人胎盘免疫调节因子对亲细胞性抗体产生的影响

应用大鼠被动把大细胞脱颗粒试验，研究了人胎盘免疫调节因子对大鼠亲细胞性抗体产生的影响。研究结果表明：ＨＰＩＦ能显著地抑制大鼠亲细胞性抗体的产生（ｐ〈０．００１）。有力地支持了ＨＰＩＵＦ在临床上治疗Ｉ型变态反应性疾病所取得的明显疗效。     

中药黄芪对牛视网膜微血管周细胞增生的影响

目的：探讨中药黄芪对牛视网膜周细胞（PC）增生的影响。方法：采用细胞计数结合噻唑蓝比色测定，研究PC在黄芪（黄芪注射液）培养下，PC增殖情况，结果：黄芪10mg/mL,20mg/mL,40mg/mL,60mg/mL,120mg/mL浓度组细胞增殖能力明显高于对照组（P＜0．01）。结论：黄芪注射液对牛视网膜周细胞生长具有促进作用，中等浓度的促进作用最为显著。     

蚯蚓提取物对小鼠脾脏抗体形成细胞的影响

作用定量溶血分光光度法（ＱＨＳ）同时测定正常和荷瘤ＢＡＬＢ／ｃ小鼠各４０只脾脏抗体形成细胞的变化，观察蚯蚓提取物对Ｂ细胞介导的免疫应答的影响。结果表明，蚯蚓提取物连续灌胃７ｄ后，使正常小鼠脾脏抗体形成细胞由１．１１７±０．０３５增至１．２９１±０．１０３（ＯＤ值）（Ｐ＜０．０１）；荷瘤小鼠由１．０４５±０．０６２增至１．３４３±０．１７３（Ｐ＜０．０１）．提示蚯蚓提取物能调节Ｂ细胞的增殖和分...     

单核细胞源性趋化因子对培养的牛视网膜Mueller细胞的趋化作用

目的：研究单核细胞源性趋化因子对培养的牛视网膜Mueller细胞的趋化作用。方法：以刀豆蛋白A激活小牛的单核细胞，以此单核细胞条件培养基作为趋化因子的来源，用改良的Boyden小室微孔滤膜法检测其对培养的牛视网膜Mueller细胞的趋化活性，并检测经明胶结合处理掉纤维连接蛋白（FN）后条件培养基的活性。结果：该条件培养基对培养的Muller细胞具有趋化活性，且该条件培养基在经明胶处理后其趋化活性降低，但仍然存在。结论：该条件培养基对Mueller细胞趋化作用的物质成份不是单一的，是多种因素作用的结果，单核巨噬细胞系统在增殖玻璃体视网膜病变发病中具有重要的作用。     

提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体的表达和抗体的功能鉴定

目的 探讨人-鼠嵌合抗体ch-BD1体内和体外的表达和功能。方法 用分子生物学方法得到系列弱化表达的双氢叶酸还原酶(DHFR)基因片段,将其克隆入载体pDHL-BD1中构建得系列弱化表达DHFR基因的人-鼠嵌合抗体pWSD1-BD1,pWSD2-BD1,和pWSD3-BD1。将这些嵌合抗体以及pDHL-BD1分别转染缺陷表达DHFR基因的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)/DHFR-细胞,以Northern印迹鉴定其DHFR基因表达水平。将不同浓度的氨甲蝶呤(MTX)加入转染细胞的培养液,测定上清中的抗体水平。用 ~(99m)标记纯化的ch-BD1,加入系列稀释的人膀胱癌EJ细胞溶液中,测定结合在细胞上的抗体放射活性,计算标记抗体的亲和常数。将人膀胱癌EJ细胞注射入3只Balb/C小鼠后肢根部,4周后对肿瘤进行放射免疫显像。将标记抗体注射入小鼠尾静脉,分别于2 h,6 h,22 h和24 h后进行放射显像。结果 构建载体的 DHFR基因表达活性由强至弱的顺序为 pDHL-BD1>pWS1-BD1>pWS3-BD1>pWS2-BD1。MTX浓度为10~(-6)mol/L时ch-BD1的表达水平与DHFR基因的基础表达水平明显相关,DHFR基础水平越高抗体的表达水平亦越高。EJ细胞与标记抗体孵育后,ch-BD1的免疫活性分数为76％,亲和常数为3.56×10~9 M~(-1);鼠单抗BD1的免疫活性分数为81％,亲和常数为1.22×10~9M~(-1)。~(99m)标记的ch-BD1经尾静脉     

万寿菊提取物对大鼠视网膜光损伤过程中细胞凋亡因子Caspase-3的影响

目的:探讨万寿菊提取物对大鼠视网膜光损伤过程中细胞凋亡因子半胱氨酸蛋白酶-3 (Caspase-3)的影响.方法:SD大鼠 40只,随机分为正常对照组、模型对照组、万寿菊提取物低剂量 组与高剂量组,各 10只.除正常对照组外,其余 3组大鼠均缝成开睑,采用日光灯照射,照光强度 (3000±100)Lux,持续 12h.光照射完毕后立即拆除缝线送回暗环境饲养笼中饲养 12h,再重复以上 过程,连续 3次,光照射时间总计 36h,建立视网膜光损伤模型.各组在光照前充分暗适应 36h,暗 适应前万寿菊提取物低剂量组、高剂量组大鼠给药,1天 1次,直至光照后 7天.实验结束,处死大 鼠,检测视网膜细胞中 Caspase-3表达情况.结果:光照后模型对照组大鼠视网膜外核层细胞浆中 Caspase-3阳性物质弥漫分布,含量增多.其面积、平均光密度、积分光密度和平均黑度均高于正 常对照组(P<0.05),而万寿菊低剂量治疗组视网膜外核层细胞浆中 Caspase-3阳性物质减少明显,四项指标与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),高剂量治疗组阳性物质减少不明显.结论:万寿菊提取物对大鼠视网膜光损伤有修复作用,其作用机制可能与减少 Caspase-3的表达,从而拮抗细胞凋亡有关.     

银杏叶提取物对大鼠高糖高胰岛素下视网膜Muller 细胞的保护作用

目的：观察银杏叶提取物（extract of ginkgo bilobaleaf ,EGB761）在高糖高胰岛素作用下对视网膜Muller细胞活性的改变及其保护作用。方法用30mmol/L葡萄糖和（或）200U/L的胰岛素处理大鼠视网膜Muller细胞48小时,分为高糖高胰岛素组：200U/L胰岛素＋30mmol/L葡萄糖;高胰岛素组：200U/L 胰岛素;对照组：普通低糖型DMEM培养（含葡萄糖5mmol/L ）。提前0.5小时加入60μg/mL、120μg/mL的EGB761,观察对各组细胞的保护作用,48小时后用MTT 法测定视网膜Muller细胞的活性。结果高糖高浓度胰岛素处理后Muller细胞活性降低,与对照组相比差异有统计学意义（ P＜0.05）。而60或120μg/mL的EGB761能上调高浓度葡萄糖和高胰岛素处理后的视网膜Muller细胞的活力,且在单纯高胰岛素组中更佳,与无EGB761处理组相比差异有统计学意义（ P＜0.05）。结论高浓度葡萄糖和高胰岛素在短期内可使视网膜Muller细胞的活性降低,一定浓度的EGB761可减轻高糖高胰岛素对视网膜Muller细胞的损伤。     

银杏叶提取物注射液对NMDA诱导的视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的探讨银杏叶提取物注射液对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)诱导的转基因的视网膜神经节细胞系RGC-5损伤的保护作用。方法体外培养RGC-5,以终浓度分别为0.025、0.25、2.5%的银杏叶提取物注射液预保护12h后,用NMDA(100μmol/L)诱导损伤,并设正常对照组,单纯损伤组和地卓西平(MK-801)对照组。倒置显微镜下观察细胞形态;MTT比色法测定细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡,半定量RT-PCR测定Bcl-2和Bax mRNA的变化。结果 NMDA可诱导RGC-5细胞损伤,与单纯损伤组比较,0.25、2.5%银杏叶提取物注射液可提高RGC-5细胞存活率,减少细胞凋亡(P0.05),另外0.25%银杏叶提取物注射液预保护后Bcl-2mRNA表达水平增加,Bax mRNA的表达水平降低(P0.05)。结论银杏叶可抑制NMDA诱导的视网膜神经节细胞凋亡,保护视网膜神经元,其机制可能与上调Bcl-2mRNA的表达,下调Bax mRNA的表达有关。     

三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞凋亡的影响

[目的]观察三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞凋亡的作用,初步探讨其可能的机制。[方法]采用体外细胞培养技术,用MTT法观察三叶青提取物RKO细胞的影响;琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;RT-PCR检测Bid,Bax,Bcl-2和Bcl-XL的表达改变。[结果]三叶青提取物能显著地抑制人结肠癌细胞系RKO细胞的生长,并且具有浓度依赖性,且细胞有明显的凋亡特征性改变,并能下调Bcl-XL、上调Bid来诱导凋亡。[结论]三叶青提取物具有对人结肠癌细胞系RKO细胞抗增殖和诱导凋亡的作用,且呈剂量依赖性。     

应用人—鼠杂交瘤技术制备抗绿脓杆菌人单克隆抗体的初步研究

作者用绿脓杆菌多价菌苗免疫的人外周血淋巴细胞与SP2/0小鼠骨髓癌细胞融合,一次成功。细胞融合率为74％,抗体阳性率为19.7％。经3次克隆化后共获得2株能稳定地分泌抗绿脓杆菌人单克隆抗体的杂交瘤细胞株A_3和F_3。核型分析可见人与小鼠的染色体共存。亚类检定均属人IgG,免疫印迹实验证明它们可识别绿脓杆菌抗原分子量为43kd和36kd的特异组分。     

H-89和Wortmannin对霍乱毒素促进受损视网膜节细胞存活作用的影响

[目的]探讨霍乱毒素(CTx)促进受损视网膜节细胞(RGCs)存活的作用机制。[方法]采用荧光逆行示踪标记术,研究蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89和PI3-K特异抑制剂wortmannin玻璃体内注射对CTx促进成年地鼠受损RGCs存活的影响。[结果]动物存活2周后,对照组存活节细胞数为:(220±45)/mm2,CTx组存活节细胞数为:(413±90)/mm2,CTx+H组存活节细胞数为:(256±61)/mm2,CTx+W组存活节细胞数为:(296±39)/mm2;H-89和wortmannin均可部分抑制CTx对受损RGCs的促存活作用。[结论]CTx可能是通过PKA-CREB和PI3-K-Akt通路实现对受损RGCs的促存活作用。     

葡萄糖限制的流加培养中杂交瘤细胞生长、代谢和单抗生成

考察了葡萄糖或谷氨酰胺限制的批培养中杂交瘤细胞的生长、代谢和单抗生成。葡萄糖或谷氨酰胺限制时最大活细胞密度基本相同,为(1.0±0.1)×106cells/mL。葡萄糖限制时,乳酸生成减少,YLac/Glc降低,YCell/Glc增加,提示葡萄糖更多地参与三羧酸循环。谷氨酰胺限制时,氨和丙氨酸生成减少,YAmm/Gln增加,YAla/Gln减小,提示谷氨酰胺的能量利用率提高。谷氨酰胺缺失时异亮氨酸、亮氨酸、胱氨酸、缬氨酸、色氨酸、组氨酸等替代谷氨酰胺,维持细胞生长和单抗合成,产物是甘氨酸和天冬氨酸。单抗生成与细胞生长关联,并且细胞停止生长后单抗仍生成。细胞死亡阶段的qMAb约是生长阶段的一半。葡萄糖和谷氨酰胺共限制下细胞对单抗的生产能力比葡萄糖和谷氨酰胺单独限制时小。     

H-89和wortmannin对霍乱毒素促进受损视网膜节细胞再生作用的影响

【目的】研究蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89和磷酸肌醇3-激酶(PI3-K)特异抑制剂wortmannin对霍乱毒素(CTx)促进受损视网膜节细胞(RGCs)再生的影响,探讨CTx促进受损视网膜节细胞(RGCs)再生的作用机制。【方法】成年金黄地鼠近侧切断视神经(ON),移植一段自体坐骨神经(SN)与ON近侧残端缝接,玻璃体内注射给药。20只动物分4组,每组5只。注射CTx为CTx组,注射CTx和H-89为CTx+H组、注射CTx和wortmannin为CTx+W组、不给药组为对照组。用粒蓝(GB)逆行标记再生的RGCs,取视网膜于荧光镜下记数。【结果】动物存活4周后,对照组、CTx组和CTx+H组再生节细胞平均数(个/视网膜)分别为:(1431±352),(2567±883)和(1606±293)个/视网膜(n=5)。CTx+H组与对照组比较差异无显著性(P<0.05),而与CTx组比较有显著性差异(P<0.05),表明H-89可抑制CTx的促再生作用;CTx+W组再生节细胞数为:(1872±262)个/视网膜(n =5),与对照组和CTx组比较差异均有显著性(P <0.05),提示wortmannin对CTx有部分的抑制作用。【结论】CTx可能是通过PKA-CREB通路实现对受损RGCs的促再生作用,PI3-K-Akt通路可能是PKA-CREB通路的下游分支。     

杂交瘤细胞的无血清低蛋白培养

实现了杂交瘤细胞的体外无血清低蛋白培养。考察了血清浓度、基础培养基和接种密度对细胞生长的影响。在含5%血清培养基、1%血清培养基和无血清低蛋白培养基中适应生长的细胞,μ分别为0.68、0.45、0.44d-1,qGlc分别为13.4×10-9、13.1×10-9、19.2×10-9mmol/(cell·分别为39.4×10-9、44.1×10-9、37.7×10-9mg/(cell·d),YMAb/Xv分别为52.6×10-9、d),qMAb57.8×10-9、54.4×10-9mg/cell,YLac/Glc分别为2.0、1.95、2.0mmol/mmol。无血清培养中葡萄糖代谢途径不变,参与细胞维持代谢的葡萄糖比例增大。血清浓度降低,延迟期变长,最大活细胞密度下降。基础培养基影响细胞的最大活细胞密度,不影响生长速率。无血清培养基中细胞的接种密度选择在0.2×106～0.3×106cells/mL。     

放射性视网膜病变大鼠视网膜内皮细胞改变的实验研究

目的 通过放射线60Co照射SD大鼠,观察大鼠视网膜毛细血管内皮细胞的改变,以探讨放射性视网膜病变发病机制.方法 45只雄性SD大鼠随机分成正常对照组、10Gy组、30Gy组(每组15只),60Co照射大鼠制备实验模型.之后分别于照射之后1个月、3个月、6个月处死10Gy、30Gy、正常对照组各1组动物(每组5只).做大鼠视网膜铺片,光镜观察毛细血管内皮细胞数量.结果正常对照组大鼠随时间的延长,视网膜毛细血管内皮细胞数量无显著差异(P>0.05).而模型组与对照组比较:检测毛细血管内皮细胞数量:[1]1个月,10Gy、 30Gy与对照组比较无显著差异;[2]3个月:30Gy组与对照组有显著差异(P<0.05);[3]6个月:30Gy组与对照组有极显著差异(P<0.01);[4]对照组间随时间改变比较无显著差异;[5]6个月:10Gy组与对照组比较有显著差异(P<0.05).结论放射线60Co照射SD大鼠后,大鼠视网膜毛细血管受损,毛细血管内皮细胞数量减少,并随着实验时间延长和剂量的增加愈加严重.这就为探讨放射性视网膜病变发病机制提供实验依据.     

川芎嗪对缺氧时视网膜血管内皮细胞ATP分泌的影响

目的探讨川芎嗪对缺氧牛视网膜血管内皮细胞中ATP含量的影响。方法用酶消化法分离牛眼视网膜血管内皮细胞,进行形态学的观察并用Ⅷ相关免疫组化法鉴定。取3代的细胞用于实验。细胞分组：取常规培养的第3代细胞,分为5组：正常对照组（F12培养基常规培养）,缺氧组（加入终浓度125μmmol/L的CoCl2）和缺氧加药物组（加入含20、40、120μg/ml川芎嗪）。免疫组化法和生物荧光法分别检测川芎嗪对CoCl2诱导的缺氧的牛视网膜血管内皮细胞中ATP含量。结果缺氧BREC细胞ATP含量增加,而川芎嗪可减少缺氧引起的ATP浓度升高,且呈剂量依赖性。当川芎嗪浓度为20μg/ml时,其ATP含量水平已显著下降（P〈0.01）。结论川芎嗪可减少缺氧诱导的血管内皮细胞ATP含量增加。     

川芎嗪对大鼠视网膜缺血后细胞凋亡的影响

目的：观察中药制剂川芎嗪对SD大鼠多膜缺血后细胞凋亡的影响。方法：采用前房灌注生理盐水的方法做成视网膜缺血模型,治疗组每天腹腔注射川芎嗪1次（500mg/kg),Tunel法检测各组视网膜凋亡细胞,结果：缺血组凋亡细胞明显高于川芎嗪治疗组,同一时间段各组之间的相比差异均有显著性。结论：川芎嗪可减少缺血后视网膜细胞的凋亡,具有明显的保护作用。     

杂交瘤细胞冻存方法实验研究

杂交瘤细胞用三种不同程序冻存后取细胞复苏,观察细胞活力及分泌 McAb能力。实验结果表明,杂交瘤细胞在液氮中至少可保存2年,且冻存前不必进行梯度降温;细胞于-80℃环境下,保存4个月是安全的。这在实际工作中很有意义,因为在不增加液氮设备情况下,可对更多细胞进行冻存,既节省了时间,又有可能对更多初筛阳性克隆进一步进行鉴定。