大鼠转化生长因子β1基因转染成骨细胞后的表达

目的 将大鼠转化生长因子β1(TGF—β1)基因转染成骨细胞后，研究转基因细胞表达TGF—β1的情况。方法 通过Lipofectamine介导将TGF—β1基因导人大鼠成骨细胞，转染24h后通过SABC法和原位杂交法检测目的基因瞬时表达的情况。采用G418筛选转染细胞2周，获得阳性细胞克隆，用SABC法检测转染细胞稳定表达TGF—β1的情况。结果 转染24h后，成骨细胞就有明显的TGF—β1蛋白和mRNA高表达。G418筛选2周后的转染细胞仍然有较高的TGF—β1表达。结论 TGF—β1基因转染成骨细胞后可获得稳定的高表达，采用细胞因子基因转染成骨细胞进行骨缺损的基因治疗具有可行性。     

转化生长因子β1及白介素-1β对终板软骨细胞的作用

目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)及白介素-1β(IL-1β)在终板软骨细胞中的表达,探讨椎间盘退变的发病机制。方法应用免疫组化SP染色法检测TGF-β1及IL-1β在20例颈椎病及20例非颈椎病椎体软骨终板中的表达,并对其阳性表达结果进行比较。结果颈椎病组TGF-β1及IL-1β的阳性率分别为(32.907 6±3.076 4)%、(51.520 7±2.192 5)%,与非颈椎病终板软骨细胞TGF-β1及IL-1β表达的阳性率(42.481 6±2.061 7)%、(33.918 5±3.320 4)%相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TGF-β1及IL-1β参与了椎间盘退变的形成和发展,在椎间盘退变的发病中可能起重要的作用。     

转化生长因子β1启动子质粒重组体的构建及活性研究

目的:探讨调控TGFβ1基因高水平转录的启动片段.方法:以人基因组DNA为模板,PCR扩增获得TGF-β1基因转录起始位点上游5'端-1328～ 812 bp的片段中不同长度的片段,以此作为启动子与含氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因的质粒pCAT3-enhancer重组成5个重组体,并将其转染至大鼠肝里状细胞株中,测定细胞的CAT的表达水平并比较各重组体的启动子活性.结果:-308～ 812 bp序列具有较强的启动活性,-611～ 812 bp次之,其他几个重组体的启动活性从高到低的排序依次为1328～ 812 bp、-867～ 812 bp、 227～ 812 bp.结论:TGF-β1基因启动子片段中,-308～ 812 bp、-611～ 812 bp、1328～ 812 bp重组体具有较强的启动活性,是进一步研究人TGF-β1基因转录调控的重要靶序列.     

转化生长因子β1在骨赘发生过程中的基因表达

目的探讨转化生长因子β1在骨关节炎骨赘发生过程中的基因表达及作用特点。方法选取接受全膝关节置换术的原发性骨关节炎骨赘标本25例,制备石蜡切片,行HE和甲苯胺蓝染色及I型、Ⅱ型(Ⅱa和Ⅱb)和Ⅹ型胶原分子的免疫组织化学染色。根据骨赘中主要组织的细胞数量与间质含量等组织学特征、蛋白多糖含量及Ⅰ、Ⅱa、Ⅱb和Ⅹ型胶原分子的表达特点将骨赘进行分类。每类组织分别进行转化生长因子β1的免疫组织化学和原位杂交染色。结果共获得5种不同类型的骨赘,分别标记为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ型骨赘。转化生长因子β1mRNA主要在Ⅱ和Ⅲ类骨赘的软骨细胞显著表达,在其他类型骨赘的软骨细胞内表达较少(P<0.05,P<0.01)。结论转化生长因子β1mRNA在骨赘形成的早期和中期显著表达,其主要作用可能在骨赘早期的软骨发育阶段促进软骨细胞的增殖和分化成熟。     

转化生长因子-β_1对猪关节软骨细胞合成糖胺多糖的作用

目的 :观察转化生长因子 β1 (TGF β1 )对软骨细胞外分泌基质糖胺多糖 (GAG)含量的影响。方法 :通过Ⅱ型胶原酶消化法获得高活性的软骨细胞 ,定量接种 6× 10 6 个细胞于培养皿 ,在细胞贴壁后更换培养基时 ,加入TGF β1 10ng mL ,每周传代 1次 ,连续 5周 ,留取所有培养液用阿利新蓝法测定软骨细胞外分泌基质GAG的变化 ;利用光镜观察原代及传代软骨细胞的生长情况。结果 :体外培养的软骨细胞从传代后合成糖胺多糖类基质 ,第 2代传代细胞分泌GAG的能力最强 ;加入TGF β1 能明显促进传代软骨细胞合成大量的糖胺多糖类基质。结论 :TGF β1 能明显促进体外培养的传代软骨细胞合成大量的糖胺多糖类基质     

人TGFβ1cDNA高表达重组质粒的构建

目的为了得到基因工程制备的人重组TGFβ1,构建人TGFβ;cDNA高表达重组质粒。方法从人血小板中提取总RNA,经RT－PCR得到TGFβ;cDNA基因,并克隆到表达质粒pBLMVL2中,构建了在PL启动控制基因表达质粒pBLMVL2－TGFβ;,使其在大肠杆菌中进行温敏诱导表达。结果RT－PCR得到的TGFβcDNA经DNA序列分析与文献报道一致,pBLMVL2－TGFβ1在大肠杆菌中表达产物人重组TGFβ1经还原型SDS－PAGE电泳,呈一条蛋白条带,分子量12．5kd,表达产物约占全菌蛋白20％。结论构建的重组质粒pBLMVL2－TGFβ1能高表达人重组TGFβ1。     

转化生长因子-β对大鼠胰岛素基因表达的调节作用

目的：研究不同浓度转化生长因子-β（TGF-β）对大鼠胰岛细胞胰岛素基因表达的影响,探讨TGF-β在2型糖尿病治疗中的作用。方法：大鼠胰岛细胞与不同刺激浓度的TGF-β（0ng／mL、1ng／mL、2ng／mL、5ng／／mL、10ng／mL、20ng／mL）和葡萄糖浓度分别为2．2mmol／L、5．5mmol／L、11．1mmol／L的RPMI1640营养液共培养24h后,提取细胞总RNA.运用RT-PCR技术检测胰岛素基因表达的变化。结果：葡萄糖浓度为2．2mmol／L时,随TGF-β浓度逐渐升高,胰岛素基因表达量无明显变化;葡萄糖浓度为5．5mmol／L时,TGF-β浓度由0ng／mL升至2ng／mL时,胰岛素基因表达量无变化,而当TGF-β浓度进一步升高,胰岛素基因表达量呈剂量依赖性升高;葡萄糖浓度为11．1mmol／L时,随TGF-β浓度升高,胰岛素基因表达量呈浓度依赖性升高。结论：TGF-β以葡萄糖依赖和浓度依赖方式促进胰岛素基因的表达：     

缺陷型转化生长因子β1Ⅱ型受体表达质粒阻断大鼠肝纤维化的实验研究

目的构建缺陷型TGFβ1Ⅱ型受体的表达质粒,观察其对人工免疫性大鼠肝纤维化的影响。方法运用基因重组技术,构建大鼠缺陷型TGβ1Ⅱ型受体表达质粒载体,将其导入CCl4诱导肝纤维化的大鼠体内,观察其对大鼠肝纤维化的影响。结果经酶切和DNA测序鉴定缺陷型TGFβ1Ⅱ型受体真核表达质粒载体构建成功,经缺陷型TGβ1Ⅱ型受体表达质粒处理的大鼠肝纤维化程度轻,血清中PCⅢ、Ⅳ-C、HA和LN均较未经处理组低。结论经缺陷型TGβ1Ⅱ型受休表达质粒处理后可减轻CCl4导致的肝纤维化增生。     

大鼠肝癌发生发展过程中的转化生长因子-β1、β2和转化生长因子-β受体1、β受体2编码基因表达及意义

TGF—β是一种具有控制增殖和分化等生物过程的自分泌或旁分泌生长因子。TGF—β及其受体、细胞内下游信号转导分子的突变在脏器纤维化和肿瘤等疾病的发病中很重要，TGF—β在肝脏的正常生理功能、肝纤维化和肝癌的发生发展中都非常重要，准确地分析TGF—β及其受体在肝细胞癌发生发展中的表达有助于了解它们在肝癌中的作用，为研究肝癌诊断和潜在的治疗靶点提供帮助。我们制备了二乙基亚硝胺（diethylnitrosamine，DENA）诱导大鼠肝癌模型，通过逆转录荧光实时PCR技术定量分析了TGF-（1、TGF-（2、T（RI和T（RII基因在肝癌发生发展过程中表达水平的动态变化。[第一段]     

P物质对大鼠成纤维细胞转化生长因子β-1及其受体基因表达的影响

目的：探讨P物质(substance P，SP)作用于离体培养的大鼠肉芽组织成纤维细胞后，对成纤维细胞转化生长因子β-1(TGFβ-1)及其受体-l／-2(TGFβ-1／R-2)基因表达的影响。方法：采用大鼠肉芽组织成纤维细胞培养和逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)技术，观察SP在不同浓度(10^-9M～10^5M)及不同孵育时间(0h，3h，6h，12h，24h)情况下刺激成纤维细胞后，成纤维细胞TGFβ-1／R-1／R-2mRNA表达的改变情况。结果：SP可上调大鼠肉芽组织成纤维细胞TGFβ-1／R-1／R-2mRNA的表达。其剂量-效应曲线呈双相分布，最大效应浓度为10喵M。在最大效应浓度(10^-8M)时，SP对大鼠成纤维细胞TGFβ-1/R-1/R-2mRNA表达的上调作用分别于刺激细胞后6h／6h／12h达高峰。结论：体外实验结果显示：SP对大鼠肉芽组织成纤维细胞TGFβ-1／R-1／R-2基因表达存在直接影响，其表现形式与SP的刺激浓度及孵育时间有关。这种影响可能是创伤愈合过程中SP影响成纤维细胞增生、分化和瘢痕组织形成的机制之一。     

转化生长因子—β1对猪关节软骨细胞合成糖胺多糖的作用

目的观察转化生长因子-β1 (TGF-β1)对软骨细胞外分泌基质糖胺多糖(GAG)含量的影响。方法通过Ⅱ型胶原酶消化法获得高活性的软骨细胞,定量接种6×106个细胞于培养皿,在细胞贴壁后更换培养基时,加入TGF-β1 10ng/mL,每周传代1次,连续5周,留取所有培养液用阿利新蓝法测定软骨细胞外分泌基质GAG的变化;利用光镜观察原代及传代软骨细胞的生长情况。结果体外培养的软骨细胞从传代后合成糖胺多糖类基质,第2代传代细胞分泌GAG的能力最强;加入TGF-β1能明显促进传代软骨细胞合成大量的糖胺多糖类基质。结论TGF-β1能明显促进体外培养的传代软骨细胞合成大量的糖胺多糖类基质。     

人WAF1基因表达质粒的构建

目的：克隆人ＷＡＦ１基因,构建成ＷＡＦ１－ｐｃＤＮＡ３真核表达质粒。方法：采用逆转录聚合酶链反应从Ｈｅｌａ细胞中扩增人ＷＡＦ１基因,并克隆到ｐｃＤＮＡ３真核克隆载体中。结果：从Ｈｅｌａ细胞扩增的人ＷＡＦ１基因克隆至真核克隆表达载体ｐｃＤＮＡ３中,经ＤＮＡ直接测序,获得了ＷＡＦ１－ｐｃＤＮＡ３重组质粒。结论：成功地构建人ＷＡＦ１表达质粒ＷＡＦ１－ｐｃＤＮＡ３,为进一步研究ＷＡＦ１基因表达及生物学效应     

乳头状甲状腺癌中转化生长因子-β及其受体的基因表达

目的　探讨转化生长因子 β(TGF β)及其受体基因的表达与乳头状甲状腺癌的关系。 方法　取甲状腺手术标本 ,其中乳头状甲状腺癌 8例、桥本甲状腺炎症 7例、甲状腺腺瘤 8例和正常甲状腺组织 8例 ,扩增TGF β1、TGF β2 、TGF β3 、TGF β受体Ⅰ、TGF β受体Ⅱ及TGF β受体Ⅲ基因 ,比较各种基因在不同组织中的表达水平。结果　TGF β1在 4种组织中表达阳性率均较高 ,但在乳头状甲状腺癌中的表达丰度高于其他 3组 (P<0 .0 5 )。TGF β受体Ⅰ在乳头状甲状腺癌组织中表达阳性率低于其他 3组 ,表达丰度也明显降低 (P <0 .0 5 )。TGF β2 、TGF β3 、TGF β受体Ⅱ及TGF β受体Ⅲ在 4种组织中均部分表达 ,且表达量的差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　TGF β1表达水平上升和TGF β受体Ⅰ表达水平下降可能与乳头状甲状腺癌的发生有关 ,TGF β2 、TGF β3 、TGF β受体Ⅱ及TGF β受体Ⅲ基因与乳头状甲状腺癌可能不存在相关性     

脂质体介导TGF-β1质粒DNA转染家兔角膜上皮细胞的实验研究

为证实TGF-β1质粒DNA能否由脂质体携带进入家兔角膜上皮细胞，用多聚阳离子脂质体携带重组的人TGF-β1质粒转染体外培养的家兔角膜上皮细胞，在转染12h后，表达2d时，用免疫组化方法（SABC）检测TGF-β1质粒DNA的表达情况，结果显示：外源TGF-β1质粒DNA在家兔角膜上皮细胞可以获得表达，基因转染率为23.37%。提示：脂质体作为角膜上皮细胞基因类药物介入的基础研究和应用研究的介导体具有广阔的应用前景。     

转化生长因子-β1与类风湿性关节炎

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是由于机体的免疫功能失调导致体液免疫和细胞免疫的高敏感性引起的以关节滑膜组织炎性增生、关节破坏为主要特点的一种疾病。其主要病理改变是关节滑膜改变，即滑膜炎和血管翳形成，血清和滑膜组织中多种细胞因子、抗原抗体黏附分子的变化。其中细胞因子在类风湿关节炎发病过程中起了至关重要的作用，是炎症和损伤的重要递质，转化生长因子-β1（transforming growth factor -β1，TGF-β1）近年来备受关注，它是一种重要的调节细胞生长及分化的多肽因子，具有双重生物学效应，     

转化生长因子β1诱导人肾小管上皮细胞表达结缔组织生长因子

目的　研究转化生长因子 β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)对人肾小管上皮细胞 (humanproximaltubularep ithelialcells ,HTECs)表达结缔组织生长因子 (connectivetissuegrowthfactor ,CTGF)的影响。方法　体外培养的HTEC被根据随机数字表分为 3组 :对照组 (C组 ) :无血清培养基 (freeserummedium ,FSM)培养 ;TGFβ1a和TGFβ1b组 (Ta 组和Tb 组 ) :分别用含不同浓度TGFβ1(Ta 组 :2 0ng/ml,Tb 组 :40ng/ml)的FSM培养 ,96h后 ,分别用RT PCR和免疫组化方法检测HTEC表达CT GFmRNA和蛋白。结果　①C组 :CTGFmRNA和蛋白表达为阴性 ;②Tb 组和Ta 组 :CTGFmRNA和蛋白表达皆呈阳性。Tb 组和Ta 组相比 ,CTGF的mRNA和蛋白表达量皆显著增加 (P <0 .0 1)。结论　TGFβ1能呈剂量依赖性地诱导HTEC合成CTGF。     

转化生长因子β1、转化生长因子β1RⅡ在原发性肝细胞癌中的表达及其意义

目的：探讨转化生长因子β1（TGF—β1）和转化生长因子DRⅡ（TGFβ1RⅡ）的表达与肝癌临床病理因素的关系，了解TGF—β1和TGFl3RⅡ在肝癌浸润、转移中的作用。方法：用免疫组化方法（S—P法）检测原发性肝细胞肝癌和癌旁组织57例中TGF—β1和TGFβ1RⅡ的表达水平。结果：TGF-β1，在肝癌组织中的阳性表达47例（82．46％）显著高于癌旁组织38例（66．67％）（P〈0．05）；TGFβ1RⅡ在肝癌组织中的阳性表达20例（35．09％），显著低于癌旁组织48例（84．21％）（P〈0．05）。TGF—β1在有转移的患者中的表达率为（92．31％）明显高于无转移的患者（74．19％）（P〈0．05），而TGFβ1RⅡ在有包膜浸润、转移、组织分化Ⅲ-Ⅳ的患者中染色较浅且阳性表达率明显下降，分别为19．52％、19．23％和7．14％，明显低于相对应组50．00％、49．39％和62．07％的阳性表达率（P〈0．01）。结论：TGF—β1过度表达和TGFβ1RⅡ表达下降可能增强了肝癌细胞的浸润、转移。     

山莨菪碱对肝纤维化大鼠转化生长因子-β1及受体表达的影响

目的:观察山莨菪碱对肝纤维化大鼠肝组织内转化生长因子-β1(TGF-β1)及其受体(TβRⅠ)表达的影响,探讨该药对肝纤维化防治作用的机制。方法:本研究用四氯化碳(CC l4)诱导肝纤维化模型。防治组在造模后1h始以山莨菪碱7.0mg.kg-1.d-1腹腔注射。大、小剂量治疗组造模后第4周始腹腔注射给药,剂量分别为14.0mg.kg-1.d-1和7.0mg.kg-1.d-1。第10周末测定血清血清谷丙转氨酶(ALT)和透明质酸(HA),RT-PCR法和免疫组化法分别检测肝组织中TβRⅠmRNA和TGF-β1蛋白的表达。结果:各山莨菪碱给药组大鼠血清ALT和HA含量均较模型组明显下降(P<0.01或P<0.05);同时该药还能抑制纤维化肝组织中TβRⅠmRNA的表达和TGF-β1蛋白的表达。结论:山莨菪碱能通过抑制肝组织中TGF-β1及TβRⅠ的表达,减轻肝纤维化。     

转染人转化生长因子-β3基因对瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响

目的 观察转染人转化生长因子-β3(hTGF-β3)基因对瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响。方法 通过脂质体介导的方法，将人表皮细胞生长因子基因真核表达质粒(pBK-CMV)-TGF-β3质粒转染体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞，采用RT—PCR法检测TGF-β3mRNA的表达，放射免疫(RIA)法测定细胞培养上清液中Ⅰ型和Ⅲ型前胶原的浓度。结果 构建的TGF-β3质粒可成功转染成纤维细胞，并增强Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达，下调Ⅰ／Ⅲ型胶原比值。结论 转染hTGF-β3基因可调节瘢痕成纤维细胞的生物学活性。