人血清哇巴因UPLC-MS/MS检测方法的建立和方法比对

目的建立超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)检测人血清哇巴因的方法。方法采用高特异性的UPLC-MS/MS,以氘标记的哇巴因-d3作为内标。样本采用固相萃取(SPE)前处理方法,以反相色谱柱负离子模式及电喷雾电离源(ESI)检测血清哇巴因水平。对建立的方法进行方法学(基质效应、回收率、准确度、批内精密度、批间精密度及稳定性)验证。采用建立的UPLC-MS/MS方法检测20名体检健康者及40例高血压患者血清哇巴因水平,并与酶联免疫吸附试验(ELISA)进行比较。结果 UPLC-MS/MS检测血清哇巴因的标准曲线范围为0.02～5.0 ng/mL,最低定量检测限(LLOQ)为0.02ng/mL。采用ABN固相萃取小柱进行样本前处理的基质效应较小,且回收率较高,达85%。LLOQ和低值(0.06 ng/mL)、中值(0.6 ng/mL)、高值(4 ng/mL)质控品的准确度分别为108.0%、89.2%、101.0%、103.0%。3个水平质控品的批内变异系数(CV)分别为2.87%、1.95%、0.56%,批间CV分别为5.98%、1.90%、0.75%。样本室温过夜放置16 h及样本前处理后室温放置自动进样器48 h的偏差均15%。采用UPLC-MS/MS检测哇巴因,正常对照者及高血压患者血清中均未检测到哇巴因。采用ELISA测定血清哇巴因,高血压患者为0.096 ng/mL,正常对照者为0.062 ng/mL。UPLC-MS/MS检测5个水平(0.02、0.05、0.10、0.20、0.50 ng/mL)的哇巴因标准品,其测定结果与对应的哇巴因标准品浓度呈正相关,且线性较好(r20.99),准确度较高;而ELISA检测5个水平哇巴因标准品的结果均很接近(0.024 9～0.029 6 ng/mL)。结论建立了检测人血清哇巴因的UPLC-MS/MS方法,未检测到正常人及高血压患者的血清哇巴因。UPLC-MS/MS与ELISA检测血清哇巴因的结果存在较大差异。     

液相色谱-串联质谱法检测血清皮质醇方法的建立及性能评价

目的建立同位素稀释液相色谱-串联质谱法(ID-LC-MS/MS)检测血清皮质醇的方法并对其进行性能评价。方法采用ABSCIEX TRIPLE QUAD 5500液相色谱-串联质谱联用系统定量检测皮质醇,参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)相关文件对建立的方法进行线性、精密度、提取回收率和准确性等基本性能验证。结果内标平衡时间为室温下1 h。ID-LC-MS/MS检测皮质醇的线性回归方程为Y=0.018 7X+0.043 4,r=0.999 8;线性范围为25~500 ng/mL。检出限为0.05 ng/mL。批内、批间变异系数(CV)分别为4%、6%。提取回收率为84.5%~90.4%。国际临床化学和检验医学联合会参考实验室外部质量评价计划(RELA)-A和RELA-B样本测定结果的偏移分别为3.19%和2.84%。结论建立的ID-LC-MS/MS方法的精密度、准确度、重现性均较好,结果准确,可用于临床实验室检测血清皮质醇。     

液相色谱串联质谱法和电化学发光免疫分析法检测25-羟维生素D的一致性评价

目的 比较液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)与电化学发光免疫分析法(ECLIA)检测血清中25-羟基维生素D(25(OH)D)结果的相关性和一致性,以期指导临床选择合适的检验方法。方法 收集该实验室临床血清标本94例,分别用LC-MS/MS和ECLIA这两种方法检测25(OH)D。采用Passing-Boblok回归分析两种方法的相关性,采用Bland-Altman及Mountain plot评估两种方法的一致性。以血清25(OH)D<20.0 ng/mL为维生素D缺乏,20.0～<30.0 ng/mL为维生素D不足,使用Kappa分析判断两种方法的诊断维生素D营养状况的符合率。结果 LC-MS/MS与ECLIA检测25(OH)D结果分别为(26.67±4.79)ng/mL和(39.33±4.09)ng/mL,Passing-Bablok回归分析显示两种方法检测25(OH)D浓度的回归方程为Y_ECLIA=-4.558 1+1.719 8X_LC-MS/MS,斜率为1.719 8(95%CI 1.586 3～1.828 4),不包...     

乌鲁木齐地区0～14岁儿童脂溶性维生素营养水平现状研究

目的研究乌鲁木齐地区0~14岁儿童脂溶性维生素A、D、E、K营养水平。方法选取2018年11月至2019年3月该院体检儿童264例,分为婴幼儿组(0~<3岁)104例,学龄前组(3~<6岁)75例,学龄组(6~<14岁)85例,利用液相色谱串联质谱法检测血清中维生素A、D、E及K水平。结果维生素D在男童中水平为(22.13±13.79)ng/mL,在女童中水平为(18.85±12.06)ng/mL,男童明显高于女童,差异有统计学意义(P<0.05)。维生素A、E、K在男、女童之间水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。维生素A水平为(0.30±0.08)mg/L,缺乏率为11.7%,婴幼儿组缺乏率最高(17.3%)。维生素D水平为(20.80±13.19)ng/mL,缺乏率、不足率和为60.3%,随着年龄的增加,缺乏率有所增加。维生素E水平为(10.22±2.20)mg/L,不足率为4.9%,整体处于正常水平。维生素K水平为0.36(0.19~0.69)ng/mL,缺乏率为13.3%,婴幼儿组及学龄前组儿童中缺乏较多,缺乏率分别为11.5%、18.7%。结论乌鲁木齐地区儿童脂溶性维生素存在整体缺乏的情况,在医生的指导下正确、及时地检测和合理地补充脂溶性维生素,有助于儿童的健康成长。     

液质联用定量血清中维生素D、A、E的方法

目的本文旨在建立并验证一种准确、方便、快速同时定量人血清中四种脂溶性维生素25-羟基维生素D2(25OHVD2)、25-羟基维生素D3(25OHVD3)、维生素A、维生素E的液质联用方法,以满足临床研究、临床诊断对其检测的需求。方法 100μL血清样品经液-液萃取纯化,4种分析物经反相色谱分离、质谱MRM扫描模式下检测。采用自配并经验证的替代基质,对内源性分析物进行准确的标准曲线定量。分离定量在5min的时间里完成。结果提出并成功验证了代替基质法为基础的LC-MS/MS 4种内源性维生素的定量方法。代替基质容易配制,性能优越,定量方便。方法的检测线性范围分别为25OHVD2:0.5～50.0ng/mL,25OHVD3:2～200ng/mL,维生素A:100～10 000ng/mL,维生素E:300～30 000ng/mL。四种分析物的日内及日间精密度和准确度偏差均在±20%以内。血清样品室温、冻融及1个月长期稳定性均满足评判标准。结论实验结果说明此方法具有准确、可靠,稳定、耐用性及快速等优点,适用于临床样本的分析。     

HPLC-MS/MS检测血清25-羟维生素D方法的建立和基本性能评价

目的建立一种检测血清25-羟维生素D2[25(OH)D2]和25-羟维生素D3[25(OH)D3]的高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)方法,以用于常规临床评价维生素D水平。方法以稳定同位素标记的25(OH)D2-d3和25(OH)D3-d3作内标,血清标本和标准品采用饱和硫酸锌和乙腈沉淀血清蛋白,正己烷提取。采用HPLC-MS/MS技术进行分析,固定相为Poroshell 120EC-C18正向柱,电喷雾离子源(ESI),多反应监测模式(MRM),干燥气温为275℃,干燥气流为10L/min,喷雾器压力为50psi,毛细管电压为5 000V。以甲醇(80%)和超纯水(20%)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.5mL/min,柱温为50℃,质谱采用高温ESI,以选择反应监测模式进行定量分析。结果 25(OH)D2和25(OH)D3内标峰面积比与对应的水平线性相关系数均大于0.995,检出限(LOD)均为1.0ng/mL,定量限(LOQ)分别为2.0ng/mL和1.5ng/mL,25(OH)D2批内和总变异系数分别为3.01%~5.23%和3.45%~8.72%,25(OH)D3批内和总变异系数分别为1.78%~3.43%和2.19%~4.16%,准确度分别为105.4%和98.0%~104.9%,加样回收率分别为99.67%~103.92%和98.72%~104.04%。结论本研究建立的HPLC-MS/MS方法检测血清中25(OH)D2和25(OH)D3灵敏度高,准确性好,可用于常规临床评价维生素D含量。     

盐田区学龄前儿童维生素D水平调查

目的了解深圳市盐田区学龄前儿童维生素D水平,为临床科学合理的补充维生素D提供实验室依据。方法采用液相色谱-串联质谱法定量检测2014年3月至2015年2月来该院儿童保健门诊进行常规体检的839名学龄前健康儿童的血清维生素D水平,并对结果进行统计分析。结果 839名参与检测的儿童血清25(OH)D平均水平为(38.1±14.3)ng/mL,缺乏率为7.03%,不足率为12.04%,适宜率为80.98%。学龄前儿童血清维生素D水平随着年龄的增长呈现出先下降后升高的趋势,各年龄组的维生素D水平差异有统计学意义(P0.05)。夏秋季维生素D水平高于冬春季,差异有统计学意义(P0.05)。不同性别间维生素D水平差异无统计学意义(P0.05)。结论盐田区学龄前儿童维生素D仍有一定的缺乏率,应当继续采取积极措施提高维生素D水平。     

同位素稀释超高效液相色谱-串联质谱法检测人血清中维生素K1含量

目的建立同位素稀释超高效液相色谱-串联质谱法测定人血清中维生素K_1含量。方法采用AB Sciex API 4000三重四级杆质谱仪,以稳定同位素标记的2H7-维生素K_1为内标,利用甲醇沉淀血清中的蛋白质,然后加入正己烷进行液液萃取,离心后上清液经氮气吹干,用乙腈复溶。用电喷雾离子源(ESI)在正离子模式下,以MRM模式采集数据。结果该方法的定量下限为0.1 ng/m L,线性范围为0.1~20 ng/m L,r=0.999 2,日内、日间精密度的CV≤7.78%,回收率在92.23%~99.32%;样品室温放置4 h,处理后自动进样器放置24 h,于-80℃环境中反复冻融3次,稳定性均良好;检测1 108份血清样品结果显示90.61%在参考区间内。结论建立了测定人血清中维生素K_1含量的同位素稀释超高效液相色谱-串联质谱法,该法准确度高、检测限低,分析时问题,适合批量处理样品。     

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清肌酐

目的 建立一种使用同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定血清肌酐的候选参考方法.方法 以[2H3]肌酐为内标,用无水乙醇沉淀血清中的蛋白质,用氯仿纯化上清液,用液相色谱串联质谱分离测定,以包括法定量.结果 血清肌酐测定的批内、批间和总变异系数的平均值分别为0.57%(范围0.52%～0.61%)、0.43%(范围0.11%～0.59%)和0.73%(范围0.62%～0.83%).加样回收试验的回收率范围为99.09%～101.13%.分析两种参考物质SRM909b和SRM 967b,测定结果与认定值的偏差小于0.4%.结论 建立了ID-LC/MS/MS法测定血清肌酐的方法,方法准确、精密、简便,可望作为血清肌酐测定的参考方法.     

糖皮质激素个体化用药系统平台的建立与评价

目的 建立可靠的糖皮质激素(GC)实验诊断系统平台. 方法 采用超高效液相色谱串联质谱法检测人工合成GC药物(泼尼松、甲基泼尼松和地塞米松)血药浓度,流式细胞分析法检测糖皮质激素受体(GR)-α蛋白,逆转录实时荧光基因扩增定量分析法检测GR-α mRNA,并进行了方法学分析. 结果 质谱法检测PNS、DPNS、DX血药浓度分别在l～15 ng/mL、1～100 ng/mL、20 ～ 400 ng/mL范围内线性关系良好.标本置26℃6h、置-20℃30 d、加甘油三酯13.21 mmol/L、加总胆红素162.8 μmol/L,比较各组血药浓度未发现统计学差异.PNS、DPNS、DX血药浓度日内CV分别小于10.81％、7.98％、5.47％,`间CV分别小于10.72％、6.29％、12.36％.回收率试验显示PNS、DPNS、DX在20 ng/mL、20 ng/mL、400 ng/mL浓度的平均回收率分别是99.91％、102.49％、109.89％.流式细胞术分析GR-α蛋白,标本立即处理检测与放置6h、24 h后处理检测结果比较无统计学差异,标本处理后5h检测结果无显著性变化,3种抗体反应条件(室温孵育30 min、37℃孵育30 min、4℃孵育6h)检测结果无统计学差异,百分率及荧光强度CV值分别为3.4％与9.8％.逆转录实时荧光基因扩增定量分析法检测GR-α mRNA检测灵敏度达到101 copies/μL,批内和批间Ct值变异系数均小于2.0％. 结论 初步证实本体系设计科学、方法先进、系统可靠.     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

31例误诊哮喘原因分析

目的通过对中央气道不全性梗阻和支气管结核、术后痰栓形成误诊为支气管哮喘的分析,探讨误诊原因及正确诊断的方法。方法对误诊为支气管哮喘的3l例患者的临床资料进行分析。结果临床特征以刺激性咳嗽为主,其次为活动后胸闷、气促,肺部闻及哮鸣音,胸部影像学多无特征性改变或极易漏诊,支气管舒张试验阳性率低,诊断前缺乏气管镜及病理检查,均误诊为支气管哮喘。结论中央气道不全梗阻性病变或炎性病变包括支气管结核、术后痰栓形成时原发疾病症状不典型,肺部影像学检查无异常表现或极易漏诊,故该类以表现为咳嗽、喘息、活动后胸闷,进而出现严重呼吸困难的患者常被误诊为支气管哮喘,延误诊治。支气管镜及病理检查再结合肺CT是鉴别诊断的重要方法。     

血液透析患者家庭护理提供者的生活质量调查

目的:了解江汉油田血液透析(血液透析)患者家庭护理提供者(护理者)的生活质量。方法:对60例血液透析患者的家庭护理提供者进行一般情况和生活质量综合评定问卷(QOLI-74)调查,并进行相关性和多因素回归分析。结果:家庭护理提供者各维度的主观生活满意度与其客观指标相关,但也与其需求、年龄、文化程度、与患者的关系有关。结论:客观状态是影响主观生活满意度的重要因素,同时应考虑护理者的需求、年龄、文化程度、与患者的关系对护理者主观生活满意度的影响。     

超声评价放疗对颈动脉溃疡斑块形成的影响

目的 探讨超声在评价放疗对颈动脉溃疡斑块形成的影响的价值。方法 回顾性收集经病理学证实为头颈部肿瘤、放疗前后的颈动脉超声资料以及其他基线资料完整的患者93例,比较放疗前后放疗侧颈动脉和非放疗侧颈动脉粥样硬化斑块和溃疡斑块的总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积。结果 放疗前后颈动脉超声检查的平均间隔时间为（6.1±1.9）年;放疗前放疗侧斑块总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、溃疡斑块的总数量、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积与非放疗侧比较差异均无统计学意义（P均>0.05）;放疗后放疗侧斑块总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、溃疡斑块的总数量、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积均较非放疗侧加重,差异有统计学意义（P均<0.05）。结论 放疗可导致头颈部肿瘤患者颈动脉粥样硬化斑块的形成和进展,且斑块具有易损性特点。     

胰腺癌治疗的Cochrane系统评价证据

目的评价胰腺癌治疗的Cochrane系统评价证据,以及纳入系统评价的临床随机对照试验（RCT）的方法学质量。方法检索Cochrane Library数据库（2009年第4期）中有关胰腺癌治疗的系统评价,并运用RewMan5.0.21对所纳入研究的偏倚进行评估。结果共检索到胆道支架置入术姑息治疗梗阻型胰腺癌的系统评价、放化疗治疗不能手术的进展期胰腺癌的系统评价共2篇系统评价,共纳入79个RCT。依照Cochrane协作网推荐的质量评价方法,对所纳入RCT的偏倚进行评估,表明均存在不同程度的偏倚,方法学质量普遍较低。结论 Cochrane系统评价是公认的最高质量的研究证据,但目前缺少足够强度的证据来支持胆道支架置入术姑息治疗梗阻型胰腺癌的疗效。其他治疗手段的疗效如胰腺癌围手术期的营养支持治疗等还需要通过进一步的完成系统评价来评估。建议推行临床试验透明化,实施临床试验注册制度以及按照CONSORT声明严格规范RCT的报告,以便于总结胰腺癌治疗的临床证据。     

护理干预对提高中风患者生活质量的效果观察

目的探讨提高中风患者生活质量的护理方法。方法将50例中风患者随机分为对照组23例和实验组27例,对照组给予针灸内科常规护理,实验组在此基础上给予心理护理和康复训练。结果两组患者治疗护理后日常生活活动(ADL)能力和贝克抑郁量表(BDI)评分均有好转,但实验组疗效明显优于对照组(P<0.05)。结论实施针对性心理护理和康复训练可明显提高中风患者的治疗效果。     

中国人四肢瘫日常生活能力评定量表的信度研究

目的研究四肢瘫日常生活能力评定量表评测四肢瘫患者的重测信度及观察者间信度。方法由1位评定者应用四肢瘫日常生活能力评定量表对20例四肢瘫患者进行评定,评定后1周内再次对该患者进行评定;另1位评定者在第1位评定者初次评定后2 d内对该患者进行评定。结果第1位评定者两次评定总分的组内相关系数为0.994(P<0.01);第1位评定者与第2位评定者评定总分的组内相关系数为0.971(P<0.01)。结论四肢瘫日常生活能力评定量表具有良好的重测信度及观察者间信度。     

乳腺叶状肿瘤的影像分析

目的 分析乳腺叶状肿瘤的X线钼靶摄片和超声表现.方法 收集经手术病理证实的19例乳腺叶状肿瘤,术前均行超声检查,其中15例行X线钼靶摄片,回顾分析其临床特点和影像学表现.结果 19例乳腺叶状肿瘤中,良性8例,交界性6例,恶性5例.15例患者X线钼靶摄片中病灶均为高密度孤立肿块影,呈圆形(8例)或浅分叶状(7例),边界清晰(10例)或部分不清(5例),部分肿块周边见"晕"征(4例).超声检查6例发现囊性变,6例表现为后方回声增强.病灶为圆形(8例)、浅分叶状(8例)或有角状突起(3例).所有病例均未发现腋下转移淋巴结及周围组织浸润等恶性征象.结论 认识乳腺叶状肿瘤的病理类型和临床特点,结合影像表现综合分析,可提高术前诊断率.     

肇庆市居民颈椎病流行病学调查

目的 :调查肇庆市居民颈椎病发病情况及相关问题。方法 :通过分层随机抽样选择该市区18～70岁居民5000人为研究对象 ,入户或至单位询问调查。结果 :该市居民颈椎病发病率为8.11% ,男女差异无显著性 ,随着年龄的增长 ,发病率逐渐增加。经多因素分析 :体位姿势不正确、情绪紧张、潮湿、疲劳是发病的主要诱因。结论 :该病严重影响肇庆市居民的健康 ,做好防治应从早做起 ,综合防治。