试验剂量Ag85A与Ag85B DNA疫苗对膀胱癌大鼠血液系统及肝肾功能的影响

目的探讨试验剂量Ag85A与Ag85BDNA疫苗对膀胱癌大鼠血液系统及肝肾功能的影响。方法致癌剂N-甲基亚硝基脲(MNU)膀胱灌注雌性Wistar大鼠制备膀胱肿瘤模型。将建模成功的48只大鼠随机分为Ag85A+DNAAg85BDNA疫苗组,Ag85BDNA疫苗组,Ag85ADNA疫苗组,卡介苗(BCG)组,空白质粒组和生理盐水组,各8只,建模后第7、14、21天于大鼠右后肢肌肉注射给药。第28天处死大鼠,腹主动脉采血进行血细胞学检测,血清学检测。结果成功建立大鼠膀胱癌模型,致瘤率100%。经治疗后,治疗组大鼠血中白细胞(WBC)、淋巴细胞(LYM)数较空白质粒组和生理盐水组均增高,差异有统计学意义(P<0.05);Ag85ADNA+Ag85BDNA疫苗组较单用Ag85ADNA,Ag85BDNA疫苗组增高幅度较大,与单用Ag85ADNA疫苗组相比有统计学意义(P<0.05),与Ag85BDNA疫苗组、BCG组相比无统计学意义(P>0.05);尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)测定值无论是单独使用还是联合使用DNA疫苗组变化均不明显,与生理盐水组比较无统计学意义(P>0.05)。而BCG组变化明显,与生理盐水组比较有统计学意义(P<0.05),与Ag85ADNA,Ag85BDNA,Ag85ADNA+Ag85BDNA组比较均有统计学意义(P<0.05)。其余血液学指标实验组与对照组相比差异均无统计学意义。结论试验剂量Ag85A与Ag85BDNA疫苗免疫膀胱癌大鼠不会引起肝肾功能的损害和红细胞系的改变,白细胞的变化与其发挥细胞免疫功能相一致。     

DNA疫苗与肿瘤免疫

［摘要］肿瘤DNA疫苗是近年来发展起来的新一代疫苗，因其能诱发有效而持久的免疫反应，因此在治疗恶性肿瘤中被广泛研究。DNA疫苗的抗肿瘤机制包括直接诱导特异抗肿瘤作用和间接增强机体免疫反应。目前已构建出多种肿瘤DNA疫苗，如根据胚胎抗原构建的DNA疫苗、独特型DNA疫苗及根据病毒相关抗原构建的DAN疫苗等。基因佐剂可将编码某些细胞因子及T、B细胞表面共刺激因子等的基因与目的基因克隆于同一载体或不同载体共同免疫动物，其表达的相应蛋白起到佐剂的作用，可大大增强T、B细胞的免疫应答水平。肿瘤DNA疫苗对人类肿瘤治疗与预防的有效性和安全性将是未来研究的重点。     

生物免疫调节剂在浅表性膀胱肿瘤治疗中的应用

目的：观察卡介苗（BCG）和干扰素（IFN）治疗浅表性膀胱肿瘤的临床疗效。方法随机选取2010年6月～2011年6月诊治的78例浅表性膀胱肿瘤患者,随机分为对照组和研究组各39例,对照组给予膀胱内灌注卡介苗（BCG）治疗,研究组给予干扰素（IFN）联合卡介苗（BCG）进行治疗,记录并分析两组相关数据和情况。结果治疗后,研究组的复发率和症状改善情况明显优于对照组,比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论应用干扰素（IFN）联合卡介苗（BCG）治疗浅表性膀胱肿瘤效果更加显著,值得临床推广。     

BCG膀胱薄注预防膀胱肿瘤复发的观察

我们自１９８９年１２月－１９９３年４月对４０例膀胱肿瘤术扣患者行ＢＣＧ膀胱灌注预防术后复发，随访１１－６４个月，复发率２２％，复发者全部为浸润性癌。１０例ＢＣＧ灌注前后膀胱粘膜行透射电镜观察，对ＢＣＧ预防膀胱肿瘤复发的机制作了初步探讨。     

BCG膀胱灌注预防膀胱肿瘤复发的观察

我们自１９８９年１２月～１９９３年４月对４０例膀胱肿瘤术后患者行ＢＣＧ（卡介苗）膀胱灌注预防术后复发，随访１１～６４个月，复发率２２％，复发者全部为浸润性癌。１０例ＢＣＧ灌注前后膀胱粘膜行透射电镜观察，对ＢＣＧ预防膀胱肿瘤复发的机制作了初步探讨。     

羟基喜树碱膀胱灌注预防膀胱肿瘤术后复发的临床观察

目的：观察比较羟基喜树碱和卡介苗膀胱癌灌注对预防膀胱肿瘤术后复发的临床疗效和安全性。方法：膀胱肿瘤术后病人50例随机分成两组：治疗组25例,以羟基喜树碱10mg加生理盐水20ml行膀胱灌注;对照组25例,以卡介苗120mg加生理盐水50ml行膀胱灌注;疗程均为2年。结果：治疗组2年内复发5例（20％）;对照组2年内复发4例（16％）,两组相比无显性差异（P＞0．05）。毒副作用两组相比治疗组明显小于对照组,有显性差异（P＜0．01）,结论：羟基喜树碱膀胱灌注预防术后肿瘤复发,安全,有效,副作用微小。     

结核分枝杆菌Hsp70,Ag85A和ESAT-6多表位DNA疫苗的免疫效果观察

目的探讨新型结核分枝杆菌Hsp70,Ag85A和ES-AT-6多表位DNA疫苗的免疫效果,为结核病防治探索新途径。方法健康BALB/c小鼠90只,随机分成阴性对照组、多表位DNA疫苗组和卡介苗对照组,经3次免疫后4,8和12周分别分离血清测定特异性IgG水平,同时分离小鼠脾细胞,体外经TB-PPD刺激后用MTT法测定T淋巴细胞增殖,并以ELISA法测定脾细胞培养上清液中IFN-γ和IL-4水平。结果多表位DNA疫苗组和BCG组小鼠血清特异性IgG抗体均在4周后明显增高,第8周达最高水平,多表位DNA疫苗组的抗体效价明显高于BCG组;小鼠脾细胞体外经TB-PPD刺激后,多表位DNA疫苗组T淋巴细胞增殖明显高于BCG组,且能诱生较强的IFN-γ反应(P<0.05),IL-4水平与BCG组及阴性对照组相比均无显著差异(P>0.05)。结论结核分枝杆菌Hsp70,Ag85A和ESAT-6多表位DNA疫苗在小鼠体内诱导较强的特异性免疫反应,产生高水平的特异性IgG抗体、诱导特异性淋巴细胞增殖和IFN-γ分泌。     

结核病疫苗研究进展

目前结核病疫情非常严峻,而唯一可用的疫苗卡介苗效果并不理想.因此,需要研发更安全有效和实用价廉的新型疫苗.此文综述了目前正在研发的新型结核病疫苗的研究进展,这些疫苗包括重组卡介苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗和病毒载体疫苗.     

Esat6-卡介苗重组疫苗的构建免疫原性及抗结核作用的初步研究

目的构建结核分枝杆菌esat6-卡介苗重组疫苗,研究其免疫原性及抗结核作用,以期获得结核病预防性或治疗性疫苗。方法通过基因工程重组技术将结核分枝杆菌保护性抗原esat6的编码基因与穿梭质粒载体pYUB295重组,采用电穿孔技术导入卡介苗中,应用聚合酶链反应(PCR)扩增、聚丙烯酰胺凝胺电泳(PAGE)鉴定重组卡介苗。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测其血清中特异性抗体,用MTS法分析其脾淋巴细胞增殖指数。通过观察esat6-卡介苗重组疫苗对结核分枝杆菌感染的预防试验中实验动物半数死亡时间、一定时间内的死亡率、大体病变、T细胞及B细胞免疫功能等指标评价esat6-卡介苗重组疫苗对结核分枝杆菌感染的预防效果。结果PCR扩增、限制性内切酶酶切、DNA测序鉴定、PAGE电泳表明成功地构建了esat6基因pYUB295重组质粒,ESAT6蛋白在卡介苗中分泌表达。重组卡介苗免疫原性试验表明:esat6-卡介苗重组疫苗组有ESAT6特异性抗体产生,45d时达到最高水平。脾淋巴细胞增殖试验表明各组刺激指数均达2.0以上,esat6重组卡介苗免疫组小鼠脾淋巴细胞的刺激指数稍高于对照组。预防试验表明:esat6-卡介苗重组疫苗组、卡介苗组与生理盐水对照组比都能延长结核分枝杆菌感染小鼠的半数死亡时间,降低2个月内的死亡率。其中esat6-卡介苗重组疫苗组效果显著,与卡介苗组比有显著差异。结核分支杆菌攻击后2个月,处死小鼠时,小鼠脏器大体病变及脏器培养结果表明:esat6-卡介苗重组疫苗免疫组小鼠比其他各组小鼠结核菌的负荷轻。抗体检测结果及淋巴细胞增殖实验各组结果差异无统计学意义。结论正确构建了esat6-卡介苗重组疫苗,esat6-卡介苗重组疫苗能提高卡介苗对结核分枝杆菌感染的预防作用。     

虫草多糖对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的 观察虫草多糖对小鼠免疫性肝损伤的保护作用.方法 序贯注射卡介苗(BCG)和酯多糖(LPS),诱导小鼠产生免疫性肝损伤模型.在造模过程中,小鼠每日ig 125、250、500 mg·kg-1虫草多糖,共12 d.比色法测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量,TBA法和NBT法测定肝匀浆中超氧歧化酶(SOD)的活力以及丙二醛(MDA)的浓度.结果 ig 125、250、500 mg·kg-1虫草多糖后,可明显降低模型小鼠血清中升高的ALT、AST的水平,抑制肝匀浆中上升的MDA水平和升高过低的SOD活性.显著降低肝脏中TNF-α和IL-1的含量.结论 虫草多糖对小鼠免疫性肝损伤有一定的保护作用.     

二硫代氨基甲酸吡咯烷对小鼠免疫性肝损伤的抑制作用

目的探讨二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对免疫性肝损伤的抑制作用及其机制。方法设正常对照、脂多糖(LPS)、卡介苗(BCG)、BCG+LPS、PDTC和BCG+PDTC+LPS组。除正常对照、LPS和PDTC组外,其余各组小鼠经尾静脉注射BCG(每只2.5mg)。10d后,LPS和BCG+LPS组分别给予LPS(0.2mg·kg-1,ip),PDTC和BCG+PDTC+LPS组在给予LPS前24和2h分别给予PDTC(100mg·kg-1,ip),对照组给予等体积生理盐水。每组15只小鼠用于观察LPS处理后72h的死亡率;每组6只小鼠于LPS处理后1.5h处死,取肝脏,用RT-PCR检测肝脏组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)mRNA表达水平,用凝胶电泳迁移率分析法测定肝脏核因子κB(NF-κB)结合活性;每组12只小鼠于LPS处理后6h取血,处死,留取肝脏,测定血清谷丙转氨酶(GPT)活性、一氧化氮(NO)水平和肝组织还原型谷胱甘肽(GSH)含量,制备肝组织切片进行HE染色,观察组织病理变化。结果与正常对照组比较,BCG和LPS组小鼠肝脏炎症细胞明显增加,血清GPT活性升高,肝脏GSH含量显著下降,肝脏TNF-α与IL-1β mRNA表达增强,各组均未见小鼠死亡;PDTC组除血清GPT活性升高外,上述其他指标均未发生明显改变。与BCG和LPS组比较,BCG+LPS组血清GPT活性进一步升高,并伴有大面积肝脏坏死和大量炎症细胞浸润,肝脏NF-κB结合活性显著升高,TNF-α和IL-1β表达进一步增强,GSH水平下降,血清NO水平增加,小鼠死亡率40%。与BCG+LPS组比较,PDTC预处理明显抑制BCG+LPS引起的肝脏NF-κB活性、TNF-α及IL-1β mRNA表达增强,升高肝脏GSH含量,降低血清GPT活性和NO水平,减轻BCG+LPS引起的肝脏炎症和坏死,未见小鼠死亡。结论PDTC可抑制BCG+LPS引起的小鼠免疫性肝损伤,其机制可能与其抗炎和抗氧化作用有关。     

Preparation and immunological effectiveness of a Swine influenza DNA vaccine encapsulated in PLGA microspheres

Optimal preparation conditions of DNA vaccine against swine influenza encapsulated in Poly (D,L)-lactic-co-glycolic acid (PLGA) microspheres were determined. The microspheres were prepared by an emulsion-evaporation method using PLGA as the biodegradable matrix forming polymer. Using the optimal preparation conditions, PLGA microspheres containing the DNA vaccine were produced with good morphology as evident from scanning electron micrographs, high encapsulation rate and high stability. The transfection test indicated that the vaccine could be expressed as an antigen in cells and maintained good bioactivity. Moreover, these results demonstrated that the PLGA microspheres containing DNA vaccine can be used to achieve prolonged release of plasmid DNA. These results have laid a foundation for further development before ultimate industrial application.     

汉滩病毒核酸疫苗滴鼻免疫小鼠表达动力学研究

目的 构建汉滩病毒DNA疫苗,考查小鼠鼻内接种DNA疫苗后的基因组织定位及表达动力学,为进一步研究汉滩病毒DNA疫苗粘膜免疫的疗效作前期准备。方法 采用PCR法从PJSA1175-S质粒扩增汉滩病毒的S基因片段后装入PcDNA3．1B(-)载体,并以此候选DNA疫苗滴鼻免疫BALB／c小鼠,在不同时间、不同部位取其组织抽提基因组DNA和组织总RNA,用PCR及RT-PCR检测质粒的分布和表达动力学。结果 构建了汉滩病毒DNA疫苗PcDNA3．1B-S1.3。免疫接种该疫苗第1天后在小鼠鼻咽、肺、肾、肝、脾、小肠等组织中均有质粒分布;第1周内上述组织中均可检测到特异mRNA,第2周起小肠、肝及肾中特异mRNA消失。结论成功构建了PcD-NA3．1B-S1.3DNA疫苗,构建的疫苗滴鼻免疫后在小鼠体内得到广泛的分布及表达。     

A conserved matrix epitope based DNA vaccine protects mice against influenza A virus challenge

DNA vaccination represents a unique strategy to overcome the limitations of immunization with conventional vaccines which is restricted by the high variability of influenza viruses. We evaluated the protective efficacy of a plasmid DNA (pDNA), encoding an evolutionarily conserved epitope of viral matrix protein, against the influenza A virus infection. It was found that the mice immunized via the intra-muscular route purely elicited cell mediated immune response to the pDNA, with enhanced level of Th1 cytokines viz. IL-12 and IFNγ production in the stimulated splenocyte supernatant. The cytotoxic T lymphocytes in the spleen of immunized mice significantly lysed the virus-infected MDCK cells. A significant decrease in virus replication was also observed in the lungs of immunized mice and 83% of the mice were protected against the lethal challenge of influenza A viruses. These findings suggest that the plasmid DNA expressing a single matrix epitope may serve as a promising vaccine candidate to provide effective immunity in the susceptible (mouse) population.     

国产皮内注射用卡介苗的稳定性研究

目的 观察国产皮内注射用卡介苗（卡介苗）的稳定性。方法 取26批上海生物制品研究所有限责任公司（上海公司）2007－2018年生产的卡介苗，按照国家食品药品监督管理总局批准的卡介苗注册标准和中国药典的要求进行各项检定：在0个月进行热稳定性试验，在0和24个月进行鉴别试验、外观、装量差异、渗透压摩尔浓度（2015年12月以后的制品）、水分、纯菌检查、效力测定、无有毒分枝杆菌试验。在0、12、24个月进行活菌数测定。同时对新、老车间生产的各3批疫苗进行加速稳定性与长期稳定性试验，重点考察水分和活菌数。结果 卡介苗在有效期内各项指标检定结果均符合注册标准和药典要求。新、老车间生产的疫苗质量相似。疫苗水分都不高于3.0%。活菌计数均在1.0×106～8.0×106 菌落形成单位/mg。结论 上海公司生产卡介苗的质量是安全、有效、稳定、均一的。     

结核病疫苗研发面临的挑战

结核病（tuberculosis ,TB）是由结核杆菌（Mycobacterium tuberculosis ,M tb）引起的传染病,每年有近1000万例 TB 新发病例,150万人死于 TB 。卡介苗是唯一能够为婴幼儿提供保护作用的疫苗,但它却不能预防成年人 TB 以及控制 TB 流行。随着耐多药 TB 的播散和 M tb／HIV 双重感染人数的不断上升,在世界范围内控制 TB 的形势变得愈发严峻。新疫苗的研发是 TB 防治的重要内容之一,目前全世界已有至少15种 TB 候选疫苗进入临床试验。此外,适宜的动物模型也将对新型疫苗研发以及宿主抗 TB 免疫机制研究起重要作用。     

Strategies for DNA vaccine delivery

Strategies for gene delivery comprise a diverse range of live and synthetic approaches; DNA delivery for the purposes of immunisation in turn comprises a large part of this research. This review mainly discusses synthetic systems for application in the delivery of plasmid DNA vaccines, outlining polylactide-co-glycolide, liposome, chitosan and complex combination delivery systems. Areas of promise for DNA vaccine candidates include immune modulation of allergic responses and veterinarian application. The potential for realistic consideration of DNA vaccines as an alternative to existing approaches is dependent on the development of efficient DNA vaccine vectors and improved systems for DNA vaccine delivery. DNA vaccine technology may yet prove to be an important asset in an environment where there is a critical need for therapeutic and prophylactic strategies to combat a wide range of disease states.