眼镜蛇蛇毒因子与大鼠中性白细胞吞噬功能减退的量效研究

目的;研究中华眼镜蛇的蛇毒因子与中性白细胞吞噬功能的量效关系及ＣＶＦ在非协调性异种心脏移植应用中的意义。方法：（１）用不同剂量的ＣＶＦ腹膜腔内注射,ＳＤ大鼠,测定大鼠血液中性白细胞噬菌率;（２）经ＣＶＦｉ,ｐ,处理后大鼠进行颈部豚鼠一大鼠异种心脏移植,然后测定移植前后大鼠不同时点的血液中性白细胞噬菌率。结果：（１）ＣＶＦ能使大鼠 液中性白细胞噬菌功能减退,并呈量效关系;（２）经ＣＶＦ处理的大鼠移植     

眼镜蛇毒因子与中性白细胞吞噬功能的量效关系

目的 探讨眼镜蛇毒因子与中性白细胞吞噬功能的量效关系。方法 蛇毒抗补体因子（ＣＶＦ）的分离、纯化及活力测定分别参照舒雨雁和Ｔａｋａｈａｃｈｉ等报道的方法,中性白细胞吞噬功能的测定参照张明安的方法。结果 眼镜蛇毒中分离纯化的抗补体因子相对分子质量为２２５～２３０ｋｕ,抗补体活力为８１．９６Ｕ／ｍｇ,五个不同剂量ＣＶＦ对豚鼠中性白细胞吞噬率均有不同的下降。结论 ＤＶＦ消除补体后,使豚鼠中性白细胞的体外     

中华眼镜蛇毒因子清除补体建立异种心脏移植急性血管性排斥反应模型

目的　采用纯化中华眼镜蛇毒因子 (CVF)清除补体 ,建立豚鼠 -大鼠非协调性异种心脏急性血管性排斥反应 (AVR)模型。　方法　供者豚鼠和受者 SD大鼠各 38只 ,分为 3组 : 组 (超急排组 ,n=2 0 ) ,受者不进行任何预处理 ; 组 (小剂量 CVF组 ,n=1 0 ) ,受者移植前 1 d经腹腔注射 CVF2 0 0 μg/ kg,移植后每日注射 1 0 0 μg/kg直至供心停搏 ; 组 (大剂量 CVF组 ,n=8) ,受者移植前 1 d经腹腔注射 CVF4 0 0 μg/ kg,移植后每日注射 2 0 0μg/ kg直至供心停搏。观察供心存活时间 ,供心停跳后行病理组织学检查。　结果　 组和 组供心平均存活时间分别为 (4 1± 2 ) h和 (4 0± 3) h明显长于 组 [(1 7± 2 ) min,P<0 .0 1 ], 组与 组间差异无显著性 (P>0 .0 5 )。病理检查 : 组呈超急性排斥反应 (HAR)改变 ,而 、 组呈 AVR改变 ; 、 组移植物炎症细胞浸润数明显多于 组(P<0 .0 1 ) ,移植物补体 C3沉积明显少于 组 (P<0 .0 1 )。　结论　适当剂量纯化 CVF具有良好的清除大鼠补体C3作用 ,克服豚鼠—大鼠非协调性异种心脏移植物 HAR的发生 ,延长其存活时间 ,建立以炎症细胞浸润为主的异种移植 AVR模型     

眼镜蛇毒因子对豚鼠-大鼠异种心脏移植的影响

目的 :研究眼镜蛇毒因子 (CVF)对豚鼠 -大鼠非协调性异种心脏移植的影响 ,探讨其应用的可能性。方法 :给受者大鼠进行 CVF (16 0 μg/ kg)、CVF+ CYP(16 0 μg/ kg+ 2 0 m g/ kg)、CYP(2 0 mg/ kg)腹腔注射处理 ,耗竭其体内补体 ,随后对耗竭体内补体的受者大鼠进行颈部豚鼠 -大鼠异种心脏移植。测定移植供心的存活时间。结果 :经 CVF处理后移植供心存活时间获得延长至 (36 .3± 5 .1) m in。加用环磷酰胺 (CYP)延长尤为明显 [(5 3.4± 7.4) m in],CYP对移植供心存活时间也有一定的延长作用 [(31.7± 6 .0 ) min]。结论 :CVF可延长供心的存活时间 ,对非协调性异种心脏移植具有一定的应用价值。     

云南眼镜蛇毒因子用于预致敏大鼠同种心脏移植的实验研究

目的观察纯化的云南眼镜蛇毒因子(Y-CVF)对预致敏大鼠同种心脏移植急性体液排斥反应的作用。方法BN大鼠到Lewis大鼠连续3次皮肤移植预致敏后行颈部异位心脏移植。将15对大鼠用随机数字法分成2组,实验组(n=8)于心脏移植前24h静脉给予Y-CVF80μg/kg;对照组(n=7)不用Y-CVF。观察移植心的生存时间,移植心停跳后病理学检查排斥类型,免疫组织化学染色观察移植心IgG和补体C3的沉积。结果Lewis大鼠预致敏后抗BN大鼠抗体滴度由0升高至1∶1028~1∶2056。对照组移植心存活时间为12·71h±13·94h,实验组移植心存活时间为99·50h±38·72h,与对照组比较差异有统计学意义(t=5·599,P<0·01)。病理检查结果证实,实验组均未发生急性体液排斥,仅见以大量单核淋巴细胞浸润为特征的急性细胞排斥反应。对照组则见以小血管内血栓形成为特征的急性体液排斥反应。免疫组织化学IgG染色实验组和对照组均为阳性,C3染色对照组为阳性,而实验组为阴性。结论使用Y-CVF可克服预致敏大鼠同种心脏移植急性体液排斥反应的发生。     

中华眼镜蛇毒因子与丹参对豚鼠至大鼠异种小肠移植存活作用的比较

目的　探讨中华眼镜蛇毒因子、丹参对异种小肠移植存活的作用。方法　供受体配对随机分为非处理组、中华眼镜蛇毒因子组、丹参组 ,每组 8例。从存活时间、组织病理两方面分析。结果　非处理组移植小肠存活时间为 ( 0 3± 0 1)h ;中华眼镜蛇毒因子将移植小肠存活延长到 ( 65 8± 9 5 )h ,组织病理发现有较多炎性细胞浸润 ;丹参组与非处理组存活时间差异无显著性。结论　中华眼镜蛇毒因子能有效延长异种小肠移植存活 ;丹参对异种小肠移植超急性排斥反应无明显作用。     

中华眼镜蛇蛇毒及复方丹参抑制异种移植免疫排斥的实验研究

目的：研究中华眼睛蛇蛇毒因子（CCV）及复方丹参在异种移植中的作用。方法；采用颈部套袖法建立豚鼠对大鼠心脏异种移植模型。于术前24h按0.5mg/kg ip CCV，术中以复方丹参注射液灌注供心并iv复方丹参。研究对照组，CCV组和CCV 丹参组供心存活时间，复跳时间及血清补体水平的变化。结果：CCV可明显降低血清补体水平，延长供心存活时间，复方丹参注射液可缩短供心复跳时间。二者合用可进一步延长供心存活时间。结论：在异种移植中补体起着关键的作用，CCV通过降低血清补体水平抑制超急性排斥反应（HAR）的发生，复方丹参可减少供心缺血损伤，并改善微循环，CCV和复方丹参合用对HAR有良好的抑制效果。     

晚期血吸虫病脾切除患者嗜中性白细胞吞噬功能的研究

应用同位素技术，检测了部分晚期血吸虫病脾切除患者（切脾组）、巨脾型患者（巨脾组）以及正常对照人群（对照组）外周血嗜中性白细胞（ＰＭＮ）吞噬、杀菌功能以及血清调理作用，结果表明切脾组、巨脾组上述免疫指标显著低于对照组，切脾组与巨脾组相比较，ＰＭＮ吞噬、杀菌功能及血清调理作用差异无显著性。提示：晚期血吸虫病患者的ＰＭＮ吞噬功能低下，巨脾切除后未使之进一步恶化。     

舟山眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶的分离纯化、理化及酶学性质

目的 从舟山眼镜蛇蛇毒中分离L-氨基酸氧化酶(LAO),测定其理化和酶学性质.方法 应用Sephadex G-100凝胶色谱和POROS CM20离子交换色谱分离纯化LAO;Wellner和Lichtenberg法测定LAO活力,SDS-PAGE法测定相对分子质量.结果 舟山眼镜蛇蛇毒经Sephadex G-100凝胶色谱和两次POROS 20离子交换色谱后,获得LAO纯品(暂定名NA-LAO).NA-LAO在非还原和还原条件下相对分子质量均为58 kD左右;其反应最适pH为8.0,最适温度为60℃,对L-苯丙氨酸的米氏常数(Km)为3.08 mmoL/L.结论 应用凝胶过滤色谱和离子交换色谱可从舟山眼镜蛇毒中分离纯化LAO.     

中华眼镜蛇毒组分对神经胶质瘤细胞U251生长的抑制作用

目的:探讨中华眼镜蛇毒卡迪(KD)中进一步分离纯化的10个组分KD Ⅰ-l、KD Ⅰ-1 H、KD Ⅰ-2、KDQ Ⅰ-2、KDⅡ、KDⅡ-2、KDⅡ-3,KDⅢ-1,KDⅢ-2和KDⅢ-2'对神经胶质瘤细胞U251的抑制作用.方法:采用MTT法和台盼蓝拒染法观察各组分对U251细胞增殖的影响.结果:在l～100 μg/mL的浓度范围内用MTT法筛选出3个具有显著抑制作用的组分KD、KDⅡ-3和KDⅢ-1.对以上3种组分再次细分浓度后(5、10、30、50、80、100 μg/mL)的MTT结果显示以上三种组分仍然具有显著的抑制作用.选取了KDⅢ-1和KDⅡ-3进一步细分浓度后(1、3.75、7.5、15、30 μg/mL)的MTT结果显示KDⅢ-1和KDⅡ-3组分在7.5 μg/mL时的抑制率分别为63.94%和62.15%,且2种组分在1～30 μg/mL呈现剂量效应关系(r=0.694,P＜0.05;r=0.732,P＜0.05).半数抑制浓度分别为6.65 μg/mL和10.54 μg/mL.KDⅡ-3的生长曲线显示药物的各个浓度(1、3.75、7.5、15、30 μg/mL)对肿瘤细胞均有抑制作用,以24 h的抑制作用最为明显.在7.5～15 μg/mL浓度范围内呈现明显抑制作用.结论:分离纯化的10组分对U251细胞有不同程度的抑制作用,尤以KDⅡ-3的抑制作用最为显著,并有明显的剂量效应关系.     

福建产眼镜王蛇毒神经毒素的分离及活性测定

目的 从眼镜王蛇蛇毒中分离神经毒素，测定其活性和毒性。方法 应用CM—Sephadex C-50离子交换色谱，阶段梯度洗脱分离粗毒；用Sephadex G-50凝胶过滤纯化组分；用大鼠体外膈神经-膈肌标本鉴定分离组分对神经-肌肉接头的作用性质；观察神经毒素对乙酰胆碱(Ach)引起蛙体外腹直肌收缩的量效曲线的影响；以Meier法测定神经毒索对小鼠的半数致死量(LD50)。结果 眼镜王蛇粗毒经阳离子交换色谱后获得A～N共14个蛋白峰，经鉴定E、F、G，H、I、K等6个蛋白峰具有阻断神经一肌肉接头传导的作用，被鉴定为神经毒素，约占粗毒的48．3％；通过凝胶过滤对E、G和K组分进行初步纯化；E、G和K组分可使Ach引起的蛙腹直肌收缩的量效曲线平行右移，它们与N2-胆碱受体(N2-AchR)的解离常数(KD)分别为：145．87，73．53和20．04ng／mL；E、G和K组分小鼠静脉注射的LD50分别为：0．884，0．749和1．58mg／kg。结论 眼镜王蛇粗毒经离子交换色谱获得6个神经毒索组分，经鉴定E、G和K组分为N2-AchR的竞争性拮抗剂。     

眼镜蛇毒对油酸型呼吸窘迫综合征的保护作用

实验组小白鼠先从腹腔注射眼镜蛇毒(200μg/kg),然后从尾静脉注射油酸(0.07ml/kg),对照组先从腹腔注射生理盐水(200μl/kg),再从尾静脉注入同剂量油酸。结果表明,实验组的肺湿重、肺干重、肺系数及肺含水量等指标均比对照组显著下降。增加静脉注射的油酸剂量至0.1ml/k8,重复实验,结果相同。说明适量的眼镜蛇毒可缓解油酸型呼吸窘迫综合征(RDS)。     

徐长卿对舟山眼镜蛇毒心脏毒素和神经毒素毒性的影响

目的　探讨徐长卿提取液对眼镜蛇毒心脏毒素 (cardiotoxin,CTX)和神经毒素 (neurotoxin,NT)毒性作用的影响。　方法　用心电监测方法观察徐长卿提取液腹腔注射对 CTX致小鼠心脏毒性的影响 ;以小鼠死亡率和存活时间为指标 ,观察徐长卿提取液对 NT所致小鼠急性毒性的影响。　结果　徐长卿提取液 10 g/ kg腹腔注射对 CTX致小鼠心脏的毒性有明显的减毒作用 ,它抑制 CTX致小鼠 ECG(胸导联 ) ST段偏移 (抬高 ) (P<0 .0 5 ) ,降低 CTX致小鼠心脏停搏 (CA )的发生率 ,延长房室传导阻滞发生的潜伏期 (P<0 .0 5 ) ;徐长卿提取液对 NT所致小鼠的急性毒性无明显影响 ,既不能降低死亡率 ,也不能明显延长小鼠存活时间。　结论　徐长卿提取液腹腔注射有对抗眼镜蛇毒 CTX的毒性的作用 ,而对眼镜蛇毒 NT毒性则无明显影响     

己酮可可碱对非协调性异种心脏移植的影响

【目(的】探讨己酮可可酮碱（PTX）对非协调性异种心脏移植［CTx(DC)］存活时间的影响。【方法】50只雄性豚鼠和50只雄性SD大鼠随机分成A、B、C3组进行异种心脏（豚鼠-大鼠）移植于颈部,移植前1hA组受体生理盐水1mL腹膜腔内注射(ip),B组受体PTX50mg/kgip,C组供体、受体均以PTX50mg/kgip。用免疫组织化学方法检测移植心脏血管内皮细胞（EC）P-选择素表达情况。【结果】①B、C组移植心脏平均存活时间分别为25.6min和25.9min,较A组13.9min明显延长,P<0.05。②移植后8min和排斥时移植心脏血管ECP-选择素表达B、C组不如A组明显,P<0.05。【结论】PTX可以通过保护EC,延长CTx（DC）存活时间。     

舟山眼镜蛇毒蕈碱样多肽的分离及其对M胆碱受体的激动效应

目的 从舟山眼镜蛇Naja atra蛇毒中分离毒蕈碱样多肽,探讨其与M胆碱受体的关系.方法 应用分子筛凝胶Sephadex G-50、Sephadex G-100、离子交换凝胶CM-Sepharose F.F.分离纯化目的组分;SDS-PAGE鉴定目的蛋白的纯度并测定其相对分子质量;放射受体分析法测定该物质与大鼠脑组织M胆碱受体的亲和力;选用离体豚鼠回肠纵行肌观察其对M胆碱受体的效应.结果 从舟山眼镜蛇蛇毒中获得一种与大鼠脑组织M胆碱受体具有高亲和力的多肽(Ki为10.12 nmol/L),其相对分子质量约14 kD.该多肽可引起离体豚鼠回肠纵行肌收缩,此效应可被阿托品阻断.结论 舟山眼镜蛇蛇毒中获得与M胆碱受体具有高亲和力的多肽,该多肽对M胆碱受体具有激动效应.     

福建产舟山眼镜蛇毒细胞毒素的快速分离纯化及鉴定

目的 从舟山眼镜蛇毒中分离纯化细胞毒素(CTX)，并鉴定其理化性质。方法 采用SP—Sephadex C-25阳离子交换色谱及Sephasil Peptide C18反相高效液相色谱法从舟山眼镜蛇毒中分离纯化CTX，SDS—PAGE(Tris—Tricine系统)鉴定纯度，Edman降解法测定N端氨基酸序列。结果 粗毒经阳离子交换色谱，得到14个蛋白峰，其中第X～XⅢ峰具CTX活性；再分别经反相色谱纯化，得到4个CTX．总得率为32.48％；SDS—PAGE显示为均一蛋白，分子量依次为：7．28，7．33，7．24和7．38kD；测定它们N端20个氨基酸序列。结论 采用阳离子交换和反相高效液相色谱可快速、高效地从眼镜蛇毒中获得4个CTX纯品。