结核杆菌多价核酸疫苗的构建及其免疫原性的初步研究

目的构建包含结核杆菌3种抗原蛋白Ag85A、ESAT-6和CFP-10真核表达质粒的多价DNA疫苗,并对其在小鼠体内的免疫原性进行初步分析。方法PCR扩增获得结核杆菌ag85 a、esat-6和cfp-10基因片段,分别克隆入真核表达质粒VR1020的BamHⅠ位点构建DNA疫苗,以此多价DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,检测小鼠体内的特异性抗体应答和细胞免疫反应,并与BCG免疫组、质粒VR1020免疫组和生理盐水对照组相比较。结果多价DNA疫苗免疫小鼠后能产生特异性的细胞和体液免疫应答,DNA疫苗免疫组小鼠脾细胞IFN-γ的表达量显著高于BCG免疫组,而DNA疫苗免疫组小鼠所产生的特异性抗体水平低于BCG免疫组。结论成功构建了结核杆菌多价DNA疫苗,免疫小鼠后检测到特异性细胞和体液免疫应答。     

密码子优化对乙肝病毒表面抗原中蛋白核酸疫苗免疫原性的影响

目的:观察密码子优化能否增强乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白核酸疫苗的免疫原性.方法:根据乙型肝炎病毒(adr亚型)表面抗原中蛋白(MHBs)的氨基酸序列,在不改变其氨基酸序列的基础上,设计并人工合成了密码子优化的基因,并将该基因克隆到核酸疫苗载体pSW3891中,构建了密码子优化的表达MHBs核酸疫苗(命名为:pSW3891/MHBs/adr/opt,简称opt).用上述核酸疫苗与表达野生型MHBs核酸疫苗(命名为:pSW3891/MHBs/adr,简称adr)及空载体质粒pSW3891一起瞬时转染293T细胞,应用蛋白质印迹法检测转染细胞中MHBs的表达.采用肌肉注射法,以opt、adr及pSW3891,分别对BALB/c小鼠进行免疫.用EIJSA方法检测免疫后小鼠血清中HBs抗体的滴度,ELISPOT法检测免疫小鼠表面抗原特异性分泌IFN-γ的脾细胞.结果:opl和adr均可在体外293T细胞中高效表达,且opt的蛋白表达量要高于野生型.opt免疫组小鼠特异性抗体滴度和免疫小鼠表面抗原特异性分泌IFN-γ脾细胞数量都要显著的高于adr免疫组小鼠.结论:密码子优化可以增强乙型肝炎病毒DNA疫苗在体外的蛋白表达量及免疫小鼠的体液免疫和细胞免疫原性.     

发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒实验室检测技术研究进展

近年来,湖北、河南、江苏、山东、辽宁及浙江等地相继发生发热伴血小板减少综合征病例,其病原体经中国疾病预防控制中心证实,为一种属于布尼亚科白蛉病毒属的新病毒,该病毒被命名为发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV),简称新布尼亚病毒[1-2]。SFTSV属于布尼亚病毒科白蛉病毒属第3组病毒,其基因是由大(L)、中(M)、小(S)3个单股负链RNA片段组成。目前     

丙型肝炎病毒核酸疫苗的构建及小鼠体液免疫效果

目的 探讨核酸商以苗在HCV感染中的预防和治疗价值。方法 将HCV C区基因插入pEF质粒EF－1α下游,构建pEF-HCV C重组质料,然后经im及皮下注射免疫BALB／c小鼠,免疫次数分别为1,2,3,4次,ELISA法检测免疫小鼠血清中抗－HCV的水平。结果 接种后各组均检测到抗－HCV的水平。结果 接种后各组均检测到抗－HCV,但是抗体滴度较低,在不同的免疫次数中,4次免疫组抗体水平最高。结论 构建的HCV DNA重组体可诱发BALB／d小鼠产生体液免疫应答,加强免疫后可使血清中抗－HCV明显增高。     

乙型肝炎病毒的核酸疫苗研究进展

传统的乙型肝炎 (乙肝 )治疗主要是干扰素和核苷类似物 ,但仍存在许多缺点 ,而新的抗乙型肝炎的基因治疗手段反义RNA、ribozyme和dominantnegativemutants虽为乙肝的治疗提供了希望 ,但是在实际运用中仍存在许多问题。核酸疫苗技术的出现为乙型肝炎的治疗开辟了一条新的途径。核酸疫苗分为DNA疫苗、RNA疫苗。由于RNA疫苗容易降解 ,不易保存 ,所以目前研究的疫苗主要是DNA疫苗。DNA疫苗是指含有编码抗原的基因的真核表达质粒DNA ,经直接接种体内后 ,可被体细胞摄取、并转录翻译表达出相应抗原。它可通过不同途径刺激机体产生针对此…     

重组乙型肝炎疫苗抗乙型肝炎病毒的免疫原性及保护效应

20世纪80年代就已开始使用的乙型肝炎疫苗[Engerix-B(○R),简称Hep-B(Eng)]是基因工程酵母产物.剂型为含有10或20μg HBsAg 0.5或1.0 mL的悬浮液,其标准接种时间表为0,6,12个月.本文重点叙述了Hep-B(Eng)对不同人群的免疫原性及保护效应.对于各年龄段的健康人群,Hep-B(Eng)具有极佳的保护效应,它可以与其他疫苗同时接种,并不影响自身及其他疫苗的免疫原性.对高危人群,Hep-B(Eng)也具有很好的保护效应.接种其他乙型肝炎疫苗效果不满意者,接种Hep-B(Eng)会有一定的帮助.Hep-B(Eng)具有较好的耐受性,最常见的副作用为注射部位过敏、皮疹等.Hep-B(Eng)的免疫保护期可长达10年.     

国产流行性感冒病毒裂解疫苗的安全性和免疫原性研究

目的评价国产流行性感冒(流感)病毒裂解疫苗的安全性和免疫原性。方法在江苏省盐城市建湖县内选择332名观察对象,按随机、开放式的方法开展现场临床调查试验。结果观察对象接种1针后局部反应率仅为0.6%,15人次(4.52%)有发热反应,且以轻度发热为主。血清学检测结果表明,接种疫苗后,流感病毒H1N1、H3N2、B亚型的HI抗体阳转率分别为94.98%、87.1%和88.1%,H1N1、H3N2、B亚型的HI抗体GMT增长倍数分别为33.5、7.8和26.2倍,抗体保护率分别为100%、99.7%、98.4%。结论国产流感病毒裂解疫苗临床安全性和免疫原性较好,适宜推广使用。     

2012年江苏部分地区动物中发热伴血小板减少综合征病毒携带状况调查

目的了解江苏部分地区动物中发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)携带状况,探讨其可能的传播媒介和自然宿主。方法 2012年3月~12月在江苏省发现发热伴血小板减少综合征病例的7个市/县,采集鼠、牛、羊、刺猬、鸟类和蜱等动物标本,提取总核酸后,应用实时荧光RT-PCR法对标本进行布尼亚病毒S基因核酸的检测,阳性标本采用Vero细胞进行病毒分离。结果采集761只(管)动物,43只(管)检出SFTSV核酸阳性,阳性率为5.65%。采集3 728份标本,阳性49份,阳性率为1.31%。鼠的病毒携带率最高(6.84%),蜱标本阳性率最高(4.94%)。除蜱标本外的3 647份标本中检出阳性45份,阳性率为1.23%,不同器官阳性率分别为淋巴结(50.00%)、血清(2.34%)、脾(1.64%)、心(1.64%)、肝(1.28%)、肺(1.09%)、脑(0.94%)、肾(0.73%)、血块(0.41%)。5月标本阳性率最高(4.01%)。从1份羊血清及其体表1份蜱标本中各分离出1株SFTSV病毒。结论鼠、牛、羊和蜱均可携带SFTSV,可能是其自然宿主或传播媒介。     

发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒研究进展

发热伴血小板减少综合征（severe fever with thrombocytopenia syndrome, SFTS）是一种急性传染性疾病,由布尼亚病毒（severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus, SFTSV）感染所致,该新病毒隶属于布尼亚病毒科白蛉病毒属,2009年在中国首次被发现,近年来已在大半个中国地区流行传播,致数千人患病甚至死亡,平均病死率约10%,陆续地在韩国、日本和美国也有类似疫情报道。该疾病主要临床症状表现为高热、厌食、肌肉痛、寒战、淋巴结肿大、白细胞降低、血小板减少和多器官功能衰竭等。SFTSV的基因组由大（L）、 中(M)、 小(S) 3 个单股负链 RNA片段组成。为更详细地了解SFTSV,本文针对其病原学特征、流行病学特征、早期检测方法和临床诊断以及疾病预防等方面对近年来的有关研究进行了整理和综述,以期对发热伴血小板减少综合征（SFTS）的预防和治疗提供理论依据。     

ha-syn蛋白核酸疫苗pVAX1-hαSH1-140的构建及其表达

目的构建含人α-突触核蛋白（human α-synuclein,hα-syn）编码基因的真核重组载体,并在COS-7细胞中表达,为帕金森病的核酸疫苗开发奠定基础。方法通过PCR方法扩增hα—syn基因的CDS全长片段,含酶切位点KpnⅠ、XbaⅠ和Kozak序列。扩增产物和真核表达载体pVAX1经双酶切、纯化、连接,转化感受态细胞E．coli TOP10,筛选含目的基因的重组载体pVAX1-hαS1-140,并在COS-7细胞中表达,用RT—PCR法和Western blot法检测其表达产物。结果经单、双酶切证实插入的基因片段大小一致,基因测序证实其序列和方向完全正确。用RT—PCR法和Western blot法检测表明,重组质粒pVAX1-hαS1-140在COS-7细胞中能表达目的蛋白,而且具有生物活性。结论成功构建了核酸疫苗pVAX1-hαS1-140,并在COS-7细胞中表达,为帕金森病的核酸疫苗治疗研究奠定了良好的基础。     

发热伴血小板减少综合征研究进展

发热伴血小板减少综合征（SFTS）是近年来在我国部分地区相继出现的感染性疾病,2009年在中国大陆首次被发现,近年来已在大半个中国流行并传播,在韩国、日本和美国也陆续有类似疫情报道,已致数千人患病甚至死亡;该病以发热、血小板减少和多脏器功能损害为主要临床表现,死亡率达10%。目前已经证实其由发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒（SFTSV）感染所致。SFTSV的基因组由大（L）、中(M)、小(S) 3 个单股负链RNA片段组成。为更详细地了解SFTSV,本文针对其病原学特征、流行病学特征以及疾病预防等方面对近年来的有关研究进行了整理和综述,以期为发热伴血小板减少综合征（SFTS）的预防和治疗提供理论依据。     

发热伴血小板减少综合征病毒动物感染及动物模型

发热伴血小板减少综合征病毒（severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV）是我国2009年发现的一种新型布尼亚病毒。蜱虫是其重要储存宿主及传播媒介,野生动物和家畜均存在自然感染。α/β干扰素受体基因敲除的免疫缺陷小鼠是理想的实验动物模型。本文综述了SFTSV的动物感染及动物模型的研究成果,为SFTSV自然流行的控制以及动物实验提供依据。     

SFTSV糖蛋白Gn重组质粒的构建及其体液免疫原性研究

目的:研究严重发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)糖蛋白Gn的体液免疫原性?方法:将PCR方法扩增的SFTSV糖蛋白Gn基因和密码子优化后Gn基因克隆入载体pJW4303,构建Gn野生型和双优化重组质粒;经酶切和测序鉴定确认为目的质粒后,分别转染HEK293T细胞,Western blot检测糖蛋白Gn的表达;用Gn重组表达质粒及空载体分别免疫BALB/c小鼠,ELISA检测免疫后小鼠血清抗Gn特异性IgG抗体?结果:成功构建Gn重组野生型质粒pJW4303-WSP-Gn和双优化质粒pJW4303-tPA-Gn-opt;Western blot证实pJW4303-WSP-Gn编码Gn可在HEK293T细胞内表达,pJW4303-tPA-Gn-opt编码Gn在HEK293T细胞内表达并分泌到细胞外;ELISA检测免疫后小鼠血清抗Gn特异性IgG抗体证实各重组质粒均能诱导特异性IgG抗体产生,双优化质粒较野生型质粒诱导产生的IgG时间更早?滴度更高?结论:SFTSV的糖蛋白Gn具有良好的免疫原性;和野生型质粒相比,双优化质粒更有利于糖蛋白Gn的表达和分泌,并且具有更好的体液免疫原性?     

结核杆菌多价核酸疫苗在小鼠体内的免疫保护效应研究

目的:探讨结核杆菌Ag85A/ESAT-6/CFP-10多价核酸疫苗的动物免疫保护效应。方法:将24只BALB/c小鼠随机分成4组,多价核酸疫苗免疫组每只小鼠股四头肌肌肉注射重组质粒VR1020-85A、VR1020-E6和VR1020-P10各25μg(溶于100μL灭菌生理盐水中)进行免疫接种,3周后加强免疫1次。其余3组均为对照组,分别是生理盐水注射组、空白质粒VR1020免疫组和卡介苗(mycobacterium bovis bacillus calmette-guérin,BCG)免疫组。每只小鼠于初次免疫6周后经腹腔注射结核杆菌H37Rv(菌落数为1×105)进行攻击,攻击实验28 d后取小鼠肺组织作结核杆菌培养和病理形态学检测。结果:多价核酸疫苗免疫组小鼠肺组织结核杆菌培养带菌量明显低于生理盐水注射组和空白质粒免疫组(P<0.05),但明显高于BCG免疫组(P<0.05)。多价核酸疫苗免疫组小鼠肺组织病变明显轻于生理盐水注射组和空白质粒免疫组,但明显重于BCG免疫组。结论:结核杆菌Ag85A/ESAT-6/CFP-10多价核酸疫苗免疫小鼠后能产生一定程度的抗结核免疫保护效应,但其免疫保护效应不及BCG。     

Comparative study on the immunogenicity between Hsp70 DNA vaccine and Hsp65 DNA vaccine in humanMycobacterium tuberculosis

Summary The BALB/c mice were immunized with Hsp70 DNA and Hsp65 DNA vaccines in humanMycobacterium tuberculosis. Eight weeks after immunization, the eyeballs were removed, blood and spleen taken, and intraperitoneal macrophages were harvested. The lymphocytic stimulating index (SI) was used to measure the cellular proliferating ability and NO release to measure the phagocytic activity of the macrophages. With ELISA kit, the levels of interleukin-2 (IL-2) and interferon-γ (IFN-γ) in serum and the splenic lymphocytic cultured supernatant were detected. The results showed that after the mice were immunized with 100 μg/mouse of Hsp70 DNA vaccine intramuscularly, the splenic lymphocytic proliferating ability in the mice was significantly increased as compared with that in the control group, vector group and Hsp65 DNA vaccine group (P<0.01); The contents of NO in the intraperitoneal macrophages of the mice were significantly lower than in the control group and Hsp65 DNA vaccine group (P<0.01); The levels of serum IL-2 in the mice were significantly higher than in the control group, but there was no statistical difference between Hsp65 DNA group and vector group (P>0.05); The contents of serum IFN-γ in the mice were significantly higher than in the control group, but significantly lower than in the Hsp65 DNA vaccine group (P< 0.05). It was indicated that immunization with Hsp70 DNA vaccine could obviously enhance the immune response, but its intensity seemed inferior to Hsp65 DNA vaccine. The anti-infection mechanisms and clinical use in the future of the vaccines of Hsp70 DNA and Hsp65 DNA are worth further studying. This project was supported by a grant from National Natural Sciences Foundation of China (No. 39870663).     

口服霍乱WC-rBS疫苗胶囊的安全性和免疫原性研究

目的评价国产胶囊剂型、灭活霍乱全菌体（WC）与重组B亚单位（rBS）联合疫苗（WC-rBS）的安全性和免疫原性，比较水剂与胶囊剂型的免疫效果。方法选择74名志愿者，按随机分层分组分为胶囊剂组（32人WC1011CFU＋rBS1mg／人次）、水剂用（32人WC1011CFU＋rBS1mg／人次）及安慰剂组（10人）。结果和结论WC－rBS胶囊剂疫苗安全、服苗组未见任何不良反应；免疫原性好，粪抗CT、抗LPS和Vab阳转率分别为84．4％、90．6％和71．9％，血清抗CT、抗LPS和Vab阳转率分别为84．4％，78．1％，抗87．5％。     

长生科技冻干水痘减毒活疫苗的安全性及免疫原性研究

目的:评价长生科技冻干水痘减毒活疫苗的安全性及免疫原性。方法:按随机、双盲的抽样原则,以国产同类疫苗作为对照,在江苏省涟水县720名1~12岁儿童中开展现场临床试验,比较两种疫苗免疫后临床反应率及抗体阳转率、保护率、几何平均滴度(GMT)。结果:所有受试者经试验疫苗免疫后,全身总发热反应率为8.33%,局部反应总反应率为2.08%;抗体GMT为1∶52.23,抗体阳转或成功率为97.12%。试验组与对照组间全身反应、局部反应、免疫后抗体GMT、阳转率、免疫成功率及4倍增长率均无显著性差异。结论:长生科技冻干水痘减毒活水痘疫苗对受试人群具有较好的安全性和免疫原性。     

国产吸附破伤风疫苗用于成人加强免疫的安全性及免疫原性观察

目的:评价成都欧林生物科技股份有限公司研制的吸附破伤风疫苗用于成人加强免疫的临床安全性与免疫原性。方法:分两阶段开展:第一阶段采用开放性设计,评价试验疫苗的安全性,在确认安全性的情况下开展第二阶段试验;第二阶段采用单中心、随机、盲法、同类制品平行对照的试验设计,选择18~30岁的常住健康人群,按1∶1的比例随机接种试验疫苗和阳性对照疫苗,使用日记卡记录接种后28 d内的不良反应/事件发生情况。采集免疫前和免疫后28 d的血液标本,使用标准酶联免疫吸附试验方法进行破伤风类毒素抗体浓度检测。结果:第一阶段招募30名受试者,试验疫苗接种后7 d内总体不良反应为33.3%;第二阶段试验组和阳性对照组各入组600人,总体不良反应发生率分别为30.7%和31.5%,以轻中度不良反应为主,最常见接种局部和全身不良反应分别为疼痛和发热,不良反应的发生在组间差异无统计学意义(P≥0.05)。加强免疫后试验组与阳性对照组均诱导较强的免疫反应:破伤风抗体浓度达到保护性水平的受试者比例均达到100%,GMC分别为3.38、3.16 U/ml。结论:成都欧林生物科技股份有限公司研制的吸附破伤风疫苗具有良好的安全性和免疫原性,适用于成人进行加强免疫和进一步进行联合疫苗的研制。     

严重急性呼吸综合征冠状病毒2咽拭子核酸检测法假阴性调查分析

目的 探讨严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）咽拭子核酸检测法的假阴性率,并分析其原因,为稳固我国新型冠状病毒肺炎（COVID-19）防控工作提供参考。方法 对2020年2月19日至3月20日湖北省妇幼保健院光谷院区收治的1 452例COVID-19患者的咽拭子核酸检测结果进行回顾性分析,将出院前检测结果为阳性之前的阴性结果判定为假阴性,统计假阴性患者例数。随访出院患者,筛选出院后再次核酸检测阳性（复阳）的患者,分析出院前病毒核酸检测连续阴性次数和核酸复阳的关系。结果 1 452例COVID-19患者中男592例（40.77%）、女860例（59.23%）。212例（14.60%）咽拭子核酸检测结果曾出现假阴性。共随访到28例（1.93%）出院后复阳患者,连续2次核酸检测阴性的918例患者中有24例（2.61%）复阳,高于连续3次及以上核酸检测阴性患者的复阳率（0.75%,4/534）,差异有统计学意义（χ²=6.21,P=0.012 7）。结论 SARS-CoV-2咽拭子核酸检测法具有一定比例的假阴性,是患者出院后核酸复阳的原因之一。建议出院前由不同检测者进行多次、连续检测,满足连续3次及以上核酸检测阴性的出院标准可以降低复阳率。