核酸疫苗pcDNA3-cC1小鼠体内表达的血清学分析

抗原cC1 是从猪囊尾蚴cDNA 文库中以囊虫病患者、病猪血清为探针筛选出的抗原蛋白, 经免疫学检测证实为具有较高特异性的诊断用抗原[ 1] .在前期的研究[ 1] 中,我们将全长cC1 cDNA 插入真核表达质粒载体pcDNA 3, 构建了重组质粒pcDNA3-cC1.该DNA疫苗免疫仔猪后,能有效诱导仔猪的免疫保护效应.本研究选择该DNA疫苗为分析对象,旨在建立一种早期预测DNA疫苗免疫效果的方法.     

猪囊尾蚴抗原cC1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合诱导小鼠免疫应答

目的:观察cC1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合免疫对诱导BALB/c小鼠免疫应答的影响.方法:雌性BALB/c小鼠随机分为4组:A组(DNA疫苗组), 质粒DNA以10 d间隔免疫3次;B组(联合免疫组),质粒DNA以10 d间隔免疫 2次后以GST-cC1融合蛋白加强免疫1次;C组(蛋白质疫苗组),分别在第0、3 周免疫接种融合蛋白;D组(pcDNA3对照组),以10 d间隔,3次免疫接种质粒pcDNA3.ELISA法检测血清样品中的特异性抗体水平以及实验小鼠脾脏淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-4水平,以MTT法行脾脏淋巴细胞增殖实验.结果:C组可诱导相对较强的小鼠免疫应答,其特异性IgG和IgG1以及脾脏淋巴细胞分泌IL-4水平均高于其他各组(P<0.05),免疫的类型以Th2应答为主.B组诱导的特异性抗体水平和淋巴细胞分泌细胞因子水平均明显高于A组(P<0.05),B组和A组诱导的免疫应答类型均以Th1应答为主.结论:以 DNA priming-protein boost的策略可有效诱导较DNA疫苗单独使用更高的特异性抗体应答,且以Th1型免疫应答为主.     

日本血吸虫核酸疫苗pcDNA3．1／SjMfl粘膜免疫小鼠的保护力研究

目的　探讨日本血吸虫核酸疫苗pcDNA3 1/SjMf1粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的保护力。　方法　按常规方法构建pcDNA3 1/SjMf1。粘膜免疫采用滴鼻方法。供试小鼠随机分为 5组 ,每组 12只 ,包括MPL、pcDNA3 1、pcDNA3 1 MPL、pcDNA3 1/SjMf1和pcDNA3 1/SjMf1 MPL组。第 3次免疫后 2周 ,每只经腹部感染 ( 4 0± 1)条尾蚴。45d宰杀小鼠 ,以观察减虫率和减卵率。在初次免疫前和攻击感染前尾静脉采血的收集粪便 ,ELISA检测血清内特异性IgA和IgG及粪内sIgA水平。　结果　pcDNA3 1/SjMf1滴鼻免疫可诱导小鼠血清内特异性IgA和IgG及粪内sIgA水平。pcDNA3 1/SjMf1和pcDNA3 1/SjMf1加MPL滴鼻免疫诱导小鼠产生的减虫率分别为 2 7 97%和 3 4 75 % ,减卵率分别为 3 8 64 %和 43 3 7%。二者的减虫率和减卵率差异无显著性 (P >0 0 5 )。　结论　pcDNA3 1/SjMf1滴鼻免疫可诱导小鼠产生全身和粘膜免疫应答及部分抗击感染的保护力     

猪囊尾蚴副肌球蛋白核酸疫苗的免疫保护性研究

研究猪囊蚴副肌球蛋白核酸疫苗诱的免疫应答。方法将ｐｃＤＮＡ３－ＡｇＢ核酸疫苗肌注４－６周龄的昆明种小鼠,从２周后开始用ＥＬＩＳＡ方法小鼠体内ＩｇＧ和ＩｇＧ２ａ的水平。另外将该核酸疫苗注射Ｃ５７ＢＬ／６小鼠,体外培养小鼠脾细胞,用刀豆蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）和特异性抗原刺激,ＥＬＩＳＡ试剂盒检测细胞因子ＩＬ－２和ＩＬ－４的水平,并观察脾淋巴细胞增殖反应。另外,将该核酸疫苗肌注瘦型仔猪进行攻击实验,计算组对     

日本血吸虫pcDNA3.1(+)/MLP核酸疫苗诱导家兔免疫应答的初步检测

目的 初步检测日本血吸虫pcDNA3．1( )／MLP(SJP)核酸疫苗是否诱导家兔免疫应答的产生。方法 将24只新西兰家兔随机分为2组，每组12只；实验组每只家兔SJP的免疫剂量为500μg/次，后腿肌肉注射，对照组注射空质粒pcDNA3．1( )，隔周免疫1次，共4次；于0周、8周、16周采血2mL，制备血清，做环卵沉淀反应，并做血清抗体及细胞因子分析。结果 实验组环卵沉淀反应0周结果阴性，第8、16周结果阳性，对照组家兔环卵沉淀反应结果阴性，实验组可诱导IgA、IgG1变化，诱生INF-γ应答。结论 SJP核酸疫苗免疫家兔可产生体液免疫及细胞免疫。     

猪囊尾蚴期特异性抗原cC1的克隆与高效可溶性原核表达

目的克隆猪囊尾蚴期特异性抗原cC1基因,并进行高效可溶性原核表达。方法利用PT-PCR从猪囊尾蚴中获得cC1编码基因,T-A克隆后,将cC1插入原核表达载体pET28a中,经酶切、测序鉴定后将其转入宿主菌E.coli BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并优化表达条件,表达的融合蛋白Ni+-亲和层析柱纯化后经快速液相蛋白层析分离系统检测其纯度。采用SDS-PAGE和Western-blotting对目的蛋白进行分析和鉴定。结果RT-PCR扩增出的片段长度为1056bp,构建的重组表达质粒经PCR、酶切验证,和预期的结果一致,测序鉴定与Genbank中cC1基因相比于423位存在1个同义突变。转化有重组质粒的E. coli BL21(DE3)经过0.05mmol/LIPTG 37℃诱导6h高效表达了占菌体蛋白总量60%的可为囊虫病患者血清识别的相对分子质量约为40000的可溶性融合蛋白,经Ni+-亲和层析柱纯化后纯度达94%。结论成功克隆并高效可溶性原核表达了猪囊尾蚴期特异性抗原cC1,为其进一步研究和应用奠定了基础。     

囊尾蚴病诱发的细胞凋亡

囊尾蚴病由猪带绦虫囊尾蚴感染引起,可寄生于人或猪皮下和肌肉组织,也可侵入中枢神经系统导致脑囊虫病,以后者对人类健康威胁更大。细胞凋亡是多细胞生物调控生物体的发育、细胞更新和维持内环境稳定的一种重要机制。现对主要的细胞凋亡蛋白(FAS、caspase-3、P53)在中枢神经系统的凋亡与非凋亡功能、相关信号通路及囊尾蚴病中细胞凋亡相关性进行综述。     

猪囊尾蚴细胞疫苗对仔猪先天性和获得性免疫的作用

目的观察猪囊尾蚴细胞疫苗对妊娠母猪、具有母源抗体的仔猪和正常仔猪的影响.方法通过ELISA方法检测血清抗体,以确定疫苗对不同实验猪的免疫效果.结果妊娠母猪产生的抗体可达到1：20480,并使仔猪获得的母源抗体接近有效抗体滴度1：2560,出生后适时追加免疫,短期内即可产生较高抗体水平.结论 猪囊尾蚴细胞疫苗免疫怀孕母猪后,母猪体内产生的抗体可以传递给仔猪,使仔猪获得先天性免疫力,具备抵抗猪囊尾蚴虫卵的侵袭.免疫正常仔猪产生有效抗体时间较晚.     

小分子化合物S1诱导PC3细胞凋亡的作用

目的：研究小分子化合物8-氧-8H-苊并［1,2-b］吡咯-9-腈的氨基或卤素取代衍生物（S1）对人雄性激素非依赖型前列腺癌PC3细胞的作用及机制。方法：常规培养PC3细胞,分为10.00、5.00、1.00、0.50、0.10、0.05和0.01 μmol•L^-1 S1化合物组,同时设培养肿瘤细胞对照组和抗癌药物环磷酰胺（5.00 μmol•L^-1）对照组,采用MTT法检测PC3细胞增殖抑制率,流式细胞术检测诱导PC3细胞凋亡作用,Caspase 3、8和9试剂盒检测细胞凋亡途径。结果：0.10~10.00 μmol•L^-1 S1化合物组,PC3细胞生长抑制率明显高于环磷酰胺对照组（P<0.01）;5.00和10.00 μmol•L^-1S1化合物组PC3细胞凋亡率明显高于培养肿瘤细胞对照组（P<0.01）;10.00 μmol•L^-1S1化合物作用于PC3细胞后不同时间(1、2、4及6 h)细胞Caspase 3和Caspase 9活性均显著高于培养肿瘤细胞对照组（P<0.01）,Caspase 8活性未见明显改变。结论：S1化合物能够通过诱导PC3细胞凋亡而导致细胞死亡,其作用机制是线粒体途径,进一步证实S1化合物作为肿瘤治疗药物的可行性。     

hTERT基因反义核酸诱导红白血病细胞凋亡的研究

目的 研究人类端粒酶反义核酸对K-562细胞增殖的影响.方法 采用脂质体介导的基因转染的方法将端粒酶反义核酸导入K-562细胞,用荧光染色观察端粒酶反义核酸诱导K-562细胞凋亡的量效和时效关系,用电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡.结果 端粒酶反义核酸对K-562生长有抑制作用,细胞凋亡率呈剂量和时间依赖性.正义核酸元此效应.结论 端粒酶反义核酸可诱导K-562细胞凋亡,它有可能成为白血病治疗的新靶点.     

F1k1胞外1—3区基因的克隆及核酸疫苗的构建

目的：克隆并构建小鼠F1k1胞外1—3区核酸疫苗，并检验疫苗引起特异性免疫反应的能力。方法：RT—PCR克隆F1k1胞外1—3区，构建核酸疫苗pcDNA3．1( )-F1k1Domainl-3，脂质体转染COS7细胞，western—bolt检测表达；疫苗免疫小鼠；以小鼠血管内皮细胞为靶细胞，以免疫的小鼠脾细胞作为效应细胞，采用标准4h^51Cr释放法计算CTL特异性杀伤率。结果：扩增出1252bp片段。疫苗DNA自动测序证明所获基因片段序列阅读框架正确。Western—blot检测转染疫苗的COS7细胞显示细胞中有分子质量为44kDa的蛋白表达；疫苗组与对照组比较，CTL杀伤率差异有显著性。结论：pcDNA3．1( )F1k1—Domainl-3核酸疫苗可有效的引起针对F1k1的免疫反应。     

针对NHE—1基因的反义核酸诱导人肺癌细胞酸化及凋亡的研究

研究Ｎａ＋／Ｈ＋交换泵（Ｎａ＋／Ｈ＋ｅｘｃｈａｎｇｅｒ，ＮＨＥ）基因家族第一亚型ＮＨＥ－１基因表达在肿瘤细胞内ｐＨ（ｐＨｉ）调节及凋亡调控中的作用。方法：在细胞培养中，以针对ＮＨＥ－１基因的硫代型反义核酸处理人肺腺癌Ａ５４９细胞，采用荧光标记法研究反义核酸对细胞的酸化效应；细胞凋亡原位检测法研究反义核酸诱导细胞凋亡。结果：Ａ５４９细胞酸化效应与ＮＨＥ－１反义核酸呈一定的剂量效应关系，当反义核酸浓度为２０μＭ时，可导致ｐＨｉ下降至６．５５，并诱发细胞凋亡，在处理时间为２４，４８，７２小时，其凋亡发生率分别为３０．１％，９１．２％，９９．６％。结论：①细胞酸化（ｐＨｉ下降至６．５５）能诱发人肺癌细胞凋亡；②人肺癌细胞ＮＨＥ－１基因表达能通过阻止其胞内酸化，对维持其抗凋亡生长性质具有重要作用     

猪囊尾蚴抗原DNA疫苗诱导的免疫保护效应

观察猪囊尾保护性原ｃＣ１ ＤＮＡ疫苗诱导的小鼠免疫应答,及对仔猪的免疫保护作用。方法：将全长ｃＣ１ ｃＤＮＡ插入真核表达质粒载体ｐｃＤＮＡ３,构建了重组质粒ｐ３－ｃＣ１,肌注小鼠,ＥＬＩＳＡ检测小鼠血清抗ｃＣ１抗体ＩｇＧ及ＩｇＧ２ａ水平,并进行仔猪的免疫保护实验。结果：免疫小鼠第３周出现特异性ＩｇＧ应答,第８周ＩｇＧ水平达到最高;小鼠血清的ＩｇＧ２ａ检测显示,第２周ＩｇＧ２ａ应答即为阳性,且长时间     

凋亡蛋白酶活化因子-1与细胞凋亡

细胞凋亡(apoptosis)即细胞编程性死亡(programmed cell death)，它是一种高度有序的细胞死亡。凋亡不仅在多细胞动物的生长发育、形态构建与维护中扮演重要角色，而且在外伤后细胞的演变过程中起关键作用。越来越多的证据表明，外伤所致的脑损伤后，神经细胞的死亡有两种形式，即细胞的直接损伤坏死和迟发性的细胞死亡即凋亡。1977年，Yang的研究小组和Kluek的研究小组同时证明Bel-2通过阻止细胞色素C，从线粒体上释放发挥其抑制凋亡的作用，     

N-乙酰半胱氨酸对尼古丁诱导的MC3T3-E1细胞凋亡的作用及其机制

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对尼古丁诱导的小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1细胞凋亡的影响,并阐明其作用机制.方法:体外培养MC3T3-E1细胞,采用不同浓度(0、1.0、2.5、5.0和7.5 mmol·L-1)尼古丁诱导MC3T3-E1细胞损伤,采用MTT法检测各组MC3T3-E1细胞增殖活性,并确定尼古丁半...     

Survivin反义核酸与顺铂联合作用诱导人卵巢癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨特异性封闭Survivin的表达与顺铂联合作用对卵巢癌细胞的凋亡诱导作用,以期为卵巢癌的治疗提供实验依据.方法将已成功构建的Survivin反义核酸真核表达载体的重组体导入人卵巢癌细胞株中,用G418筛选得到表达反义Survivin的细胞,RT-PCR技术检测转染细胞Survivin表达的变化;采用Hoechest核染色分析与顺铂联合作用时人卵巢癌细胞的凋亡情况.结果构建的Survivin反义RNA真核表达载体能有效的抑制卵巢癌细胞中Survivin基因的表达;顺铂诱导转染Survivin反义核酸的卵巢癌细胞的凋亡作用显著强于未转染Survivin反义核酸的卵巢癌细胞株.结论Survivin反义核酸可明显增强顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡,为其联合应用卵巢癌治疗研究提供了实验依据.     

DNA核酸疫苗诱导小鼠免疫应答的作用

目的 研究DNA核酸疫苗诱导机体免疫应答的能力，为揭示其诱导机制奠定基础。方法 采用本室构建的单纯疱疹病毒2型（HSV－2）糖蛋白D的真核表达质粒pcDNA-gD2免疫小鼠，通过对ELISA法动态检测特异性抗体的产生及小鼠外周血Th1细胞因子IFN－γ，IL－2的水平同时进行病毒攻击实验。结果 pcDNA-gD2和HSV－2免疫组小鼠从第2周开始产生特异性抗糖蛋白D抗体，第4－5周达到高。外周血清IFN－γ，IL－2水平明显高于阴性对照组。病毒攻击实验显示2周内pcDNA-gD2和HSV－2免疫组小鼠无一只死亡，而阴性对照组小鼠全部死亡。结论 pcDNA-gD2真核表达质粒可以诱导小鼠产生特异性体液免疫和Th1型细胞免疫，并具有免疫保护作用。     

多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗抑制小鼠脾细胞的凋亡

目的：多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ／3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠并以Em原头节攻击后探讨以上疫苗对小鼠脾细胞凋亡的变化．方法：将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫Balb／c鼠8wk后，用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染，感染18wk杀鼠取脾并分离脾细胞，流式细胞仪检测脾细胞的凋亡发生率，同时设有空载体、BCG和PBS对照．结果：疫苗接种组的脾细胞凋亡发生率明显低于感染对照组．结论：泡球蚴感染可引起小鼠脾细胞凋亡，而多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ／3和BCG-Em14-3-3疫苗可在一定程度上抑制感染鼠脾细胞的凋亡．     

电磁辐射对γ射线诱导HL60细胞凋亡影响的初步研究

研究了脉冲磁场与γ射线联合作用对ＨＬ６０细胞凋亡的影响。采用１３７Ｃｓ照射源剂量为４Ｇｙ，磁场强度为２０ＭＴ，频率为２５０Ｈｚ照射人早幼粒白血病细胞。结果表明，ＨＬ６０细胞经电磁场作用后，可以提高γ射线对它的杀伤效果，增加γ射线诱发ＨＬ６０细胞凋亡明显高于单独γ射线照射。