防己诺林碱阻断自噬抑制H1N1病毒感染的研究

目的 探索防己诺林碱在细胞水平抗H1N1病毒的作用,阐明防己诺林碱调控细胞自噬抑制H1N1病毒复制的分子机制。方法 CCK-8法检测0.312 5、0.625 0、1.250 0、2.500 0、5.000 0、10.000 0、20.000 0、40.000 0、60.000 0μmol·L^-1的防己诺林碱对MDCK细胞活力的影响;MDCK细胞设置对照组、模型组和防己诺林碱(2.5、5.0、10.0μmol·L^-1)组,除对照组外,以感染复数(MOI)为0.1的H1N1病毒感染MDCK细胞,加入防己诺林碱共同孵育12 h,同时设置防己诺林碱(10.0μmol·L^-1)与病毒共同孵育4、8 h组,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR,检测HIN1 mRNA表达)和Western blotting[H1N1病毒核蛋白(NP)]检测防己诺林碱对病毒复制的抑制作用;PI/Hoechst 33342染色检测防己诺林碱(10.0μmol·L^-1)对MDCK细胞死亡的影响;qRT-PCR法检测防己诺林碱检测防...     

防己诺林碱抑制黑色素瘤的增殖转移

目的观察防己诺林碱对黑色素瘤细胞生长转移的影响。方法通过MTT实验,观察不同浓度防己诺林碱对A375细胞增殖的影响;利用Transwell实验,检测不同浓度防己诺林碱对A375细胞转移功能的影响。通过Western blot和RT-PCR,检测防己诺林碱对A375生长转移相关蛋白的影响。结果防己诺林碱可以抑制黑色素瘤细胞A375的增殖转移。10、20、40μM/L防己诺林碱处理A375细胞后,对其增殖的抑制率分别为43.81%±1.53%、48.64%±4.65%、50.69%±4.99%。20、40μM/L防己诺林碱处理A375细胞作用24 h后,对其转移的抑制率分别为14.95%±4.31%、33.03%±5.46%。防己诺林碱显著抑制细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、CDK4、CDK6、基质金属蛋白酶-2(MMP2)的表达(P<0.05)。结论防己诺林碱能显著抑制A375细胞的增殖转移,可作为治疗黑色素瘤的潜在化疗药物进行深入研究。     

正交试验优选防己中粉防己碱和防己诺林碱的提取工艺

目的优选防己中粉防己碱和防己诺林碱的最佳提取工艺。方法以总生物碱的含量和浸膏的率为考察指标,采用正交试验,考察提取溶媒的浓度、提取时间、提取次数和提取溶媒的用量对提取的影响,确定了防己中粉防己碱和防己诺林碱的最佳提取工艺。结果最佳提取工艺条件是：以6倍量60%乙醇提取3次,每次1小时。结论优选得到的提取工艺得率高,操作简便易行。     

高效液相色谱法测定防己药材中粉防己碱与防己诺林碱的含量

目的用高效液相色谱法测定不同产地防己药材中粉防己碱与防己诺林碱的含量。方法色谱柱为Kromasil ODS-1（4．6mm×200mm，5μm），流动相为乙腈0．01％三乙胺水溶液，梯度洗脱，流速为1．0mL·min^-1，检测波长为280nm。结果粉防己碱在474-4740ng内线性关系良好，r=0．9999，平均回收率为99．3％，RSD=1．5％；防己诺林碱在238-2380ng线性关系良好，r=0．9998，平均回收率为99．5％，RSD=1．1％。结论建立了高效液相色谱法同时测定防己药材中粉防己碱与防己诺林碱的含量，比较了不同产地防己药材中粉防己碱与防己诺林碱的含量。     

利心丸中防己诺林碱HPLC检测方法的建立及其评价

目的建立利心丸中的防己诺林碱含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,以Inertsil ODS-3(5μm,4.6mm×250mm)色谱柱,甲醇-乙腈-水-二乙胺(52∶20∶28∶0.08)为流动相,检测波长:282nm,流速:1.0mL/min。结果己诺林碱在0.1617~0.9702μg的范围内线性关系良好,r=0.9996;平均加样回收率是98.50%,RSD=1.26%。结论方法操作简便,专属性强,准确度高,可用于利心丸的质量控制。     

高效液相色谱法同时测定复方防己颗粒中粉防己碱和防己诺林碱的含量

目的：研究一种能同时准确测定复方防己颗粒中的粉防己碱和防己诺林碱的方法。方法：采用高效液相色谱法测定粉防己碱和防己诺林碱的含量；色谱柱ZorbaxsbCl。柱；流动相为甲醇-乙腈-0．002moL&#183;L^-1。“磷酸二氢钾-乙二胺（55：25：20：0．06），流速1．0mL&#183;min，柱温为室温，检测波长为230nm，进样量为20μL,结果：本法可以准确测定复方防己颗粒中的粉防己碱和防己诺林碱，精密度、回收率、稳定性均符合要求。结论：该方法能同时测定复方防己颗粒中的粉防己碱和防己诺林碱的含量，方法简单、快速、灵敏度高，可用于复方防己颗粒的质量控制。     

防己诺林碱电喷雾质谱裂解的机制

目的对防己诺林碱的电喷雾质谱裂解机制进行研究。方法采用量子化学计算结合电喷雾质谱法预测化合物的质谱裂解机制。结果防己诺林碱电喷雾质谱分析发现,主要脱掉甲醇、羟基自由基和甲烷中性分子,以及发生逆Diels-Alder反应(RDA反应),经量子化学计算确定了脱掉-OCH3的顺序:C17-O40>C6-O43>C33-O34。结论质谱与量子化学有机结合可以预测质谱裂解机制。     

HPLC法测定风痛安胶囊中粉防己碱和防己诺林碱的含量

目的建立风痛安胶囊中粉防己碱和防己诺林碱含量的测定方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为Diamonsil C18;流动相：甲醇-乙腈-0.03mol·L^-1磷酸二氢钾溶液-二乙胺（55∶25∶20∶0.05）;检测波长230nm。结果粉防己碱、防己诺林碱进样量分别在0.1355～2.7100μg（r=0.9999）,0.1033～2.0660μg（r=0.9999）范围内线性关系良好。粉防己碱、防己诺林碱平均回收率分别为98.02%（RSD=1.31%）,97.11%（RSD=1.42%）。结论本方法简便,专属,重复性好,可用于该制剂的质量控制。     

RP-HPLC测定舒肝饮丸中粉防己碱与防己诺林碱的含量

舒肝饮丸为我院自制制剂，由防己等9味中药组成，临床用于治疗慢性肝炎、肝硬化等疗效确切。防己为该制剂主要药物之一，含有粉防己碱（tetrandrine）和防己诺林碱（fangchinoline）等有效成分，高效液相色谱法测定防己及其他制剂中粉防己碱和防己诺林碱含量已有报道田。笔者用甲醇超声提取，采用高效液相色谱法测定舒肝饮丸中粉防己碱和防己诺林碱的含量，为该制剂的质量控制提供简便、快速、准确的测定方法。     

一清胶囊抗甲型H1N1流感病毒作用

目的 研究一清胶囊抗甲型H1N1流感病毒作用。方法 采用小鼠气管内注入甲型流感病毒鼠肺适应株A/PR/8/34(H1N1)病毒液建立病毒感染小鼠模型,以肺指数、肺指数抑制率、小鼠累积死亡率为指标,评价一清胶囊体内抗甲型H1N1流感病毒作用。结果 7.3 g·kg^-1一清胶囊(原生药)可降低病毒感染小鼠的肺脏指数(P<0.05)和小鼠感染病毒后7~9 d内的死亡率(P<0.01)。结论 一清胶囊具有明显的抗甲型H1N1流感病毒作用。     

大流行流感与甲型H1N1流感

目的对大流行流感和甲型H1N1进行综述。方法参考国内外近期的有关文献和WHO的相关报道,介绍了流感病毒的基本知识、大流行流感的定义和发展,以及甲型H1N1流感的特点和流行现状等。结果与结论大流行流感具有传播性强、危害大等特点,2009年的甲型H1N1流感为21世纪的第1次大流感,应加以重视。     

220例甲型H1N1流感病例流行病学调查分析

目的：进一步熟悉、掌握甲型H1N1流感流行病学特点,为预防和控制甲型H1N1流感提供科学依据。方法：回顾分析某定点医院收治的220例甲型H1N1流感病人的相关资料。结果：输入性病例74例,其中境外输入57例;周边地区转诊病例15例,本土病例131例;男109例,女111例;平均年龄19.4&#177;9.3岁;学生183例,占83.2%,以在校集中居住的初高中学生及大学生为多的聚集性群体发病为主,84.1%的患者与甲型H1N1流感疑似或确诊病人接触及感冒病人有明确接触史,潜伏期2.22&#177;0.92d。结论：甲型H1N1流感传染源、传播途径、易感人群3个环节控制难度大。     

热毒宁注射液体外抑制甲型H1N1流感病毒的研究

目的 研究热毒宁注射液体外抑制甲型H1N1流感病毒的作用。方法 以奥司他韦为阳性对照,采用CPE和MTT法观察热毒宁注射液对甲型H1N1流感病毒的抑制作用。结果 CPE法结果表明热毒宁注射液最大无毒浓度（TC₀）为16.2 mg/mL,半数中毒浓度为（TC₅₀）为（24.5±8.1）mg/mL;MTT法测定结果表明热毒宁注射液TC₀为16.2 mg/mL,TC₅₀为（21.7±9.4）mg/mL。热毒宁注射液体外抑制甲型H1N1流感病毒结果显示,CPE法和MTT法热毒宁注射液作用感染细胞1次组半数有效浓度（IC₅₀）为（900.0±173.2）、（933.3±57.7）μg/mL,治疗指数（TI）为27.2、23.2;热毒宁注射液作用感染细胞3次组IC₅₀为（666.7±115.5）、（866.7±208.1）μg/mL,TI为36.7、25.0。结论 热毒宁注射液具有明显体外抗甲型H1N1流感病毒的作用。     

湘西地区甲型H1N1流感危重患儿4例临床特点分析

目的探讨湘西自治州少数民族地区甲型H1N1流感危重患儿临床特点及诊疗体会。方法回顾性分析资料完整的本院儿科住院4例甲型H1N1流感危重患儿临床表现、实验室检查及影像学资料。结果 4例患儿早期无特异性表现,均为流感样症状。3例发热,1例病初体温未测,4例均咳嗽,少量痰液,病情加重可出现咳嗽加重,均有呼吸困难,无腹泻呕吐,2例3d未排大便,伴腹胀;随着病情进展都有多脏器功能不全,其中以肺脏受累最为突出。实验室检查：白细胞计数正常、降低或升高,多有肝肾功能异常。X线胸片提示双肺均有广泛受损害,表现为大片状高密度影。结论甲型H1N1流感危重患儿病情凶险,进展迅速,病死率高。因此,为了降低发病率,特别是降低危重症发病率,必须加强小于5岁的农村儿童甲型H1N1流感疫苗接种及防控工作,同时注重针对合并营养性缺铁性贫血儿童的早期治疗。早发现,早诊断,早期综合治疗,是降低甲型H1N1流感危重症病死率的关键。     

Immunodepression induced by influenza A virus (H1N1) in lymphoid organs functions as a pathogenic mechanism

In recent years, the frequency of influenza epidemics around the world has posed a great threat to the lives of people, especially those in developing countries. However, it is unclear which organs are the targets of influenza A viruses (IAVs) and what histopathology is caused by IAVs. In this study, BALB/c female mice were infected with H1N1 by nasal inoculation for 5 days. After euthanasia, the brain, heart, lungs, thymus, liver, spleen, hilar lymph nodes, pancreas, kidneys, and adrenal glands were collected. Among these organs, only the lungs, thymus, spleen, and hilar lymph nodes showed lesions. Lung histopathology was characterized by widening of the septum, lymphocyte infiltration, alveolar effusion, and alveolar hyaline membrane formation. The thymus and spleen exhibited atrophy due to the apoptosis of numerous lymphocytes. Although the hilar lymph nodes were enlarged, lymphocyte apoptosis still occurred. The nucleocapsid protein (NP) of IAVs was present not only in the lungs but also in the thymus, spleen, and hilar lymph nodes. In peripheral blood, CD19⁺B lymphocyte levels clearly decreased whileCD3⁺CD8⁺T and CD3⁺CD4⁺T lymphocyte levels temporarily decreased but subsequently increased. These results demonstrate that H1N1 in the lungs could reach lymphoid organs, induce the depletion of B and T lymphocytes in peripheral blood and lymphoid organs, and suppress adaptive immunity.     

重型甲型H1N1流感的早期预测指标

目的寻求重型甲型H1N1流感患者的早期预测指标。方法比较2009年6月~2010年1月南京地区经RT-PCR确诊的183例普通型和64例重型甲型H1N1流感患者的临床特点及实验室参数,分析重型患者的特征。结果重型外周血白细胞绝对数(6.13±4.06)×109/L,较普通型的(4.48±1.44)×109/L明显偏高(P<0.01);而同期淋巴细胞数(1.23±0.76)×109/L,较普通型(1.50±0.59)×109/L明显下降(P<0.01)。结论除已知的重型甲型H1N1流感指征外,淋巴细胞比例和绝对计数下降可作为重型甲型H1N1患者的早期预测指标。     

奥司他韦治疗疑似甲型H1N1流感的疗效分析

目的观察奥司他韦（达菲）治疗疑似甲型H1N1流感的疗效。方法47例疑似甲型H1NI流感的病例,随机分成治疗组22例和对照组25例,治疗组给予奥司他韦75mg,每天2次口服,疗程5d;对照组给予常规流感对症治疗（感冒灵冲剂）,疗程5～7d。结果治疗组发热缓解时间与流感样症状持续时间均短于对照组,差异均有统计学意义（P〈0．01）。治疗组应用抗生素的比例为25．1％低于对照组的48．3％,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论奥司他韦作为抗流感病毒药物治疗疑似甲型H1N1流感安全有效。