miR-145通过mTOR途径调控NSCLC A549细胞生物学特性

目的探究miR-145调控非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞生物学特性及对雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号转导通路的影响。方法将A549细胞分为miR-145组、对照组、miR-145抗体组和对照抗体组。采用LipofectamineTM 2000转染试剂盒进行质粒转染,行MTT、细胞凋亡、细胞迁移、细胞侵袭检测,Western blotting检测分析雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、真核细胞翻译起始因子(eIF4E)、磷酸化eIF4E(p-eIF4E)、核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)、磷酸化p70S6K(p-p70S6K)、S6核糖体蛋白(S6)、磷酸化S6(p-S6)、eIF4E结合蛋白1(4E-BP)、磷酸化4E-BP(p-4E-BP)水平。结果对照组和对照抗体组细胞miR-145表达和细胞凋亡水平差异无显著性(P＞0.05),但与miR-145组和miR-145抗体组比较有明显差异,其中miR-145组最高,miR-145抗体组最低(P＜0.05)。对照组和对照抗体组细胞增殖、迁移、侵袭活性,以及p-mTOR/mTOR、p-eIF4E/eIF4E、p-p70S6K/p70S6K、p-S6/S6、p-4E-BP/4E-BP表达水平差异无显著性(P＞0.05),但与miR-145组和miR-145抗体组比较有明显差异,其中miR-145组最低,miR-145抗体组最高(P＜0.05)。结论miR-145可通过mTOR途径调控NSCLC A549细胞生物学特性,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖活性、迁移能力及侵袭能力。     

血清miR-378和miR-216b对早期非小细胞肺癌的诊断价值

非小细胞肺癌(NSCLC)是肺癌的常见类型,每年死亡人数不断增加,晚期生存率较低[1].尽管在手术、放疗、化疗和特定靶向治疗方面取得了进展,但由于诊断发现晚,导致其预后仍不理想,进而出现癌细胞的转移[2].大量的基因组学研究将肺癌与抑癌、致癌基因的表达、染色体畸变、氧化应激等因素相联系,这些因素影响了包括细胞生长、分裂...     

AEG-1抑制miR-137对非小细胞肺癌增殖调控作用

目的 探讨AEG-1在miR-137抑制非小细胞肺癌(NSCLC)增殖中的作用及机制。方法收集2013年2月~2014年5月在本院手术治疗的65例NSCLC患者肿瘤标本,提取RNA,qRT-PCR检测NSCLC组织、A549、H460及16HBE细胞中miR-137与AEG-1的表达,统计分析NSCLC组织中miR-137与胶质细胞上调基因1(AEG-1)表达的相关性;将A549细胞根据不同转染试剂分成4组:转染miR-137 mimics及空载体组,转染miR-137 mimics及AEG-1表达载体组,转染miR-137 inhibitor及siRNA无关序列组,转染miR-137 inhibitor及AEG-1 siRNA组。用Lipofectamine 2000进行转染,生长曲线实验检测转染后细胞增殖情况。结果在NSCLC组织中miR-137与AEG-1的表达呈负相关;miR-137表达高的NSCLC细胞中AEG-1表达降低;共同转染miR-137 mimics与AEG-1过表达载体的A549细胞在48 h的细胞数高于对照组,而共同转染miR-137 inhibitor与AEG-1 siRNA的A549细胞在48 h、72 h的细胞数低于对照组。结论miR-137与AEG-1在NSCLC组织及细胞中表达呈负相关;AEG-1逆转miR-137对NSCLC细胞增殖的作用。     

PTEN在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的：研究抑癌基因PTEN在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其意义。方法：收集78例NSCLC及临床资料。采用免疫组织化学SP法检测PTEN蛋白表达情况。结果：PTEN蛋白表达阳性率在NSCLC中为57．69％（45／78），其中在鳞癌为54．00％（27／50），腺癌为64．29％（18／28）（P〉0．05）；PTEN蛋白表达阳性率随NSCLC分化程度的降低而降低，在高分化组为76．47％（13／17），中分化组为60．00％（24／40），低分化组为38．10％（8／21），低分化组与高分化组、中分化组之间比较差异均有显著性（P〈0．01，P〈0．05）；在Ⅰ、Ⅱ期者为72．92％（35／48），Ⅲ、Ⅳ期者为33．33％（10／30）（P〈0．01）；有淋巴结转移的病例为47．92％（23／48），无转移的病例为73．33％（22／30）（P＜0．05）；PTEN蛋白表达阳性者两年生存率为65．67％，表达阴性者为9．09％，两者之间差异有显著性（P〈0．01）。结论：PTEN蛋白表达阳性率的降低与NSCLC的分化程度差、TNM分期高、淋巴结转移及病人的生存期降低相关，可能作为判断预后的指标之一。     

VEGF-C和VEGF-D在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF-C)和血管内皮生长因子-D(VEGF-D)在非小细胞肺癌组织中的表达与其临床病理学参数的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测105例非小细胞肺癌组织及肺部淋巴结中的表达.结果 61.5%非小细胞肺癌标本呈现VEGF-C表达阳性,51.4%非小细胞肺癌标本呈现VEGF-D表达阳性,且二者表达都与肺癌的淋巴结转移、分级密切相关(P<0.05).结论 VEGF-C/VEGF-D的高表达可以作为评价纵膈淋巴结转移的分子指标之一,为NSl2LC的临床治疗及预后判断提供一定的理论依据.     

组织因子表达在非小细胞肺癌转移中的意义

目的探讨组织因子(TF)表达在非小细胞肺癌转移中的意义。方法利用HE染色对75例非小细胞肺癌患者的石蜡标本进行肺癌原发灶及是否有淋巴转移行病理确认;应用免疫组化SABC法检测所有肺癌组织标本中TF的表达。结果 75例非小细胞肺癌TF阳性表达49例,阳性率为65.3%;在48例发生淋巴结转移的患者中,40例肺癌原发灶TF表达为阳性(包括19例强阳性),阳性率为83.3%;27例未发生淋巴结转移的患者中,9例肺癌原发灶TF表达为阳性(包括2例强阳性),阳性率为33.3%。结论伴有淋巴转移的非小细胞肺癌原发灶高水平表达TF,TF与肿瘤的转移密切相关。     

NF-kB在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

核因子-kB（nuclear factor kappaB，NF-kB）是1986年Sen等首先从成熟B淋巴细胞核抽取物中检出的，可与免疫球蛋白的x链基因的增强子序列特异结合并促使x链基因转录的核蛋白因子。NF-kB广泛存在于真核生物中，属于一个由复杂的多肽亚单位组成的蛋白家族，目前的研究认为它与炎症、免疫反应、创伤、细胞增殖、细胞凋亡以及胚胎发育等重要事件有着密切联系。NF-KB基因是转移基因家族的新成员，近年来研究发现NF-kB活性的失控导致哺乳动物的系统肿瘤发生，在许多肿瘤中均可见到NF-kB的异常活化。     

Tiam1在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam 1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与NSCLC浸润转移和预后的关系.方法 采用免疫组化SP法检测98例NSCLC组织中Tiam 1蛋白的表达,并分析与肺癌患者性别、年龄、吸烟、组织学类型、分化程度、T分期、淋巴结转移和TNM分期的联系及预后的关系.结果 Ti...     

miR-143、miR-145在膀胱癌中的表达及意义

【目的】探讨膀胱癌中miR-143、miR-145的表达及其与膀胱癌临床病理特征的关系。【方法】采用miRNA表达谱芯片、Northen blot、Real-time PCR法检测miR-143、miR-145在膀胱癌中的表达,分析miR-143、miR-145的表达与膀胱癌临床分期分级的关系。【结果】miRNA表达谱芯片、Northen blot、Real-time PCR法均提示miR-143、miR-145在膀胱癌中较癌旁正常膀胱组织中表达明显降低,差异具有统计学意义。miR-143、miR-145的低表达在不同临床分期与分级的膀胱癌中差异不明显。【结论】miR-143、miR-145在膀胱癌中明显低表达,可能与膀胱癌的发生密切相关。     

miR-145在肿瘤耐药中的研究进展

恶性肿瘤是严重危害人类生命健康的疾病。化疗是其治疗的重要手段之一,而耐药限制了恶性肿瘤化疗的临床疗效。尽管耐药机制受到了广泛的探索,但至今仍未找到有效治疗途径。miRNA负性调控相关靶基因的表达,与肿瘤的发生、发展及肿瘤细胞对化疗药的敏感性与耐药性密不可分。miR-145是研究较为深入的miRNAs之一。miR-145在大多数肿瘤细胞中表达下降,是机体的保护基因。增强miR-145的表达可发挥逆转耐药作用。以miR-145为作用靶点,与化疗药相结合发挥协同作用可为临床提供一种有效治疗途径。     

MicroRNA-145在急性髓系白血病患者中的表达及意义

目的：探讨MicroRNA‐145（miR‐145）在急性髓系白血病患者骨髓细胞中的表达情况,并分析其临床意义。方法收集急性髓系白血病患者骨髓标本70例,其中初治组46例、缓解组24例,非血液肿瘤性疾病14例作为对照组。通过实时荧光定量PCR方法检测miR‐145的相对表达水平。结果 miR‐145在初治急性髓系白血病骨髓中表达水平明显低于缓解组及对照组（P＜0．01）;其中9例经化疗后缓解的急性髓系白血病患者骨髓miR‐145表达水平较治疗前显著升高,差异有统计学意义（P＜0．05）;且miR‐145表达水平与初诊时原始细胞百分数及外周血白细胞数均无相关性（P＝0．456、0．394）。结论 miR‐145在急性髓系白血病患者表达下调,提示miR‐145的表达与白血病的发生、发展存在显著的关系。     

非小细胞肺癌中基质金属蛋白酶-10的表达

目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)中基质金属蛋白酶-10(matrix metalloproteinase-10,MMP-10)的表达及其与临床参数间的关系.方法:使用RT-PCR法及免疫组化法,检测32对NSCLC癌组织及癌旁正常组织中MMP-10的表达水平,并分析其与性别、年龄、分期、分级、肿瘤大小、淋巴结转移及病理类型之间的相关性.结果:MMP-10 的表达在mRNA水平与蛋白质水平表达有差异:MMP-10 mRNA在NSCLC癌组织中的表达要显著低于癌旁正常肺组织(P＜0.05),MMP-10蛋白在肺癌癌组织中的表达要显著高于癌旁正常肺组织(P＜0.01);在NSCLC癌组织中MMP-10 mRNA 的表达与MMP-10蛋白的表达呈正相关(r=0.4672, P＜0.05),而在癌旁正常肺组织中,两者表达相关性无显著统计学差异(r=-0.003022,P＞0.05).结论:MMP-10 mRNA在肺癌癌组织中表达要低于正常组织,MMP-10蛋白在肺癌癌组织中表达要高于正常组织.     

血浆miR-143、miR-145与冠脉粥样硬化程度的关系

目的:探讨血浆miR-143和miR-145水平与冠脉粥样硬化严重程度的关系。方法:112例患者按冠脉造影结果分为冠脉病变组、非显著冠脉病变组和对照组,用Gensini评分评估病变严重程度。用实时定量RT-PCR检测血浆中miR-143和miR-145的浓度,并评估其与冠脉粥样硬化严重程度的关系。结果:与非显著冠脉病变组和对照组相比,冠脉病变组患者血浆miR-143和miR-145水平显著降低。miR-143和miR-145是冠脉粥样硬化严重程度的独立危险因素(miR-143,r=-0.440,P=0.001;miR-145,r=-0.459,P=0.015)。miR-143和miR-145的ROC曲线下面积分别为0.884和0.909。结论:miR-143和miR-145可作为评估冠脉粥样硬化程度的生物标志物,并具有较高的特异性和敏感性。     

miR-145抑制口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞增殖活性及其与CDK6的靶向关系

目的 在口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞中验证miR-145靶向CDK6对其细胞增殖活性的影响. 方法 构建pcD-NATM6.2-GW-pre-miR-145重组表达质粒并转染入Tca-8113细胞,以荧光实时定量PCR（qRT-PCR）检测转染后癌细胞miR-145的表达水平.MTT法评价miR-145对Tca-8113细胞增殖活性的影响,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-145对候选靶基因CDK6的调控作用,同时采用Western blot法检测miR-145对CDK6蛋白表达水平的影响. 结果 成功构建miR-145真核表达载体,qRT-PCR显示miR-145组中miR-145的表达显著高于内源性表达量（P＜0.001）,说明miR-145在Tca-8113细胞中具有较高的转染效率.MTT法提示miR-145的过表达能够显著抑制Tca-8113细胞的增殖（P＜0.01）,同时双荧光素酶报告基因分析表明,共同转入miR-145与CDK6野生型（CDK6-WT）会显著抑制Tca-8113细胞中的荧光酶表达（P=0.002）;Western blot进一步证实了miR-145的过表达能够抑制内源性CDK6蛋白的表达. 结论 miR-145可能通过直接靶向CDK6来抑制口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞的增殖活性.     

有丝分裂激活的蛋白激酶家族基因在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨有丝分裂激活的蛋白激酶(MAPK)的三个亚族p38,ERK1及JNK1在非小细胞肺癌中表达的意义及ras与三者之间的关系,并判断它们对非小细胞肺癌预后的影响。方法对1992至1997年共73个患者的手术切除的标本蜡块行p38,ERK1,JNK1及ras的免疫组织化学分析,并判断p38,ERK1,JNK1与一些临床病理因素的关系,明确MAPK的不同亚族与ras的相关性,了解影响非小细胞肺癌预后的指标。结果p38表达与淋巴结转移(P=0．000)和TNM分期有关(P=0．001)。JNK1表达与病理类型(P=0．015)、淋巴结转移(P=0．000)、分期有关(P=0．000),ERK1表达与肿瘤位置有关(P=0．005)。p38(P=0．003)、ERK1(P=0．012)显示与ras有相关性。单因素分析显示TNM分期(P=0．0000)、淋巴结转移(P=0．0000)、肿瘤分化(P=0．0000)、p38(P=0．0001)、JNK1(P=0．0232)及ras(P=0．0022)与非小细胞肺癌预后有关。多因素分析显示p38阴性(P=0．035)、临床分期为Ⅰ期(P=0．026)、淋巴结转移阴性(P=0．044)和肿瘤分化较好(P=0．020)的患者预后较好。结论在MAPK的亚族中,p38的表达可以用来评价淋巴结转移和TNM分期,ERK1表达可评估病理类型、淋巴结转移和分期,JNK1与肿瘤位置有关。ras可能促进p38和ERK1的表达,p38的表达和肿瘤分化、临床分期以及淋巴结转移,是非小细胞肺癌独立的预后因素。     

血清miR-378和miR-216b对早期非小细胞肺癌的诊断价值分析

目的：探讨早期非小细胞肺癌患者血清中miR-378和miR-216b表达水平及其诊断预后价值。方法：前瞻性选择2017年4月至2018年10月我院收治的非小细胞肺癌患者86例（观察组）以及健康体检人员86例（对照组）作为研究对象。采用RT-qPCR检测两组血清中miR-378和miR-216b表达水平。采用ROC曲线评价血清miR-378和miR-216b对早期非小细胞肺癌的诊断价值,Cox回归分析探讨miR-378和miR-216b表达水平是否是早期非小细胞肺癌患者预后的相关因素。结果：观察组血清miR-378表达水平显著高于对照组,miR-216b显著低于对照组（P＜0.05）。手术后,早期非小细胞肺癌患者miR-378水平显著降低,miR-216b水平显著升高（P＜0.05）。ROC曲线结果显示：血清miR-378和miR-216b诊断早期非小细胞肺癌的曲线下面积分别为0.874、0.845,最佳截断值为5.28和4.96,敏感度为81.39%、79.07%,特异度为84.88%、87.20%。血清miR-378高表达和miR-216b低表达患者肿瘤II期、发生淋巴结转移和肿瘤≥3cm）概率显著升高（P＜0.05）。miR-378低表达和miR-216b高表达患者生存率分别大于miR-378高表达和miR-216b低表达患者（P＜0.05）。多因素Cox回归分析显示,肿瘤分期为II期（HR=2.07, 95%CI: 1.28～3.35）、有淋巴转移（HR=3.33, 95%CI:1.55～7.16）、肿瘤大小≥3cm（HR=1.90, 95%CI: 1.11～3.24）、miR-378＞8.13（HR=2.51, 95%CI:1.16～5.44）、miR-216b＜3.61（HR=3.05, 95%CI:1.47～6.32）是影响肺癌患者预后危险因素（P＜0.05）。结论：早期非小细胞肺癌患者血清中miR-378表达水平异常升高、miR-216b表达降低,miR-378异常高表达和miR-216b异常低表达患者预后不良风险增加,miR-378和miR-216b有望作为非小细胞肺癌临床诊治的有效生物标志物     

非小细胞肺癌患者肺耐药蛋白和多药耐药相关蛋白的表达及其临床意义

目的 检测肺耐药蛋白和多药耐药相关蛋白在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达情况.并探讨其临床意义.方法 采用免疫组化方法对术前未经化疗、术后病理诊断明确的92例肺癌组织标本并以20常肺组织作为对照进行了多药耐药相关蛋白（MRP）、肺耐药蛋白（LRP）表达的检测.并对病理类型、分化程度、临床分期、预后等进行统计学分析.结果 （1）92例肺癌组织中MRP、LRP及其两者共表达的阳性率分别为53%、52%和45%,均显著高于正常肺组织中的表达水平（P〈0.05）.（2）MRP、LRP蛋白表达在不同病理类型、不同分化程度之间具有统计学差异（P〈0.05）,而在不同年龄、性别、临床分期、淋巴结转移情况等均无明显差异.另外,MRP、LRP蛋白的表达与患者预后密切相关,且随着耐药蛋白表达种类的增加,生存曲线水平下降.结论 NSCLC中MRP、LRP的表达可能在肺癌的原发性多药耐药中起不同程度的作用,检测NSCLC中MRP、LRP在判断患者预后.指导肿瘤化疗方面具有重要的临床意义.     

miR-145通过IGF1R 与 IRS1逆转胃癌SGC7901/DDP细胞对顺铂的耐药性

目的:研究miR-145对胃癌耐顺铂细胞株SGC7901/DDP顺铂耐药的影响?方法:应用QRT-PCR检测miR-145在胃癌组织?细胞中的表达水平;MTT法和细胞克隆形成实验检测细胞活性与增殖能力;荧光素酶实验验证miR-145的靶基因;Western blot?免疫组化和免疫荧光实验检测相关蛋白表达;流式细胞术检测耐药细胞对顺铂诱导凋亡的影响?结果:miR-145在胃癌组织?各种胃癌细胞株中呈低表达;在胃癌耐顺铂细胞株SGC7901/DDP中,miR-145呈低表达,IGF1R 与 IRS1呈高表达;上调miR-145增强SGC7901/DDP细胞对顺铂的敏感性;荧光素酶报告实验证实IGF1R 与 IRS1为miR-145的靶基因;上调miR-145显著降低靶蛋白表达,抑制SGC7901/DDP细胞增殖,促进顺铂诱导的凋亡?结论:上调miR-145通过靶向IGF1R 与 IRS1逆转胃癌细胞对顺铂的耐药性?