细胞形态学在巨幼细胞性贫血与难治性贫血、再生障碍性贫血与骨髓稀释中的鉴别诊断意义

[目的]鉴别分析两组疾病包括巨幼细胞性贫血（MA）与难治性贫血（MDS—RA），再生障碍性贫血（AA）与骨髓稀释。[方法]分别对各组病例进行回顾分析血象，骨髓象及特殊染色的特征。[结果]MDS与MA在骨髓象中粒系细胞、红系细胞病态造血、外周血核右移等方面有显著差异（P〈0．005）；AA与骨髓稀释在骨髓造血分叶核细胞总数、非造血细胞中淋巴细胞总数及骨髓外观特征等方面均有显著性差异（P〈0．05）。[结论]巨幼细胞性贫血与难治性贫血形态学鉴别诊断的关键是有无细胞病态造血，再障与骨髓稀释鉴别关键不但要注意观察骨髓外观还要对骨髓造血与非造血细胞分类进行分析比较。     

环孢菌素A治疗对再生障碍性贫血患者骨髓细胞凋亡的影响

目的 探讨环孢菌素A（CsA)治疗对再生障碍性贫血（再障）患者骨髓单个核细胞Fas（CD95）抗原表达及凋亡的影响作用。方法 用流式细胞术检测骨髓（BM）CD34^ 细胞、CD34^-细胞Fas抗原的表达,用原位末端标记法（TUNEL）测定骨髓单个核细胞凋亡率。结果 应用CsA治疗再障2个月时的总有效率为40％。再障患者骨髓CD34^ 细胞百分率显著低于正常对照（P＜0．05）,再障患者骨髓CD34^ 细胞Fas表达率显著高于正常对照（P＜0．01）,用CsA治疗后,再障患者骨髓单个核细胞凋亡率显著低于治疗前（P＜0．01）。CsA治疗前CD34^ 细胞Fas表达率与骨髓单个核细胞凋亡率呈正相关。结论 CsA治疗可降低再障患者骨髓单个核细胞凋亡率,CD34^ 细胞Fas的异常表达与再障的发病有关。     

Use of flow and laser scanning cytometry to study mechanisms regulating cell cycle and controlling cell death.

Applications of FC and more recently LSC in the fields of cell cycle progression and cell death already have revealed a wealth of knowledge about mechanisms involved in regulation of these pathways. The cytometry instrumentation and the associated methodologies complement tools of molecular biology by providing information that is unavailable from the latter alone. The use of cytometry side by side with classic molecular biology methods offers the means for deeper exploration of these mechanisms at molecular and cellular levels. Recent years brought the availability of new cytometric probes that sense the functional changes in the cell, such as chemical modifications (phosphorylation, acetylation, ubiquitinylation, and so forth) of the regulatory molecules, or their translocations between different cell compartments. Such probes will be particularly useful in mechanistic studies on cell cycle and cell death. One expects that the progress in these fields will expand at a continuously accelerating pace, propelled by development of new methodologies and probes. One of the dominating motors for this progress will be further development of cytometry instrumentation and the applicability of this instrumentation, methods, and probes.     

骨髓间充质干细胞对再生障碍性贫血患者T细胞的免疫抑制

背景：骨髓间充质干细胞对再生障碍性贫血患者T细胞增殖的影响国内报道较少,而骨髓间充质干细胞是否通过抑制T细胞增殖实现对再生障碍性贫血患者的免疫调节目前尚无定论。目的：观察人骨髓间充质干细胞对再生障碍性贫血患者T细胞的免疫调节作用。方法：体外分离培养、扩增人骨髓间充质干细胞并通过形态学特征以及流式细胞术进行表面标志鉴定,将骨髓间充质干细胞分别与正常人和再生障碍性贫血患者外周血提取的T淋巴细胞共培养7d。应用ELISA法检测各培养上清液中T淋巴细胞分泌的白细胞介素2、γ-干扰素、白细胞介素4及白细胞介素10水平。结果与结论：再生障碍性贫血组患者培养上清液中T淋巴细胞分泌的白细胞介素2、γ-干扰素水平明显高于正常人（P〈0．05）,白细胞介素4、白细胞介素10低于正常人（P〈0．05）。骨髓间充质干细胞可下调白细胞介素2、γ-干扰素表达,同时上调白细胞介素4、白细胞介素10表达,从而调节再生障碍性贫血患者的免疫紊乱。     

Cytokine concentrations in bone marrow of stable sickle cell anemia patients.

Inflammation plays a significant role in the clinical manifestations of sickle cell anemia. In studies of anemic patients with other clinical syndromes, measurement of the concentrations of cytokine mediators of inflammation in bone marrow aspirates has provided unique correlations with clinical and laboratory parameters. We determined concentrations of interleukin (IL)-1, IL-6, tumor necrosis factor (TNF), and placental growth factor (PlGF) in bone marrow aspirates from six homozygous sickle cell (SS) patients who were not acutely ill and who were not receiving hydroxyurea, erythropoietin, or chronic transfusion and compared them with specimens from seven healthy controls. We also measured concentrations of soluble transferrin receptor (sTfR) and of marrow erythroid colony-forming units (CFU-E) as markers of erythropoietic activity. sTfR concentration was significantly higher in SS patients (p = .024). CFU-E concentration was not significantly different between the two groups. Bone marrow concentrations of IL-6 and IL-1 did not differ between the study groups. TNF was undetectable in all specimens, plasma or marrow. Bone marrow PlGF concentrations were significantly higher in SS patients (p = .004). Since PlGF is a product of erythroid cells, the ratio of marrow PlGF to marrow sTfR was determined and found to be significantly greater in SS patients. This suggests that the observed difference in marrow PlGF concentrations does not reflect increased erythropoiesis but rather represents increased PlGF production per erythroid unit.     

人骨髓间充质干细胞对再生障碍性贫血患者T细胞增殖影响的体外实验

背景:许多报道指出骨髓间充质干细胞具有免疫调节作用,可治疗自身免疫性疾病.目的:体外观察人骨髓间充质干细胞对再生障碍性贫血患者T细胞增殖的影响.设计、时间及地点:对照观察性实验,于2007-01/10在安徽医科大学第一附属医院中心实验室完成.材料:来源于29例重型及慢性再生障碍性贫血患者的外周血.方法:取再生障碍件贫血患者骨髓血及外周血,采用percoll上密度梯度离心分离骨髓间充质干细胞,用淋巴细胞分离液分离出外周血单个核细胞,用含体积分数为0.20胎牛血清的RPMI1640培养基悬浮,将细胞悬液加入尼龙棉柱内,平置于37℃温箱中孵育1 h,用预温至37℃的上述培养液冲洗出非黏附细胞即为T淋巴细胞,洗涤后重悬于培养基中备用.将骨髓间充质干细胞以1×103/孔,1×104/孔加入到植物血凝素刺激的再生障碍性贫血患者T淋巴细胞增殖体系中,以单独培养的再生障碍性贫血患者T淋巴细胞为对照.主要观察指标:MTT还原法测定再生障碍性贫血患者T淋巴细胞的增殖.结果:与对照组比较,当骨髓间充质干细胞为1×104/孔时,对再生障碍性贫血患者T淋巴细胞增殖表达的抑制率为(42.1±11.2)%,差异有显著性意义(P<0.01),当骨髓间充质干细胞为1×103/孔时,抑制率为(9.2±3.5)%,差异无显著性意义.结论:自体骨髓间充质干细胞可抑制再生障碍性贫血患者T细胞的增殖,且这种抑制作用具有数量依赖性.     

Defective DNA synthesis in human megaloblastic bone marrow: effects of homocysteine and methionine

In B(12) deficiency, inadequate DNA synthesis seems due in large measure to a block of tetrahydrofolic acid (THFA) regeneration from 5-methyl THFA (via homocysteine transmethylation).In support of the above, homocysteine appears to facilitate and methionine to reduce de novo DNA synthesis. This was measured by the ability of deoxyuridine to suppress thymidine-(3)H uptake into DNA in human bone marrow cultures. The homocysteine effect in B(12)-deficient marrow supports the possibility that there is in man an additional B(12)-independent pathway for regeneration of THFA by methylation of homocysteine to form methionine.Among possible explanations for the methionine effect is end-product inhibition of the homocysteine transmethylase reaction, resulting in further accumulation of 5-methyl THFA. Homocysteine transmethylation may play an important role in the regulation of THFA availability and de novo DNA synthesis.In vitro and in vivo evidence suggests that methionine may be useful to potentiate and homocysteine to reduce methotrexate action.     

骨髓间充质干细胞对再生障碍性贫血患者体内T细胞活化影响的临床分析与研究

目的探讨骨髓间充质肝细胞对再生障碍性贫血(AA)患者体内T细胞活化的影响。方法回顾性分析2008年9月至2011年9月的60例骨髓间充质干细胞AA患者的临床资料,从该组患者骨髓中分离并培养间充质肝细胞,采用尼龙棉柱对其中T淋巴细胞予以分离,以不同数量间充质干细胞加入至植物血凝素刺激的再生障碍性贫血患者T淋巴细胞活化体系之中。通过流式细胞仪对数据加以获取,并计算出CD3+CD25+与CD3+CD38+T淋巴细胞的表达率。结果当骨髓间充质干细胞为1×104/孔,与单独培养的再生障碍性贫血患者T淋巴细胞(对照组)比较,间充质干细胞对再生障碍性贫血患者的T淋巴细胞CD25以及CD38的表达呈现出明显的抑制作用(P<0.01);当骨髓间充质干细胞为1×103/孔时,与对照组相比无显著差异,P>0.05。结论对于再生障碍性贫血患者而言,其体内T淋巴细胞受到骨髓间充质在体外间充质干细胞的抑制作用,而且这种抑制作用需要在一定数量的骨髓间充质下才会实现。     

再生障碍性贫血骨髓磁共振成像的临床应用

目的:探讨磁共振成像(MRI)在再生障碍性贫血(AA)中的应用价值。方法:选择AA及正常对照者各20例,行腰椎和骨盆M RI检查,扫描序列为T1W I、T2W I和STIR。对比分析2组资料的骨髓MRI表现及骨髓相对信号强度比值,比较6例AA患者治疗前后的骨髓M RI变化。结果:AA患者的骨髓MRI表现类型包括:弥漫型12例,灶型3例,不均匀型5例。2例于治疗后M RI显示好转。定量分析提示病变组与对照组间的骨髓相对信号强度比值差异有显著性。结论:AA的弥漫型M RI表现具有鉴别诊断价值。MRI对AA的治疗反应及监测其临床转归有一定的临床意义。     

再生障碍性贫血患者骨髓T淋巴细胞的研究

目的：进一步探明免疫因素在再生障碍性贫血（再障）发病中的作用。方法：用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法检测再障患者骨髓中Ｔ淋巴细胞表型的变化，并用半固体培养法检测再障患者骨髓及去Ｔ细胞后骨髓单个核细胞ＣＦＵ－ＧＭ集落形成情况。结果：①与正常对照组相比较，再障患者骨髓中Ｔ淋巴细胞百分率明显增高，且以ＣＤ８、ＣＤ２５细胞增多为主。②再障患者骨髓与外周血中Ｔ淋巴细胞的变化并不完全一致。在部分再障患者，仅骨髓中ＣＤ８细胞增多，外周血中不高。③再障患者骨髓ＣＦＵ－ＧＭ集落数及丛数明显低于正常对照组，去ＣＤ８细胞后，集落数及丛数均明显增加。结论：免疫异常是再障发病的重要因素，而且，骨髓中Ｔ淋巴细胞的变化比外周血更有意义。建议对再障患者常规检查骨髓中Ｔ淋巴细胞及其亚群的变化，以预测应用免疫抑制剂的可行性及其有效性。     

巨幼细胞性贫血老年患者的认知功能损害特征

目的:分析不同贫血程度和营养成分(叶酸/维生素B12)缺乏及病程时间对巨幼细胞性贫血老年患者认知功能损害的影响,并以中国韦氏成人智力量表为标准,比较与国内相应年龄组正常常模数据的差异。方法:①选择1999-03/2004-03在中国医科大学第一临床医院血液内科住院的巨幼细胞性贫血老年患者156例;年龄均在60周岁以上,且自愿参加。②按贫血程度将患者分为设为重度贫血组62例(血红蛋白<60g/L)和轻度贫血组94例(血红蛋白≥60g/L)。按缺乏的营养成分将患者分为叶酸缺乏组61例和维生素B12缺乏组133例(其中维生素B12和叶酸同时缺乏38例)。按病程分为病程长组65例(病程≥2年),病程短组91例(病程<2年)。③评估巨幼细胞性贫血老年患者认知功能采用中国韦氏成人智力量表犤分语言量表测验(包括6个分量表,为知识、领悟、算术、相似性、数字广度、词汇,有的项目通过时记1分,未通过时记0分;另一些项目按回答质量记0,1或2分),操作量度测验(包括5个分量表,为数字符号、图画填充、木块图案、图片排列、图形拼凑,每种操作结果都按质记分)。有时间限制的项目,超过规定时间即使通过也记0分;提前完成的按提前时间的长短记奖励分。一个分测验中的各项目的得分相加,称该分测验的粗分(或称原分)。粗分按手册上相应用表换算成量表分犦。将测得认知水平与正常人常模比较,同时比较不同贫血程度和叶酸/维生素B12缺乏及病程巨幼细胞性贫血老年患者认知功能。④组间计量资料差异测定采用t检验。结果:巨幼细胞性贫血老年患者156例均进入结果分析。①巨幼细胞性贫血老年患者中国韦氏成人智力量表测验结果与国内常模数据比较结果:巨幼细胞性贫血老年患者知识、算术、相似性、词汇、图形排列分量表评分均明显低于国内常模(t=2.237～3.196,P<0.05～0.01)。②不同贫血程度巨幼细胞性贫血老年患者中国韦氏成人智力量表测验结果:重度贫血组知识、算术、数字广度、词汇、图形排列分量表评分均明显低于轻度贫血组(t=2.132～2.356,P<0.05)。③缺乏叶酸/维生素B12巨幼细胞性贫血老年患者中国韦氏成人智力量表测验结果:叶酸缺乏组知识、算术、相似性、数字广度、数字符号、木块图、图形排列分量表评分均高于维生素B12缺乏组(t=2.135～2.413,P<0.05);词汇分量表评分低于维生素B12缺乏组(t=3.178,P<0.01)。④不同病程巨幼细胞性贫血老年患者中国韦氏成人智力量表测验结果:病程长组知识、领悟、算术、词汇、数字符号、填图、木块图、图形排列分量表评分明显高于病程短组(t=2.138～3.246,P<0.05～0.01)。结论:老年巨幼细胞性贫血的认知功能特征为不仅有记忆力和注意力的减退,非语言能力和动手操作部分也受到一些影响。贫血程度的越重,病程越长,认知功能损害越重。维生素B12缺乏的老年巨幼细胞性贫血患者比单纯叶酸缺乏性有更加严重的认识功能障碍。     

巨幼细胞性贫血老年患者的认知功能损害特征

目的：分析不同贫血程度和营养成分（叶酸／维生素B12）缺乏及病程时间对巨幼细胞性贫血老年患者认知功能损害的影响，并以中国韦氏成人智力量表为标准，比较与国内相应年龄组正常常模数据的差异。方法：①选择1999-03／2004-03在中国医科大学第一临床医院血液内科住院的巨幼细胞性贫血老年患者156例；年龄均在60周岁以上，且自愿参加。②按贫血程度将患者分为设为重度贫血组62例（血红蛋白〈60g／L）和轻度贫血组94例（血红蛋白≥60g／L）。按缺乏的营养成分将患者分为叶酸缺乏组61例和维生素B12缺乏组133例（其中维生素B12和叶酸同时缺乏38例）。按病程分为病程长组65例（病程≥2年），病程短组91例（病程〈2年）。⑧评估巨幼细胞性贫血老年患者认知功能采用中国韦氏成人智力量表[分语言量表测验（包括6个分量表，为知识、领悟、算术、相似性、数字广度、词汇，有的项目通过时记1分，未通过时记0分；另一些项目按回答质量记0，1或2分），操作量度测验（包括5个分量表，为数字符号、图画填充、木块图案、图片排列、图形拼凑，每种操作结果都按质记分）。有时间限制的项目，超过规定时间即使通过也记0分：提前完成的按提前时间的长短记奖励分。一个分测验中的各项目的得分相加，称该分测验的粗分（或称原分）。粗分按手册上相应用表换算成量表分]。将测得认知水平与正常人常模比较，同时比较不同贫血程度和叶酸／维生素B12缺乏及病程巨幼细胞性贫血老年患者认知功能。④组间计量资料差异测定采用t检验。结果：巨幼细胞性贫血老年患者156例均进入结果分析。①巨幼细胞性贫血老年患者中国韦氏成人智力量表测验结果与国内常模数据比较结果：巨幼细胞性贫血老年患者知识、算术、相似性、词汇、图形排列分量表评分均明显低于国内常模（t=2．237-3．196，P〈0．05-0．01）。②不同贫血程度巨幼细胞性贫血老年患者中国韦氏成人智力量表测验结果：重度贫血组知识、算术、数字广度、词汇、图形排列分量表评分均明显低于轻度贫血组（t=2．132-2．356，P〈0．05）。⑧缺乏叶酸／维生素B12巨幼细胞性贫血老年患者中国韦氏成人智力量表测验结果：叶酸缺乏组知识、算术、相似性、数字广度、数字符号、木块图、图形排列分量表评分均高于维生素B12缺乏组（t=2．135-2．413，P〈0．05）；词汇分量表评分低于维生素B12缺乏组（t=3.178，P〈0．01）。④不同病程巨幼细胞性贫血老年患者中国韦氏成人智力量表测验结果：病程长组知识、领悟、算术、词汇、数字符号、填图、木块图、图形排列分量表评分明显高于病程短组（t=2．138-3．246，P〈0．05～0．01）。结论：老年巨幼细胞性贫血的认知功能特征为不仅有记忆力和注意力的减退，非语言能力和动手操作部分也受到一些影响。贫血程度的越重，病程越长，认知功能损害越重。维生素B12缺乏的老年巨幼细胞性贫血患者比单纯叶酸缺乏性有更加严重的认识功能障碍。     

再生障碍性贫血患者骨髓造血干/祖细胞体外增殖分化特征的研究

OBJECTIVE: To investigate the quality of bone marrow stem cells from aplastic anemia patients and their in vitro responses to hemopoietic growth factors(HGF). METHODS: CD34 positive bone marrow cells from 10 chronic aplastic anemia(CAA), 5 severe aplastic anemia(SAA) patients and 5 healthy subjects were detected with immunoflurescence assay, enriched by Panning way, and then cultured in vitro for CFU-GM, BFU-E and CFU-E in the presence of recombinant HGFs. RESULTS: CD34 positive rates of the bone marrow mononuclear cells(MNC) of CAA, SAA and control groups were (1.05 +/- 0.51)%, (0.70 +/- 0.37)% and (1.27 +/- 0.45)%, respectively, and there was no difference among them (P > 0.05). After being enriched, CD34 positive cells in MNC of CAA, SAA and control groups increased to a similar level(P > 0.05). In the presence of G-CSF or GM-CSF, the enriched CD34 positive MNC of CAA and SAA patients formed similar CFU-GM number to those of normal controls. The numbers of BFU-E and CFU-E formed from the enriched CD34 positive MNC of CAA and SAA patients were also the same as that of normal control groups under the stimulation of erythropoietin and interleukin-3. Stem cell factor could cooperate with G-CSF, GM-CSF, and erythropoietin significantly increasing the numbers of CFU-GM, BFU-E and CFU-E of CAA, SAA and normal control's enriched CD34 positive MNC. CONCLUSION: The bone marrow CD34 positive cells from aplastic anemia patients appears to be normal in percentages and in in vitro proliferation/differentiation capacities.     

56例巨幼细胞性贫血临床实验室特点分析

目的分析巨幼细胞性贫血（megaloblasticanemia,MA）患者的临床及实验室指标并探讨其临床意义。方法对56例巨幼细胞性贫血患者的临床和肝功能、心肌酶谱、血象和血清造血原料等实验室指标进行回顾性分析。结果56例患者中48例（85．7％）维生素B12缺乏、5例（8．9％）叶酸缺乏;51例（91．1％）出现贫血伴白细胞和（或）血小板减少,3l例（55％）平均红细胞体积（MCV）大于120fL;与正常对照相比,MA患者中乳酸脱氢酶（LDH）、α-羟丁酸脱氢酶（HBDH）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）和间接胆红素（IBIL）明显增高,差异有高度显著性（P〈0．01）。结论LDH、HBDH、AST、TBIL和IBIL增高可作为巨幼细胞性贫血的临床实验室诊断的重要参考指标。     

血宝含药血清和再障患者血清对骨髓基质细胞的影响

目的：探讨血宝含药血清和再生障碍性贫血患者血清对骨髓基质细胞的影响。方法：提纯的再障患者血清抑制蛋白组份加到骨髓基质细胞培养体系48h后，采用免疫组化法观察骨髓基质细胞形态学观察和TUNEL法测定骨髓基质细胞的凋亡。大鼠胃饲血宝7天后制成含药血清按比例加入培养液，培养骨髓基质细胞，观察细胞形态和通过计数了解血宝对骨髓基质细胞的刺激作用；结果： 20例正常人骨髓基质细胞分别与0.1ug/ml，1ug/ml，10ug/ml的再障血清抑制蛋白组份共同培养后，Fas表达阳性率分别为（10.66±4.2）%（P＞0.05），（16.92±9.8）%（P＞0.05），（49.4±10.5）%（P＜0.01），而对照组为（14.4±7.8）%；凋亡细胞发生率分别为（5.6±1.6）%（P＞0.05），（24.82±8.2）%（P＜0.01），（43.3±9.8）%（P＜0.01），对照组为（4.6±1.5）% 。含药血清高，中，培养骨髓基质细胞5天后细胞计数分别（5±0.5）x104，（P＜0.01），（2.3±0.6）X104（P＜0.05），空白对照组为（1.3±0.2）X104 结论：再障患者血清抑制蛋白组份与正常人骨髓基质细胞的凋亡有一定的量效关系。推测Fas-FasL系统可能是启动骨髓基质细胞凋亡的一条重要途径，血宝具有促进骨髓基质细胞增殖作用。     

骨髓间充质干细胞抑制再生障碍性贫血患者外周血T细胞增殖的实验研究

背景:既往研究发现骨髓间充质干细胞具有免疫抑制作用,而再生障碍性贫血患者存在T淋巴细胞异常活化及增殖。目的:体外分析骨髓间充质干细胞对再生障碍性贫血患者外周血T淋巴细胞增殖的抑制作用。方法:分离再生障碍性贫血患者外周血T淋巴细胞,行羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDASE)荧光染色,与体外培养扩增的骨髓间充质干细胞按3︰1比例直接接触法及Transwell法共培养,加入植物血凝素(PHA)刺激T淋巴细胞增殖,并设阴性及阳性对照。流式细胞术检测各组T细胞增殖情况,评价骨髓间充质干细胞对T淋巴细胞增殖的影响。结果与结论:CFDASE染色分析显示,直接接触组T细胞增殖较阳性对照组明显减低(P<0.01);Transwell组T细胞增殖亦较阳性对照组减低(P<0.05);直接接触组T细胞增殖较Transwell组明显减低(P<0.01)。骨髓间充质干细胞可能通过直接接触及分泌某些细胞因子方式抑制再生障碍性贫血患者异常增殖的T细胞,以直接接触方式发挥主要作用。