P38 MAPK在大鼠体外循环肺组织炎症反应中的作用

54只SD大鼠随机分为3组,全麻开胸组(S组)、体外循环组(CPB组)、体外循环 P38 MAPK阻断剂组(SB组).Western blot法检测大鼠肺组织中P38 MAPK、磷酸化P38 MAPK,EMSA法检测激活蛋白(AP-1)的DNA结合活性变化,ELISA法检测TNF-α和IL-1β产量,并留取肺组织做HE染色病理检查.发现在磷酸化P38 MAPK、AP-1、TNF-α、IL-1β方面,CPB组较S组明显增高,SB组较CPB组明显减少.认为P38 MAPK通过影响AP-1的激活而参与体外循环术后肺炎症反应的发生,SB203580通过阻断P38 MAPK的激活而减轻体外循环术后肺炎症反应的发生.     

SB203580对烟雾暴露的哮喘大鼠的影响

目的 建立烟雾暴露的支气管哮喘(简称哮喘)大鼠模型,观察p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)抑制剂SB203580对其的治疗作用.方法 将Wistar大鼠随机分为4组,即正常对照组、哮喘组、烟雾暴露的哮喘组及SB203580干预组.动物肺功能仪测定大鼠呼气阻力、吸气阻力及肺顺应性,观察肺组织病理学改变,通过ELISA检测大鼠肺组织中IL-4、IL-5和IL-8的表达.结果 与烟雾暴露的哮喘组相比,SB203580干预组大鼠的气道阻力显著下降,肺顺应性显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05);气道炎症明显减轻;肺组织中IL-4、IL-5和IL-8的含量显著下降,差异有统计学意义(P ＜0.05).结论 p38 MAPK抑制剂SB203580可以改善烟雾暴露的哮喘大鼠的气道炎症,减轻其支气管收缩反应.     

p38MAPK抑制剂SB203580对脓毒症大鼠心功能的影响及机制探讨

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶p38MAPK抑制剂SB203580对脓毒症大鼠心功能的影响及其机制.方法 30只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、干预组,各10只.模型组和干预组采用盲肠结扎穿刺术（CLP）制备脓毒症大鼠模型.干预组给予p38MAPK抑制剂SB203580干预.干预后1、3、6、12、24h检测各组血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、IL-6水平,24h后行心脏彩超检测各组大鼠的左室射血分数（EF）及短轴缩短率（FS）;并分离左室心肌采用Western blot方法检测p38MAPK蛋白表达.结果 模型组、干预组术后血清TNF-α、IL-6水平迅速升高,于24h到达高峰,但干预组升高幅度小于模型组（P均＜0.05）.术后24h模型组、干预组左心室EF和FS较对照组显著降低（P均＜0.05）.干预组左心室EF和FS下降程度小于模型组（P均＜0.05）.与对照组比较,术后24h模型组、干预组心肌组织中p38MAPK蛋白相对表达量升高,干预组低于模型组（P均＜0.05）.结论 p38MAPK抑制剂SB203580对脓毒症大鼠心功能有保护作用,降低TNF-α、IL-6水平可能为其主要机制.     

肺炎链球菌感染早期外源性白介素-18干预的实验研究

目的:探讨外源性IL-18在小鼠肺炎早期对肺组织中肺炎链球菌清除的影响.方法:经鼻灌注肺炎链球菌诱导并建立小鼠肺炎链球菌肺炎模型,将实验小鼠分3组:正常对照组、感染组、感染加IL-18干预组.培养并计数小鼠肺组织内细菌数量,检测支气管肺泡灌洗液中中性粒细胞计数,RT-PCR方法检测小鼠肺组织中TNF-α及MIP-2 mRNA表达水平.结果:①干预组小鼠肺泡灌洗液中,中性粒细胞计数明显高于感染组(P＜0.01),感染组又高于对照组(P＜0.01);②干预组小鼠肺组织中细菌计数较感染组明显降低(P＜0.01);③干预组小鼠肺组织中TNF-α及MIP-2 mRNA表达较感染组明显增高(P＜0.01),而感染组又高于对照组(P＜0.01).结论:在小鼠肺炎链球菌肺炎早期给予外源性IL-18可以上调肺组织中TNF-α及MIP-2 mRNA的表达,促进中性粒细胞在感染部位聚集,减少肺组织中细菌数量.     

SB203580对SAP大鼠胰腺组织MPO、TNF-α、IL-6和IL-8表达的影响

目的观察p38丝裂原蛋白（p38MAPK）信号传导通路阻断剂SB203580对急性重症胰腺炎（SAP）大鼠胰腺组织髓过氧化物酶（MPO）及促炎因子TNF-α、IL-6和IL-8表达的影响。方法 46只健康雄性SD大鼠,随机分为观察组22只和SAP组24只。采用3.5%牛磺胆酸钠溶液胰胆管注射法制作SAP动物模型。观察组大鼠制模前半小时股静脉注射SB203580。造模后0.5、6、24 h取两组大鼠胰腺组织,用紫外分光光度法检测MPO活性,用放射免疫法检测TNF-α、IL-6和IL-8。结果造模后6、24 h观察组大鼠胰腺组织中MPO、TNF-α、IL-6、IL-8均低于SAP组（P均〈0.05）。结论 SB203580可以降低大鼠胰腺组织中MPO、TNF-α、IL-6、IL-8的表达。     

p38丝裂原活化蛋白激酶对急性坏死性胰腺炎大鼠低钙血症的影响

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠低钙血症和甲状旁腺激素受体1(PTHR1)表达的影响.方法 将雄性SD大鼠72只按完全随机法分为ANP组、SB203580干预(SB)组和假手术(SO)组,每组分3、6、12 h 3个时间点,每个时间点8只.以5%牛磺脱氧胆酸钠逆行胰胆管注射建立ANP模型,SB组在造模前30 min腹腔注射p38MAPK特异抑制剂SB203580 10 mg/kg体重.观察各组血清钙浓度,蛋白质印迹法(Western blotting)分析骨组织磷酸化p38MAPK(P-p38 MAPK)和TNF-α变化,实时RT-PCR检测骨组织PTHR1 mRNA表达.结果 制模后6 h,SO组、ANP组和SB组血清钙浓度分别为(2.50±0.08)mmoL/L、(2.11±0.06)mmol/L和(2.35±0.10)mmol/L;骨组织P-p38 MAPK表达量分别为0.14±0.04、0.80±0.06和0.33±0.05;骨组织TNF-α表达量分别为0、0.91±0.04和0.44±0.03;骨组织PTHR1 mRNA表达量分别为1.00±0.12、0.23±0.04和0.44±0.06.SB组骨组织P-p38 MAPK及TNF-α表达较ANP组显著降低(P＜0.01);骨组织PTHR1 mRNA表达量及血清钙浓度较ANP组显著增加(P＜0.01).结论 p38MAPK信号转导通路可介导ANP低钙血症的发生,抑制该通路可改善ANP低钙血症.     

SB203580对烟雾暴露的哮喘大鼠的影响

目的建立烟雾暴露的支气管哮喘(简称哮喘)大鼠模型,观察p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)抑制剂SB203580对其的治疗作用。方法将Wistar大鼠随机分为4组,即正常对照组、哮喘组、烟雾暴露的哮喘组及SB203580干预组。动物肺功能仪测定大鼠呼气阻力、吸气阻力及肺顺应性,观察肺组织病理学改变,通过ELISA检测大鼠肺组织中IL-4、IL-5和IL-8的表达。结果与烟雾暴露的哮喘组相比,SB203580干预组大鼠的气道阻力显著下降,肺顺应性显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);气道炎症明显减轻;肺组织中IL-4、IL-5和IL-8的含量显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 p38 MAPK抑制剂SB203580可以改善烟雾暴露的哮喘大鼠的气道炎症,减轻其支气管收缩反应。     

p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂减少大鼠肝脏炎症细胞因子的表达

目的 观察p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580阻断p36 MAPK信号通路,减少脑死亡大鼠肝脏促炎细胞因子表达的作用.方法 雄性Wistar大鼠30只,体质量180～200 g,随机分3组,每组10只.脑死亡组:诱导大鼠及死亡;脑死亡+SB203580组:大鼠脑死亡诱导成功后,经阴茎背静脉注射SB203580(10 mg/kg);两组大鼠脑死亡诱导成功,行人工呼吸6 h后,若平均动脉压大于80 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),则为脑死亡供体,获取肝脏待检.对照组:正常大鼠麻醉后取肝脏待检.逆转录-聚合酶链反应检测肝脏肿瘤坏死因子(TNF)α和白细胞介素(IL)-1β的mRNA表达,Western blot检测肝脏TNF α和IL-1 β的蛋白质表达以及磷酸化p38 MAPK的表达.多个样本间比较行One-Way ANOVA分析,SNK法行两两样本间比较.结果 脑死亡组大鼠肝脏出现p38 MAPK磷酸化,磷酸化p38 MAPK的相对表达量比对照组明显增加(0.190±0.004比0.001±0.002),差异有统计学意义(q=172.53,P＜0.01);肝脏TNF α的mRNA和蛋白质表达量分别为0.670±0.012和0.240±0.003,较对照组(分别为0.130±0.013和0.001±0.002)明显增加(q值分别为123.99和243.09,P值均＜0.01);肝脏IL-1 β的mRNA和蛋白质表达量分别为0.560±0.009和0.190±0.003,较对照组(分别为0.160±0.010和0.001±0.002)明显增加(q值分别为135.35和192.23,P值均＜0.01).脑死亡SB203580组大鼠肝脏p38 MAPK磷酸化下降,磷酸化p38 MAPK的表达量(0.120±0.004)比脑死亡组明显下降(q=63.90,P＜0.05),但仍明显高于对照组(q=108.63,P＜0.01);肝脏TNF α的mRNA和蛋白质表达量分别为0.430±0.016和0.180±0.004,较脑死亡组明显下降(q值分别为55.11和61.03,P值均＜0.01),但仍高于对照组(q值分别为68.89和182.06,P值均＜0.01);肝脏IL-1β的mRNA和蛋白质表达量分别为0.270±0.009和0.140±0.004,较脑死亡组明显下降(q值分别为98.13和50.85,P值均＜0.01),但仍高于对照组(q值分别为37.22和141.38,P值均＜0.01).结论 SB203580能抑制p38 MAPK的磷酸化,阻断p38 MAPK信号通路,减少脑死亡大鼠肝脏促炎细胞因子表达,降低肝脏免疫原性.     

姜黄素对肺炎支原体感染肺炎幼鼠抗炎作用及机制初步探讨

目的基于NF-κB途径探讨姜黄素对肺炎支原体感染肺炎幼鼠抗炎作用及机制初步探讨。方法选取50只SPF级BALB/c小鼠随机分为五组,分别为空白对照组(A组)、模型组(B组)、姜黄素高剂量组(C组),姜黄素中剂量组(D组)和姜黄素低剂量组(E组),模型组及姜黄素治疗组采用肺炎支原体标准株滴鼻法进行建模,HE染色观察肺脏病理组织学变化;免疫组化染色测定肺组织中NF-κB p65阳性细胞的积分光密度;采用Western blot实验检测肺组织中NF-κB p65蛋白表达变化;使用ELISA法检测IL-6、IL-8和TNF-α水平。结果模型组小鼠肺组织病理改变明显,姜黄素高剂量组小鼠肺组织与模型组相比,小鼠肺泡结构比较完整,肺泡与气管结构清晰,炎细胞明显减少,姜黄素中剂量组对小鼠有一定的治疗效果,姜黄素低剂量组小鼠和模型组小鼠比较并无明显差异;与空白对照组相比,模型组小鼠肺组织中NF-κB p65的IOD值、NF-κB p65蛋白表达和支气管灌洗液中IL-6、IL-8和TNF-α表达明显升高(P<0.01),与模型组小鼠相比,姜黄素高剂量组和姜黄素中剂量组小鼠肺组织中NF-κB p65的IOD值、NF-κB p65蛋白表达和支气管灌洗液中IL-6、IL-8和TNF-α表达明显降低(P<0.01)。与模型组小鼠相比,姜黄素低剂量组与模型组小鼠肺组织中NF-κB p65的IOD值、NF-κB p65蛋白表达和支气管灌洗液中IL-6、IL-8和TNF-α表达相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论姜黄素可改善肺炎支原体感染幼鼠症状且能够抑制炎症因子,其机制可能是通过抑制NF-κB通路的激活,表明姜黄素可作为治疗肺炎支原体感染的潜在药物。     

p38MAPK抑制剂对大鼠急性坏死性胰腺炎合并肺损伤的保护作用

目的 探讨p38MAPK特异性抑制剂SB203580对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠合并肺损伤的保护作用.方法 54只雄性SD大鼠按数字表法随机分为对照组、ANP组和SB203580(干预)组,每组18只.以左旋盐酸精氨酸腹腔注射建立大鼠ANP模型,对照组大鼠腹腔注射等容积生理盐水,干预组在制模前腹腔注射SB203580(用二甲基亚枫溶解配制成10 μmol/L)5 mg/kg体重.术后3、6、12 h分批处死大鼠,取血测淀粉酶、TNF-α和IL-6含量,行胰腺及肺组织病理学检查,计算肺组织湿/干重比,测髓过氧化酶(MPO)含量,RT-PCR法检测中性粒细胞趋化因子(C1NC) mRNA表达,蛋白质印迹法检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白表达.结果 术后6h,对照组的血淀粉酶、TNF-α和IL-6含量、肺组织湿/干重比、MPO活性、CINC mRNA及p-p38MAPK蛋白表达量分别为(1035±73) U/L、(0.94±0.16) μg/L、(4.77±0.86) μg/L、3.92±0.29、(0.39±0.02) U/g、0.28 ±0.04、0.09±0.04;ANP组分别为(5848±656)U/L、(3.84±0.32) μg/L、( 103.54±15.32) μg/L、4.97±0.47、(1.03±0.08) u/g、0.62±0.06、0.52±0.14;干预组分别为(4259±286) U/L、(1.64±0.21) μg/L、(76.56±11.46) μg/L、4.32±0.34、(0.78±0.05)U/g、0.37±0.04、0.27 ±0.08.ANP组的各项指标均显著高于对照组,干预组的各项指标均显著低于ANP组,但仍显著高于对照组(P值均＜0.01).结论SB203580可通过阻断p38MAPK信号通路,在一定程度上减少炎症因子的产生,减轻ANP大鼠胰腺及肺组织损伤.     

SIRT1减弱对脂多糖致急性呼吸窘迫综合征小鼠的促炎作用

目的探讨SIRT1对脂多糖(LPS)诱导的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠炎症反应的作用及其机制。方法采用SIRT1基因敲减小鼠SIRT1~(+/-)与野生型小鼠,qRT-PCR,Western Blot检测两种小鼠肺组织中的相关基因表达差异。两种小鼠用LPS腹腔注射法造模,同时设生理盐水对照组,观察肺组织病理形态学变化,测定肺湿干比(W/D比),BCA法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白浓度,ELISA法测定BALF及血浆中炎症因子TNF-α、IL-6的含量,Western Blot检测肺组织p-p38MAPK、p38MAPK、p-ATF2的表达变化。结果与野生型小鼠相比,SIRT1~(+/-)肺组织中SIRT1在mRNA表达和蛋白表达均显著降低,差异有统计学意义(P0.01)。LPS致ARDS后,两种小鼠病理形态学观察均表现为肺组织炎症细胞浸润,肺泡结构破坏,间质水肿,肺泡间隔增厚,而SIRT1~(+/-)小鼠肺组织破坏更严重。在SIRT1~(+/-)小鼠中,肺W/D比值,BALF中总蛋白浓度,BALF及血浆中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的含量,均明显高于野生型小鼠(P0.05),肺组织p-p38MAPK/p38MAPK、p-ATF2的表达增加也更显著(P0.05)。结论 SIRT1基因在LPS致伤ARDS小鼠的炎症进程中起着非常重要的作用,其机制可能与Sirt1诱导的p38 MAPK-p-ATF2信号通路的活化增强有关。     

硫化氢在p38MAPK信号通路对大鼠肝星状细胞凋亡中的作用

目的探讨硫化氢(H2S)在p38MAPK信号通路对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)凋亡中的作用及磷酸化P38、Caspase-3蛋白表达的变化。方法实验设对照组(HSC加含10%胎牛血清的DMEM培养液)、二甲基亚砜(DMSO)组(对照组基础上加DMSO,使其终浓度为0.1%)、NaHS组(对照组基础上加NaHS,使其终浓度为50μmol/L)、SB组(DMSO组基础上加SB203580,使其终浓度为75μmol/L)、SB加NaHS(SB+NaHS)组;采用Hoechst荧光染色检测细胞凋亡;Western blotting法检测磷酸化p38MAPK表达及Caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组比较,SB组和SB+NaHS组HSC-T6的凋亡率增加(P0.05),NaHS组p38MAPK磷酸化水平及Caspase-3表达均明显增高(P0.01);与NaHS组比较,SB组和SB+NaHS组细胞凋亡率增加明显(P0.01),p38MAPK磷酸化水平表达降低(P0.01);SB+NaHS组较SB组Caspase-3蛋白表达升高(P0.05)。结论 p38MAPK及Caspase-3在H2S刺激的HSC-T6中表达增强,H2S能促使SB203580诱导的HSC-T6细胞凋亡,其作用机制可能与活化p38MAPK的磷酸化途径,进而激活Caspase-3的表达有关。     

肿瘤坏死因子α调节人肝癌MHCC-97H细胞中白细胞介素8的分泌

目的 研究肿瘤坏死因子(TNF)α诱导人肝癌细胞系MHCC-97H分泌白细胞介素8(IL-8)及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和核因子-κB (NF-κ B)信号通路对其的调节作用.方法 酶联免疫吸附法检测不同浓度的TNF α(0、1、5 ng/ml)干预人肝癌细胞MHCC-97H 24 h和相同浓度的TNFα(1 ng/ml)干预不同时间后,细胞上清液中IL-8的浓度; Western blot和免疫荧光方法检测TNFα(1 ng/ml)刺激MHCC-97H细胞后,p38 MAPK磷酸化蛋白的表达及其分布;非放射性NF-κ B p50/p65转录因子活性试剂盒检测TNFα干预MHCC-97H细胞后核蛋白中活性NF-κB p65蛋白的含量.多组均数比较采用单因素方差分析,多个样本均数间两两比较用q检验.结果 TNFα明显促进肝癌细胞分泌IL-8,具有显著的时间和浓度依赖性:TNFα干预0、6、12、18、24h,IL-8的浓度分别为(47.45±9.78)pg/ml、(497.41±52.83)pg/ml、(694.14±44.43)pg/ml、(909.35±97.22) pg/ml、(1093.59±75.72) pg/ml (F=144.04,P＜0.01);TNFα0、1、5、10 ng/ml干预24h,IL-8浓度分别为(47.45±9.12) pg/ml、(1093.59±75.72)pg/ml、(1372.77±85.10) pg/ml和(1614.55±153.52) pg/ml(F=364.14,P＜0.01).TNFα刺激肝癌细胞后,p38 MAPK磷酸化蛋白表达明显上调,给予p38 MAPK通路特异性抑制剂(SB203580)可以显著抑制TNFα诱导的IL-8的分泌(P值均＜0.01)且呈浓度依赖性(F=165.92,P＜0.01).免疫荧光结果显示TNFα促进肝癌细胞NF-κ B p65的核转位,且呈浓度依赖性(TNF α0、1、5、10 ng/ml处理肝癌细胞1h后细胞核蛋白表达NF-κ B p65对应吸光度值分别为0.52±0.04、2.75±0.15、3.13±0.18、3.81±0.14 (F=1266.42,P＜0.05),而SB203580则可以部分抑制NF-κB p65的核转位(F=141.20,P＜0.05).结论 TNFα通过p38 MAPK-NF-κB信号途径调节人肝癌细胞系MHCC-97分泌IL-8.     

实验性结肠炎p38丝裂原活化蛋白激酶表达的研究

目的观察三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的大鼠结肠炎结肠组织p38MAPK表达与激活及大鼠血清TNF-α、IL-10水平变化,探讨p38MAPK在实验性结肠炎中的作用与机制。方法20只SD大鼠随机分为正常对照组（N）与模型组（M）,TNBS／乙醇法构建结肠炎模型,观察炎症活动指数（DAI）、大体形态损伤指数（CMDI）、组织学损伤指数（TDI）,ELISA法检测血清TNF-α、IL-10水平,免疫组化染色检测大鼠结肠p38MAPK、p-p38MAPK表达。结果与N组相比,M组DAI、CMDI、TDI显著升高（P〈0．01）,血清TNF-α升高,IL-10水平下降（P〈0．01）,结肠组织p38MAPK表达增加（P〈0．05）,p-p38MAPK表达显著增加（P〈0．01）。结论p38MAPK在实验性结肠炎的表达与激活均有明显增加,可能通过调节TNF-α、IL-10等细胞因子的表达参与结肠炎的发病。     

Inhibition of p38 mitogen-activated protein kinase attenuates experimental autoimmune hepatitis： Involvement of nuclear factor kappa B

To investigate the role of p38 mitogen-activated protein kinase （p38MAPK） in murine experimental autoimmune hepatitis （EAH）.METHODS： To induce EAH, the syngeneic S-100 antigen emulsified in complete Freud＇s adjuvant was injected intraperitoneally into adult male C57BI/6 mice. Liver injury was assessed by serum ALT and liver histology. The expression and activity of p38 MAPK were measured by Western blot and kinase activity assays. In addition, DNA binding activities of nuclear factor kappa B （NF-KB） were analyzed by electrophoretic mobility shift assay. The effects of SB203580, a specific p38 MAPK inhibitor, on liver injuries and expression of proinflammatory cytokines （interferon-y, IL-12, IL-1β and TNF-α） were observed.RESULTS： The activity of p38 MAPK and NF-~：B was increased and reached its peak 14 or 21 d after the first syngeneic S-100 administration. Inhibition of p38 MAPK activation by SB203580 decreased the activation of NF-~：B and the expression of proinflammatory cytokines. Moreover, hepatic injuries were improved significantly after SB203580 administration.     

大鼠重症急性胰腺炎发病机制中p38丝裂原活化蛋白激酶的作用研究

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)特异性抑制剂SB203580对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)的保护作用。方法以胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠建立SD大鼠SAP模型。将45只SD大鼠随机分为3组,假手术组(SO组,n=15);SAP组(SAP组,n=15);SB203580治疗组(SB组,n=15)。术后3、6、12 h处死大鼠并取血。对胰腺进行病理组织学评分,测定大鼠腹水量。检测血清淀粉酶,ELISA法测定血清IL-6和IL-10水平。并采用免疫组化法观察大鼠胰腺组织p38 MAPK下游靶点P-ATF2表达情况。结果 SO组胰腺组织存在P-ATF2弱表达,SAP组各时间点P-ATF2表达水平明显升高(P<0.01),SB组各时间点表达水平较SAP组下降明显(P<0.01)。SAP组6、12 h时间点IL-6水平,3、6 h时间点IL-10水平,血清淀粉酶,腹水量明显高于SB组(P<0.05)。SAP组各时间点胰腺组织病理学积分显著高于SB组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论阻断p38 MAPK信号传导通路可以明显缓解大鼠重症急性胰腺炎的病情。预示此信号传导通路可以为SAP的治疗提供一个有价值的标靶。