糖皮质激素受体基因多态性与肾病综合征患儿激素耐药相关性分析

目的探讨糖皮质激素受体基因多态性与肾病综合征患儿激素耐药相关性。方法对研究对象进行基因组DNA的提取,后进行引物的设计和合成,进行PCR扩增,在高温和稳定状态下合成杂合双链,再应用变性高效液相色谱进行分析,进行DNA直接测序。结果琼脂糖凝胶中进行电泳的结果为,研究对象的外显子PCR产物可形成单一的区带,其序列与已知序列相一致,可见清晰明亮的均一条带。在136份基因样本中,经变性高效液相色谱分析出11种多态性,经DNA图谱测序证实。其中3组多态性呈紧密连锁的单倍型,并且为首次报道,其在激素耐药型肾病综合征的基因型频率高于敏感型肾病综合征组,其他的多态性出现的频率较低。结论在糖皮质激素受体基因多态性中筛选出11处多态性,并且发现其中2种为多为点紧密连接的单倍型,有可能与肾病综合征患儿发生糖皮质激素耐药性有关。     

变性高效液相色谱法检测乙型肝炎病毒YMDD基序的变异

目的 建立变性高效液相色谱(DHPLC)检测HBV DNA聚合酶活性区酪氨酸-蛋氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸(YMDD)基序变异的方法.方法 分别采用荧光PCR法和DHPLC法检测61例慢性乙型肝炎(CHB)患者经拉米夫定治疗1年后HBV YMDD基序变异,并经基因测序法验证.结果 共检出10例野生型、5例DNA聚合酶活性区酪氨酸-异亮氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸(YIDD)完全突变型、2例DNA聚合酶活性区酪氨酸-缬氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸(YVDD)完全突变型,3例YMDD与YIDD混合突变型,1例YMDD与YVDD混合突变型,2种方法检出结果一致;21例PCR产物经过基因测序法得到证实. 结论 PCR结合DHPLC检测YMDD基序变异,经济便捷,适用于筛查CHB患者的YMDD基序变异.     

中国人群中C6orf37第二外显子VNTR多态性的研究

目的：证实C6orf37编码区VNTR位点，检测其多态性在中国人群中的分布特点，并寻找VNTR多态性检测的理想方法。方法：用RT—PCR及测序证实C6orf37编码区的VNTR位点，并用SSLP和DHPLC两种方法对166例中国人进行VNTR基因分型。结果：C6orf37基因的第二外显子区存在一个新的VNTR多态性位点，其核心序列为GGCGGCGACTTCGGC，编码5个氨基酸（G—G—D—F—G），重复3到5次。该位点存在3种等位基因：a（3次重复），b（4次重复），c（5次重复），6种基因型：a／a，b／b，c／c，a／b，a／c，b／c。在中国人群中的a、b、c等位基因频率分别为0．145，0．304，0．551。杂和度为0．583，多态信息含量为0．510。DHPLC与SSLP检测VNTR多态性的结果一致，但DHPLC具有快速、经济、高通量的特点。结论：C6orf37编码区存在一个高度多态性VNTR位点，DHPLC是大规模筛选VNTR多态性的理想方法。     

变性高效液相色谱检测IRS-2基因3′-非翻译区单核苷酸多态性

目的 :探讨变性高效液相色谱 (DHPLC)在胰岛素受体底物 2 (IRS 2 )基因 3′ 非翻译区单核苷酸多态性 (SNP)检测中的应用。方法 :采用聚合酶链式反应 (PCR) ,DHPLC ,单链构象多态性 (SSCP)和DNA序列分析对 30例正常对照和 30例 2型糖尿病患者IRS 2基因 3′ 非翻译区进行SNP和突变检测。结果 :PCR DHPLC检测出 4例PCR SSCP分析未能发现的 2型糖尿病患者IRS 2基因 3′ 非翻译区的SNP ,并得到测序验证。结论 :DHPLC是一种快速、自动化程度高、操作简单、检测片段长、准确率高的SNP检测技术。它为进一步研究IRS 2基因 3′ 非翻译区的变异与 2型糖尿病的关系奠定了基础。     

变性高效液相色谱法在肾上腺脑白质营养不良分子诊断中的应用

目的：目的对4个肾上腺脑白质营养不良（ALD）家系进行基因突变分析。方法：应用变性高效液相色谱（DHPLC）技术检测了4个ALD家系的A／3091基因，并通过核苷酸序列分析确证突变位点。结果：所有患儿的母亲，患儿2、患儿3、患儿4弟弟及其表弟与正常对照的PCR产物混合物。均出现DHPLC洗脱双峰。而正常对照均为单峰，提示相应基因片段存在突变位点。上述出现异源双峰的PCR产物经直接测序．证实了相关突变的存在：患儿1母亲为fs Glu 471突变携带者；患儿2存在S108X突变；患儿3存在R617C突变；患儿4弟弟和表弟均存在A141T突变。结论：DHPLC能有效地检测ABCD1基因突变。并为进—步地基因突变筛查与产前诊断提供依据。     

变性高效液相色谱检测IRS-2基因3′-非翻译区单核苷酸多态性

目的：探讨变性高效液相色谱(DHPLC)在胰岛素受体底物-2(IRS-2)基因3′-非翻译区单核苷酸多态性(SNP)检测中的应用。方法：采用聚合酶链式反应(PCR)，DHPLC，单链构象多态性(SSCP)和DNA序列分析对30例正常对照和30例2型糖尿病患者IRS-2基因3′-非翻译区进行SNP和突变检测。结果：PCR-DHPLC检测出4例PCR-SSCP分析未能发现的2型糖尿病患者IRS-2基因3′-非翻译区的SNP，并得到测序验证。结论：DHPLC是一种快速、自动化程度高、操作简单、检测片段长、准确率高的SNP检测技术。它为进一步研究IRS-2基因3′-非翻译区的变异与2型糖尿病的关系奠定了基础。     

变性高效液相色谱分析法在人类基因组单核苷酸多态性检测中的应用

目的:检测白种人和汉族人RDH8基因序列中单核苷酸多态性(SNP)位点,探讨变性高效液相色谱分析法(DHPLC)在基因组研究中的效能.方法:建立8个由白种人和汉族人基因组DNA组成的混合样品池,并进行PCR扩增.其产物以DHPLC检测,发现杂合子信号后,对单独DNA样本进行DHPLC检测及直接测序确定其突变类型.以DHPLC结合DNA样本混合技术在150个汉族人和20个欧洲白种人样本中测定SNP的基因频率.结果:在RDH8基因中共检测到17个SNP,其中12个为新发现的,5个为已报道的;11个SNP在筛查阶段发现,6个在基因频率检测阶段发现;2个仅在白种人样本中检测到,3个SNP的MAF在两种人种间有较明显的差异;汉族人基因频率检测确定了7个常见SNP.结论:DHPLC能有效地用于基因组SNP的检测,结合DNA混合技术,更能提高其检测效力,有效地应用于基因频率的测定.     

变性高效液相色谱检测IRS-2基因3''''-非翻译区单核苷酸多态性

目的探讨变性高效液相色谱(DHPLC)在胰岛素受体底物-2(IRS-2)基因3′-非翻译区单核苷酸多态性(SNP)检测中的应用.方法采用聚合酶链式反应(PCR),DHPLC,单链构象多态性(SSCP)和DNA序列分析对30例正常对照和30例2型糖尿病患者IRS-2基因3′-非翻译区进行SNP和突变检测.结果PCR - DHPLC检测出4例PCR-SSCP分析未能发现的2型糖尿病患者IRS-2基因3′-非翻译区的SNP,并得到测序验证.结论DHPLC是一种快速、自动化程度高、操作简单、检测片段长、准确率高的SNP检测技术.它为进一步研究IRS-2基因3′-非翻译区的变异与2型糖尿病的关系奠定了基础.     

人糖皮质激素受体变异体cDNA序列克隆和表达及其活性研究

目的构建人糖皮质激素受体变异体表达载体,研究其表达和功能.方法运用RT-nested PCR扩增糖皮质激素受体不含有编码LBD(ligand binding domain)的cDNA序列,将PCR产物定向克隆至pEGFP-N2质粒载体,测序筛选重组质粒;荧光显微镜观察重组质粒转染表达情况;相对荧光素酶法检测GR转录激活活性.结果扩增出长1 601 bp的cDNA序列,测序证实:克隆片段与Genbank该基因序列同源性为100%;重组质粒表达产物定位于细胞核;转染组细胞转录激活活性增强.结论成功构建糖皮质激素受体变异体的表达载体,该变异体具有不依赖激素的转录激活活性.     

糖皮质激素受体基因外显子2/1密码子23多态性与支气管哮喘的相关性研究

目的检测糖皮质激素受体（GIucoeorticoid Receptor，GR）基因外显子2／1密码子23多态性，从而探讨糖皮质激素受体基因外显子2／1密码子23与激素敏感型支气管哮喘的相关性。方法按标准方法从外周血白细胞中提取DNA，采用聚合酶链反应／单链构象多态性（Polymerase chain reaction／Single-strand cordormation polymorphism，PCR／SSCP）和基因测序技术，结合琼脂糖凝胶电泳，对20例哮喘患者（研究组）及20例健康对照组的糖皮质激素受体基因外显子2／1密码子23的基因型进行检测和分类．统计两组的各基因型频率，判断两组之间有无差异．统计学处理用X^2检验．结果经琼脂糖凝胶电泳显示哮喘组（20例）与健康对照组（20例）样本PCR产物片断长度约356bp。SSCP分析显示哮喘组（20例）与健康对照组（20例）样本的电泳速率相同，提示无变异存在．行基因测序糖皮质激素受体外显子2／1密码子23基因型均为AGG。结论江西籍汉族人种中糖皮质激素受体基因外显子2／1密码子23基因未发现多态性的存在。糖皮质激素受体基因外显子2／1密码子23与激素敏感型支气管哮喘之间无明显联系．     

荧光PCR熔解曲线法检测广东韶关地区G6PD缺乏症基因突变

目的:采用荧光PCR熔解曲线法检测广东韶关地区G6PD缺乏基因突变,获得基因突变谱并进行方法学应用评价.方法:采用荧光PCR熔解曲线法试剂盒对613例G6PD缺乏症表型筛查阳性样本,分两管检测中国人群常见的12种G6PD基因突变(95A>G、383T>C、392G>T、487G>A、517T>C、592C>T、871G>A、1004C>A、1024C>T、1360C>T、1376G>T、1388G>A).结果:613例标本中检出基因突变536例(男性365例,女171例,占87.44%),其中:1388G>A突变210例(占37.30%),1376G>T突变213例(占37.83%),95A>G突变55例(占9.77%),871G>A突变49例(占8.70%),1024C>T突变18例(占3.20%),1004C>A突变2例(占0.35%),1360C>T突变4例(占0.71%),383T>C突变1例(占0.18%),392G>T突变10例(占1.78%),517T>C突变1例(占0.18%),没有发现487G>A、592C>T突变类型.另外,女性双重杂合或纯合突变分布情况为:1388G>A纯合突变7例,1376G>T纯合突变4例,871G>A纯合突变1例,1388G>A/1376G>T杂合突变4例,1388G>A/871G>A杂合突变2例,1388G>A/95A>G杂合突变1例,1376G>T/1024C>T杂合突变1例,1376G>T/95A>G杂合突变1例,1376G>T/392G>T杂合突变2例.结论:1388G>A,1376G>T,95A>G,871G>A,1024C>T,1004C>A,1360C>T,383T>C,392G>T,517T>C是韶关地区最常见的基因突变类型,与已报道的中国南方人群突变谱相近;荧光PCR熔解曲线法G6PD缺乏症基因结果准确,可广泛应用于临床基因检测.     

贵州土家族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变型

目的研究贵州土家族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)基因致病突变型,检测G6PD缺乏症发生率及基因频率。方法通过硝基四氮唑蓝纸片法对2 789例土家族男性进行G6PD缺乏症定性筛查,用变性高效液相色谱技术和DNA测序对78例个体进行基因突变型鉴定。结果在2 789例纯系土家族男性中,发现2例酶活性异常。在印江县采集的78例(2例酶活性异常和76例正常)纯系土家族男性血样中,共检出G6PD c.1388G>A突变2例、c.1376G>T突变1例和c.1311C>T/IVS 11+93T>C突变2例,基因突变型分别占2.6%、1.3%和2.6%。结论在贵州土家族人群中发现c.1388G>A、c.1376G>T和c.1311C>T/IVS11+93T>C 3种突变型,是共同存在于中国人群的G6PD基因突变型,中华民族可能源于共同的祖先;贵州省印江县土家族男性G6PD缺乏症的基因频率为6.5%,可为上述地区G6PD缺乏症的防治提供依据。     

5-羟色胺4受体基因多态与共患破坏性行为障碍的儿童注意缺陷多动障碍的相关性

目的:探讨共患及不共患破坏性行为障碍(DBD)的儿童注意缺陷多动障碍(ADHD)与5-羟色胺4受体基因(HTR4)83097C＞T、83198A＞G及-36C＞T三种多态之间的相关性. 方法 :对152个共患DBD的ADHD核心家系和173个不共患DBD的ADHD核心家系的83097C＞T、83198A＞G及-36C＞T三种多态进行检测,并分别进行传递不平衡(TDT)检验和单体型分析.结果 :在共患DBD的家系中,单体型T/G/T呈现传递增多的趋势(χ2＝3.470,P=0.062),而在不共患DBD的家系中,单体型C/G/T(χ2＝4.568,P=0.032)和C/G/C(χ2＝5.333,P=0.021)均传递减少.无论在共患DBD的家系,还是在不共患DBD的家系中均未发现等位基因的传递不平衡现象.结论 :ADHD共患DBD与否在HTR4多态水平存在遗传差别.     

蚌埠地区高血压病人药物基因多态性的分布

目的探讨高血压病人降压药物代谢酶基因位点CYP2C9*3(1075A>C)、CYP2D6*10(100C>T)、CYP3A5*3(6986A>G)和药物作用靶点基因位点AGTR1(1166 A>C)、ACE (I/D)、ADRB1(1165G>C)、NPPA (2238T>C)的基因型分布频率。为安徽蚌埠地区高血压病人β受体阻滞剂、血管紧张素受体拮抗剂、血管紧张素转换酶抑制剂、钙离子拮抗剂、利尿剂五大类降压药物的个性化用药提供理论基础。方法使用PCR熔解曲线法检测2020年1-12月住院的879例高血压病人的药物基因位点多态性, 对各基因位点的分型频率进行分析。结果879例高血压病人AGTR1(1166A>C)基因位点的野生型、杂合突变型、纯合突变型的频率分别为88.74%、10.92%、0.34%;ADRB1(1165G>C)基因位点的野生型、杂合突变型、纯合突变型的频率分别为5.23%、35.38%、59.39%;ACE (I/D)基因位点的野生型、杂合突变型、纯合突变型的频率分别为40.73%、43.12%、16.15%;NPPA (2238T>C)基因位点的野生型、杂合突变型、纯合突变型的频率分别为98.63%、1.37%、0%;CYP2C9*3(1075A>C)基因位点的野生型、杂合突变型、纯合突变型的频率分别为91.81%、7.96%、0.23%;CYP2D6*10(100C>T)基因位点的野生型、杂合突变型、纯合突变型的频率分别为25.94%、45.73%、28.33%;CYP3A5*3(6986A>G)基因位点的野生型、杂合突变型、纯合突变型的频率分别为7.17%、39.70%、53.13%。其中, CYP2C9*3(1075A>C)基因位点基因型在男性与女性病人中的分布差异有统计学意义(P < 0.05)。CYP2C9*3等位基因多态性在男性和女性病人的分布差异有统计学意义(P < 0.05)。CYP2D6*10等位基因多态性在男性和女性病人的分布差异有统计学意义(P < 0.05)。结论获得安徽蚌埠地区原发性高血压人群的高血压药物相关的基因多态性分布频率的数据, 为建立病人基因库提供了基础, 便于后期继续深入研究相关基因位点的多态性在临床中指导的合理用药。     

5-羟色胺1D基因多态与共患学习困难的儿童注意缺陷多动障碍的相关性

目的:探讨共患学习困难(LD)的儿童注意缺陷多动障碍(ADHD)与5-羟色胺1D受体基因(HTR1D)1350T＞C和1236A＞G两种多态之间的关联.方法: 就91个共患LD的ADHD核心家系和181个不共患LD的ADHD核心家系的1350T＞C和1236A＞G两种多态进行检测,并分别进行传递不平衡(TDT)检验和单体型分析.结果:在不共患LD的家系中1236A等位基因(χ2＝5.306,P=0.021,传递和未传递的次数分别为115和82)传递次数明显增加.在共患LD的家系中未发现任何等位基因和单体型的传递不平衡现象.结论:ADHD共患LD与否在HTR1D受体基因多态水平存在遗传差别,遗传在不共患LD的ADHD中具有更重要的作用.     

MTHFR与MTRR基因相关突变与H型高血压相关性分析

目的 探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)基因多态性与H型高血压的相关性。方法 选取2017-04~2017-10西安北方医院55例H型高血压患者样本做为病例组,37例孕妇样本作为健康对照组,使用PCR熔解曲线法检测两组人群MTHFR基因677C＞T、1298A＞C和MTRR基因66A＞G位点的多态性,分析两组人群的基因型及分布,采用循环酶法检测血清同型半胱氨酸(Hcy)水平。结果 与孕妇健康对照组相比,H型高血压组MTHFR677C＞T的T等位基因频率显著升高(χ²=10.172,P<0.01),而MTHFR1298A＞C和MTRR66A＞G差异无统计学意义(P>0.05)。此外,H型高血压组血清Hcy明显高于孕妇健康对照组(P＜0.01),血清Hcy水平在MTHFR677C＞T的基因型间差异有统计学意义(P＜0.05),但在MTHFR1298A＞C和MTRR66A＞G的基因型间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MTHFR677C＞T中T等位基因与H型高血压密切相关,也与Hcy水平升高相关,但未发现MTHFR1298A＞C和MTRR66A＞G与H型高血压及Hcy水平升高有关。     

癫痫伴热性惊厥附加症患儿IMPA2基因单核苷酸多态性相关性研究

目的:对癫痫伴热性惊厥附加症患儿进行IMPA2基因多核苷酸多态性研究,探讨两者关系。方法:根据国际抗癫痫联盟综合征分类中癫痫伴热性惊厥附加症诊断标准,参照IMPA2基因型东亚热性惊厥人群分布特点,收集鄂西北地区36例癫痫伴热性惊厥附加症患儿与53例正常对照组患儿,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析法(PCR-RFLP),分别选取IMPA2基因热性惊厥两个常见单核苷酸多态性位点:6号外显子位点159T>C和2号外显子位点558C>T进行基因型分析。结果:癫痫伴热性惊厥附加症组与正常对照组在IMPA2基因SNP基因型和单倍体分布上,6号外显子位点159T>C存在统计学差异。结论:鄂IMPA2基因6号外显子位点159T>C可能是鄂西北地区癫痫伴热性惊厥附加症患儿的易感单核苷酸多态性位点。     

NFKB1基因多态性与溃疡性结肠炎相关性研究

目的　探讨NFKB1 基因单核苷酸多态性rs3774963 C>G和rs11722146 A>G与溃疡性结肠炎的相关性。方法　采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测149例溃疡性结肠炎患者组和168例健康对照组NFKB1 基因多态性。结果　在rs3774963 C>G位点,溃疡性结肠炎组GG基因型占53.0%,明显高于对照组（38.7%）,差异具有统计学意义（P = 0.005）。G等位基因频率（73.2%）亦明显高于对照组（61.9%）,差异具有统计学意义（P = 0.003）。在rs11722146 A>G位点,两组间基因型和等位基因频率差异无统计学意义（P > 0.05）。两位点溃疡性结肠炎不同分型基因型和等位基因频率差异无统计学意义（P > 0.05）。结论　NFKB1 基因rs3774963 C>G多态性与溃疡性结肠炎的发病具有相关性,其中G等位基因是溃疡性结肠炎的遗传危险因素。     

42708例新生儿耳聋基因筛查结果分析

目的 了解南宁市区新生儿常见耳聋基因的突变类型和突变携带率,并就耳聋基因检测结果进行评价,为遗传性耳聋的远期预防和临床诊断提供依据。 方法 对2016年1月—2018年12月在广西壮族自治区妇幼保健院产科出生、儿科门诊以及耳鼻喉科门诊进行筛查的42 708例新生儿,应用基质辅助激光解析-飞行时间质谱法筛查在我国常见的4个基因包括20个位点GJB2(35delG、176-191del16、167delT、299_300delAT、235delC)、GJB3(538C>T、547G>A)、SLC26A4(281C>T、589G>A、1174A>T、1226G>A、IVS7-2A>G、1229C>T、1975G>C、2162C>T、2027T>A、IVS15+5G>A、2168A>G)、和线粒体12SrRNA(1555A>G、1494C>T)。 结果 42 708例新生儿中检出基因突变940例,总体阳性检出率为2.201%,其中GJB2基因突变492例,突变携带率约1.152%;GJB3基因突变61例,突变携带率约0.143%;SLC26A4基因突变320例,突变携带率约0.749%;线粒体12SrRNA基因突变57例,突变携带率约0.133%。同时检出复合杂合突变1例,双杂合突变9例。 结论 本研究中主要的突变基因是GJB2和SLC26A4,主要的突变位点是235delC和IVS7-2A>G,开展新生儿听力筛查与耳聋基因联合检测有助于耳聋的早期预防特别是药物性耳聋的预防,对降低耳聋发生和出生缺陷的发生有重要意义。      

ＪＷＡ基因-７６Ｇ＞Ｃ和４５４Ｃ＞Ａ多态性与宫颈癌易感性

目的:探讨JWA基因多态性与江苏人群宫颈癌易感性之间的关系.方法:采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,检测227例宫颈癌患者和333例年龄、性别相匹配的非肿瘤者JWA-76G＞C、454C＞A和723T＞G多态性的频率和分布.比较不同基因型携带者患宫颈癌的危险性,通过分层分析探讨初潮年龄、初次生育年龄和产次对患宫颈癌的影响.结果:JWA-76GC和454AA基因型均可增加罹患宫颈癌的危险性.携带3-5个危险等位基因者比携带0-2个等位基因者患官颈癌的危险性更大(OR=1.70.95%CI=1.20～2.42).分层分析结果显示,初潮年龄早、生育年龄晚和产次多且携带3-5危险等位基因者能增加患宫颈癌的危险性.本研究未发现JWA基因723T＞G多态性与宫颈癌之间存在显著相关.结论:JWA基因-76G＞C和454C＞A多态性显著增加江苏地区汉族人群患宫颈癌的危险性.