丙型肝炎病毒1b型NS3基因扩增方案的改进

目的优化扩增武汉地区HCV1b型患者HCV非结构蛋白3(NS3)的cDNA,并进行测序。方法从患者血清中提取HCVRNA,采用型特异性引物扩增分型法检测HCV患者基因分型。设计3对外侧引物和3对内侧引物,采用套式PCR技术(方案一)分别扩增HCV1b型患者的HCVNS33个区段,然后用3对内侧引物进行测序。为了优化NS3扩增和测序效果和减少操作繁琐,对引物进行改进,设计1对外侧引物和1对内侧引物,采用改进的套式PCR技术(方案二)直接扩增HCV1b型患者的HCVNS3区,然后用3个正向引物和1个逆向引物进行测序。结果改进的套式PCR技术(方案二)与套式PCR技术(方案一)相比,操作较为简单,而且扩增效率增高,扩增效果较好。结论采用改进的套式PCR技术(方案二)扩增和测序HCVNS3区更迅速、有效、实用。     

环介导等温扩增技术及其应用

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种新型的体外核酸扩增技术,在等温条件下,利用一种具有自动链置换活性的Bst DNA聚合酶和一组特异性引物,对靶DNA序列进行快速扩增,1 h左右可合成109～1010拷贝的靶DNA序列.LAMP技术具有简便、快速、扩增效率和特异性高等特点,近年来该技术广泛应用于病原菌、病毒等病原体的快速分子检测.该文详细介绍LAMP的原理、引物设计及其在微生物分子检测方面的应用.     

实时均相PCR技术在肝病科研中的应用

一、技术背景近年发展起来的一种能集扩增与检测于一体的核酸扩增技术,即实时均相PCR技术(real-time homogeneous PCR)。可在单一闭管体系中对靶核酸进行扩增、检测和定量。不仅有传统PCR的优点,且不易受到交叉污染,已在微生物学、分子遗传学、肿瘤学和血液学等领域得到广泛的应用。现就其中的相关技术以及在肝脏病学中的应用作一介绍。     

LAMP法应用于寄生虫感染检测的研究进展

环介导等温扩增(LAMP)技术是近年来发展迅速的一种敏感、特异、方便快捷的核酸扩增技术。与传统PCR方法相比,LAMP技术属于等温扩增,无需昂贵的热循环仪,并且由于LAMP反应中产生大量的副产物-白色焦磷酸镁沉淀,扩增产物可不经过电泳,无需开盖直接通过肉眼观察即可判定结果,在反应前、后加入染色剂效果更佳。LAMP技术敏感性高、特异性强、操作简便,能够满足现场和条件较差的基层实验室进行快速检测的需求。近年来LAMP技术在寄生虫感染检测中应用广泛,本文对其研究进展进行了综述。     

核酸检测技术对日本血吸虫病诊断价值的meta分析

目的　应用诊断试验meta分析,定量评价核酸检测中变温和等温扩增技术对日本血吸虫病的诊断价值。方法　通过计算机检索1990年1月-2019年6月中国知网、万方数据知识服务平台、PubMed数据库和ScienceDirect数据库中公开发表的日本血吸虫病核酸检测相关文献,手工查阅《血吸虫病研究资料汇编》及论文集等纸质出版物,并以文献追溯法对相关文献引文进行追溯查找。按照纳入与排除标准对检索的文献进行筛选,提取纳入文献相关数据,采用RevMan 5.3软件对入选文献进行质量评价,采用MetaDiSc 1.4软件对数据进行meta分析。结果　最终纳入19篇文献,其中中文文献5篇、英文文献14篇;共24组研究,其中17组研究涉及变温扩增技术与金标准的比较、7组研究涉及等温扩增技术与金标准的比较。文献质量评价结果表明,所纳入文献总体偏倚较小;Deek漏斗图提示变温扩增技术相关文献可能存在发表偏倚。变温扩增技术相关研究间存在非阈值效应引起的异质性,故采用随机效应模型合并效应量;合并分析结果示,其检测日本血吸虫病的综合灵敏度为0.81（0.79,0.83）、特异度为0.73（0.71,0.74）、SROC曲线下面积为0.944 3。等温扩增技术相关研究间不存在异质性,故使用固定效应模型进行效应量合并;合并分析结果显示,其检测日本血吸虫病的综合灵敏度为0.96（0.94,0.98）、特异度为0.95（0.94,0.97）、SROC曲线下面积为0.989 9。结论　变温扩增技术和等温扩增技术对日本血吸虫病均有较高诊断价值,等温扩增技术诊断准确性相对更高。     

安徽省3种常见蜚蠊基因组多态性DNA的研究

目的研究随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,用于蜚蠊分子分类。方法提取3种蜚蠊的基因组DNA,鉴定及定量分析。确定RAPD反应总体积、反应条件。选取3条不同的随机排列碱基顺序的多聚核苷酸单链为引物,进行PRPD-PCR扩增反应。将扩增产物制备成DNA图谱,通过对DNA图谱和遗传距离的分析,研究这3种蜚蠊基因组DNA的多态性。结果分别扩增出不同数量和分子大小的DNA片段。3种蜚蠊基因组DNA扩增产物中具有相同的DNA条带,这反映了各蜚蠊基因组DNA具有同源性;3种蜚蠊基因组DNA扩增产物又具有各种独特的DNA条带,DNA条带亮度也有差别。结论 RAPD技术简便、快速、精确,可用于蜚蠊分子生物学分类。     

用RAPD-PCR扩增DNA多态性进行埃及伊蚊亚种和种群的鉴定

随机复制多样性DNA聚合酶链反应(RAPD-PCR)是以单一的、含10个碱基序列的随机引物体外扩增基因组DNA的随机片段,用以研究基因多态性。此技术快速、简易、不需了解基因背景。本研究用RAPD-PCR技术扩增埃及伊蚊基因组DNA,用统计学方法分析扩增的基因片段,通过基因分析进行亚种和种群的鉴定。     

环介导等温扩增技术及其在病原生物检测中的应用

环介导等温扩增(LAMP)技术是近年来发展起来的一种新型核酸扩增技术,具有操作简便、快速、特异性高、灵敏性高等特点,自2000年开发以来,在短短的十几年内被广泛应用于细菌、病毒和寄生虫等病原生物的检测,在即时检验和基层实验室推广中有重要意义。     

多重置换扩增在地中海贫血植入前遗传学诊断中的应用

多重置换扩增(MDA)技术作为一种全新的全基因组扩增技术,为单细胞的后续检测提供了足够和稳定的DNA,在地中海贫血植入前遗传学诊断的实验研究和临床应用中取得了较大进展。该文就MDA的原理、技术特点及其在地中海贫血植入前遗传学诊断中的应用研究进展进行综述。     

环介导等温扩增技术用于肠杆菌检测的研究现状

肠杆菌是肠道疾病的一种病原体。环介导等温扩增技术（LAMP）是一种新的核酸扩增技术,具有敏感性高、特异性强和简便快速等优点,可用于肠杆菌的快速诊断。本文拟就LAMP检测肠杆菌的研究现状进行综述。     

云南省猪戊型肝炎病毒全基因组扩增及进化分析

目的 对猪戊型肝炎病毒全长基因组进行扩增,分析其进化关系,为HEV的感染性克隆研究奠定基础。方法 利用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-nPCR)和RACE技术对猪粪便中HEV样品进行全基因组扩增,利用DNAStar和MEGA4.0软件进行同源性比较和进化树分析。结果 RT-nPCR方法扩增出HEV的 5段目的基因序列和RACE技术扩增出HEV的 5'和3'端,序列比对结果正确,HEV全长扩增成功。同源性分析显示其与新疆株(GU119961)同源性较高(96.1%)。系统进化树显示该病毒属于基因4型h亚型猪HEV。结论 HEV全基因组序列扩增成功,为深入研究HEV奠定基础。     

临床基因扩增实验室的建立

一、临床基因扩增实验室的现状基因扩增技术作为现代分子生物学检测的先进手段之一,为多种疾病提供了核酸的诊断依据,但部分地区呈现开展基因扩增检验过热现象,造成检验结果和临床意义十分混乱;为加强对临床基因扩增检验的管理,1998年卫生部医政司发文,停止临床出PCR检验报告。二、医院基因扩增实验室建立为规范对临床基因扩增实验室的管理,卫生部即将颁布临床基因扩增实验室建立规范,届时各省三级医院依据临床基因扩增实验室建设的规范,申请建立临床基因扩增实验室,经卫生部临床检验中心验收,报卫生部医政司备案,省卫生行政…     

环介导等温扩增技术用于寄生虫检测的研究进展

寄生虫病在我国分布广泛,严重危害着人们的身体健康.环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种新的核酸扩增技术,具有敏感性高、特异性强和简便快速等优点,可用于寄生虫的快速诊断.该文就LAMP检测寄生虫的研究现状进行综述.     

乙肝表面抗原和弓形虫棒状体分泌抗原多功能真核表达载体的构建与鉴定

目的探讨通过体外扩增乙肝表面抗原(HBsAg)基因,构建真核表达载体pcDNA3-HBsAg-ROP2的可行性。方法根据乙肝S基因序列及pcDNA3-p30-ROP2酶切位点等情况设计、合成引物,应用聚合酶链反应(PCR)技术,扩增HBsAg基因片段;应用回收、纯化、酶切、连接等技术,将HBsAg基因替换pcD-NA3-p30-ROP2中的p30基因,并进行酶切、PCR扩增及测序鉴定。结果 PCR扩增出约0.7 kb的目的基因HBsAg,成功构建pcDNA3-HBsAg-ROP2重组载体。PCR、酶切结果与理论相符,重组体包含了HBsAg和ROP2基因的完整序列。结论利用体外扩增乙肝表面抗原,可成功构建乙肝和弓形虫多功能重组载体pcDNA3-HBsAg-ROP2。     

等温扩增技术在寄生虫及其他病原体检测中的应用

以聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction, PCR）为基础的体外核酸扩增技术已成功应用于科学研究各方面。近年来等温扩增技术（Isothermal amplification technology）凭借恒温、高效、耗时短、不过分依赖设备仪器等优点越来越多地被应用于分子诊断及疾病检测中。本文对现有的部分等温扩增技术原理、特点以及在寄生虫病病原体及其他病原体检测方面的应用进行综述,并展望其应用前景。     

噬菌体生物扩增法在结核病诊断中的研究

噬菌体生物扩增法是一项接近于细菌培养的微生物学实验室技术,它能快速准确地检出结核分枝杆菌,近年来在结核病诊断研究中备受关注.国内外研究表明噬菌体生物扩增法是一种简便、快速、安全、可靠的检测方法,而且具有较高的敏感度和特异性.本文介绍了噬菌体生物扩增法在结核病诊断中的研究进展.     

套式PCR和DNA探针技术检测Q热立克次体

目的 建立套式PCR（NPCR）和DNA探针技术用于检测Q热立克次体。方法 依据已知的Cb 23s rRNA基因序列,设计两对引物用于建立套式PCR技术,并将扩增片段制成探针进行斑点杂交。结果 9株Cb分离株均可扩增出阳性产物带,而对照菌均为阴性,扩增灵敏度可达0.1pg Cb DNA,实验感染第6天的豚鼠血、小鼠血、小鼠脾脏均可扩增出阳性带;用七医株扩增片段制成的探针与9株Cb分离株的全DNA呈阳性杂交,对照菌为阴性,探针杂交灵敏度为0.5ng Cb DNA,感染的豚鼠血、小鼠血、小鼠脾脏均可呈阳性反应。结论 我们的NPCR和DNA探针技术具有很好的特异性和灵敏度,可将二者联合用于Q热的病原学诊断。     

噬菌体生物扩增法在结核病诊断中的研究

噬菌体生物扩增法是一项接近于细菌培养的微生物学实验室技术,它能快速准确地检出结核分枝杆菌,近年来在结核病诊断研究中备受关注.国内外研究表明噬菌体生物扩增法是一种简便、快速、安全、可靠的检测方法,而且具有较高的敏感度和特异性.本文介绍了噬菌体生物扩增法在结核病诊断中的研究进展.     

噬菌体生物扩增法在结核病诊断中的研究

噬菌体生物扩增法是一项接近于细菌培养的微生物学实验室技术,它能快速准确地检出结核分枝杆菌,近年来在结核病诊断研究中备受关注.国内外研究表明噬菌体生物扩增法是一种简便、快速、安全、可靠的检测方法,而且具有较高的敏感度和特异性.本文介绍了噬菌体生物扩增法在结核病诊断中的研究进展.