UV-C诱导体外平滑肌细胞凋亡的相关信号机理的研究

为观察经ＵＶＣ照射诱导的体外凋亡动脉中膜平滑肌细胞(ＳＭＣ)内Ｃａ2+浓度及ａｃｔｉｎ表达的变化,应用ＳＰ免疫组织化学技术和图像分析技术检测凋亡ＳＭＣ内ａｃｔｉｎ的表达;应用粘附细胞分析及筛选激光细胞仪观察凋亡ＳＭＣ内Ｃａ2+浓度的变化。结果:ＵＶＣ照射后,ＳＭＣ出现典型的凋亡形态学和生化指标上的改变。ＵＶＣ动态照射10ｍｉｎ引起胞浆内Ｃａ2+浓度的快速升高;并引起照射后不同时期ＳＭＣ中Ｃａ2+浓度的持续升高。凋亡ＳＭＣ内ａｃｔｉｎ表达较正常大大加强,并出现从胞内向核周、从胞内向核内的迁移和再分布。据此认为:Ｃａ2…     

功率密度对激光诱导之VSMC凋亡率的影响

目的 :通过激光照射诱导体外培养血管平滑肌细胞(ＶＳＭＣ)凋亡 ,观察能量密度相同时功率密度与ＶＳＭＣ凋亡率的关系 ,为将激光诱导细胞凋亡的方法用于血管成形术后再狭窄的防治提供实验依据。材料与方法 :组织贴块法培养兔主动脉平滑肌细胞 ,透射电镜上观察ＶＳＭＣ胞浆内肌丝及密体 ,鉴定ＶＳＭＣ。实验采用第四代细胞。将能量密度确定为 10 0、2 0 0、30 0、40 0Ｊ/ｃｍ2 ,以功率密度分别为 10 0、2 0 0、30 0ｍＷ/ｃｍ2 予波长 5 10 6ｎｍ铜蒸气激光照射。照光后 2 4ｈ取材 ,制作细胞涂片 ,以ＤＮＡ末端标记法 (ＴＵＮＥＬ)标记ＴＵＮ…     

UV-C照射诱导体外血管平滑肌细胞凋亡模型的建立

应用常规细胞培养超净台紫外消毒灯(220Ｗ,220Ｖ,50Ｈｚ)发射的ＵＶＣ波段的紫外光源(254ｎｍ),垂直照射距离其10ｃｍ处的大鼠主动脉平滑肌细胞(ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｓ,ＳＭＣｓ),发现经照射后细胞出现典型的凋亡形态学改变,如细胞变圆、染色质浓缩、细胞膜出泡、出现凋亡小体等;细胞面积、核面积及核/胞面积比均显著降低;且提取细胞ＤＮＡ的琼脂糖凝胶电泳呈现梯状图谱。从形态学和生化指标方面证明了ＵＶＣ照射可诱导体外血管ＳＭＣｓ凋亡。此方法可作为进一步研究ＳＭＣｓ凋亡的内在调控机制的一个简便、稳定、可靠的模型。…     

移植pSVPoMcat微基因修饰雪旺氏细胞对脊髓损伤后细胞凋亡的影响

目的探讨ｐＳＶＰｏＭｃａｔ微基因修饰雪旺氏细胞（ＳＣ）移植对脊髓损伤（ＳＣＩ）后细胞凋亡的作用。方法将实验动物分为ｐＳＶＰｏＭｃａｔ微基因修饰ＳＣ组（Ａ组），ＳＣ移植组（Ｂ组），损伤对照组（Ｃ组）。移植后１２周，对ＳＣＩ区的脊髓组织切片进行细胞凋亡的检测（甲基绿－派诺宁染色法和荧光原位标记法）以及Ｂｃ１～２和Ｆａｓ蛋白表达的测定（免疫组化法）。结果在Ａ、Ｂ、Ｃ组中，均发现凋亡细胞及Ｂｃ１～２和Ｆａｓ蛋白阳性表达。体视学计量发现，细胞凋亡率为Ｃ＞Ｂ＞Ａ；Ｂｃ１～２蛋白阳性表达顺序为Ａ＞Ｂ＞Ｃ；Ｆａｓ蛋白阳性表达顺序为Ｃ＞Ｂ＞Ａ。结论ｐＳＶＰｏＭｃａｔ微基因修饰ＳＣ移植能抑制ＳＣＩ后的细胞凋亡，而创伤则可诱发细胞凋亡     

8-Br-cAMP和~(60)Co照射诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及相关基因表达的研究

应用８ Ｂｒ ｃ Ａ Ｍ Ｐ 和６０ Ｃｏ 照射体外诱导 Ｈｅｌａ 细胞凋亡。探讨ｂｘ Ｌ ２ ,ｗ ｐ５３ ,ｍ ｐ５３ ,ｃ ｍ ｙｃｉ Ｎｏｓ 的基因表达和ｉ Ｎｏｓ , Ｆａｓ 蛋白表达之间的关系,为探讨无毒性８ Ｂｒ ｃ Ａ Ｍ Ｐ 对宫颈癌治疗的新途径提供依据。采用 Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ 法和 Ｆｅｕｌｇｅｎ 法进行细胞凋亡实验;采用本实验室创新的完整细胞原位 Ｒ Ｎ Ａ 斑点印迹技术检测 Ｆａｓ 和ｉ Ｎｏｓ蛋白,应用高速薄层色谱扫描仪对斑点印迹信号进行定量测定。结果８ Ｂｒ ｃ Ａ Ｍ Ｐ 和６０ Ｃｏ 照射均可上调 Ｈｅｌａ ｗｐ５３ ,ｉ Ｎｏｓ 的基因表达;下调ｍ ｐ５３ ,ｂｃｌ ２ ,ｃ ｍｙｃ 的基因表达。可增强ｉ Ｎｏｓ 蛋白质的酶活性,降低 Ｆａｓ 蛋白质的免疫反应性。显示出８ Ｂｒ ｃ Ａ Ｍ Ｐ 可能代替放疗作为一种治疗宫颈癌的新途径。     

槲皮酮对晚期糖化终产物刺激的微血管内皮细胞VCAM-1、TNF-α、ET表达的影响

槲皮酮 (ＱＵ)是黄酮类化合物 ,具有抑制非酶糖化、可能有防治糖尿病慢性并发症的作用。前期研究发现 ,晚期糖化终产物(ＡＧＥｓ)能够刺激体外培养的微血管内皮细胞 (ＭＥＣ)血管细胞粘附分子 1(ＶＣＡＭ 1)表达增强[1] 。本研究观察ＱＵ对ＡＧＥｓ刺激的ＭＥＣＶＣＡＭ 1及相关细胞因子ＴＮＦ α、ＥＴ表达的影响。1　材料与方法1 1　材料　新生ＢＡＬＢ/Ｃ小鼠 (第二军医大学动物中心 ) ,人血清白蛋白 (Ｖ部分 ) (ＨＳＡ) (Ｓｉｇｍａ,ＵＳＡ) ,Ｆｉｔｃａｎｔｉ ｍｏｕｓｅＶＣＡＭ 1(Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｒ,ＵＳＡ) ,Ａｎｔｉ ｒａｂｂｉ…     

丙型肝炎病毒核心蛋白可溶性单链可变区抗体在大肠杆菌中的表达

利用分子生物学技术,构建表达丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白的人源单链可变区抗体（ＳｃＦｖ）的原核表达载体,并在大肠杆菌ＪＭ１０９中表达可溶性的ＨＣＶ－ｃｏｒｅ－ＳｃＦｖ。以重组的ＨＣＶ核心蛋白为包被抗原,利用噬菌体抗体库的表面展示技术,筛选到含有ＨＣＶ－ｃｏｒｅ－ＳｃＦｖ基因的噬菌体克隆。从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒,经ＮｃｏⅠ／Ｎｏｔ Ⅰ酶切鉴定,该ＳｃＦｖ基因由７５０ｂｐ组成。将其亚克隆到ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ表达载体中,转化大肠杆菌ＪＭ１０９,提取质粒进行ＤＮＡ序列测定,符合ＳｃＦｖ的重链可变区和轻链可变区基因结构特点。ＩＰＴＧ诱导转化的大肠杆菌ＪＭ１０９,在其培养上清中获得了可溶性ＨＣＶ－ｃｏｒｅ－ＳｃＦｖ的表达。酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）证实表达的ＨＣＶ－ｃｏｒｅ－ＳｃＦｖ进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡ     

LACA小鼠骨髓辐射损伤后干细胞因子受体表达的免疫组化研究

目的至今，尚未见到采用免疫组化技术研究骨髓辐射损伤后干细胞因子受体（Ｃ－ｋｉｔ）表达及其在造血重建中的意义。方法经６０Ｃｏγ射线全身照射ＬＡＣＡ小鼠，于照射后４周内分批活杀动物，采用光镜、电镜及ＬＳＡＢ免疫组化方法，研究了辐射诱导的造血细胞凋亡及Ｃ－ｋｉｔ的表达及意义。结果全身照射ＬＡＣＡ小鼠时，５．５Ｇｙ为其亚致死剂量，此剂量照射小鼠可导致外周血白细胞及骨髓有核细胞数减少；骨髓明显损伤及损伤后重建现象；在照后１天内可使骨髓造血细胞发生凋亡；５．５Ｇｙ照射后６小时，Ｃ－ｋｉｔ蛋白于造血细胞浆内明显增多，呈强阳性；照后１０天，骨髓造血细胞增生、恢复，Ｃ－ｋｉｔ蛋白于造血细胞膜表达明显增多，呈强阳性。结论Ｃ－ｋｉｔ表达与造血功能重建有关，在早期造血功能重建中起重要调节作用。     

UV-C诱导的凋亡SMC内Actin蛋白的表达

目的 :观察经UV -C照射诱导的体外凋亡动脉中膜平滑肌细胞 (SMC)内Actin表达的变化。方法 :应用免疫组织化学技术和图象分析技术检测凋亡SMC内Actin的表达。结果 :UV -C照射可诱导SMC发生凋亡 ,凋亡细胞内Actin表达较正常大大增强 ,并出现从胞周向核周、从胞浆向核内的迁移和再分布。结论 :Actin表达的改变可能是参与UV -C诱导的SMC凋亡的信号传递过程中的重要因素之一。     

心痛定抑制激光血管成形术后体外培养的平滑肌细胞增殖和癌基因c-fos的表达

本文在兔腹主动脉粥样硬化模型上，行激光血管成形术（ｌａｓｅｒａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ，ＬＡ），用体外培养的血管平滑肌细胞（ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌ，ＶＳＭＣ）３Ｈ－ＴｄＲ掺入和癌基因ｃ－ｆｏｓ表达的测定观察了心痛定对血管损伤后腹主动脉ＶＳＭＣ增殖的影响。结果显示：心痛定（１０－７－１０－４ｍｏｌ／Ｌ）能抑制体外培养ＶＳＭＣ３Ｈ－ＴｄＲ掺入，呈剂量依赖关系，１０－５ｍｏｌ／Ｌ抑制血清诱导ＶＳＭＣ中的ｃ－ｆｏｓ基因表达。     

人参组甙对紫外辐射致皮肤角质形成细胞损伤的保护作用

本实验旨在观察ＵＶＢ对Ｃｏｌｏｌ6细胞的损伤及人参组甙及其单体对损伤的保护作用 ,研究紫外辐射生物效应 ,并为开发紫外线天然防护药物提供理论依据。一、材料和方法1 试剂 :胎牛血清 (北京军医兽医防治中心 ) ,ＤＭＥＭ培养液 (ＧＩＢＣＯ ,美国 ) ,碘化丙啶ＰＩ(Ｓｉｇｍａ) ,Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ10 0 (ＢＤＨ) ,Ｈｏｅｃｈｓｔ3334 2 (Ｓｉｇｍａ) ,ＲＮａｓｅ(Ｓｉｇｍａ)。2 细胞及实验分组 :人角质形成细胞株Ｃｏｌｏｌ6 (由北京师范大学生物系提供 )。分单纯对照、单纯照射、给药后照射、照射后给药 4组。给药后照射组为在照射前 2 4…     

牛磺酸抑制激光血管成形术后体外培养的平滑肌细胞增殖和癌基因c-fos、c-myc的表达

本文在兔腹主动脉粥样硬化模型上，行激光血管成形术（ｌａｓｅｒａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ，ＬＡ），用体外培养的血管平滑肌（ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌ，ＶＳＭＣ）３Ｈ－ＴｄＲ掺入和癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达的测定，观察了牛磺酸对血管损伤后腹主动脉ＶＳＭＣ增殖的影响。结果显示：牛磺酸（３×１０－６～５×１０－３ｍｏｌ／Ｌ）能抑制体外培养ＶＳＭＣ３Ｈ－ＴｄＲ掺入，呈剂量依赖关系，５×１０－３ｍｏｌ／Ｌ抑制血清诱导ＶＳＭＣ中的ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ基因表达。     

肿瘤坏死因子α对小鼠骨髓型放射损伤的防护作用

目的：研究肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）对受照射小鼠骨髓造血细胞的近期影响和造血重建功能的作用探讨ＴＮＦα对骨髓造血细胞的辐射防护作用。方法小鼠照射前２４ｈ一次性注射ＴＮＦα,２周后检测共外周血ＷＢＣ、骨髓ＭＮＣ、ＣＦＵ－Ｓ和ＣＦＵ－Ｍｉｘ,流式细胞仪分析骨髓ｃ－Ｋｉｔ＋细胞;并进行长期造血重建实验燧注射ＴＦＮα的小鼠,２周后外周血ＷＢＣ、骨髓ＭＮＣ、内源性ＣＦＵ－Ｓ、ＣＵＦ－Ｍｉｘ数量和ｃ－Ｋｉｔ＋     

经UV-C诱导的体外凋亡SMC内Ca2+浓度的改变

目的 观察经UV-C照射诱导的体外凋亡动脉中膜平滑肌细胞(SMC)内游离Ca^2 浓度的变化。方法 应用粘附细胞分析及筛选激光细胞仪观察凋亡SMC内Ca^2 浓度的变化。结果 UV-C照射可诱导SMC发生凋亡,UV-C动态照射10min引起凋亡细胞浆内Ca^2 浓度的快速升高;并引起照射后不同时期胞浆中Ca^2 浓度的持续升高。结论 Ca^2 浓度升高可能是参与UV-C诱导的SMC凋亡信号传递过程中的重要因素之一。     

Bcl—2基因在鼠T—细胞淋巴瘤细胞中抗凋亡作用的实验研究

目的应用转染了Ｂｃｌ－２基因的鼠Ｔ－细胞淋巴瘤ＷＨｂ１２细胞系进一步研究Ｂｃｌ－２基因的抗凋亡作用及意义。方法分别采用紫外线照射２０ｓ、１０μｍ地塞米松作用２４ｈ和２００ｎｇ／ｍｌ鬼臼乙叉甙作用２４ｈ等方法,诱导ＷＨｂ１２细胞和其亲本细胞Ｗ７２ＵＳＡ细胞凋亡,与亲本细胞相比较,观察转染了Ｂｃｌ－２基因的ＷＨｂ１２细胞是否具有抗凋亡作用。结果未转染Ｂｃｌ－２基因的亲本细胞Ｗ７２ＵＳＡ细胞发生了凋亡,而转染了Ｂｃｌ－２基因的ＷＨｂ１２细胞存活完好,无明显凋亡发生。结论进一步证实了Ｂｃｌ－２基因具有显著的抗凋亡作用,其抗凋亡作用谱广,具有重要意义。     

低氧时—氧化碳对PASMC增殖的影响及机制探讨

作者应用ＭＴＴ比色、原位杂交、免疫细胞化学技术检测内源性或外源性ＣＯ对低氧状态下ＰＡＳＭＣ增殖的作用以及对ＰＤＧＦ -Ｂ和原癌基因Ｂｃ1 -2、突变型Ｐ5 3表达的影响 ,探讨ＣＯ抑制低氧状态下ＰＡＳＭＣ增殖的机制。结果表明 :各组ＰＡＳＭＣ中ＰＤＧＦｍＲＮＡ原位杂交和ＰＤＧＦ -Ｂ蛋白的免疫细胞化学染色均为阴性 ,单纯低氧组较正常对照组Ｂｃ1 -2和突变型Ｐ5 3蛋白表达增强 (Ｐ <0 .0 1 ) ,Ｈｅｍｉｎ和ＣＯ干预组Ｂｃ1 -2和突变型Ｐ5 3蛋白表达低于单纯低氧组 ,而Ｈｂ干预组则高于单纯低氧组 (Ｐ <0 .0 1 )。结果表明 ,ＰＡＳ…     

p53和bcl-2表达与BT325细胞辐射性凋亡的关系

目的探讨癌基因表达的变化与辐射诱导肿瘤细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化技术检测人多形性胶质母细胞瘤细胞系，经Ｘ射线处理前后ｐ５３、ｂｃｌ－２基因表达的变化；原位杂交方法检测ｐ５３基因在ｍＲＮＡ水平表达的变化。结果①凋亡组内ｐ５３蛋白表达率明显高于对照组，ｂｃｌ－２表达显著减弱，ｐ５３与ｂｃｌ－２蛋白表达呈显著性负相关。②凋亡组内ｐ５３在ｍＲＮＡ水平表达量明显高于对照组，ｐ５３基因在蛋白水平与ｍＲＮＡ水平表达呈显著性正相关。结论ｐ５３和ｂｃｌ－２基因在Ｘ射线诱导的细胞凋亡过程中具有重要作用     

粒细胞巨噬细胞集落刺激因子重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达

本研究通过反转录ＰＣＲ得到人ＧＭ-ＣＳＦ基因片段后，通过重组插入ｐＢＶ２２０载体质粒的ＥｃｏＲⅠ、ＢａｍＨⅠ之间，构建了重组表达质粒ｐｈＧＭ９１。借助计算机分析，优化了构建质粒的转译起始区，采取定点诱变以消除ＳＤ序列和ＡＴＧ区的强二级结构，提高了表达水平。将ＧＭ-ＣＳＦ基因进行序列测定，与文献报导完全一致，所对应的氨基酸序列与天然氨基酸序列一致。将带有表达质粒ｐｈＧＭ９１的ＤＨ５α菌在４２℃诱导，表达了预期的１５ＫＤ的蛋白，约占菌体总蛋白的２０％，并探讨了不同菌株对表达水平的影响。用ＭＴＴ法测定所表达的ＧＭ-ＣＳＦ生物活性，比活性可达到１×１０~７ＩＵ／ｍｇ，表明所表达的ＧＭ-ＣＳＦ具有生物学作用。     

Fas和Bcl2在受照射小鼠脾淋巴细胞中的表达及与细胞凋亡的关系

目的：探讨Ｆａｓ和Ｂｃｌ－２蛋白在受大剂量＾６０Ｃｏγ射线照射小鼠脾淋巴细胞中的表达及与细胞凋亡的关系。方法小鼠全身一次性γ射线照射,吸收剂量分别为０、６、９、１２、１５和２０Ｇｙ,于照射后３、６、１２、２４ｈ、３、７、１４和２８ｄ活杀取材,免疫组化ＬＳＡＢ染色观察后进行定量分析。结果照射后６ｈ,ｆａｓ的表达呈强阳性,６－１２Ｇｙ剂量范围内阳性表达更明显,而随时间递增表达逐渐减少,但无明显的剂量效     

低剂量辐射对小鼠胸腺细胞成熟、分化、凋亡和激活的影响

目的研究低剂量辐射对胸腺细胞成熟、分化、激活和细胞凋亡及有关基因蛋白表达的影响，以揭示低剂量辐射免疫增强效应的发生机理。方法采用双参数直接免疫荧光和间接免疫荧光流式细胞术，检测了低剂量辐射小鼠全身照射后胸腺细胞ＣＤ４、ＣＤ８、ＴＣＲ、ＣＤ３、ＩＬ－２Ｒ、［Ｃａ２＋］ｉ、Ｂｃ１－２、Ｂａｘ的表达和细胞凋亡。结果实验结果表明：低剂量辐射全身照射未引起ＴＳ减少和ＴＨ／ＴＳ比值上调；低剂量辐射未增加胸腺细胞凋亡，这与Ｂｃｌ－２／Ｂａｘ比值上调有关；低剂量辐射促进了胸腺细胞的成熟分化和信息传递过程。结论以上结果提示：低剂量辐射促进胸腺细胞的成熟、分化和激活，使胸腺向外周输送成熟的具有功能活性的效应性Ｔ细胞的储备增强，可能是低剂量辐射免疫增强效应的重要机理。