基因重组鼠伤寒沙门氏菌防龋疫苗研究进展

用沙门氏菌作为载体制备防龋重组疫苗的研制为预防和控制龋病提供了前景乐观的研究方向。本文就沙门氏菌基因重组防龋疫苗研制的进展以及面临的问题作一系统综述。     

减毒鼠伤寒沙门氏菌防龋疫苗免疫定菌鼠的实验研究

目的：本研究通过建立定菌鼠模型，采用携带变形链球菌PAc A区片段的减毒鼠伤寒沙门氏菌S.typhimurium SL3261(pET-17b/A)防龋疫苗，经不同途径免疫定菌大鼠，观察其在大鼠肠道定居的能力和诱发的特异性免疫应答反应。方法：采用携带变形链球菌表面蛋白基因片段的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌S.typhimurium SL3261(pET-17b/A)，通过口服、皮下、粘膜下等途径免疫50只定菌SD大白鼠，以酶联免疫吸队鼠血清及唾液中抗PAc-IgG、SIgA水平进行测定。采集不同时间大鼠粪便样本，观察减毒鼠伤寒沙门氏菌在肠道的定居情况，并进行质粒抽提鉴定。结果：口服活菌苗组免疫后血清PAc-IgG及唾液SIgA水平皆明显高于免疫前（P＜0.01)。各组免疫水平比较，口服活菌苗组免疫水平也明显高于其它4组（P＜0.01)。其大鼠粪便中存在大量氨苄抗性的沙门氏菌，即沙门氏菌SL3261（pET-17b/A)。结论：用基因重组减毒鼠伤寒沙门氏菌免疫定菌大鼠，能刺激其产生免疫反应。重组减毒鼠伤寒沙门氏菌S.typhimurium SL3261(pET-17b/A)可在大鼠肠道较持久的寄生，并能较稳定地携带质粒。     

基因重组鼠伤寒沙门氏菌防龋疫苗的研究

目的：确认变形链球表面蛋白pac基因A区片段重组表达质粒载体pET-17b-A中的A区片段阅读框正确。方法：利用ABI310DNA自动测序 进行DNA序列测定,并利用Internet进行联机检索,确定序列的构建正确与否。结果：测定了重组表达质粒载体pET-17b-A中的350个碱基序列,联机检索序列的构建正确。结论：重组表达质粒载体pET-17b-A中的A区片段阅读框正确。     

基因工程重组防龋疫苗的研究进展

防龋疫苗的研究经历了三个阶段，目前国外仍将变链菌细胞表面蛋白抗原Ⅰ／Ⅱ和葡糖基转移酶蛋白抗原基因工程重组疫苗作为研究的重点。本文对基因重组防龋疫苗的研究近况进行了综述。     

基因重组乳链球菌防龋疫苗免疫定菌鼠的实验研究

目的为了阐明基因重组乳链球菌防龋疫苗的免疫效能。方法采用携带有变形链球菌表面蛋白（PAc）结构基因pac的重组乳链球菌防龋疫苗HL107通过灌胃、皮下注射、粘膜下注射三种途径对50只定菌Sprague－Dawley大鼠进行免疫，并以酶联免疫吸附试验进行鼠血清和唾液中抗PAc－IgG、IgA测定。结果通过灌胃进行免疫接种HL107的大白鼠血清中抗PAc－IgG、IgA抗体滴度和唾液中抗PAc－IgA抗体滴度明显高于乳链球菌LM0230免疫组和空白免疫组（P＜0.01）。结论基因重组乳链球菌具有变形链球菌表面蛋白的免疫原性，能够刺激定菌鼠产生特异性免疫反应和免疫表达产物。     

基因工程重组防龋疫苗的研究进展

防龋疫苗的研究经历了三个阶段,目前国外仍将变链菌细胞表面蛋白抗原Ⅰ/Ⅱ和葡糖基转移酶蛋白抗原基因工程重组疫苗作为研究的重点。本文对基因重组防龋疫苗的研究近况进行了综述。     

基因重组乳链球菌防龋疫苗免疫定菌鼠的实验研究

目的 为了阐明基因重组乳链球菌防龋疫苗的免疫效能。     

基因重组乳链球菌防龋疫苗的研究Ⅶ.基因重组乳链球菌免疫BALB/c鼠的实验研究

目的：观察基因重组乳链球菌的免疫原性和免疫反应性。方法：对实验动物ＢＡＬＢ／ｃ鼠进行基因重组乳链球菌防龋疫苗的灌胃免疫，并以酶联免疫吸附实验进行鼠血清和唾液中抗特异性ＰＡｃ－ＩｇＧ测定。结果：接种重组乳链球菌ＨＬ１０２、ＨＬ１０７组血清中抗ＰＡｃ－ＩｇＧ明显高于乳链球菌免疫组（Ｐ＜０．０１），与接种变形乳链球菌组产生同样的ＩｇＧ反应（Ｐ＞０．０１）。结论：基因重组乳链球菌具有变形乳链球菌表面蛋白抗原的免疫原性，能够在ＢＡＬＢ／ｃ鼠中产生特异性免疫反应和免疫表达产物抗特异性ＰＡｃ－ＩｇＧ。     

基因重组鼠伤寒沙门氏菌防龋疫苗的研究Ⅱ.携带变形链球菌pac基因表达质粒的构建与初步鉴定

目的：构建携带变形链球菌表面蛋白pac基因A区片段的原核高效表达系统。方法：对含变形链球菌表面蛋白pca基因的pPC41质粒进行PCR扩增,获得了pac基因A区片段,将扩增获得pac基因A区片段与表达质粒pET17-b定向克隆,重组质粒用B HI,EcoRV双酶切后电泳鉴定。结果：获得携带pac基因片段的重组持粒,结论：利用基因工程技术获得的重组质粒为后继工作准备了实验基础。     

基因重组鼠伤害沙门氏菌防龋疫苗的研究：Ⅰ.变形链球菌pac基因上游区 …

目的;对变形链球菌表面蛋白ｐａｃ基因上游区进行序列测定和分析。方法;通过应用ＰＣＲ测序试剂盒和ＤＮＡ自动测序仪ＡＢＩ３１０对变形链球菌表面蛋白ｐａｃ基因上游区进行序列测定。结果：测定了ｐａｃ基因上游区内的５１７个碱基序列。     

基因重组乳链球菌防龋疫苗的研究：Ⅷ.基因重组乳链球菌免疫B…

目的；观察基因重组乳链球菌的免疫原性和免疫反应性，方法：对实验动物ＢＬＡＢ／ｃ鼠进行基因重组乳链球菌防龋疫苗的灌胃免疫，并以酶联免疫吸附实验进行鼠血清和唾液中抗特异性ＰＡｃ－ＩｇＧ测定。结果：接种重组乳链球菌ＨＬ１０２，ＨＬ１０７组血清中抗ＰＡｃ－ＩｇＧ明显高于乳链求球菌免疫组（Ｐ〈０．０１），与接种变形乳链球菌产生同样的ＩｇＧ反应（Ｐ〉０．０１），结论：基因重组乳链球菌具有变形乳链球菌表面蛋白抗     

基因重组乳链球菌防龋疫苗的研究：Ⅵ.乳链球菌重组质粒pLF稳定…

本研究从分析乳链球菌转化子ＨＬ４５、ＨＬ１０２、ＨＬ１０７中质粒的稳定性入手，了解所用质粒载体对克隆基因表达的影响。质粒稳定性实验结果发现在含有５μｇ／ｍｌ红霉培养环境下，未出现失去红霉素抗性的红霉素敏感菌株；在红霉素缺失的条件下仅有１％－２％菌落失去抗性，成为红霉素敏感菌株。     

防龋疫苗的研究进展

防龋疫苗的研究进展李富明综述罗宗莲岳松龄审校对ＳＩｇＡ抗体产生机理的研究，为防龋疫苗的研制提供了新的思路和理论基础。随着不同剂型、佐剂和免疫途径的进一步研究，粘膜免疫系统的抗体产生也出现了新的看法［１］。但是，疫苗的更新，总是向着增加疫苗的免疫效果的...     

基因重组乳链球菌防龋疫苗的研究──Ⅵ．乳链球菌重组质粒pLF稳定性的实验观察

本研究从分析乳链球菌转化子ＨＬ４５、ＨＬ１０２、ＨＬ１０７中质粒的稳定性入手，了解所用质粒载体对克隆基因表达的影响。质粒稳定性实验结果发现在含有５μｇ／ｍｌ红霉素培养环境下，未出现失去红霉素抗性的红霉素敏感菌株；在红霉素缺失的条件下仅有１％～２％菌落失去抗性，成为红霉素敏感菌株。提示质粒稳定地存在于重组乳链球菌ＨＬ４５、ＨＬ１０２、ＨＬ１０７中，ｒＰＡｃ的低产生水平与在红霉素培养条件下质粒的丧失无关。基因表达的影响因素有待于今后不断深入分析研究。     

基因重组乳链球菌防龋疫苗免疫定菌鼠的实验研究Ⅱ:实验龋齿记分研究

目的：了解基因重组乳链球菌防龋疫苗的抗龋效果。方法：采用携带有变形链球菌表面蛋白（ＰＡｃ）结构基因ｐａｃ的重组乳链球菌防龋疫苗ＨＬ１０７通过灌胃、皮下注射、粘膜下注射三种途径对５０只定菌鼠进行免疫,统计龋齿记分进行比较。结果：经过重组乳链球菌免疫的大鼠口腔内龋齿记分明显低于未重组的乳链球菌ＬＭ０２３０免疫组。结论：基因重组乳链球菌能有效预防龋病的发生,可望在将来作为一种新的免疫原用于龋病的免疫学预防中。     

基因重组乳链球菌防龋疫苗的研制 Ⅱ．变形链球菌结构基因重组质粒对乳链球菌的克隆

在获得带有结构基因的质粒ｐＰＣ４１和穿梭质粒ｐＳＡ３的基础上，制备目的基因并与载体ＤＮＡ进行体外连接，使重组体导入乳链球菌ＬＭ０２３０受体细胞，为研制防龋疫苗获得携带变链菌表面抗原基因的重组乳链球菌。     

基因重组乳链球菌防龋疫苗的研究 Ⅲ．乳链球菌重组质粒DNA的Southern印迹和点印迹杂交分析

为了证实重组质粒ＤＮＡ分子中插入的外源ＤＮＡ确是来自变形链球菌拱体菌，检测受体菌中是否有探针同源的序列。本研究采用ＤＮＡＳｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交、点印迹杂交和切口平移制备生物素ＤＮＡ探针以及光敏基因检测技术，对乳链球菌ＨＬ１０２，ＨＬ１０７中的重组质粒ＤＮＡｐＬＦ１０２，ｐＬＦ１０７作了进一步分析鉴定，ＤＮＡ点印迹杂交结果显示，含有ｐａｃ基因的ｐＰＣ４１ＰｓｔⅠ酶切ＤＮＡ探针均与上述质粒ＤＮＡ结合，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交提示重组质粒１．５ｋｂ的酶切片段与生物素探针杂交，证实该基因片段是从ｐＰＣ４１中获得的变形链球菌目的基因片段，重组乳链球菌ＨＬ１０２，ＨＬ１０７均携带变形链球菌表面蛋白抗原（ＰＡｃ）结构基因ｐａｃ。     

基因重组乳链球菌防龋疫苗主动免疫防龋研究：Ⅲ.静脉 …

利用ＥＬＩＳＡ法观察了携带有变形链球菌表面蛋白基因的重组乳链球菌ＨＬ１０７经静脉内注射免疫孕兔后诱导机体免疫应答情况。结果表明，免疫１周后，血清和乳清中特异性ＩｇＧ型抗体明显升高，并持续数周。提示重组乳链球菌ＨＬ０７具有变形链球菌表面蛋白抗原ＰＡｃ的免疫原性，能激发机体的系统免疫应答。     

多肽防龋疫苗研究进展

多肽防龋疫苗研究进展湖北医科大学口腔医学院中心实验室（４３００７０）刘建国（综述）樊明文凌均启（审校）龋病是最常见的口腔疾病。致龋变形链球菌（简称变链菌）表面蛋白抗原（ＳＡ）和葡糖基转移酶（ＧＴＦ）在其致病过程中起重要作用。目前防龋疫苗的研究主要集中...