丝素/褐藻多糖硫酸酯复合膜的理化性质

背景:丝素膜α-螺旋的结构是水溶性的而且不稳定,不能直接作为医用材料,具而β-折叠构象更为稳定.目的:利用褐藻多糖硫酸酯导致丝素膜的构象转变来制备β折叠构象的丝素膜,观察膜的理化件质.设计、时间及地点:生物材料复合膜的理化性质观察实验,于2003-11/2006-08在中科院北京化学所、承德石油高等专科学校化学实验中心完成.材料:褐藻多糖硫酸酯,从海带中提取,在承德石油高等专科学校化学实验中心完成,蚕丝购于中国进出口公司.方法:将丝素溶液和褐藻多糖硫酸酯的水溶液按一定比例混合,静置脱泡后,注入聚乙烯模具内,于25℃.相对湿度65%的环境干燥成膜,当褐藻多糖硫酸酯含量≤20%时,成膜性较好.根据复合膜中褐藻多糖硫酸酯和丝素的质量比0∶100、5∶95、10∶90、20∶80、100∶0,将膜分别标记.主要观察指标:采用红外光谱、X射线衍射、热失重分析表征观察制成膜的理化性质.结果:红外光谱、X射线衍射结果表明,由于褐藻多糖硫酸酯的引入,促使了丝素β-折替构象的形成.丝素从无规线团转变为β-折叠构象归结于丝素与褐藻多糖硫酸酯之间存在着氢键的相互作用.热失重分析表明,具有β-折叠结晶结构的丝素复合膜热稳定性要比无定形丝素膜高.结论:利用褐藻多糖硫酸酯导致丝素膜的构象转变来制备β折叠构象的丝素膜,构象的转变可通过红外光谱、X射线衍射证实.具有β-折叠结晶结构的丝素膜的热稳定性要比无定形丝素膜高.     

硫酸酯化琼脂糖的抗凝血性能

背景:多糖的硫酸酯化一直是近年来的研究热点,其中对于硫酸酯化多糖的抗凝血性能,近年来较多从取代度层面进行探讨,相对分子质量及空间结构方面的影响较为少见.目的:观察不同相对分子质量硫酸酯化琼脂糖的抗凝血性能.方法:以琼脂糖为原料,甲酰胺为分散剂,通过氯磺酸吡啶法制备了硫酸酯化琼脂糖.通过透析纯化分级,获得两种不同相对分子质量分布的琼脂糖硫酸酯.采用人体血浆的部分凝血活酶时间、凝血酶原时间指标分别对它们的抗凝血性能进行了研究.结果与结论:可以获得取代度及取代位置相似,具有不同相对分子质量分布的硫酸酯化琼脂糖.对凝血指标的化验结果证明,在一定范围内,相对分子质量大的产物的抗凝血活性大于相对分子质量小的产物.结果提示相对分子质量对硫酸酯化琼脂糖的抗凝血活性有重要的影响.     

白树花多糖硫酸酯的抗凝血活性研究

目的研究白树花多糖硫酸酯的抗凝血效果及抗凝血机理,为制备合成高效、安全的多糖硫酸酯抗凝剂提供实验依据。方法将可食用的白树花真菌进行发酵,提取水溶性多糖,采用氯磺酸-吡啶法进行硫酸酯化修饰,获得水溶性的白树花多糖硫酸酯。通过测定APTT、TT、凝血因子活性对白树花硫酸酯的抗凝血效果及抗凝血机理进行评估和探讨。结果对正常人血浆进行的抗凝血实验表明,白树花多糖硫酸酯具有明显的抗凝血活性,在5 mg/L的浓度下即可发挥效果,在10 mg/L浓度时,相当于150 U肝素的抗凝血效果;抗凝血机理研究结果表明,白树花多糖硫酸酯作用于内源凝血系统,主要通过抗凝血酶Ⅲ抑制凝血因子Ⅱa和Xa的活性发挥抗凝血作用,抗凝血机理与肝素完全相同。结论通过上述研究结果,我们认为白树花多糖硫酸酯具备肝素的抗凝血特性。同时由于是可食用真菌多糖的制备产物,在防生物污染方面具备一定优势。因此,白树花多糖硫酸酯可作为理想的肝素替代品进行开发及临床应用。     

肝素化胶原／丝素共混膜的制备及其抗凝血性能

目的:制备一种新型肝素化胶原/丝素共混膜,观察其抗凝血性能。方法:实验于2003-12/2005-04在北京理工大学材料中心实验室完成。①将50mg胶原溶于0.2g/L醋酸溶液5mL中,然后滴加10g/L肝素溶液0.5mL,均匀搅拌10min,得到肝素化胶原。采用EQINOX55型红外光谱仪(美国NICOLET公司)进行结构表征。②将肝素化胶原与丝素溶液共混(质量比为1∶4),加入戊二醛溶液作交联剂,注入聚乙烯模具内干燥72h得肝素化胶原/丝素膜。测定肝素的标准曲线以及不同戊二醛用量对肝素的结合率和膜的力学性能的影响。③采用体外凝血时间试验评价材料的抗凝血性,包括活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间、凝血活酶时间3种凝血时间测定,在COAG-A-MATE-XM型半自动四通道凝血仪(美国OrganonTekinika公司)中进行。结果:①肝素化胶原红外光谱在850cm-1处出现新峰。②当加入5g/L戊二醛溶液0.1mL时,所得共混膜中肝素的结合率为56%,共混膜的断裂强度为45MPa。③共混膜的活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间、凝血活酶时间分别超过150,200,50s。结论:肝素化胶原与丝素共混膜中的肝素仍保持良好的抗凝血性。从而得到一种性能优良的新型生物材料。     

孕妇血浆和羊水凝血、抗凝血及纤维蛋白溶解状态研究

目的探讨孕妇血浆和羊水中凝血、抗凝血及纤溶状态。方法采用磁珠法检测孕妇第一产程末血浆和羊水中活化部分凝血活酶时间、血浆凝血酶原时间、纤维蛋白原、抗凝血酶Ⅲ活性、蛋白C活性、蛋白S活性、凝血酶时间、D-二聚体和血管性血友病因子的水平。结果孕妇血浆纤维蛋白原、蛋白C活性、D-二聚体、血管性血友病因子显著高于健康对照组(P0.01)。羊水中活化部分凝血活酶时间、血浆凝血酶原时间和凝血酶时间超出了试剂盒的检测上限,未检测到蛋白S活性,纤维蛋白原、抗凝血酶Ⅲ活性、蛋白C活性、D-二聚体和血管性血友病因子的水平分别为(0.27±0.46)g/L、(2.07±1.22)、(1.80±1.52)、(0.22±0.05)μg/mL和(0.32±0.09)。结论孕妇是发生深静脉血栓的高危人群,孕妇血浆和羊水中凝血、抗凝血及纤溶活性成分的变化可作为孕妇和胎儿健康状况的监测指标。     

褐藻多糖硫酸酯对老龄小鼠GSH和GR含量的影响

目的研究褐藻多糖硫酸酯(APS)对老龄小鼠谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽还原酶(GR)的影响。方法比色分析法测GR、GSH含量变化。结果褐藻多糖组小鼠脑、心、肾GR含量明显高于对照组(P0.05);褐藻多糖组小鼠脑、心、肾GSH含量明显高于对照组(P0.01)。结论褐藻多糖能提高老龄小鼠机体GR、GSH活力,增强机体抗氧化能力。     

褐藻多糖硫酸酯通过调控PCNA-AS1表达对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨褐藻多糖硫酸酯对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法体外培养宫颈癌Hela细胞,褐藻多糖硫酸酯作用Hela细胞后,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测Hela细胞抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白印迹(Western Blot)法检测细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中PCNA-AS1基因表达水平。转染PCNA-AS1小干扰RNA或PCNA-AS1过表达载体至Hela细胞后,上述相同方法观察干扰PCNA-AS1表达或过表达PCNA-AS1的同时使用褐藻多糖硫酸酯处理对Hela细胞抑制率、凋亡率及CyclinD1、p21、Bax和Bcl-2的蛋白表达的影响。结果褐藻多糖硫酸酯作用Hela细胞后,细胞抑制率、凋亡率及p21和Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),CyclinD1和Bcl-2蛋白及PCNA-AS1表达水平显著降低(P0.05)。干扰PCNA-AS1表达后,Hela细胞抑制率、凋亡率及p21和Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),CyclinD1和Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。过表达PCNA-AS1的同时使用褐藻多糖硫酸酯作用Hela细胞,细胞抑制率、凋亡率及p21和Bax蛋白表达水平显著降低(P0.05),CyclinD1和Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05)。结论褐藻多糖硫酸酯可抑制宫颈癌Hela细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与下调PCNA-AS1表达有关。     

小儿脓毒症血浆D-二聚体、凝血4项、血小板变化及临床意义

目的:探讨小儿脓毒症血浆D-二聚体、凝血酶原时间、凝血酶时间、活化部分凝血活酶时间、纤维蛋白原和血小板在小儿脓毒症不同病情阶段的变化,为防治小儿脓毒症提供理论依据.方法:重症监护室住院患儿51例为脓毒症组,同期本院普通病房患儿30例为普通感染组,健康小儿20例为对照组.对入选病例即时检测血浆D-二聚体、凝血酶原时间、凝血酶时间、活化部分凝血活酶时间、纤维蛋白原和血小板和24,48,72 h病情评估 .结果:(1)血浆D-二聚体在脓毒症组明显高于普通感染组(P＜0.05), 随病情加重而升高,与危重评分呈负相关(P＜0.05﹚;(2) 凝血酶原时间、凝血酶时间、活化部分凝血活酶时间在脓毒症组明显延长,纤维蛋白原、血小板明显降低(P＜0.05),凝血酶原时间、凝血酶时间、活化部分凝血活酶时间、纤维蛋白原与危重评分及预后无相关性(P＞0.05).结论:血浆D-二聚体对诊断小儿脓毒症纤溶状态有一定的参考价值,动态观察小儿脓毒症凝血、纤溶变化,可为脓毒症早期治疗、判断预后提供一定的理论依据.     

全蝎纯化液对凝血酶所致血液凝固的影响

目的 探讨全蝎纯化液对凝血酶所致凝血/纤溶系统变化的影响.方法 实验1:将18只SD大鼠随机分为对照组、凝血酶组和全蝎纯化液组,每组6只.凝血酶组颈外静脉注射凝血酶70 U/kg,15 min内注完;全蝎纯化液组于注射凝血酶前腹腔注射全蝎纯化液20 mg/kg;对照组给予16 ml/kg生理盐水.于注射凝血酶后10 min取颈总动脉血,测定血浆活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT).实验2:将15只家兔随机分为对照组、凝血酶组和全蝎纯化液组,每组5只.实验方法同实验1,凝血酶剂量为50 U/kg,药物均经耳缘静脉注射.于注射凝血酶后3 h经颈总动脉取血,测定血浆血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)、组织型纤溶酶原激活物(tPA)及其抑制物(PAI)含量.结果 全蝎纯化液可明显延长APTT[(43.6±1.3) s比(28.2±0.9) s]、PT[(13.1±0.7) s比(9.8±0.3) s]、TT[(19.9±1.1) s比(13.9±0.9) s],明显降低血浆TXB2[(56.8±23.2) ng/L比(133.4±21.3) ng/L]、PAI含量[(4.9±0.5) kAU/L比(8.5±1.1) kAU/L],增加血浆6-keto-PGF1α[(35.3±2.5) ng/L比(21.4±2.8) ng/L]、tPA含量[(4.6±0.9) kU/L比(2.3±0.5) kU/L],与凝血酶组比较差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 全蝎纯化液可降低内、外源性凝血系统因子的活性,增加纤溶系统活性,进而抑制凝血酶的作用.     

亲体肝移植患者围手术期止血与凝血指标的变化

背景:亲体供肝移植后由于止血和凝血指标的异常可出现出血及血栓等严重并发症,但其具体变化规律如何尚未见报道.目的:探讨亲体肝移植受体围手术期止血与凝血指标的变化.方法:抽取44例亲体肝移植受者移植前、移植后1～7 d静脉血,检测患者血浆中活化部分凝血活酶时间、凝血酶原时间、凝血酶时间、纤维蛋白原含量、血小板、抗凝血酶活性、纤溶酶原活性、纤溶酶原激活物抑制剂1活性、D-二聚体、纤维蛋白降解产物的动态变化.以32名体检中心健康体检者为对照.结果与结论:移植前活化部分凝血活酶时间、凝血酶原时间、凝血酶时间延长(p<0.01),纤维蛋白原含量、血小板、抗凝血酶活性、纤溶酶原活性降低(P<0.01),纤溶酶原激活物抑制剂1升高(P<0.01);移植后1周凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间、血小板、纤维蛋白原含量、抗凝血酶活性逐渐恢复正常,纤溶酶原活性、纤溶酶原激活物抑制剂1、D-二聚体、纤维蛋白降解产物仍异常于正常值(p<0.01).结果提示亲体肝移植后凝血因子、抗凝因子的恢复是相对较快的,而纤溶因子的恢复则较为迟缓,纤溶功能亢进,是肝脏移植严重出血的主要原因,因此在移植后凝血与止血功能的监测,是预防出血和血栓形成的有效措施.