 ,对诱导的体液免疫和细胞免疫反应进行了检测。结果　电镜观察显示L1 VLP和L1+2 VLP二者形态上无明显差异 ,为圆形颗粒 ,直径约 5 0nm ,SDS PAGE和Westernblot分析表明 ,L1+2 VLP中L1和L2蛋白摩尔比例为 4∶1。用ELISA法测定免疫小鼠血清抗体滴度 ,加佐剂L1 VLP免疫组和加佐剂L1+2 VLP免疫组血清针对HPV 6L1VLP的滴度在 1∶10 0 0 0以上 ,高于未加佐剂组免疫血清滴度 (1∶2 0 0 0 ) ,L1+2 VLP免疫诱导出了特异于L2抗原的抗体。血清抗体主要识别HPV 6构象依赖性抗原表位 ,与HPV 11抗原显示出一定的交叉反应 ,而与HPV 16无明显交叉反应。免疫小鼠脾淋巴细胞体外经HPV 6L1VLP再激活后出现了特异性增殖反应 ,3H TdR掺入值与未免疫组之间差异有显著性 (P <0 .0 1) ,L1 VLP和L1+2 VLP两组间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,L1 VLP和L1+2 VLP免疫组刺激指数 (SI)分别为 6 .4和 6 .2 ,阴性对照组SI为 1.1。HPV 6L1VLP再刺激特异地诱导免疫组脾淋巴细胞IL 2和IL 10分     

人乳头瘤病毒的致癌机理及其疫苗的临床试验研究

高危型人乳头瘤病毒（HPV）是引起宫颈癌的重要原因.诸多类型的HPV疫苗已经进入临床试验.在预防性疫苗中,嵌合型病毒样颗粒（cVLP）取得了不错的效果;在治疗性疫苗中,人们尝试了多肽疫苗,蛋白疫苗,DNA疫苗,病毒载体疫苗和联合免疫等方式,可以检测到所诱发的特异性免疫反应,但临床效果并不满意.无论预防性疫苗还是治疗性疫苗都面临着许多挑战.     

乳头瘤病毒病毒样颗粒的研究进展

乳头瘤病毒病毒样颗粒（VLP）主要依壳蛋白L1体外表达后处我组装成结构和功能类似天然病毒的颗粒,在HPV诊断,防治等方面有重要作用。本文就HPV VLP的制备、结构,病毒组装机理,病毒与细胞相互作用以及VLP在血清学检测中的应用等方面作一综述。     

原核高效制备人乳头瘤病毒16型L1病毒样颗粒

目的通过原核表达系统高效制备人乳头瘤病毒(HPV)16晚期蛋白L1病毒样颗粒(VLPs)。方法构建HPV16L1基因序列优化前后的PET30aHPV16L1重组质粒,转化大肠杆菌Rosetta(DE3);用IPTG诱导目的基因表达,两步层析方法纯化HPV16L1蛋白;电镜下观察纯化产物形成VLPs的情况。结果成功构建大肠杆菌工程菌,高效可溶表达(目的蛋白约占总蛋白的38%)并纯化HPV16L1蛋白,纯度达95%以上,电镜下观察,发现纯化后的目的蛋白为直径50 nm左右,形态与天然病毒颗粒高度相似。结论在大肠杆菌原核系统中高效、简易地制备了HPV16L1VLPs,为诊断试剂和疫苗的研制奠定基础。     

人乳头瘤病毒感染与人乳头瘤病毒疫苗的研究进展

人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈癌的发生密切相关,是宫颈癌发生的最主要诱发因素.预防性HPV疫苗是一种预防宫颈癌的新方法,其效果得到了多项临床试验的肯定.治疗性HPV疫苗的研发同样备受关注,目前治疗性疫苗的类型很多,但因其机制较复杂,大多仍处在实验阶段.     

人类乳头瘤病毒（H^1PV）病毒样颗粒的研究进展

人乳头瘤病毒 ( human papillomavirus,HPV)是一类具有严格宿主范围和组织特异性的 DNA病毒 ,主要感染人的皮肤或粘膜上皮细胞 ,引起感染部位发生良性和恶性病变。根据DNA序列的同源性组织特异性等 ,HPV可分为许多型别。目前发现的人乳头瘤病毒已超过1 0 0型 [1] ,其中感染人生殖道的人乳头瘤病毒有 3 5个型别 [1] ,根据其致瘤性不同分为低危型和高危型两大类。高危 HPV的感染与宫颈癌的发生有十分密切的关系。约 80 %的宫颈癌与四个型别的 HPV感染有关 ,分别是 HPV1 6、1 8、3 1和 45型 ,其中 50 %的宫颈癌与 HPV1 6感染有关 [1]…     

HPV16预防性疫苗的相关研究动态

人类乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）在宫颈癌患者中检出率高达９０％。近年来通过基因工程方法对ＨＰＶ的晚期基因（Ｌ１和Ｌ２基因）编码的外壳蛋白产物的研究很多，发现主要壳蛋白（Ｌ１）可自我组装成病毒样颗粒（ＶＬＰ），并可用途预防性疫苗；基于次要壳蛋白（Ｌ２）的预防性疫苗和核酸水平的预防性疫苗也很有前途。本文就近几年的研究进展及趋势作一综述。     

治疗性人乳头瘤病毒疫苗研究进展

人乳头瘤病毒是以表皮细胞为感染对象的小型DNA病毒,HPV感染与子宫颈癌的发生、发展有着十分密切的关系.宫颈癌位居女性恶性肿瘤的第二位,且呈逐年上升的趋势.已上市的疫苗主要用于预防HPV的感染,对已感染HPV人群的治疗效果欠佳,治疗性疫苗可以通过诱导特异性的细胞免疫应答,阻止甚至清除HPV感染引起的病变及肿瘤.动物实验和临床试验结果显示,治疗性HPV疫苗在治疗HPV感染相关疾病有重要作用.因此,治疗性HPV疫苗的研制及应用已成为近年来研究热点.     

人乳头瘤病毒的致癌机理及其疫苗的临床试验研究

高危型人乳头瘤病毒(HPV)是引起宫颈癌的重要原因.诸多类型的HPV疫苗已经进入临床试验.在预防性疫苗中,嵌合型病毒样颗粒(cVLP)取得了不错的效果;在治疗性疫苗中,人们尝试了多肽疫苗,蛋白疫苗,DNA疫苗,病毒载体疫苗和联合免疫等方式,可以检测到所诱发的特异性免疫反应,但临床效果并不满意.无论预防性疫苗还是治疗性疫苗都面临着许多挑战.     

二代人乳头瘤病毒预防性疫苗的研究进展

人乳头瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）是一种嗜黏膜和皮肤上皮的双链DNA病毒,与多种疾病的发生相关.根据致病性将其分为高危型和低危型2种,高危型感染与宫颈癌及癌前病变的发生密切相关,有：HPV-16、-18、-45、-31、-33、-52、-58等;其中70%的宫颈癌与HPV-16/18型有关.低危型感染与生殖器疣和宫颈低级鳞状上皮增生病变的发生密切相关,有：HPV-6、-11、-40、-42等,其中6和11型的感染与90%以上的生殖器疣和宫颈低级鳞状上皮增生病变的发生密切相关.     

人乳头瘤病毒16型晚期蛋白L1的表达及病毒样颗粒的装配

目的　在昆虫细胞中表达人乳头瘤病毒 16型 (HPV16 )哈尔滨地区分离株的晚期蛋白L1,并分离纯化由L1蛋白在细胞中自主组装成的病毒样颗粒 ,为HPV16预防性疫苗的研制奠定基础。方法　获得含有HPV16L1基因的重组杆状病毒并使目的蛋白L1在昆虫细胞中表达 ;对重组杆状病毒的扩增条件及L1蛋白的表达水平进行优化 ;电镜下观察昆虫细胞中晚期蛋白装配成病毒样颗粒的情况 ,经氯化铯密度梯度纯化病毒样颗粒 ,并经Westernblot进行验证。结果　获得了稳定表达L1蛋白的重组杆状病毒 ;以MOI值为 0 .2感染昆虫细胞可获得较高滴度的重组病毒 ,以MOI值为 10感染昆虫细胞可获得较高水平的L1蛋白表达 ;电镜下可观察到昆虫细胞核内直径为 5 5nm的病毒样颗粒 ;病毒样颗粒可通过氯化铯密度梯度离心获得。结论　获得人乳头瘤病毒哈尔滨地区分离株L1蛋白可在昆虫细胞中自主装配的病毒样颗粒并成功分离纯化。     

子宫颈癌人乳头状瘤病毒疫苗的研究进展

宫颈癌是全世界妇女第三大常见肿瘤 ,每年大约有 3 70 0 0 0新诊断的病例 [1]。尽管目前临床上应用手术或放疗治疗早期宫颈癌治愈率已达 90 %以上 ,但对中晚期病人的治疗仍比较困难 ,还有 3 5%病人没有有效地治疗的办法而发展为持续性或转移性疾病。故对宫颈癌的治疗和预防需要发展更有效的或辅助治疗。在所有宫颈癌细胞中几乎都有人乳头瘤病毒(HPV) DNA和病毒转化蛋白的表达 ,表明这一病毒在疾病的发病中起重要作用。高危 HPV的感染是宫颈癌的必然起因 ,这为发展治疗性疫苗来治疗早期和晚期宫颈癌提供了的机会。HPV预防性疫苗的发展也…     

人乳头瘤病毒16型E7核酸疫苗的构建及鉴定

人乳头瘤病毒16 型在引起宫颈上皮转化过程中, 持续表达E7 蛋白, 有可能成为肿瘤特异性移植抗原。本文将E7蛋白的编码基因定向克隆于真核表达载体构建了HPV16E7 HB核酸疫苗, 将该疫苗直接注射BALB/c 小鼠和Wistar 大鼠股四头肌, 动态观察, 28d 后仍能测出E7 DNA 的扩增。提取肌组织RNA, RT PCR检测老鼠特异性E7 的转录情况, 3/3 大鼠,1/10 小鼠为阳性; 用ELISA法在免疫小鼠血清中检出了特异性抗E7 抗体。证明, HPV16E7 HB 核酸疫苗构建正确且能够在哺乳动物体内和体外有效表达     

人乳头瘤病毒外壳蛋白研究进展

人乳头瘤病毒(HPV)的晚期转录区(L区)编码病毒的两个外壳蛋白:主要外壳蛋白(L1)和次要外壳蛋白(L2),外壳蛋白具有组装功能、有抗原表位、在宿主细胞表面有蛋白受体。本文就HPV外壳蛋白的分子特性、组装功能、表达、抗原表位及血清学、受体、病毒外壳蛋白的组织等研究进展作一综述。     

人乳头瘤病毒黏膜疫苗的研究前景

人乳头瘤病毒( human papillomavirus,HPV)是环状双链DNA病毒,具有高度宿主细胞特异性,主要传播途径是性接触[1].根据感染后诱发病变的不同,嗜黏膜型HPV分为高危型和低危型.低危型HPV感染则与肛门生殖道良性病变和子宫颈鳞状上皮细胞低度病变等疾病有关,高危型HPV感染可引发宫颈癌和肛门癌等疾病.     

人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗的计算机辅助设计及真核表达

目的:设计并表达预防16型人乳头瘤病毒感染的重组蛋白疫苗。方法:选取HPV16型病毒L1蛋白上的B表位和T表位,将其连接组合成多种方式,利用计算机预测蛋白质的三维结构,选取其中最优的结构进行基因克隆构建,并利用杆状昆虫系统进行表达。结果:利用计算机设计出了一种重组蛋白,成功构建了该重组蛋白的结构基因,并在杆状昆虫表达系统中得到表达。结论:成功构建并表达了人乳头瘤病毒的重组蛋白疫苗。     

人乳头瘤病毒16型结构基因L1在昆虫细胞中的表达及其生物学活性

目的 研究与宫颈癌及人类其它多种组织癌症密切相关的人乳头瘤病毒16型（HPV16）的晚期基因L1的表达及其生物学活性。方法 采用PCR法从pBSSK-B/16L1扩增了来自中国妇女鲍温病组织标本的HPV16晚期基因L1,装入杆状病毒转移载体;在DH10Bac内通过转座子Tn7的介导,使携带有杆状病毒多角体蛋白基因启动子Ppolh的HPV16 L1基因整合入杆状病毒,形成重组杆状病毒;转染昆虫细胞Sf9进行表达;将感染72h的Sf9细胞包埋、切片、染色后,电镜观察。提取L1蛋白,免疫BALB／ c小鼠。结果 重组杆状病毒在Sf9细胞内高效表达出L1蛋白,经Western blot发现能与L1抗体特异地结合;薄层扫描显示所表达的L1蛋白占Sf9细胞总蛋白的比例高达31％。经透射电镜观察表明,在细胞核里有大量的重组杆状病毒形成;并且产生了大量的由HPV16 L1蛋白单体自组装的病毒样颗粒（virus-like particles,VLP)。小鼠免疫实验结果表明,所表达的HPV16 L1蛋白单体自组装的病毒样颗粒（virus-like particles,VLP)。小鼠免疫实验结果表明,所表达的HPV16 L1蛋白具有强免疫原性。结论 此研究为今后L1基因分子流行病学检查、L1蛋白的结构生物学研究、疫苗研制以及HPV相关基础性研究提供了有用的资料。     

人乳头瘤病毒诱导肿瘤发生的研究进展

人乳头瘤病毒可导致多种疾病,且发现它的感染与多种恶性肿瘤发生密切相关,其早期基因E5,E6,E7在其致瘤过程中发挥关键作用。研究E5,E6,E7的结构和功能有助于揭开人乳头瘤病毒的致病机制,为控制该病毒所致的疾病提供依据。