雷帕霉素联合TAT-凋亡素抑制胶质瘤的研究

目的：研究雷帕霉素(Rapamycin, Rapa)和凋亡素(TAT-apoptin, T-ap)联合应用对神经胶质瘤的治疗作用。方法用 MTT 实验比较 Rapa、 TAT-apoptin 单用和联合应用对 U87细胞增殖的影响; AO/EB 荧光染色与流式细胞仪检测对 U87细胞凋亡的影响;建立裸鼠 C6胶质瘤皮下移植模型,计算 Rapa、TAT-apoptin 单独及联合作用下的抑瘤率。结果 Rapa 与 TAT-apoptin 单独用药均能抑制 U87细胞的增殖,呈剂量依赖性,联合用药组细胞增殖率明显低于单独用药组(P ﹤0.05);联合用药组凋亡状态比单独用药更明显,呈晚期凋亡形态,细胞凋亡率显著高于单独用药组(P ﹤0.01);在体内实验中,联合用药组抑瘤率为65.5％,雷帕霉素与 TAT-凋亡素单独用药抑瘤率分别为29.59％,24.4％,前者比后者高1倍(P ﹤0.05)。结论 Rapa 与 TAT-ap 联合用药可增强对胶质瘤细胞增殖的抑制作用,促进胶质瘤细胞的凋亡,产生协同的抗肿瘤作用。     

靶向GRP78增强小鼠抗TfR单克隆抗体抑制神经胶质瘤细胞增殖

目的研究抗转铁蛋白受体(TfR)抗体作用于胶质瘤细胞是否会诱导内质网(ER)应激,以及靶向应激分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)能否促进抗TfR抗体的抗瘤效应。方法 Western blot检测抗TfR抗体作用胶质瘤细胞后GRP78和CHOP的表达。构建针对GRP78的小干扰RNA,小干扰RNA转染胶质瘤细胞后与抗TfR抗体共孵育,流式细胞计量术(FCM)检测肿瘤细胞的增殖和凋亡。结果抗TfR抗体能够诱导ER应激反应,提高胶质瘤细胞GRP78和CHOP的表达水平。与对照组相比,转染针对GRP78的小干扰RNA的胶质瘤细胞与抗TfR抗体作用后,增殖显著减少,凋亡显著增加(P0.05)。结论抗TfR抗体的抗肿瘤作用触发了内质网应激反应,沉默应激分子GRP78的表达,可增强抗TfR抗体的抗瘤效应。     

脂质体姜黄素联合索拉非尼对人肝癌Huh7细胞的抑制作用

【摘 要】 目的:探讨脂质体姜黄素联合索拉非尼对肝癌Huh7细胞的抑制作用。 方法:采用脂质体包埋技术制备脂质体姜黄素,并通过Nano-ZS激光粒度测定仪测定其粒径大小及Zeta电位。分别用浓度为10 ?mol/L脂质体姜黄素、0.1 ?mol/L索拉非尼单独及联合处理人肝癌Huh7细胞,应用CCK8检测和EdU检测评价其对Huh7细胞增殖的影响,通过Transwell小室迁移实验检测其对Huh7细胞迁移能力的影响。 结果:获得粒径为（118.7±13.6） nm、Zeta电位为（-9.8±1.1） mV的脂质体姜黄素,脂质体姜黄素单独使用可显著抑制Huh7细胞的增殖和迁移,脂质体姜黄素与索拉非尼联合使用可显著提高索拉非尼对Huh7细胞增殖与迁移的抑制能力。 结论:脂质体姜黄素与索拉非尼联合使用可显著抑制肝癌Huh7细胞的增殖和迁移,是肝癌治疗的一种潜在策略。     

抗CD43单克隆抗体对B细胞增殖及抗体分泌的影响

目的：研究抗CD43 mAb（DFT1）对B细胞增殖及其抗体分泌的影响。方法：细胞培养，^3H-TdR掺入法测定不同时间抗CD43 mAb对B细胞增殖的影响，ELISA测定其对PWM诱导系统内抗体分泌的水平。结果：单独加入抗CD43 mAb对B细胞增殖无影响，但在TPA诱导系统内加入抗CD43 mAb，培养72h可见显著增殖反应，为单独加入TPA引起增殖反应的3倍，在培养开始加入抗CD43 mAb可引起显著的增殖反应，而延迟加入抗CD43 mAb对B细胞增殖的影响不显著。抗CD43 mAb对PWM诱导系统内B细胞的抗体分泌不产生影响。结论：抗CD43抗体可引起TPA诱导系统内B细胞的显著增殖。而PWM诱导系统内B细胞抗体的分泌无影响。     

T63增强放疗诱导的鼻咽癌细胞凋亡和G2/M期阻滞

 目的： 探讨姜黄素衍生物T63在鼻咽癌CNE-2和CNE-2R细胞中的抗癌作用。方法： 采用MTT法、集落形成实验和流式细胞术检测单独放疗组、药物处理组和放疗药物联合作用组对CNE-2和CNE-2R细胞增殖能力、细胞凋亡和细胞周期的影响,并比较其差异。结果： T63可有效抑制CNE-2和CNE-2R细胞的活性和增殖;T63或电离辐射（IR）均可单独诱导CNE-2和CNE-2R细胞的凋亡和G2/M期阻滞;与T63或IR单独作用组比,T63与IR联合作用诱导细胞凋亡和G2/M期阻滞更明显（P<0.05）。结论： T63通过增加放疗诱导的细胞凋亡和G2/M期阻滞而逆转CNE-2R细胞辐射抗性,提示T63具有放疗增敏的潜在价值。     

转Wee1基因靶细胞抗CTL介导的细胞毒效应

目的 :研究Wee1转基因细胞抗CTL介导的细胞毒效应及抗穿孔素抗体对抗细胞毒效应的影响。方法 :体外混合NIT及淋巴细胞培养获得CTL ,并测定淋巴细胞增殖指数 (MTT法 ) ;采用脂质体将重组体Wee1Hu GFP导入哺乳动物细胞NIT ;以转染重组体前后的NIT为靶细胞 ,检测CTL介导的胞毒效应 (LDH法 ) ,同时测定抗穿孔素抗体对此效应的影响。结果 :混合细胞培养可诱导CTL的增殖 ;转染Wee1基因及加入抗穿孔素抗体NIT组发生的细胞溶解的数量最少。结论 :转Wee1基因靶细胞在一定程度上可抵抗CTL介导的细胞毒作用 ,穿孔素抗体可协同增强此抗胞毒作用。     

转Weel基因靶细胞抗CTL介导的细胞毒效应

目的：研究Weel转基因细胞抗CTL介导的细胞毒效应及抗穿孔素抗体对抗细胞毒效应的影响。方法：体外混合NTT及淋巴细胞培养获得CTL，并测定淋巴细胞增殖指数(MTT法)；采用脂质体将重组体Weel Hu／GFP导人哺乳动物细胞NIT；以转染重组体前后的NIT为靶细胞，检测CTL介导的胞毒效应(LDH法)，同时测定抗穿孔素抗体对此效应的影响。结果：混合细胞培养可诱导CTL的增殖；转染Weel基因及加入抗穿孔素抗体NIT组发生的细胞溶解的数量最少。结论：转Weel基因靶细胞在一定程度上可抵抗CTL介导的细胞毒作用，穿孔素抗体可协同增强此抗胞毒作用。     

雷帕霉素对顺铂作用下人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞增殖、侵袭、黏附及自噬凋亡的影响

 目的:研究雷帕霉素（Rap）对顺铂（DDP）作用下人肺腺癌A549及耐药A549/DDP 细胞增殖、迁移、黏附及其自噬凋亡的影响。方法: 培养人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞株,利用MTT方法分别检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞增殖抑制率的影响;Transwell方法检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞体外侵袭能力的影响;黏附实验检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞体外侵袭能力的影响;流式细胞术检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞凋亡的影响;Western blotting检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞自噬标志蛋白beclin-1和LC3表达的影响。 结果: 与Rap或DDP单独作用组相比,Rap和DDP联合作用能够同时显著抑制人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞增殖、体外侵袭能力及细胞黏附能力,并能够促进细胞凋亡和自噬标志蛋白beclin-1和LC3的表达（均P＜0.05）。结论: Rap能够通过促进细胞自噬而增强DDP的作用,进而抑制人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞的增殖、侵袭、黏附并促进细胞凋亡作用,具有协同作用。     

CD44抗体诱导急性髓性白血病细胞增殖抑制作用的研究

目的　探讨抗CD4 4抗体对白血病细胞增殖的影响 ,以及对T淋巴细胞介导的白血病细胞的细胞毒作用的影响 ;阐明抗CD4 4抗体的抗肿瘤效应机制。方法　利用3 H TdR掺入法检测肿瘤细胞的DNA合成 ;利用PI染色 流式细胞仪法分析肿瘤细胞的细胞周期变化 ;利用PKH2 PI双染色 流式细胞仪法检测T淋巴细胞所介导的细胞毒作用。结果　抗CD4 4抗体可明显地抑制高表达CD4 4分子的急性髓性白血病MML 1细胞的增殖 ,并且利用抗GAM抗体交联抗CD4 4抗体后 ,可直接诱导Fas敏感的MML 1细胞的凋亡改变。另外 ,抗CD4 4抗体单独即可抑制IL 2激活的T淋巴细胞介导的细胞毒作用 ;协同抗CD2抗体后 ,其对IL 2激活的T淋巴细胞介导的细胞毒作用的抑制更加明显。结论　CD4 4分子的表达可能与肿瘤的发生发展有一定的关系。抗CD4 4抗体对MML 1细胞的增殖抑制作用 ,可能与启动了Fas系统所介导的凋亡信号有关。另外 ,抗CD4 4抗体对T淋巴细胞所介导的白血病细胞的细胞毒作用的抑制 ,可能与其部分地阻断了CD4 4分子的表达有关     

姜黄素对TRP离子通道抑制作用的研究

目的验证瞬时受体电位（TRP）通道在胶质瘤MGR2细胞中的存在,研究姜黄素对TRP通道的电生理影响,探讨姜黄素抑制肿瘤细胞增殖的可能机制。方法体外培养人脑胶质瘤细胞MGR2;利用膜片钳技术检测胶质瘤细胞MGR2的电生理特性,验证并分离TRP离子通道。使用薄荷醇、无Mg2＋内液、酸以及非特异阻断剂2-氨基乙氧基苯硼酸（2-APB）及钆离子（Gd3＋）对TRP通道的敏感性进行检测。记录不同浓度的姜黄素对TRP通道电流幅度的影响。结果神经胶质瘤细胞MGR2是一种非可兴奋细胞,其细胞上表现出TRP离子通道的电生理特性。该通道对薄荷醇不敏感,对酸的反应不明显。对细胞内液低Mg2＋有（24.2±4.1）%的TRP电流增加（n=12,P〈0.05）,200μmol/L2-APB及10μmol/LGd3＋对TRP电流分别有（46.4±4.5）%及（73.2±3.6）%的增加（n=12,P〈0.05）。姜黄素对TRP通道的抑制作用具有浓度依赖性和可恢复性。结论 TRP通道在胶质瘤细胞MGR2中存在,姜黄素对TRP通道的作用具有浓度依赖性,为姜黄素抑制肿瘤增殖的可能机制提供了实验依据。     

体外DCs在抗CD45RB抗体诱导免疫耐受中的作用机制

目的:探讨树突状细胞(dendritic cells,DCs)在抗CD45RB抗体诱导的免疫耐受中所发挥的作用,从而阐明抗CD45RB抗体诱导免疫耐受的机制。方法:采用DCs的常规诱导方法(rmGM-CSF、IL-4和LPS),在诱导过程中加入不同剂量的抗CD45RB抗体,成熟后利用流式细胞仪检测细胞表型、周期和吞噬能力,ELISA法检测IL-12分泌量,混合淋巴细胞培养检测DCs对T细胞增殖能力的影响。结果:DCs经抗CD45RB抗体处理后,CD11C和CD83表达升高,CD86表达下降,自身增殖和吞噬能力增强,但分泌IL-12和刺激T细胞增殖的能力明显下降。结论:耐受性树突状细胞(tolerogenic dendritic cells,tDCs)能显著抑制T细胞的增殖,它的产生是抗CD45RB抗体诱导免疫耐受的主要机制之一。     

基因工程抗体增强紫杉醇诱导乳腺癌细胞SKBr3凋亡的作用

目的：探讨抗p185^c-erbB-2/neu基因工程抗体增强化疗药物紫杉醇诱导p185高表达的人恶性乳腺癌细胞系SKBr3凋亡的效应及其机制.方法：采用MTS法检测基因工程抗体、紫杉醇及两者联合对SKBr3细胞增殖的抑制作用;用AnnexinV-FITC/PI法和流式细胞术定量分析SKBr3细胞的凋亡率;用Western blot技术分别检测AKt的Ser473位点、NF-κB p65亚基的磷酸化水平;用EMSA分析SKBr3细胞核内NF-κB与DNA的结合活性.结果：基因工程抗体可增强紫杉醇对SKBr3细胞增殖的抑制作用,并可诱导细胞凋亡;基因工程抗体联合紫杉醇并可显著抑制SKBr3细胞中AKt/NF-κB途径.结论：紫杉醇诱导乳腺癌细胞SKBr3凋亡的同时,可能通过激活AKt/NF-κB途径使癌细胞对紫杉醇产生耐药性.抗p185^c-erbB-2/neu基因工程抗体联合紫杉醇是通过抑制AKt/NF-κB途径而增强紫杉醇诱导癌细胞凋亡的作用.     

抗α1-肾上腺素能受体抗体对培养大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察抗α1-肾上腺素能受体自身抗体对培养平滑肌细胞增殖的影响，并探讨其可能机制。 方法： 用酶消化法培养大鼠平滑肌细胞及用亲和层析的方法纯化抗α1-肾上腺素能受体抗体，用BrdU掺入法检测平滑肌细胞的增殖率，用RT-PCR及Western blotting法检测c-jun、c-fos的表达。 结果： 抗α1-肾上腺素能受体抗体可以显著增加VSMC的增殖，并随时间的延长及抗体滴度的增加而增强，并可增加c-jun mRNA和蛋白的表达，其作用与NE相似，均显著高于正常对照IgG，并均可被α1-肾上腺素能受体阻滞剂prazosin阻断；而该抗体对c-fos的表达无显著增加。 结论： 抗α1-肾上腺素能受体抗体可以显著增加培养大鼠平滑肌细胞的增殖，并可增加c-jun的表达，在高血压血管重塑中可能发挥一定作用。     

交联抗人DR5单抗-YM366EC诱导Jurkat细胞凋亡机制研究

目的：探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）的死亡受体5（DR5）单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号传导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制,为相关肿瘤治疗提供依据。方法：光镜下观察交联366EC作用下Jurkat细胞形态变化,并利用MTT法检测Jurkat细胞的增殖,利用FITC-AnnexinV及PI标记流式细胞仪检测交联YM366EC对Jurkat细胞凋亡率影响。进一步用Western blot法检测交联YM366EC作用于Jurkat细胞2、4、6、8、10、12小时时Bcl-2、Cyt-C、Bax、caspase3、caspase9的表达变化。结果：DR5抗体YM366EC单独应用无凋亡作用,但应用抗小鼠IgG交联366EC后可致Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成,并可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡改变。Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bcl-2蛋白表达减少;Cyt-C、Bax、有活性的caspase3和caspase9蛋白的表达增加。结论：交联抗DR5抗体YM366EC对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、caspase3、caspase9。     

六亚甲基双乙酰胺与烟酰胺联合使用对MELDS19细胞有更强的促分化作用

目的研究六亚甲基双乙酰胺（HMBA）、烟酰胺（HMBPA）单独及两者联合使用对MELDS19细胞生长及分化的影响.方法绘制HMBA和HMBPA单独及两者联合使用后的MELDS19细胞生长曲线,成集落实验检测细胞增殖,联苯胺染色法检测其分化百分率. 结果 MELDS19细胞在HMBA与HMBPA联合作用下增殖能力下降,并且比单独作用强,联苯胺染色阳性率增高.结论 HMBA与HMBPA联合作用能增强抑制MELDS19细胞的生长繁殖并促使其分化.     

交联抗DR5单抗YM366EC诱导的Jurkat细胞凋亡机制探讨

为探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号转导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制。观察了交联366EC对Jurkat细胞的形态变化,细胞增殖和细胞凋亡率影响。进一步用Western blot法检测YM366EC作用于Jurkat细胞不同时间Bcl-2、Cyt-C、Bax、Caspase 3、Caspase 9的表达变化。结果发现DR5抗体YM366EC单独应用无凋亡作用,但抗小鼠IgG交联366EC后可致Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,形成凋亡小体,并可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡。Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bel-2蛋白表达减少;Cyt-C、Bax、有活性的Caspase 3和Caspase 9蛋白的表达增加。结果表明交联抗DR5抗体YM366EC对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、Caspase 3、Caspase 9。     

姜黄素抑制Wnt信号通路增加胃癌细胞对顺铂的敏感性

目的 探讨姜黄素增强胃癌细胞对顺铂化疗敏感性的作用以及Wnt/β-catenin信号通路的调控机制。方法 姜黄素、顺铂单独或联合干预多耐药细胞株BGC-823/5-Fu,并将细胞分为对照组、姜黄素干预组、顺铂干预组、联合干预组。MTT试验及集落形成试验检测各组细胞增殖能力和克隆成瘤能力; Transwell小室试验检测各组细胞迁移能力。Western blot检测各组细胞E-cadherin、Vimentin蛋白及Wnt信号通路相关蛋白表达。结果 干预后72 h,联合干预组OD值低于对照组、姜黄素干预组、顺铂干预组,差异均有统计学意义(P 0. 05)。联合干预组集落形成数、穿膜细胞数均少于姜黄素干预组、顺铂干预组,差异均有统计学意义(P 0. 05)。联合干预组Wnt2及β-catenin蛋白表达低于姜黄素干预组、顺铂干预组; GSK3β蛋白表达高于姜黄素干预组、顺铂干预组,差异均有统计学意义(P 0. 05);联合干预组Vimentin蛋白表达低于姜黄素干预组(P 0. 05),与顺铂干预组比较,差异无统计学意义(P 0. 05);联合干预组E-cadherin蛋白表达与姜黄素干预组和顺铂干预组比较,差异无统计学意义(P 0. 05)。结论 姜黄素下调Wnt/β-catenin信号通路,增强胃癌细胞对顺铂的敏感性,抑制胃癌细胞上皮间质转化。     

亚毒性剂量阿霉素提高抗人DR4、DR5抗体诱导的神经胶质瘤细胞凋亡的研究

目的探讨亚毒性剂量的阿霉素影响抗DR4、DR5单克隆抗体(mAb)FMU1.4和FMU1.5诱导3株神经胶质瘤细胞株U343(TRAIL敏感株)、U138(TRAIL部分敏感株)及U373(TRAIL耐受株)凋亡的作用及可能的机制。方法采用流式细胞术检测DR4、DR5的表达及神经胶质瘤细胞中DNA倍增。用MTT比色法检测mAbFMU1.4和FMU1.5对3株神经胶质瘤细胞增殖的抑制作用。用共聚焦显微镜观察3株细胞中Ca2 的浓度。以Westernblot检测细胞内色素C、FLIP[FLICE-inhibitoryprotein,为一组含有死亡效应结构域(DED)的胞浆蛋白]的表达。结果亚毒性剂量的阿霉素作用后,DR5、DR4在3株细胞中的表达提高;而mAbFMU1.4、FMU1.5诱导U138和U373细胞凋亡的作用增强,细胞内细胞色素C的表达提高,FLIP的表达降低,Ca2 浓度增加。结论亚毒性剂量的阿霉素与抗DR4、DR5mAb联合应用后,可提高mAb诱导靶细胞凋亡的效应,其作用机制与DR4、DR5、细胞色素C、FLIP的表达及Ca2 的含量有关。     

交联抗DR5单抗YM366EO诱导的Jurkat细胞凋亡机制探讨

为探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号转导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制.观察了交联366EC对Jurkat细胞的形态变化,细胞增殖和细胞凋亡率影响.进一步用Western blot法检测YM366EC作用于Jurkat细胞不同时间Bcl-2、Cyt-C、Bax、Caspase 3、Caspase 9的表达变化.结果发现DR5抗体YM366EC单独应用无凋亡作用,但抗小鼠IgG交联366EC后可致Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,形成凋亡小体,并可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡.Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bcl-2蛋白表达减少;Cyt-C、Bax、有活性的Caspase 3和Caspase 9蛋白的表达增加.结果表明交联抗DR5抗体YM366EC对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、Caspase 3、Caspase 9.     

抗CD3—抗胶质瘤双特异性抗体的制备及其细胞毒活性作…

采用化学联法制备抗ＣＤ３－抗胶质瘤双特异性的抗体，其分子结构为杂合的Ｆ（ａｂ‘）２片段、结合率试验证明，此双抗能同时识别并结合ＬＡＫ细胞和胶质瘤细胞，在细胞毒性试验中，虽然双抗，ＣＤ３单抗和ＳＺ－３９单抗混和物均能提高ＬＡＫ细胞对胶质瘤细胞的杀伤作用，但双抗的作用特别显著，增强效应为１４８％，而在以非胶质瘤细胞为靶细胞时，双抗虽有增强作用，但低于ＣＤ３单抗的作用。