右美托咪定调节MAPK/ERK-CREB通路对大鼠海马神经元凋亡的保护作用

目的探讨右美托咪定(DEX)调节MAPK/ERK-CREB通路对大鼠海马神经元凋亡的保护作用。方法通过腹腔注射氯化锂-毛果芸香碱构建癫痫持续状态(SE)大鼠模型,并随机分为4组,每组各10只。SE+DEX组在SE模型构建成功后腹腔注射DEX 1μmol/L,阳性对照组腹腔注射1μmol/L苯巴比妥,药物干预24 h后,通过Nissl法和TUNEL法检测大鼠海马神经元损伤及凋亡情况,Western blot法检测大鼠海马组织中MAPK、p ERK、p CREB蛋白和凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2、Bax表达。结果与正常对照组相比,SE、阳性对照组、SE+DEX组大鼠Racine分值显著增加(P 0. 05),大鼠海马神经元数、Bcl-2蛋白表达量显著减少(P 0. 05),棕褐色TUNEL阳性细胞数、MAPK、p-ERK、p-CREB、caspase-3、Bax、Bax/Bcl-2蛋白表达量显著增加(P 0. 05)。与SE组相比,阳性对照组、SE+DEX组大鼠Racine分值显著降低(P 0. 05),大鼠海马神经元数、Bcl-2蛋白表达量显著增加(P 0. 05),棕褐色TUNEL阳性细胞、MAPK、p-ERK、p-CREB、caspase-3、Bax、Bax/Bcl-2蛋白表达量显著减少(P 0. 05)。结论 DEX可能通过抑制MAPK/ERK-CREB通路抑制海马神经元凋亡对其有保护作用。     

艾司西酞普兰对抑郁大鼠海马BDNF表达及细胞凋亡的影响

目的观察艾司西酞普兰对抑郁大鼠海马BDNF表达及细胞凋亡的影响,探讨其作用机制。方法40只雄性SD大鼠随机分为对照（A）、对照＋药（B）、抑郁模型（C）和抑郁模型＋药（D）组共4组,采用慢性不可预见性的温和刺激结合孤养法建立抑郁大鼠模型,TUNEL法检测海马细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR方法检测海马BDNF、Bax、Bcl2、Caspase3mRNA的表达。结果（1）C组海马细胞凋亡数显著增加,与A组比较差异有统计学意义（P〈0．01）,而B组细胞凋亡数与A组差异无统计学意义（P〉0．05）;D组细胞凋亡数明显减少,与c组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。（2）C组海马BDNF、Bel—2mRNA表达降低,Bax、Caspase3mRNA表达升高,与A组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）;D组BDNF、Bcl2mRNA表达增加,Bax、Caspase3mRNA表达降低,与C组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论艾司西酞普兰可改善抑郁大鼠的抑郁行为及海马细胞凋亡,其机制可能是通过增加海马BDNFmRNA的表达,上调Bcl一2及下调Bax、Caspase3mRNA的表达,从而预防海马细胞凋亡而发挥脑保护的作用。     

姜黄素预防高原缺氧大鼠认知功能障碍的机制研究

目的探讨姜黄素（Curcumin）预防高原缺氧大鼠认知功能障碍的机制。方法将24只成年雄性sD大鼠随机分为健康对照组、模型组（model组）、姜黄素[按体重60mg／（kg·d）]防治组（curcumin组）。造模后,给予姜黄素防治,采用Morris水迷宫实验方法检测各组大鼠学习记忆功能变化,并运用Westernblot技术检测海马Bcl-2、Bax及活化的caspase-3等凋亡相关蛋白表达水平的变化。结果①模型组大鼠寻找平台的潜伏期明显长于对照组,具有统计学意义（P〈0．05）,姜黄素组寻找平台的潜伏期相对于模型组显著缩短（P〈0．05）。撤离平台后,模型组大鼠在平台所在象限的停留时间明显短于对照组（P〈0．05）,姜黄素干预后大鼠在平台所在象限的停留时间较模型组显著延长（P〈0．05）;②姜黄素可显著减轻慢性缺氧导致的Bax、活化的easpase．3表达水平升高级Bcl-2表达水平下降。结论姜黄素可显著改善高原缺氧大鼠认知功能障碍,其机制可能和减轻海马神经元的凋亡有关。     

亚低温对糖尿病合并脑梗死大鼠缺血半暗带凋亡的作用及机制

目的探讨亚低温对糖尿病合并脑梗死(CI)大鼠缺血半暗带凋亡的作用及机制。方法健康雄性SD大鼠随机分为糖尿病组(n=42)和非糖尿病组(n=14),通过高脂饲料喂食联合链脲霉素(STZ)诱导2型糖尿病。制备大鼠永久性大脑中动脉栓塞模型,造模成功2周后随机分为糖尿病CI常温组(n=14)、糖尿病CI亚低温组(n=14)、糖尿病假手术组(n=14)、非糖尿病CI常温组(n=14)。建立永久性大脑中动脉栓塞CI模型后2 h开始对亚低温组进行亚低温干预6 h。于术后不同时间点进行神经行为学评估,术后3 d检测各组大鼠缺血半暗带的细胞凋亡程度以及基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达量。结果①与非糖尿病CI常温组比较,糖尿病CI常温组神经功能评分降低(P 0. 05),缺血半暗带凋亡水平升高(P 0. 05),cleaved caspase-3和MMP-9蛋白表达量增加(P 0. 05),Bcl-2基因表达量降低(P 0. 05),Bim基因表达量增加(P 0. 05)。②与糖尿病CI常温组比较,糖尿病CI亚低温组神经功能评分增加(P 0. 05),缺血半暗带凋亡水平降低(P 0. 05),cleaved caspase-3和MMP-9蛋白表达量降低(P 0. 05),Bcl-2基因表达量增加(P 0. 05),Bim基因表达量降低(P 0. 05)。结论糖尿病加重CI大鼠的神经功能损伤,亚低温干预可以减轻糖尿病CI大鼠的神经功能损伤,减轻血脑屏障受损从而抑制缺血半暗带神经细胞凋亡可能是其保护机制。     

川芎嗪对大鼠重型颅脑损伤后神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨川芎嗪对大鼠重型颅脑损伤后神经细胞凋亡及相关基因Bcl-2、Bax表达的影响和对脑神经的保护作用。方法120只SD健康大鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组,其中模型组和治疗组采用Feeney自由落体撞击装置制作大鼠重型颅脑损伤模型,治疗组给予盐酸川芎嗪,用TUNEL及免疫组化法检测三组间细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果大鼠脑组织中细胞凋亡率及Bcl-2、Bax表达水平在治疗组和模型明屁高于假手术组（P〈0．05）。在伤后72h、168h,治疗组的细胞凋亡率及Bax表达水平明显低于模型组,而Bcl-2的表达水平则明显高于模型组（P〈0．05）。结论川芎嗪可能通过抑制Bax的表达,上调Bcl-2的表达,减少神经细胞凋亡,减轻重型颅脑损伤后继发脑损害,从而发挥脑神经保护作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对癫痫大鼠海马神经元凋亡的影晌

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对致痫大鼠的神经保护作用及可能机制。方法给予戊四氮（PTZ）致痫大鼠每日腹腔注射bFGF（bFGF组，n=36）、生理盐水（NS组，n=36），分别于痫性发作后6h、12h、24h、48h、3d、5d处死取脑，切片进行bcl-2、caspase-3染色，用原位末端标记（TUNEL）方法检测海马神经元凋亡细胞。结果痫性发作6h后两组海马CA1、CA3区的bcl-2、caspase-3、TUNEL染色阳性表达差异无统计学意义（P〉0．05）；12～48h表达逐渐增强，bFGF组bcl-2、TUNEL的表达显著高于NS组，bFGF组caspase-3的表达显著低于NS组（P均〈0．01）；3d后表达减弱，bFGF组与NS组的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论bFGF能显著减轻癫痫所致的海马神经元凋亡，提示可能通过调控bcl-2和caspase-3基因的表达发挥作用。     

线粒体钙单向转运体在匹鲁卡品致痫大鼠海马神经损伤中的作用

目的研究线粒体钙单向转运体(mitochondrial calcium uniporter,MCU)在氯化锂-匹鲁卡品(pilocarpine,PILO)癫痫大鼠模型神经损伤中的作用。方法将84只雄性SD大鼠随机分成空白对照(CON)组、PILO组(2 h、8 h、24 h和72 h 4个亚组)、Ru360组和精胺(Spermine)组。观察各组大鼠行为学改变,并荧光染色法测定海马组织线粒体Ca~(2+)浓度,TUNEL染色检测海马CA3区神经元凋亡,并采用Western Blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cyt C和caspase-3表达变化。结果 (1)与CON组比较,PILO组海马神经元线粒体Ca~(2+)浓度明显升高,凋亡明显增加(P0.05);与CON组比较,PILO组海马Bax表达水平、线粒体Cyt C释放及caspase-3激活明显增多,而Bcl-2表达水平明显减少(P0.05)。(2)与PILO组比较,Ru360组海马神经元线粒体Ca~(2+)浓度明显降低,凋亡明显减少(P0.05);与PILO组比较,Ru360组海马Bax表达水平、线粒体Cyt C释放及caspase-3激活明显减少,而Bcl-2表达水平明显增多(P0.05)。(3)与PILO组比较,Spermine组海马神经元线粒体Ca~(2+)浓度明显升高,凋亡明显增加(P0.05);与PILO组比较,Spermine组海马Bax表达水平、线粒体Cyt C释放及caspase-3激活明显增多,而Bcl-2表达水平明显减少(P0.05)。结论 MCU在PILO癫痫大鼠海马神经损伤中发挥重要作用,抑制MCU可发挥对海马神经元凋亡的保护作用,其机制可能是通过抑制线粒体介导的细胞凋亡途径。     

Pinacidil抑制线粒体和死亡受体通路减少大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡

目的探讨ATP敏感性钾通道开放剂pinacidil对大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡的保护作用及信号转导机制。方法100只Wistar雄性大鼠随机分为四组：A组（假手术组）、B组（缺血组）、C组（KATP开放剂处理组）及D组（KATP 开放剂和阻断剂处理组）。用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型,用DNA断端末端标记法（tenninal-deoxynucleotidytransferase-mediated dUTP—biotin nick end labeling,TUNEL）检测神经元凋亡,用原位杂交方法检测caspase-3、caspase-8及caspase-9mRNA的表达。结果（1）C组12h、24h、48h、72h时间点的凋亡细胞数较B、D组显著减少（P〈0．05或P〈0．01）;B组和D组之间无显著性差异fP〉0．05）。（2）C组caspase-3mRNA和caspase-8mRNA在各时间点及caspase-9mRNA在12h、24h、48h、72h时间点的表达显著少于B组和D组（P〈0．01或P〈0．05）,B组和D组之间无显著性差异（P〉0．05）。结论K通道开放剂能显著减少大鼠脑缺血再灌注后的细胞凋亡及caspase-3、caspase-8及caspase-9 mRNA的表达。K通道开放剂可能通过抑制线粒体通路和死亡受体通路降低神经元凋亡,保护缺血再灌注损伤后的脑组织。     

碱性成纤维细胞生长因子对脑出血大鼠神经细胞凋亡和BaX、Bcl-2基因表达的影响

目的观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠脑出血后神经细胞凋亡及血肿周围大脑皮质和出血侧海马Bax、Bcl-2基因表达的影响。方法采用脑内注射胶原酶建立大鼠脑出血模型,应用TUNEL法测定大鼠大脑皮质、海马神经细胞凋亡数目。及应用采用半定量逆转录酶聚合链反应(RT-PCR),检测脑出血后血肿周围大脑皮质和出血侧海马的Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表达。结果(1)bFGF组的皮质和海马神经细胞凋亡数比生理盐水(NS)对照组明显减少(P<0.05)。(2)bFGF组的血肿周围大脑皮质和出血侧海马Bax mRNA表达比NS对照组明显减少(P<0.05);而Bcl-2 mRNA表达比NS对照组明显增高(P<0.05)。结论bFGF提高大鼠脑出血后大脑组织和海马Bcl-2 mRNA的表达,降低Bax mRNA的表达,抑制脑出血后神经细胞凋亡。     

替普瑞酮诱导AD模型大鼠海马HSP70表达及其神经保护作用的研究

目的 研究替普瑞酮（Geranylgeranylacetone，GGA）诱导阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）模型大鼠海马热休克蛋白70（heat shock protein70，HSP70）表达及其对AD大鼠的神经保护作用。方法 90只SD大鼠随机分为替普瑞酮组、模型组与生理盐水组，双侧海马注射Aβ1-42。建立阿尔茨海默病大鼠模型，替普瑞酮组给予替普瑞酮800mg·kg^-1·d^-1灌胃，余两组给予等量生理盐水灌胃；术后1d、7d、14d、21d并于Y迷宫行为学测试后处死大鼠；采用western-blot方法检测各组大鼠海马HSP70表达的变化，HE染色观察海马神经元形态学改变，TUNEL法检测海马神经元凋亡。结果术后14d、21d模型组大鼠学习记忆能力较生理盐水组明显减退（P〈0．05），替普瑞酮组较模型组明显改善（P〈0．05）；术后7d、14d、21d模型组大鼠海马HSP70表达较生理盐水组逐渐减少（P〈0．05），替普瑞酮组HSP70表达明显增加（P〈0．05）；术后21d模型组大鼠海马CA1区神经元结构紊乱，细胞减少，凋亡细胞较生理盐水组明显增加（P〈0．01），替普瑞酮组凋亡细胞较模型组显著减少（P〈0．05），细胞形态学改变减轻。结论替普瑞酮能够诱导AD模型大鼠海马HSP70表达，减少大鼠海马神经元凋亡而产生神经保护作用，改善大鼠的学习记忆能力。     

Uteroplacental insufficiency lowers the threshold towards hypoxia-induced cerebral apoptosis in growth-retarded fetal rats

Infants suffering uteroplacental insufficiency and hypoxic ischemic injury often demonstrate cerebral apoptosis. Our objective was to determine the global effects of uteroplacental insufficiency upon cerebral gene expression of the apoptosis related proteins Bcl-2 and Bax and their role in increasing vulnerability to hypoxia-induced cerebral apoptosis. We therefore caused uteroplacental insufficiency and growth retardation by performing bilateral uterine artery ligation upon pregnant rats 2 days prior to term delivery and elicited further perinatal fetal hypoxia by placing maternal rats in 14% FiO(2) 3 h prior to delivery. We quantified cerebral levels of Bcl-2 and Bax mRNA, lipid peroxidation, caspase-3 activity, and cAMP in control and growth retarded term rat pups that experienced either normoxia or hypoxia. Uteroplacental insufficiency alone caused a significant decrease in cerebral Bcl-2 mRNA levels without altering cerebral Bax mRNA levels, malondialdehyde levels, or caspase-3 activity. In contrast, uteroplacental insufficiency and subsequent fetal hypoxia significantly increased cerebral Bax mRNA levels, lipid peroxidation and caspase-3 activity; Bcl-2 mRNA levels continued to be decreased. Hypoxia alone increased cerebral cAMP levels, whereas uteroplacental insufficiency and subsequent hypoxia decreased cerebral cAMP levels. We speculate that the decrease in Bcl-2 gene expression increases the vulnerability towards cerebral apoptosis in fetal rats exposed initially to uteroplacental insufficiency and subsequent hypoxic stress.     

大鼠蛛网膜下腔出血后细胞外调节蛋白激酶1/2激活介导海马区神经细胞自噬

目的探讨大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后海马区细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)激活与神经细胞自噬的关系。方法 120只雄性SD大鼠随机分成假手术组、SAH组、ERK1/2抑制剂U0126组、自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,Rap)组。采用枕大池二次注血法制作SAH大鼠模型;U0126组和Rap组分别于造模前30min侧脑室注射U0126(5μg/μL)和Rap(10nmol/μL)。光镜观察海马区神经细胞形态结构;免疫组化法和实时荧光定量PCR法检测海马区磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、ERK1/2 mRNA和自噬标志蛋白(Beclin-1和Beclin-1mRNA、LC3-Ⅱ和LC3mRNA)表达水平。结果与假手术组比较,SAH组神经细胞死亡率增加(14.9%±5.7%,28.3%±9.8%,44.2%±10.9%)(q值依次为27.56、35.65、44.81;均P0.05),ERK1/2 mRNA、Beclin-1 mRNA和LC3 mRNA水平增加(1.83±0.01,2.82±0.06,1.34±0.04;1.46±0.02,1.76±0.02,1.35±0.02;1.52±0.04,1.89±0.01,1.31±0.04)(q值依次为42.99、60.66、48.08,71.26、72.46、49.50,48.49、82.40、41.18;均P0.05),p-ERK1/2、Beclin-1和LC3–Ⅱ蛋白水平增加(均P0.05);与SAH组比较,U0126组神经细胞死亡率增加(19.6±6.5%,36.2±7.7%,58.2±12.7%)(q值依次为9.59、10.43、14.66;均P0.05),U0126组ERK1/2 mRNA、Beclin-1 mRNA和LC3 mRNA表达降低(1.23±0.02,1.40±0.02,1.12±0.02;1.22±0.04,1.48±0.06,1.24±0.03;1.34±0.04,1.33±0.02,1.14±0.04)(q值依次为75.66、65.35、31.11,37.18、26.70、15.56,16.79、51.85、22.58;P0.05),p-ERK1/2、Beclin-1和LC3–Ⅱ蛋白水平降低(P0.05);与SAH组比较,Rap组神经细胞死亡率降低(9.1%±4.6%,18.8%±8.6%,28.21%±9.2%)(q值依次为11.86、12.54、16.74;均P0.05),Rap组Beclin-1mRNA和LC3mRNA增加(1.78±0.02,2.27±0.05,1.86±0.04;1.97±0.06,2.31±0.08,1.85±0.00)(q值依次为49.57、48.63、72.12、41.96、38.88、71.73;P0.05),Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白增加(P0.05),ERK1/2 mRNA变化差异无统计学意义(q值依次为2.63、2.65、2.83,P0.05),p-ERK1/2蛋白变化差异无统计学意义(P0.05)。结论 SAH后激活的ERK1/2激活,可促进Beclin-1和LC3-Ⅱ表达介导神经细胞丢失。     

葛根素对大鼠颅脑损伤的保护作用

目的 探讨葛根素对大鼠颅脑损伤（TBI）的保护作用及其机制。方法 将45只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、低剂量葛根素组、中剂量葛根素组和高剂量葛根素组,每组9只。采用Feeney氏自由落体法制备TBI大鼠模型。低、中、高剂量葛根素组腹腔注射葛根素,剂量分别为10、25、50 mg/kg。造模后1、3、7 d采用改良神经功能缺损评分（mNSS）评价神经功能。造模后7 d,干湿法测定脑组织含水量;ELISA法检测脑组织丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、过氧化氢酶（CAT）、核因子κB （NF-κB）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、caspase-3水平;免疫印迹法检测Bax、Bcl-2的表达。结果 葛根素能显著降低TBI大鼠mNSS（P<0.05）,显著减轻脑组织水肿（P<0.05）,显著降低脑组织MDA、SOD、GSH、CAT、NF-κB、ICAM-1、IL-6、TNF-α、caspase-3水平（P<0.05）,显著下调Bax表达而上调Bcl-2表达（P<0.05）。结论 葛根素可通过减轻颅脑水肿、抑制氧化应激及炎性反应以及调节Bax/Bcl-2表达从而发挥神经保护作用。     

3-硝基丙酸预处理对大鼠局灶性脑缺血Bcl-2和Bax mRNA表达的影响

目的探讨3-硝基丙酸(3-NPA)预处理对大鼠局灶性脑缺血半暗带Bc l-2和Bax mRNA表达的影响。方法将大鼠腹腔注射3-NPA 20 mg/kg,3 d后制作局灶性脑缺血再灌注模型;采用逆转录聚合酶链反应,观察3-NPA预处理对脑缺血再灌注1 h、6 h、12 h、24 h及48 h额顶部皮质Bc l-2和Bax mRNA表达的影响,并与假手术组和缺血再灌注组比较。结果与假手术组比较,缺血再灌注组和3-NPA预处理组各时间点Bc l-2和Bax mRNA表达极显著增强(均P<0.01);与缺血再灌注组比较,3-NPA预处理组各时间点Bc l-2mRNA表达显著增强(均P<0.05),再灌注12~48 h Bax mRNA的表达显著降低(均P<0.05)。结论增强Bc l-2的表达、抑制Bax的表达,可能是3-NPA预处理抑制细胞凋亡、诱导脑缺血耐受的机制之一。     

下调GABA受体基因对癫痫模型大鼠海马神经细胞凋亡的影响及作用机制

目的 探讨下调GABA受体基因对癫痫模型大鼠海马神经细胞凋亡的影响及作用机制。方法 选择30只SD健康雄性大鼠,建立癫痫模型,建模成功后分为模型组、上调组、下调组各10只; 进行细胞转染建立稳定转染的GABA上调组、GABA下调组; 检测3组大鼠海马神经细胞凋亡及PI3K、AKt、mTOR、Bax、Caspase-3蛋白表达水平。结果 上调组大鼠各时间点海马神经细胞凋亡率高于模型组(P<0.05); 下调组大鼠各时间点海马神经细胞凋亡率低于模型组(P<0.05); 下调组大鼠各时间点海马神经细胞凋亡率低于上调组(P<0.05)。上调组大鼠各时间点海马神经细胞增殖率、Bcl-2、p-PI3K、p-AKt、p-mTOR蛋白表达水平均低于模型组,而Bax、Caspase-3蛋白表达水平高于模型组(P<0.05); 下调组大鼠各时间点海马神经细胞增殖率、Bcl-2、p-PI3K、p-AKt、p-mTOR蛋白表达水平均高于模型组,而Bax、Caspase-3蛋白表达水平低于模型组(P<0.05); 下调组大鼠各时间点海马神经细胞增值率、Bcl-2、p-PI3K、p-AKt、p-mTOR蛋白表达水平均高于上调组,而Bax、Caspase-3蛋白表达水平低于上调组(P<0.05)。结论 下调GABA受体基因可能是通过调节PI3K/AKt/mTOR来作用于下游凋亡靶基因,最终抑制癫痫模型大鼠海马神经细胞凋亡     

芍药苷对蛛网膜下腔出血早期脑损伤大鼠NLRP3炎性小体表达的影响

目的 探究芍药苷(Paeoniflorin,PAE)对蛛网膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage,SAH)早期脑损伤大鼠NLR家族Pyrin域蛋白3(NLR family Pyrin domain containing 3,NLRP3)炎性小体表达的影响。方法 将60只大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(SAH)组、芍药苷低剂量(PAE-L)组、芍药苷高剂量(PAE-H)组; Sham组不刺破血管,其余各组采用血管内穿孔法构建SAH大鼠模型; PAE-L组、PAE-H组腹腔注射对应剂量的芍药苷(10、20 mg/kg),Sham组、SAH组腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液,2次/d,共3 d; 采用Garcia评分法评估大鼠神经功能; SAH评分法评估蛛网膜下腔出血情况; 脑组织含水量测定评估脑水肿; 伊文思蓝(Evans blue,EB)染色评估血脑屏障通透性; 苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色观察大鼠脑组织病理损伤; TdT介导的dUTP末端标记法(TdT-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)染色检测神经元凋亡; 免疫荧光染色检测NLRP3、离子钙结合衔接分子-1(Ionized calcium binding adapter molecule-1,Iba-1)和髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)表达水平; 免疫组化染色检测NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Cysteinyl aspartate-specific proteinase,Caspase-1)表达水平; Western Blot检测B细胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X的蛋白质(Bcl-2-Associated X protein,Bax)、Caspase-3,NLRP3,ASC,Caspase-1、白介素-1β(Interleukin-1 β,IL-1β)、IL-18、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、Iba-1和MPO表达水平。采用氧化血红蛋白(Oxygenated hemoglobin,OxyHb)构建原代皮层神经元体外SAH模型,并将其分为对照(Control)组、模型(OxyHb)组、芍药苷低剂量(PAE-L)组和芍药苷高剂量(PAE-H)组; Control组正常培养,OxyHb组、PAE-L组、PAE-H组神经元在含20 uM OxyHb的神经元培养基中培养,PAE-L组、PAE-H组分别加入对应剂量的芍药苷(10、20 uM); 各组神经元孵育48 h; 采用细胞计数试剂盒8(Cell counting kit 8,CCK8)法和TUNEL染色检测神经元活性及凋亡; Western Blot检测Bcl-2,Bax,Caspase-3的表达水平。结果 动物模型显示,Sham组大鼠脑组织未见积血,脑组织细胞结构清晰可辨; 与Sham组比较,SAH组脑组织可见大量积血,脑组织细胞排列松散,Garcia评分降低(P<0.05),SAH评分、脑含水量、EB渗出量升高(P<0.05),神经元TUNEL阳性细胞数增加(P<0.05),Bcl-2表达水平降低,Bax,Caspase 3,NLRP3,ASC,Caspase-1,IL-1β,IL-18,TNF-α表达水平升高(P<0.05),Iba-1和MPO阳性细胞数增加(P<0.05); 与SAH组比较,PAE-L组、PAE-H组脑组织积血减少,脑组织细胞状态趋于正常,Garcia评分升高(P<0.05),SAH评分、脑含水量、EB渗出量降低(P<0.05),神经元TUNEL阳性细胞数减少(P<0.05),Bcl-2表达水平升高,Bax,Caspase 3,NLRP3,ASC,Caspase-1,IL-1β,IL-18,TNF-α表达水平降低(P<0.05),Iba-1和MPO阳性细胞数减少(P<0.05)。细胞模型显示,Control组神经元形态正常; 与Control组比较,OxyHb组神经元肿胀,突触丧失,神经元活性降低,凋亡率增高(P<0.05),Bcl-2表达水平降低,Bax,Caspase 3表达水平升高(P<0.05); 与OxyHb组比较,PAE-L组、PAE-H组细胞损伤减轻,神经元活性升高,凋亡率降低(P<0.05),Bcl-2表达水平升高,Bax,Caspase 3表达水平降低(P<0.05)。结论 芍药苷能够减轻SAH后大鼠脑水肿、细胞凋亡和神经损伤,其机制可能为通过抑制NLRP3炎性小体的激活,并抑制小胶质细胞和中性粒细胞浸润,改善SAH后早期脑损伤。     

头孢曲松钠对大鼠蛛网膜下腔出血后认知功能的影响

目的 探讨头孢曲松钠（CEF）对大鼠蛛网膜下腔出血（SAH）后的认知功能的影响及其机制。方法 将68只成年SD大鼠随机分为4组:正常组（n=12）、对照组（n=24）、CEF低剂量治疗组（n=8）和CEF高剂量治疗组（n=24）。采用枕大池双次注血方法建立大鼠SAH模型。SAH后3 h经小脑延髓池缓慢注射100 μl CEF（高剂量组浓度为100 μmol/L,低剂量组浓度为50 μmol/L）,对照治疗组注射等体积生理盐水。采用Morris水迷宫检测各组动物学习记忆能力;Western blot检测各组大鼠海马 Caspase-3和兴奋性氨基酸转运体2（EAAT2）的表达水平。结果 与对照组相比,CEF治疗组SAH后动物的水迷宫实验中的逃逸时间显著减少（P<0.05）,大鼠海马组织中EAAT2的表达增加（P<0.05）,Caspase-3的表达减少（P<0.05）。结论 CEF对SAH后具有显著的神经保护作用,CEF治疗可能通过上调星形胶质细胞EAAT2的表达逆转SAH诱导的神经损伤。     

尼莫地平对大鼠蛛网膜下腔出血后认知障碍及海马Tau蛋白的影响

目的探讨尼莫地平（ND）对大鼠蛛网膜下腔出血（SAH）后认知功能障碍及海马Tau蛋白的影响。方法将40只SD大鼠随机分成正常组、假手术组、SAH组、ND组,每组10只;采用枕大池单次注血法建立SAH模型;造模后30 d进行Morris水迷宫试验评估大鼠认知功能,TUNEL法检测海马细胞凋亡,免疫组化染色法检测海马Tau蛋白和磷酸化Tau蛋白表达。结果 1认知功能：SAH组和ND组潜伏期较正常组和假手术组明显延长（P〈0.05）,而ND组较SAH组明显缩短（P〈0.05）;SAH组和ND组平台象限游泳时间百分比较正常组和假手术组明显缩小（P〈0.05）,而ND组较SAH组明显增大（P〈0.05）。2海马病理改变：SAH组和ND组细胞凋亡较正常组和假手术组明显升高（P〈0.05）,而ND组较较SAH组明显减少（P〈0.05）;SAH组和ND组海马Tau蛋白及磷酸化Tau蛋白表达水平均明显高于正常组和假手术组（P〈0.05）,而ND组明显低于SAH组（P〈0.05）。结论 ND可改善大鼠SAH后认知功能障碍,可能与抑制细胞凋亡及降低海马Tau蛋白和磷酸化Tau蛋白的表达有关。     

Neuroprotective and antihyperalgesic effects of orexin-A in rats with painful diabetic neuropathy

Aim of studyDiabetes mellitus is related to the development of neuronal tissue injury in different peripheral and central nervous system regions. A common complication of diabetes is painful diabetic peripheral neuropathy (PDN). We have studied the neuroprotective and anti-nociceptive properties of neuropeptide orexin-A in an animal experimental model of diabetic neuropathy.MethodsAll experiments were carried out on male Wistar rats (220-250 g). Diabetes was induced by a single intraperitoneal injection of 55 mg/kg (i.p.) streptozotocin (STZ). Orexin-A was chronically administrated into the implanted intrathecal catheter (0.6, 2.5 and 5 nM/L, daily, 4 weeks). The tail-flick and rotarod treadmill tests were used to evaluate the nociceptive threshold and motor coordination of these diabetic rats, respectively. Cleaved caspase-3, Bax, Bcl2 and the Bax/Bcl-2 ratio, as the biochemical indicators of apoptosis, were investigated in the dorsal half of the lumbar spinal cord tissue by western blotting method.ResultsTreatment of the diabetic rats with orexin-A (5 nM/L) significantly attenuated the hyperalgesia and motor deficit in diabetic animals. Furthermore, orexin-A (5 nM/L) administration suppressed pro-apoptotic cleaved caspase-3 and Bax proteins. Also, orexin-A (5 nM/L) reduced the expression of Bax/Bcl-2 ratio in spinal cord dorsal half of rats with PDN.ConclusionsAltogether our data suggest that the orexin-A has anti-hyperalgesic and neuroprotective effects in rats with PDN. Cellular mechanisms underlying the observed effects may, at least partially, be related to reducing the neuronal apoptosis.