酶免疫染色技术快速检测鼠疫耶尔森菌

目的研究酶免疫染色技术检测鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)的敏感性及特异性,建立鼠疫免疫快速检测技术。方法用酶免疫染色技术对细菌标本和动物标本检测鼠疫菌,动物标本同时用细菌学、RIHA、RGICA和ELISA法平行检测鼠疫菌。结果细菌标本酶免疫染色法检测结果与实际相符,酶免疫染色技术检测鼠疫菌的灵敏性为1 000个/ml;动物标本酶免疫染色法检测鼠疫菌结果和细菌学、RIHA、RGICA和ELISA一致。结论酶免疫染色技术检测鼠疫菌敏感、特异、简便、快速,可用于鼠疫检测工作。     

鼠疫菌毒素的研究进展

近十多年来对鼠疫菌毒素的研究已成为比较广泛而深入的课题之一。本文拟概括介绍所见到的新近研究进展。鼠疫菌的毒素主要有两类,即内毒素(Endotoxin)和鼠毒素(Exotoxin)。前者是细胞壁成分,与其他革兰氏阴性菌的脂多糖(LPS)内毒素极相似,后者则位于细菌的封套上,是唯一由鼠疫菌分泌的酶蛋白。     

溶组织内阿米巴同工酶的初步研究

本文对3株溶组织内阿米巴(Entamoeba histo-lytica)和1株侵入内阿米巴(Entamoeba invadens)的匀浆液用琼脂糖凝胶电泳法进行同工酶谱分析研究。这4株阿米巴分别多菌培养72h和2wk后收集离心浓缩,加入酶稳定液,冻融数次,高速离心,提取阿米巴细胞匀浆液。并以各株伴随细菌作对照。分别检测阿米巴4种酶的同工酶,即L-苹果酸:辅酶I     

结核分枝杆菌Rv0341蛋白编码基因iniB的多态性分析

目的研究结核分枝杆菌假设蛋白Rv0341编码基因iniB的多态性,确认其保守性,分析依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)在利福平(R)培养管中Rv0341高表达的可能原因。方法用大肠埃希菌做为阴性对照,提取依R菌(14株)、耐R菌(23株)、R敏感的结核分枝杆菌(12株)、结核分枝杆菌标准株H37Rv及BCG(共51株)的细菌基因组DNA,利用PCR自基因组DNA中扩增iniB基因,通过ApaⅠ/EcoRⅤ、KpnⅠ/SmaⅠ双酶切,琼脂糖凝胶电泳检测其带型,对iniB基因进行限制性片段长度多态性分析并测序。结果实验组中iniB基因的酶切图谱完全相同,测序结果亦证实iniB基因无突变。结论 iniB基因在对R依赖、耐药和敏感等不同类型的结核分枝杆菌中是相对保守的;依R菌在Rv0341蛋白表达方面的差异可能是RNA转录差异或利福平诱导的结果。     

社区及医院感染中常见细菌的耐药性分析

目的探讨社区和医院感染中细菌耐药谱的特点。方法药敏试验用KirbyBauer法,根据2003年美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)标准判定结果,应用WHONET-5软件对临床分离细菌的药敏结果进行数据分析。结果医院感染480株,常见细菌依次为:铜绿假单胞菌(19.37%),肺炎克雷伯菌(15.83%),大肠埃希菌(11.87%)。社区感染726株,常见细菌为:金黄色葡萄球菌(14.05%),大肠埃希菌(12.67%),凝固酶阴性葡萄球菌(11.43%)。医院感染的金黄色葡萄球菌,凝固酶阴性葡萄球菌,铜绿假单胞菌,大肠埃希菌耐药率明显高于社区感染,差异有统计学意义(P<0.01)。而肺炎克雷伯菌和不动杆菌属差异无统计学意义。结论重视细菌耐药性监测,合理使用抗生素。     

空肠弯曲菌hipO基因的Real-time PCR检测研究

目的建立基于新型Taqman荧光探针的荧光实时(Real-time)PCR方法用于空肠弯曲菌的筛选检测与快速鉴定。空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是近十几年来在世界范围内广泛重视的人畜共患病原菌,可以导致人类的急性肠炎与食物中毒,并能引发格林-巴利综合征等并发症。为更好地利用分子生物学技术对空肠弯曲菌进行快速、准确的基因检测,本研究从样品增菌液与单菌落中提取细菌DNA,建立了针对空肠弯曲菌特异的hipO(hippuricase,马尿酸酶)基因的Real-time PCR方法,用于空肠弯曲菌的快速筛选检测与可疑菌落快速鉴定。试验结果表明,该方法检测细菌的灵敏度为1~10CFU,人工布菌鸡肉的检测灵敏度为1~10CFU。本研究所建立的空肠弯曲菌荧光实时PCR方法具有准确、可靠、快速的特点。     

基因盒-整合子系统与志贺菌耐药

随着抗生素的广泛应用,志贺菌的耐药特别是多重耐药问题日趋严重.具有捕获及表达外来基因能力的整合子(integron)系统作为新的细菌耐药机制,正越来越受关注.根据整合酶int Ⅰ的不同,整合子可分为6类.其中1,2,3类整合子研究较多,并已被证明与细菌的耐药性有关.最近研究表明,2类整合子是志贺菌中最常见的整合子.本文就基因盒-整合子系统的概念、结构及与志贺菌耐药相关性等进行综述.     

临床常用的β内酰胺酶抑制剂能否治疗产Ⅰ型头孢菌素酶细菌的感染?

产 β内酰胺酶是革兰阴性杆菌对 β内酰胺类抗生素最 常见和最为重要的耐药机制 ,目前常见的革兰阴性杆菌临床分离菌株 85 %以上产酶阳性。在众多 β内酰胺酶中 ,可水解广谱 β内酰胺类抗生素的Ⅰ型头孢菌素 (ＡｍｐＣ)酶近年来日益受到重视 ,目前产ＡｍｐＣ酶细菌已成为院内感染最常见病原体。欧洲 1997～ 2 0 0 0年的一项耐药监测资料[1] 显示产ＡｍｐＣ酶细菌 (不包括铜绿假单胞菌 )占临床分离菌的 12 % ,其中 2 7.6%对头孢他啶耐药 ,美国一项全国监测报告[2 ] 耐药率更高达 3 7%。据我国 2 0 0 1年全国院内感染监测资料 ,这类菌株已占我…     

非酒精性脂肪性肝病细菌感染的细菌类型及耐药性分析

目的探析非酒精性脂肪性肝病患者的细菌类型及耐药性情况,以期提供合理的临床用药方案。方法分析2013年1月至2014年12月期间于我院治疗的非酒精性脂肪性肝病细菌感染患者的细菌类型,及在患者体内的分布、药物敏感性、耐药性等。结果非酒精性脂肪性肝病患者体内革兰氏阴性菌共656株:大肠埃希氏菌297株(45.27%)、克雷伯氏菌属118株(17.99%)、气单胞菌属85株(12.96%)、不动杆菌属43株(6.55%)、假单胞菌属41株(6.25%)、肠杆菌属37株(5.64%)、其他菌35株(5.34%),分布于血液166株(25.30%)、痰177株(26.98%)、腹水176株(26.83%)、尿液137株(20.88%)。大多数的阴性菌对氨苄西林和哌拉西林都有较高的耐药率,而对环丙沙星和庆大霉素的耐药率都较低。产ESBLs菌多集中在大肠埃希氏菌及肺炎克雷伯氏菌属,产酶率分别是58/297(19.53%)及27/118(22.88%)。亚胺培南在产酶菌株和非产酶菌株都有较低的耐药性,且产酶菌株对药物的敏感性低于非产酶菌株。结论 NAFLD患者体内的细菌分布和细菌对于抗生素的耐药性具有特异性,可为临床用药提供用药方案。     

一起由屎肠球菌引起的人、猪败血症暴发流行的相关性

目的 通过基因分析研究引起人、猪败血症暴发流行的屎肠球菌的相关性。方法 随机对患者和病猪的血培养分离菌进行16S核糖体RNA基因(16SrRNA基因或16SrDNA)测序，与基因库中菌种比较，从基因水平上确定细菌种类。分别将人、猪血液分离菌基因组经20U SamI酶消化后经脉冲场凝胶电泳(PFGE)，确定两者的相关性。结果 16SrRNA基因测序分析证明人、猪分离菌100％相同，与基因库中原型屎肠球菌仅相差一个核苷酸(999％相同)，两株细菌全基因组经Saml酶消化后PFGE谱完全一致。结论 此起暴发流行是由猪传播的屎肠球菌败血症所致。     

慢性肝病患者血培养分离菌分布特征及耐药谱研究

目的:分析慢性肝病患者血培养分离菌的分布特点及耐药情况。方法:培养6913瓶慢性肝病患者全血标本,鉴定细菌,测定药敏。结果:阳性标本763份,阳性率为11.0%。共检出34个属、71个种,383株菌;需氧菌373株(97.4%),厌氧菌3株(0.7%),真菌7株(1.9%);排在前几位的细菌是:大肠埃希菌(122株),凝固酶阴性葡萄球菌(51株),肺炎克雷伯菌(41株)。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs率分别为18.0%(22/122)和12.2%(5/41);耐苯唑西林凝固酶阴性葡萄球菌产生率为51.0%(26/51)。结论:肝病患者的血培养分离菌以肠杆菌科细菌为主。     

耶氏菌属毒力株共同血清学特性

<正> 取氏菌属细菌(鼠疫耶氏菌、假结核耶氏菌和小肠结肠炎耶氏菌)对人和动物都能引起侵袭性疾病,他们的致病性与一分子量40～48Mdal的毒力质粒有关。该质粒编码VW抗原,自凝因子和特异外膜蛋白。我们对该属细菌毒力株的共同血清学特性进行了研究,发现采用小肠结肠炎耶氏菌酶免疫斑点试验,可以把这3种细菌的毒力株和无毒力株区别开来。     

光滑型布氏菌104M和耶氏菌(O9)脂多糖可溶性抗原的提取及其免疫学特性

目前,国内外对细菌脂多糖的临床应用正在探索之中,用脂多糖作为抗原模型,进行广泛的免疫学试验将对免疫学的发展起促进作用。关于布氏菌与耶氏菌(O_9)LPS的提取、用免疫扩散试验进抗原成分的分析比较及抗原关系的免疫学研究,国外报道不少,而国内未见报道,本文做一初步探讨。     

鼠疫菌种特异性抗原

鼠疫菌和其它微生物一样具有许多免疫活性物质,大部分与其它细菌并无区别,其中只有少数抗原是鼠疫菌所特有的。弄清这些抗原的特性是研究鼠疫菌免疫机制及完善鼠疫诊断方法的基础。目前公认的鼠疫菌种特异性抗原有:荚膜抗原(Fra Ⅰ),“鼠毒素”,(Fra Ⅱ),纤维蛋白溶解酶及血浆凝固酶(FC)。     

肺炎克雷伯菌对喹诺酮类药物的耐药机制研究

为了探讨肺炎克雷伯菌对喹诺酮类药物的耐药机制，将肺炎克雷伯菌９００１２９及其诱导耐药株Ｇ１与Ｇ２用于本研究。细菌ＤＮＡ旋转酶以新生霉素亲合层析分离，细菌外膜蛋白质及细菌对环丙沙星了聚积分别以ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及荧光法分析。     

溃疡性结肠炎与克隆氏病时具有降介粘液作用的粪便糖苷酶

正常粪便菌丛中,约1%的细菌产生能消化粘液的糖苷酶,结肠粘液的降介几乎均由这些细菌酶引起.可以设想,溃疡性结肠炎(简称溃结)的发病可能由细菌酶对结肠粘液之降介作用增强,以致毒素或过敏源侵入结肠粘膜.为此,本研究对炎症性肠病患者和正常对照者进行粪便糖苷酶定量测定.测定的酶有α-D半乳糖苷     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌质粒中AmpC酶基因型的检测

目的探讨台州地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株质粒介导的AmpC酶基因型流行状况。方法应用VITEK-60型全自动细菌鉴定仪鉴定细菌,按NCCLS推荐的确证试验测定β-内酰胺酶(ESBLs);采用头孢西丁纸片扩散法筛选疑产AmpC酶阳性菌株,并通过酶粗提物头孢西丁三维试验、接合试验和PCR测序等实验分析该菌株的基因型及基因表型。结果299株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs检出率为19.73%(59/299),AmpC酶纸片扩散法筛选阳性率为12.04%(36/299),且36株AmpC酶筛选阳性菌株均为ESBLs阳性株;该菌株中有15株经三维试验证实为AmpC酶阳性,阳性率5.02%(15/299);15株产AmpC菌经接合试验得到15株接合子,经PCR及测序证实与原菌株表型基本一致。质粒型AmpC基因中13株为CIT型,2株为DHA型。结论台州地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株中已出现质粒携带的AmpC基因,基因型以CIT型为主,其次是DHA型。AmpC基因可能与编码ESBLs的基因存在于同一质粒上,编码的AmpC酶的质粒可在细菌间传递。     

我国产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的基因型及流行病学研究

 目的 分析我国对碳青霉烯类药物敏感性降低肠杆菌科细菌中碳青霉烯酶基因的携带情况及分子流行病学特征。方法 收集全国11个城市14家医院临床分离的碳青霉烯类药物不敏感肠杆菌科细菌201株,采用琼脂稀释法检测14种抗菌药物的MICs,改良Hodge试验和乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验筛检碳青霉烯酶表型,PCR扩增测序确证菌株携带的耐药基因。对产碳青霉烯酶菌株进行接合试验,脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)分析。结果 201株碳青霉烯类药物敏感性降低肠杆菌科细菌中有53株确定为产碳青霉烯酶[KPC-2(32株)、IMP-4(20株)、IMP-8(1株)],其中肺炎克雷伯菌33株、弗劳地枸橼酸杆菌9株、大肠埃希菌6株、阴沟肠杆菌5株,分别来自于北京(43株)、杭州(6株)、南京(3株)、福州(1株)4个地区;将53株产酶菌株与大肠埃希菌EC600进行接合,获得28株接合子;PFGE分型结果显示,肺炎克雷伯菌(33株)可分为3个型2个亚型、弗劳地枸橼酸杆菌(9株)可分为4个型、阴沟肠杆菌(5株)可分为4个型、大肠埃希菌(6株)均为同一型;29株产KPC-2型酶肺炎克雷伯菌的MLST分型序列均为ST11,4株产IMP-4型酶肺炎克雷伯菌中3株为ST876,1株为ST147。结论 在对我国11个城市的耐药菌监测中只有北京、杭州、南京和福州的医院中检出携带碳青霉烯酶基因的菌株,其中KPC-2最常见,其次为IMP-4、IMP-8,菌株间同源性较高,由于碳青霉烯酶基因在菌株间容易发生水平转移,应引起临床高度关注。
        

临床上微生物检验过程中细菌耐药性监测的应用研究

目的 通过临床微生物检验过程中细菌耐药性监测,为临床合理用药提供依据.方法 回顾分析我院2017年8月-2019年8月期间进行微生物检验的8150例患者资料,回顾分析细菌培养结果 以及耐药性结果 .结果 8150例患者细菌培养结果 包括:(1)鲍曼不动杆菌163例,耐碳青霉烯酶25例,全耐5例;(2)肺炎克雷伯菌389例,耐碳青霉烯酶7例,ESBLs(+)151例;(3)产酸克雷伯菌60例,耐碳青霉烯酶6例,ESBLs(+)28例;(4)大肠埃希菌435例,耐碳青霉烯酶1例,ESBLs(+)210例等.ESBLs、铜绿假单胞菌、溶血葡萄球菌存在多重耐药性.结论 通过对临床微生物检验过程中细菌耐药性监测,有利于知晓不同细菌耐药性情况,指导临床合理使用抗生素,同时可规范抗生素药物使用,加强对多重耐药菌的科学治疗.     

白细胞介素18基因工程表达方法

目的探讨人白细胞介素(IL)-18基因工程表达方法。方法复苏含有p GEX-IL-18重组体质粒的E.coli JM109,并进行增菌培养;利用质粒提取试剂盒提取p GEX-IL-18重组体质粒,通过琼脂糖凝胶电泳、基因片段测序、基因库比对等技术鉴定IL-18基因序列;将提取得到的p GEX-IL-18重组体质粒转化到DH5α,制成高效表达的IL-18原核表达系统。结果含有p GEX-IL-18重组体质粒的E.coli JM109增菌培养后提取质粒,酶切电泳与Marker比对,证实质粒大小2.7 kb;经测序并利用基因库比对证实,所制备的DNA片段符合IL-18基因序列。将p GEX-IL-18转染DH5α细菌内,并经过蓝白筛选系统进行筛选,证实转染成功。结论经过系统的实验研究,成功建立了IL-18的基因工程表达系统。IL-18具有重要的生物学功能,在后续的科研工作中将对IL-18的应用价值进行系统研究。