细胞趋化因子SDF-1α对小胶质细胞趋化作用的研究

目的观察细胞趋化因子SDF-1对小胶质细胞的趋化作用以及机制探讨。方法体外培养BV2细胞系,给予不同浓度SDF-1α,进行迁移实验以确定SDF-1α对小胶质细胞趋化作用的浓度;将C6小鼠分为对照组和SDF-1α干预组,分别予以侧脑室注射PBS和SDF-1α各8周,采用免疫荧光组织化学方法观察注射后小鼠脑内小胶质细胞的数量,进一步采用Western Blot检测小胶质细胞标志物Iba-1的表达水平。结果予以SDF-1干预6 h后BV2细胞的迁移指数增加,SDF-1的受体CXCR4拮抗剂AMD3100能抑制SDF-1所致的小胶质细胞迁移;长程的SDF-1α侧脑室注射能够增加C6小鼠皮层和海马小胶质细胞的数量;Western Blot检测发现SDF-1α干预组脑组织中Iba-1表达量也明显增加。结论 SDF-1在离体和在体实验中均能趋化小胶质细胞的迁移。     

β-淀粉样蛋白对AD大鼠脑内胶质细胞的影响作用研究

目的　探讨Meynert核注射 β 淀粉样蛋白 (Aβ)后对大鼠脑神经胶质细胞超微结构的影响及其可能机制。方法　将 1μLAB1-40 (10 μg/ μL)在立体定向仪下注入大鼠右侧Meynert核 ,分别于 1周、4周时用透射电镜观察脑组织中神经胶质细胞超微结构变化。结果　实验组Meynert核、海马区和皮层区均可见神经胶质细胞增生 ,其中以小胶质细胞为主 ,星形胶质细胞次之 ;小胶质细胞聚集并吞噬变性神经细胞以及血管周围可见增生活跃的小胶质细胞聚集 ;神经元胞体皱缩 ,胞浆浓缩 ,核染色质固缩成团块状并见边聚现象 ,核膜尚完整 ,有发生凋亡的趋势 ;正常对照组和假手术组无上述变化。结论　Aβ能引发CNS神经胶质细胞增生并活化 ,免疫炎性反应在AD记忆障碍和痴呆形成过程中可能具有重要作用。     

芍药苷对Aβ_(1-42)诱导的小胶质细胞炎性反应和趋化性的影响

目的探讨芍药苷(PF)对β-淀粉样蛋白(Aβ)_(1-42)诱导的小胶质细胞炎性反应和趋化性的影响。方法原代培养大鼠小胶质细胞,分别用0、5、25、50μmol/LPF预处理细胞后,采用CCK-8法和LDH法检测细胞毒性。将培养的细胞分为空白对照组(正常培养基)、阳性对照组(Aβ_(1-42)处理细胞)和实验组(PF+Aβ_(1-42)处理细胞)。采用ELISA法检测各组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和趋化因子配体1(CXCL1)、趋化因子配体2(CCL2)的表达水平。采用Transwell小室进行小胶质细胞体外趋化实验,观察各组细胞趋化迁移情况。结论培养大鼠原代小胶质细胞纯度达90%以上,CCK-8法和LDH法测定均显示PF对小胶质细胞无明显细胞毒作用(均P0.05)。PF可抑制Aβ_(1-42)诱导的小胶质细胞分泌促炎性介质TNF-α、IL-1β、IL-6和趋化因子CXCL1、CCL2(均P0.01)。同时,PF可抑制小胶质细胞向Aβ_(1-42)的趋化(均P0.05)。结论 PF可抑制Aβ_(1-42)诱导的啮齿动物小胶质细胞生成促炎性介质和趋化因子,并抑制小胶质细胞向Aβ_(1-42)趋化迁移,提示PF可能为阿尔茨海默病的治疗提供新的契机。     

基质细胞衍生因子-1对间质干细胞迁移的影响

目的:观察基质细胞衍生因子-1(SDF-1)在体内外对大鼠骨髓间质干细胞(rMSCs)的趋化诱导作用,探讨SDF-1对rMSCs迁移影响的可能机制。方法:应用体外细胞迁移实验及大鼠脑梗死模型体内移植,观察SDF-1对rMSCs的迁移影响。流式细胞术与RT-PCR检测rMSCs的CXC趋化因子受体4(CXCchemokinereceptor4,CXCR4)表达。结果:在SDF-1存在时,rMSCs迁移活跃,应用抗体封闭CXCR4后,这种迁移显著减弱。体内移植的rMSCs主要聚集在脑梗死灶周围,但在封闭CXCR4后,这种聚集现象大大减弱。流式细胞术示仅小部分rMSCs表面表达CXCR4,但经TritonX-100处理后,表达CXCR4的rMSCs增加。结论:SDF-1可通过CXCR4对rMSCs起趋化作用,针对这种作用可望调控干细胞向靶组织的趋化聚集量,达到治疗目的。     

脑内淋巴引流和Aβ清除机制对阿尔茨海默病防治的研究进展

以减少Aβ沉积为标靶的Aβ疫苗的研究失败使人们开始反思阿尔茨海默病主流病理机制—Aβ级联反应学说的局限性,而新近证实的脑淋巴引流系统在打破了诸多传统观念的同时,也为诠释AD的病理机制提供了新的思路。本文拟全面介绍脑淋巴引流途径以及它们在Aβ清除机制中的作用,进而展望其在未来AD防治中的应用前景。     

小胶质细胞在阿尔茨海默病发病机制中的作用

研究表明,β淀粉样蛋白(amyloid beta-peptide,Aβ)沉积激活小胶质细胞引起的炎症反应是阿尔茨海默病(Akheimer disease,AD)的核心病理机制之一,小胶质细胞在其发病机制中起着重要的作用。小胶质细胞被Ap激活,释放大量细胞因子和炎性介质,促进老年斑(senile plaques,SP)、神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs)的形成,导致神经元损伤、死亡,促使AD发生、发展。     

血管内注射可溶性β-淀粉样蛋白1-40对毛细血管内皮细胞和胶质细胞毒性的研究

目的研究血液内较高浓度的可溶性β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)对毛细血管内皮细胞和胶质细胞的毒性,以探讨其在阿尔茨海默病发病中的作用.方法成年雄性SD大鼠90只,随机分为注射Aβ1-40组、注射生理盐水组以及正常大鼠(非手术)组,每组30只.采用右侧颈外静脉血管插管并留置的方法,通过导管向血管内中每日2次注射10μg的可溶性的Aβ1-40,连续14天后,采用免疫组化和免疫印迹(Western blot)方法观察星形胶质细胞、小胶质细胞的激活状态以及转糖蛋白-1、转糖蛋白-3表达的改变.结果注射Aβ1-40以后,毛细血管周围星形胶质细胞的胶质纤维酸性蛋白表达明显增多;小胶质细胞呈明显的激活状态;Western blot法检测到脑实质内转糖蛋白-1以及转糖蛋白-3表达明显减少.结论血管内连续注射Aβ1-40以后,对血-脑屏障的内皮细胞有明显的损害,对胶质细胞有明显的激活作用,可能与AD发病有关.     

PGN对Aβ1-42寡聚体促进BV2细胞分泌IL-1β的影响

目的探讨前炎介质肽聚糖(peptidoglycan,PGN)激活BV2细胞内吞β淀粉样蛋白(amyloid pro-teinβ,Aβ)1-42寡聚体后,对白细胞介素-1β(IL-1β)分泌的影响及其机制。方法采用细胞株传代法培养BV2细胞替代小胶质细胞,按Klein方法制备Aβ1-42寡聚体。将BV2细胞分为PGN(20μg/mL)组、Aβ1-42寡聚体(0.5μmol/L)组、PGN(20μg/mL)+Aβ1-42寡聚体(0.5μmol/L)组,比较BV2细胞分泌IL-1β水平;将BV2细胞予PGN(20μg/mL)及PGN+SB202190,比较两组IL-1β分泌水平;将不同浓度的PGN(0、5、10、20、40μg/mL)加入BV2细胞中培养,分别检测培养液中IL-1β的水平。采用ELISA方法测定BV2细胞培养液中IL-1β的水平。结果 PGN、Aβ1-42寡聚体、PGN+Aβ1-42寡聚体均可激活BV2细胞分泌IL-1β,分泌IL-1β高峰分别为孵育后24h、12h、24h;孵育后6、12、24h同时间相比,PGN+Aβ1-42寡聚体组BV2细胞分泌IL-1β水平均较PGN组和Aβ1-42寡聚体组明显增多(均P<0.05);PGN激活BV2细胞分泌IL-1β的水平与PGN浓度有剂量依赖关系(P<0.05);丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB202190使BV2细胞分泌IL-1β量明显减少(P<0.01)。结论 PGN可激活BV2细胞分泌IL-1β,且促进Aβ刺激BV2细胞分泌IL-1β增多,p38MAPK抑制剂可抑制IL-1β分泌,推测p38MAPK可能参与BV2细胞分泌IL-1β的过程。     

基质细胞衍生因子-1诱导神经干细胞靶向性迁移的实验研究

目的 观察基质细胞衍生因子-1(SDF-1)对神经干细胞(NSCs)迁移的影响.方法 由胚胎大鼠脑组织获取NSCs并进行传代培养和分化鉴定,使用流式细胞术检测NSCs纯度及SDF-1特异性受体CXCR4的表达情况,之后利用Blind-Well小室体外迁移体系观察不同浓度的SDF-1(0 ng/L、1 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、500 ng/mL和1000 ng/mL)对NSCs迁移数量的影响,并使用μ-载片观察SDF-1对NSCs迁移距离的影响.结果成功分离培养得到了能够在体外不断分裂增殖、具有多向分化潜能的NSCs,连续传3代后绝大部分细胞nestin表达阳性,nestin和CXCR4的共表达率达到80%左右.细胞趋化实验结果表明,SDF-1对NSCs有较强的趋化作用,随着SDF-1浓度的升高,发生迁移的细胞数量也随之增加,并于SDF-1浓度为500ng/mL时达到最高峰[(256.79±38.27)个细胞/每高倍视野].在μ-载片细胞生长通道两侧的SDF-1浓度梯度(500ng/mL→0ng/mL)作用下,由细胞克隆球迁出的细胞呈不对称分布,通常有更多的迁出细胞分布于趋化因子浓度较高的一侧,且该侧细胞的最大迁移距离也比对侧远.结论 SDF-1与其特异性受体CXCR4相巨作用能够诱导NSCs发生靶向性迁移.     

基质细胞衍生因子-1诱导神经干细胞靶向性迁移的实验研究

Objective To investigate the effect ofstromal cell derived factor-1 (SDF-1) on the regulation of neural stem cells (NSCs) migration.Methods NSCs were obtained from the cerebral cortex of embryonic rats and cultured in serum-free medium,and their stem cell properties were assessed by means of induced differentiation in vitro into neurons and astrocytes.After in vitro cell culture,the purity of NSCs and the co-expression rate of CXCR4/nestin were detected by flow cytometry.Blind-well chambers were employed to detect the chemotactic effects of SDF-1 by counting the cells which had crossed a 8 μm pore membrane when confronted with varying concentrations of SDF-1 (0,1,10,50,100,500 and 1000 ng/mL),and the distribution of cells migrated out of the same neurosphere was overviewed by μ-slides in the persistent concentration gradient of SDF-1.Results Neurospheres were formed by persistent proliferation of NSCs, which were capable of differentiating into neurons (β-tubulin+) and astrocytes (GFAP+) in media without mitogens,and flow cytometry analyses showed that most of the cultured cells expressed nestin and the co-expression rate of CXCR4/nestin was nearly 80%.SDF-1 showed great chemotaxis to NSCs,and the amount of cells having migrated through the membrane in 500 ng/ml SDF-1 group was higher than that in other groups (P<0.05).When the cells were confronted with a linear concentration gradient (from 500 to 0 ng/mL),which was generated by diffusion and stable for at least 48 h,the cells migrated out ofa neruosphere could distribute irregularly with more cells locating in the region of higher concentration of SDF-1 and longer migration distance away from the center of the neurosphere than the opposite.Conclusion SDF-1 binding to its specific receptor CXCR4 was capable of inducing NSCs migrating directionally to the source of SDF-1.     

基质细胞衍生因子-1诱导神经干细胞靶向性迁移的实验研究

Objective To investigate the effect ofstromal cell derived factor-1 (SDF-1) on the regulation of neural stem cells (NSCs) migration.Methods NSCs were obtained from the cerebral cortex of embryonic rats and cultured in serum-free medium,and their stem cell properties were assessed by means of induced differentiation in vitro into neurons and astrocytes.After in vitro cell culture,the purity of NSCs and the co-expression rate of CXCR4/nestin were detected by flow cytometry.Blind-well chambers were employed to detect the chemotactic effects of SDF-1 by counting the cells which had crossed a 8 μm pore membrane when confronted with varying concentrations of SDF-1 (0,1,10,50,100,500 and 1000 ng/mL),and the distribution of cells migrated out of the same neurosphere was overviewed by μ-slides in the persistent concentration gradient of SDF-1.Results Neurospheres were formed by persistent proliferation of NSCs, which were capable of differentiating into neurons (β-tubulin+) and astrocytes (GFAP+) in media without mitogens,and flow cytometry analyses showed that most of the cultured cells expressed nestin and the co-expression rate of CXCR4/nestin was nearly 80%.SDF-1 showed great chemotaxis to NSCs,and the amount of cells having migrated through the membrane in 500 ng/ml SDF-1 group was higher than that in other groups (P<0.05).When the cells were confronted with a linear concentration gradient (from 500 to 0 ng/mL),which was generated by diffusion and stable for at least 48 h,the cells migrated out ofa neruosphere could distribute irregularly with more cells locating in the region of higher concentration of SDF-1 and longer migration distance away from the center of the neurosphere than the opposite.Conclusion SDF-1 binding to its specific receptor CXCR4 was capable of inducing NSCs migrating directionally to the source of SDF-1.     

脑内β淀粉样蛋白清除的研究进展

脑内β淀粉样蛋白(Aβ)的清除主要包括细胞外降解、细胞内吞和外流转运。Aβ降解酶包括neprilysin、内皮素转化酶、胰岛素降解酶、血管紧张索转换酶、纤溶酶和基质金属蛋白酶-9等。细胞内吞由低密度脂蛋白受体相关蛋白和清道夫受体介导。转运清除包括血脑屏障转运和非特异性脑间质液泵流清除。针对上述三种清除途径,出现了以此为切入点的三种新的阿尔茨海默病治疗策略,包括上调Aβ降解酶基因表达或增加其活性以及促进细胞内吞清除和外流转运等干预措施。     

阿尔茨海默病患者的脑脊液tau蛋白及Aβ1-42水平

目的 探讨脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)中tau蛋白及β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)对诊断阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的早期诊断价值,寻找AD理想的生物学标志.方法 采用酶联免疫吸附法检测36例AD、24例血管性痴呆患者(vascular dementia,VD)和26名正常对照者(对照组)CSF中tau蛋白及Aβ1-42浓度的变化.结果 CSF中tau蛋白平均浓度:AD组(336±126)ng/L,VD组(183±96)ng/L,对照组(98±54)ng/L,AD组CSF中tau蛋白浓度明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);CSF中Aβ1-42平均浓度:AD组(341β113)ng/L,VD组(457±132)ng/L,对照组(502±167)ng/L,AD组CSF中Aβ1-42浓度明显低于对照组.差异有显著性意义(P<0.05).结论 脑脊液Aβ1-42、tau蛋白浓度的变化,不仅对诊断阿尔茨海默病具有较高的敏感性和特异性,而且亦可作为阿尔茨海默病与血管性痴呆鉴别诊断的生物学指标.     

Aβ3-10重复片段质粒免疫接种AD鼠后对脑内BACE1的影响

目的探讨Aβ3-10重复片段质粒免疫接种3月龄APPswe/PSEN1双转基因(AD)鼠脑内BACE1的影响。方法应用Aβ3-10重复片段质粒免疫3月龄APPswe/PSEN1双转基因鼠,同等剂量的PBS免疫对照组及C57BL/6J组小鼠,各组小鼠均在免疫后2、4、6次后通过RT-PCR法检测BACE1 m RNA水平,Western blotting法检测BACE1/GFAP/NF-κB蛋白水平,免疫组化法观察Aβ1-42脑内分布情况。水迷宫检测其行为学改变。结果在免疫2次后BACE1 m RNA表达水平C57BL/6J组Aβ3-10组对照组(F=4.649,P=0.021);免疫4次Aβ3-10组C57BL/6J组对照组(F=115.683,P=0.001);免疫6次C57BL/6J组Aβ3-10组对照组(F=86.600,P0.001)。BACE1的蛋白表达水平在免疫2、4、6次后C57BL/6J组Aβ3-10组对照组(F=432.843,P0.001;F=57.673,P0.001;F=26.550,P=0.001),NF-κB的蛋白表达水平在免疫2次后C57BL/6J组Aβ3-10组对照组(F=109.127,P0.001);免疫4,6次后Aβ3-10组C57BL/6J组对照组(F=30.301,P0.001;F=129.967,P0.001)。GFAP的蛋白表达水平在免疫2、4、6次后C57BL/6J组Aβ3-10组对照组(F=27.782,P=0.001;F=26.132,P=0.001;F=26.450,P=0.001);Aβ1-42在脑内的分布C57BL/6J组Aβ3-10组对照组(皮质:F=5.395,P=0.021;F=47.135,P=0.000;F=25.306,P=0.000,海马:F=11.023,P=0.002;F=14.936,P=0.001;F=50.132,P=0.000)。总潜伏期C57BL/6J组Aβ3-10组对照组(F=8.938,P=0.016;F=5.745,P=0.04;F=7.073,P=0.017)。结论 Aβ3-10重复片段质粒可以影响脑内BACE1的表达,影响Aβ产生,改善空间记忆能力。     

Aβ1-40与D-Gal致阿尔茨海默病大鼠模型的对比研究

目的建立β-淀粉样蛋白( Aβ1-40 )与D-半乳糖(D-Gal)致阿尔茨海默病大鼠模型,并对其进行比较.方法在大鼠海马内定向注入神经毒性物质β-淀粉样蛋白或腹腔注射D-半乳糖,然后用三等分辐射式迷路箱测定其学习记忆功能,研究海马部的细胞凋亡情况并测定海马单胺类递质代谢产物水平.结果海马内定向注射β-Ap或腹腔注射D-半乳糖大鼠的学习记忆功能减退,海马3-甲氨基-4-羟基苯乙二醇(MHPG)、5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)水平显著减低,未见海马部的细胞凋亡.结论大鼠海马内定向注射Aβ1-40或腹腔注射D-Gal均可建立阿尔茨海默病大鼠模型,注射Aβ1-40模型更加符合自然状态下阿尔茨海默病发病状况.     

阿尔茨海默病脑β淀粉样蛋白的PET显像

阿尔茨海默病（AD）的特征性病理改变是老年斑形成及神经纤维缠结的出现。目前利用正电子发射断层扫描进行活体早期AD的诊断是公认的安全可靠的方法。本文对近年用于诊断早期ADβ淀粉样蛋白的PET显像剂的研究和进展进行简要回顾。     

基质细胞衍生因子1α促进皮肤创面的新血管形成

背景：基质细胞衍生因子1α是有促进血管生成作用的CXC类趋化因子,研究发现其在调节一些重要组织/器官的损伤修复过程中有重要作用,但对其在皮肤创伤愈合过程中的作用还不很清楚。 目的：观察基质细胞衍生因子1α在创面新生血管形成过程中的作用。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-06/08在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究六室完成。 材料：SPF级昆明小鼠60只,雌雄不拘,体质量25~30 g;基质细胞衍生因子1α抗体为美国Santa Cruz Biotechnology公司产品。 方法：建立小鼠背部全层皮肤缺损伤模型,分为3组,即对照组,10 mg/L 基质细胞衍生因子1α抗体组和20 mg/L 基质细胞衍生因子1α抗体组,每组20只。各组分别在创面及创周连续6 d注射不同质量浓度的基质细胞衍生因子1α抗体(0,10,20 mg/L)。 主要观察指标：创伤后3,4,5,6,7 d,以半定量反转录-聚合酶链反应检测创面CD146表达情况,并观察创面微血管密度及创面收缩率。 结果：伤后各天,10 mg/L抗体组和20 mg/L抗体组CD146 mRNA表达和微血管密度均少于对照组(P < 0.05),伤后5,6,7 d,抗体组CD146 mRNA表达和微血管密度多于3,4 d(P < 0.05);伤后6,7 d,10 mg/L 抗体组创面收缩率低于对照组 (P < 0.05),伤后5,6,7 d,20 mg/L 抗体组创面收缩率低于对照组(P < 0.05),抗体组间仅在伤后7d差异有显著性意义(P < 0.05)。 结论：阻断创面基质细胞衍生因子1α作用,能够降低创面新血管化程度,从而可能影响创面愈合速度。     

Aβ25-35激活小胶质细胞机制的研究

目的以Aβ25-35为工具药，观察小胶质细胞激活后形态和功能的变化，以探讨阿尔茨海默病发病过程中活化的小胶质细胞对神经元损伤作用的可能机制。方法用Aβ25-35处理体外培养的大鼠小胶质细胞，采用倒置相差显微镜观察细胞形态，RT-PCR方法检测炎性因子肿瘤坏死因子（TNF）-α、白介素（IL）-1β、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA表达，Griess反应检测一氧化氮（NO）生成量，超氧化物岐化酶可抑制的WST-1还原法检测细胞外超氧化物产生量。结果Aβ25-35作用后，小胶质细胞形态发生明显变化，细胞胞体延长，由胞体伸出一个或多个树枝状突起，变为类巨噬样细胞；细胞外超氧化物产生量明显增加；但TNF—α、IL-1β、iNOS mRNA表达及NO释放量无明显改变。结论Aβ25-35激活小胶质细胞以活性氧类物质产生为主，活性氧类物质在介导Aβ诱导的神经毒性中起了关键作用。     

β淀粉样蛋白诱导脑内神经元调亡及褪黑素的保护作用

目的 探讨凋亡机制在β－淀粉样蛋白（Ａβ）服内致阿尔茨海默病（ＡＤ）作用中的意义及褪黑素（ＭＴ）对Ａβ脑内神经毒性的干预效果。地将Ａβ１－４０微量注射至大鼠右侧海马ＣＡ１区,７天后,用尼氏染色检测神经元丢失,ＨＥ染色、ＴＵＮＥＬ染色及透射电镜检测细胞凋亡,用免疫组织化ＳＡＢＣ法检测Ｂａｘ／Ｂｃｌ－２表达。结果 Ａβ组右侧海马ＣＡ１区发现大量凋亡细胞,而假手术对照组和生理盐水对照组未发现细胞凋亡;Ａ