免疫磁珠法纯化小鼠CD34^＋造血干细胞

目的 探讨免疫磁珠法（MiniMACS)能否用于纯化小鼠骨髓CD34^ 造血干细胞。方法 应用免疫磁珠纯化小鼠骨髓CD34^ 细胞，流式细胞仪（FACS）评估纯化效率，检测纯化后的细胞活力。结果 纯化后CD34^ 细胞纯度81．5％（范围76．80％－85．38％），回收率47．54％（范围40．50％－54．31％），纯化前后细胞活力不受影响（P＝0．169）。结论 应用MiniMACS纯化小鼠骨髓可获得高纯度CD34^ 细胞，并不影响细胞活力。     

应用单克隆抗体—免疫磁珠分离系统分离纯化再生障碍性贫血骨髓CD34^＋细胞

目的 分离、纯化再生障碍性贫血(简称AA)患者骨髓CD34^ 细胞，探讨其发病机制。方法 对42例AA患者，以常规方法进行骨髓液采集和有核细胞分离，用单克隆抗体—免疫磁珠分离系统(MACS)分离、纯化骨髓CD34^ 细胞，用碱性磷酸酶—抗碱性磷酸酶(APAAP)法作CD34^ 细胞的纯度检测。结果 骨髓CD34^ 细胞纯度达95％—99％，AA患者骨髓CD34^ 细胞多呈单个、散在分布，着色较淡；而对照组骨髓CD34^ 细胞多呈均匀或丛簇状分布，着色较深。结论 应用MACS分离从骨髓CD34^ 细胞，特异性强、纯度高，是研究从骨髓CD34^ 细胞功能、形态的最直接、客观、准确的方法。     

脐血CD34^＋细胞免疫表型的分析

应用免疫磁珠法分离脐血ＣＤ３４＾＋细胞，以比较ＣＤ３４＾＋细胞亚群及各系相关抗原的变化。经过分离，ＣＤ３４＾＋细胞由１．４７±０．７７％升至５７．３９±１６．１７％，分离后ＣＤ３４＾＋ＣＤ３８＾－细胞占ＣＤ３４＾＋细胞的比率为７．８２±４．７９％ＣＤ３４＾＋。细胞纯化同时可减少ＣＤ３＾＋细胞达１４．１２±９．１８倍，ＣＤ１５＾＋细胞减少１６．４２±２１．４７倍；Ｂ系（ＣＤ１９）、巨核系（ＣＤ４１）     

慢性B淋巴细胞白血病CD4^＋CD25^＋highCD127^Low和CD19^＋-CD23^＋的相关性研究

目的通过研究慢性B淋巴细胞白血病（chronic B cell lymphocytic leukemia,B—CLL）CD4^＋CD25^＋highCDl27^Low和CD19^＋CD23^＋的相关性,探讨CD4^＋CD25^＋highCDl27^Low在B—CLL发生发展过程中的作用。方法将20例初次发病的B—CLL患者按临床分期的不同分为O-II期组、III-IV期组,设立正常对照组,应用流式细胞仪检测各组的研究对象外周血中CD4^＋CD25^＋highCDl27^Low、CD19^＋、CD19^＋CD23^＋的表达量,比较各组间的差异。结果B—CLL O-II期组、III-IV期组患者外周血中CD4^＋CD25^＋highCDl27^Low、CD19^＋、CD19^＋CD23^＋的表达量均明显高于正常对照组;B—CLL患者III-IV期组的CD4^＋CD25^＋highCDl27^Low、CDl9^＋、CDl9^＋CD23^＋表达量明显高于O-II期组;CD4^＋CD25^＋highCDl27^Low、CDl9^＋CD23^＋有明显的正相关性。结论B—CLL患者外周血中CD4^＋CD25^＋highCD127^Low的表达量增高,与CD19^＋、CD19^＋CD23^＋的表达量增高明显相关,可能是B—CLL患者CD19^＋CD23^＋克隆性增生原因之一．     

免疫磁珠分选系统在急性髓系白血病干细胞分离中的应用

目的：采用免疫磁珠分选系统（MACS）分离人白血病骨髓CD34^＋、CD38^-干细胞群。方法：收集人白血病骨髓，Percoll密度梯度离心分离单个核细胞，CD34、38磁性标记，MACS分离纯化CD34＋、CD38^-干细胞群，流式细胞仪检测其纯度和分选前后CD34^＋、CD38^-百分比，计算回收率。结果：分选后的CD34^＋、CD38细胞纯^-度达72．6±3．2％，回收率85．8±1．2％。结论：免疫磁珠分选系统是一种有效的白血病干细胞分离提纯方法，所得细胞纯度比较高。     

小剂量G-CSF联合GM-CSF动员外周血CD34^＋细胞

OBJECTIVE: To study the efficacy of combined use of low-dose granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) in mobilizing hematopoietic stem/progenitor cells. METHODS: Twenty adult patients with malignant hematologic diseases were paired using statistical methods, and the 10 pairs were divided into 2 equal groups. For non-Hodgkin lymphoma, the treatment regimen adopted intravenous infusion of cytoxan (2 g/d for 1 or 2 d) and VP16 (0.2 g/d for 1 to 3 d), while for acute non-lymphocytic leukemia, Ara-C (2 g/d for 1 to 3 d) and VP16 (0.2 g/d for 1 to 3 d) were used. When the while blood cell count (WBC) was below 1.0 x10(9)/L, G-CSF and GM-CSF were administered subcutaneously at the same dose of 2.5 microg/d.kg in the 10 patients in the experimental group, while the patients in the control group received only 5 microg/d.kg G-CSF, both for 5 to 6 d. After WBC>5.0 x 10(9)/L, the peripheral blood mononuclear cells (PBMNC) were separated by CS-3000 pluse separator and CD34+ cells were determined by flow cytometry. RESULTS: The purity of the isolated PBMNC was 95%-99%. In the experimental group, the mean number of CD34+ cells acquired was 9.4 x 10(6)/kg ranging from 8.4 x 10(6) to 10.2 x 10(6)/kg, and granulocyte-macrophage colony-forming unit (CFU-GM) was 42.4 x 10(4)/kg on average ranging from 21.9 x 10(4) to 72.8 x 10(4)/kg, as compared with 4.8 x 10(6)/kg [(4.1-8.3) x10(6)/kg] for CD34+ cells and 28.1 x 10(4)/kg [(7.1-60.2) x 10(4)/kg] for CFU-GM in the control group (P<0.05). No obvious difference was observed between the two groups in terms of the adverse effects of the treatment (P>0.05). CONCLUSION: Combined use of G-CSF and GM-CSF can be more effective than the exclusive use of GM-CSF for mobilizing CD34+ cells.     

脐血CD34^＋细胞体外扩增的实验研究

目的 探讨脐血造血细胞体外扩增及其移植的最佳时期。方法 用免疫磁珠法分离纯化人脐血CD34^ 细胞,从CD34^ 细胞不同体外培养系中取样检测细胞总数、CD34^ 细胞百分率和ＣＦＣ（包括ＣＦＵ－ＧＭ和ＢＦＵ－Ｅ）。结果 Ａ组（加rhSCF、rhIL-3、rhG-CSF、rhＴＰＯ）与Ｂ组（加rhFL、rhＩＬ－3、rhG-CSF、rhEpo及rhTPO)对各阶段造血细胞扩增效果无显差异。Ｃ组（加rhSCF、rhCSF与rhFL有明显的协调效应;培养７d时开始增多,培养１４d进入高峰。培养２１d开始下降。培养２８d明显下降。结论 Ｃ组能明显扩增人脐血造血细胞,培养７－１４d造血细胞达高峰。为移植最佳时间。     

应用免疫磁珠法分离脐血CD^＋34造血细胞

分离脐血ＣＤ＾＋３４细胞，以了解其造血增殖活性。方法：应用免疫磁珠法分离脐血ＣＤ＾＋３４细胞，并对其实验方法进行了改进。结果：常规方法ＣＤ＾＋３４纯度较低，经过改进，脐血ＣＤ＾＋３４细胞由分离前的（１．３９±０．７６）％增加至（５９．４６±１７．３５）％，ＣＤ＾＋３４细胞富集倍数为（６２．３１±５５．１９）倍，分离后组分ＣＦＵ－ＧＭ，ＢＦＵ－Ｅ，ＣＦＵ－Ｍｉｘ较分离前分别增加（４１．０５±１５．７     

CD34^＋细胞与骨髓增生异常综合征患者生存率的关系

目的 探讨CD34^ 细胞与骨髓增生异常综合征（MDS）患者生存率的相关性。方法 应用免疫组化SAP法对56例MDS患者骨髓细胞CD34抗原进行检测,并随访3－5年,同时定期门诊复诊及住院治疗。结果 56例中,CD34^-33例,CD34^ 23例,随访3－5年后,阴性组10例（30．3％）转为急性白血病（AL）,阳性组14例（60．9％）转为AL,差异有显著性（P＜0．01）。17例RAEB患者中,CD34^-中数生存期47月,CD34^ 者16月,3年生存率前者69％,后者21．1％。12例CD34^ 高表达RAEB－T患者中,转化成AL时间明显缩短。结论 CD34^ 患者具有高危转为AL,CD34^ 高表达RAEB－T短期内转化为AL,提示预后不佳。     

富集CD34^＋细胞作干细胞移植的临床初步探索

目的 观察富集ＣＤ３４＾＋的造血干／祖细胞做肿瘤患者同种异基因造血干细胞移植（Ａｌｌｏ－ＨＳＣＴ０的自体移植的临床疗效。观察输注纯化ＣＤ３４＾＋细胞患者的预后情况。方法 采用磁分选临床型细胞富集仪将表面包被有ＣＤ３４单抗的磁性微球体系与细胞共同培养,特异性结合ＣＤ３４＾＋细胞。在磁场作用下分别收集ＣＤ３４＾＋和ＣＤ３４＾－组分。完成２０例患者ＣＤ３４＾＋细胞体外纯化富集。其中ＨＬＡ半相合移植５例,     

胎儿骨髓来源的Flkl^＋CD34^—细胞的血液血管干细胞特性

目的:研究骨髓基质中是否具有血液血管干细胞的特征。方法：分离并培养人胎儿骨骨基质细胞（hfMSCs),FACS检测细胞的免疫表现。将此细胞接种在基底膜胶中，由血管内皮细胞生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)诱导，免疫组化和透射电镜检测轿管和造血的分化形成。结果：此细胞群体的典型特征是CD34阴性的成纤维样细胞99％表达Flkl(即血管内皮细胞生长因子受体2），并能形成血管样结构，而在管样结构形成的过程中诱导的CD34阳性的圆形细胞。结论：Flk^ CD34^-的hfMSC能向血管内皮细胞和造血细胞分化，提示其具有血液血管干细胞的特征表型。     

冠状动脉支架置入后CD34^＋骨髓源性细胞动员对再狭窄的影响

背景：最近，越来越多的证据表明骨髓干细胞可分化为血管细胞。假设血管损伤后的炎症反应可触发骨髓中内皮和平滑肌祖细胞的动员。方法和结果：检测40例接受冠状动脉支架置入患者的循环血CD34^＋单核细胞、中性粒细胞表面整合素Mac-1的激活以及血浆粒细胞集落刺激因子水平。置入裸金属支架后，CD34^＋细胞增加，术后第7天达到最高峰。与支架置入前的基线水平相比的最大变化，在发生再狭窄患者中较之无再狭窄患者中更显著（332％±108％郴148％±49％，P〈0．05）。[第一段]     

钩吻素子对免疫磁珠分离纯化的小鼠CD4^＋T细胞体外增殖的影响

OBJECTIVE: To assess the separation efficiency of magnetic-activated cell sorting in the purification of CD4+ T cells from murine spleen, and observe the effects of koumine on the proliferation of the separated cells. METHODS: CD4+ T cells were isolated from murine spleen by magnetic-activated cell sorting (MiniMACS). Fluorescence-activated cell sortering was employed to determine the purity of CD4+ T cells before and after the separation procedure followed by evaluation of the cell viability using trypan blue staining. Concanavalin A- (ConA, 5 microg/ml) or phytahematoagglutinin (PHA,1 mg/ml)-induced murine T cells were treated with different concentrations of koumine (10-320 microg/ml), and their proliferation was determined by MTT colorimetry, and enzyme-linked immunosorbent assay was used to measure IL-2 level in the cell culture supernatant. RESULTS: The purity of CD4+ T cells reached (90.3+/-5.8)% after the purification with a cell viability of (94.9+/-3.6)%. Koumine (20-320 microg/ml) dose-dependently inhibited ConA- or PHA-induced proliferation of murine lymphocytes as compared with the controls (P<0.05). Koumine (20, 100, and 200 microg/ml) significantly decreased the level of IL-2 in comparison with the control group (P<0.05). CONCLUSIONS: CD4+ T cells of high purity can be obtained from murine spleen using MiniMACS without impairing the viability of the cells. Koumine significantly inhibits the proliferation of murine CD4+ T cells due to its immunosuppressive effect and inhibition of IL-2 secretion.     

ITP病人外周血CD4^＋CD25^＋CD127^-调节T细胞的检测及临床意义

目的：探讨特发性血小板减少性紫癜（ITP）病人外周血CD4^＋CD25^＋CD127^-调节T细胞（Tregulatory cells,Treg）表达水平的变化及意义。方法：观察32例ITP病人及20例正常对照,应用流式细胞仪检测外周血CD4^＋CD25^＋CD127^-Treg细胞的表达水平。结果：ITP病人治疗前CD4^＋CD25^＋CD127^-Treg细胞表达水平明显降低（2．90±1．00）,与治疗恢复期（7．36±1．46）及正常对照组（4．52±0．94）比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。治疗恢复期病人CD4^＋CD25^＋CD127^-Treg细胞表达水平明显高于正常对照组（P〈0．05）。结论：ITP病人外周血CD4^＋CD25^＋CD127^-Treg细胞表达水平下降,激素的有效治疗能提高病人机体内CD4^＋CD25^＋CD127^-Treg细胞表达水平。     

胃癌手术前后外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的变化及临床意义

目的：检测CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）在胃癌手术前后外周血中的变化,探讨Treg在肿瘤免疫中的作用。方法：收集初治胃癌患者38例作为研究对象,同时收集20例健康人外周血作为正常对照组。检测手术前3d和手术后14d外周血中CD4^＋CD25^＋Treg比例及T细胞亚群,将各检测结果结合临床、病理指标进行统计学分析。结果：胃癌患者术前外周血中Treg比例显著高于术后比例以及对照组（P均〈0．01）。胃癌患者术前外周血CD8^＋T细胞比例明显低于术后比例以及对照组（P均〈0．01）。术前外周血CD8^＋T细胞比例与Treg比例呈负相关（P〈0．05）。胃癌患者术前外周血中Treg比例在不同淋巴结转移情况和TNM分期之间差异具有统计学意义（P〈0．05）,其与淋巴结转移和TNM分期呈正相关（P〈0．01）。胃癌患者手术后Treg比例较术前下降,且下降程度与浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期、分化程度、病理分型以及手术方式无相关性。结论：Treg可能通过抑制CD8^＋T细胞的增殖及功能,促进肿瘤细胞的生长和发展。Treg与肿瘤的侵袭、淋巴结转移有关,提示Treg在一定程度上可作为检测疾病进展的免疫学指标。     

抑制性消减杂交技术检测骨髓CD34^＋细胞基因差异表达

目的 检测、比较骨髓和动员外周血2种来源不同的CD34^ 细胞基因表达的差异。方法 从-健康供者分别获取骨髓和动员外周血，分离出CD34^ 细胞，利用抑制性消减杂交技术检测。比较该2种来源不同的CD34^ 细胞基因表达差异。结果 在骨髓CD34^ 细胞中共有21个基因高表达。主要涉及2类：（1）与细胞周期S期，G2期和M期转化相关的基因；（2）C/EBP（CCAAT/增强子结合蛋白）转录因子家族。结论 骨髓和外周血CD34 细胞在基因表达上具有明显的不同，大部分骨髓CD34^ 细胞处于S期，G2期和M期，提示骨髓CD34^ 细胞比外周血CD34^ 增殖活跃。     

免疫磁珠法纯化小鼠CD34+造血干细胞

目的探讨免疫磁珠法(MiniMACS)能否用于纯化小鼠骨髓CD34+造血干细胞.方法应用免疫磁珠纯化小鼠骨髓CD34+细胞,流式细胞仪(FACS)评估纯化效率,检测纯化后的细胞活力.结果纯化后CD34+细胞纯度81.5%(范围76.80%～85.38%),回收率47.54%(范围40.50%～54.31%),纯化前后细胞活力不受影响(P=0.169).结论应用MiniMACS纯化小鼠骨髓可获得高纯度CD34+细胞,并不影响细胞活力.     

人脐血CD34^＋细胞的分离纯化及电镜观察

采用ＭＡＣＳ吸附单克隆抗体－磁珠分离系统对人脐血ＣＤ３４＾＋细胞进行了分离及透射电镜观察，结果显示：ＣＤ３４＾＋细胞为形态，大小不均一的单个核细胞群体，细胞直径介于５￣１０ｕｍ，其中少数细胞胞体大而圆，细胞核圆，核膜凹陷浅，核染色质细而弥散，核周胞质少，游离核糖体较多，线粒体少且形态特殊，即线粒体嵴内间隙较大，此形态特征与造血干细胞之间的关系尚有待进一步研究证实。     

非小细胞肺癌外周血CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋调节T细胞分析

目的分析非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋调节T细胞（Treg）占CD4^＋T细胞的比例变化,探讨其临床意义。方法采用流式细胞仪检测32例非小细胞肺癌患者和15例正常健康者（对照组）外周血中CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋Treg占CD4^＋T细胞的比例。结果健康对照纽外周血CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋Treg占CD4^＋T细胞比例为（0．54±0．51）％;NSCLC患者外周血CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋Treg占CD4^＋T细胞比例为（1．40±0．98）％。两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论NSCLC患者外周血CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋Treg占CD4^＋T细胞的比例明显升高,提示与肺癌免l癌逃逸有美。