他莫昔芬对子宫内膜癌细胞株增殖的影响

目的 探讨他莫昔芬(Tamoxifen,TAM)对人子宫内膜癌Ishikawa细胞体外增殖的影响.方法 应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法研究他莫昔芬对Ishikawa细胞增殖的影响.结果 TAM浓度为1×10-8～1×10-6mol/L时,呈剂量依赖性促进Ishikawa细胞的增殖,TAM浓度为1×10-5mol/L时,可抑制细胞的增殖.而且这种促进作用呈现剂量-时间-效应关系.结论 低浓度的TAM具有促进子宫内膜癌细胞株Ishikawa细胞增殖的作用.     

孕酮、他莫西芬对子宫内膜癌细胞增殖及雌激素受体相关受体表达的影响

目的探讨孕酮及他莫西芬（tamoxifen,TAM）对子宫内膜癌细胞生长的影响及其对雌激素受体相关受体（ERRα）表达的影响。方法体外培养子宫内膜癌Ishikawa细胞,采用MTT法检测不同浓度孕酮及TAM对子宫内膜癌细胞生长的影响,同时采用Western Blot方法检测细胞中ERRα蛋白水平的变化。结果不同浓度孕酮对Ishikawa细胞体外增殖具有抑制作用,呈剂量-时间依赖性。TAM对Ishikawa细胞体外增殖具有双向作用,在×10-9~×10-7mol/L TAM作用下促进细胞增殖,并呈剂量-时间依赖性;在×10-5mol/L TAM作用下抑制细胞增殖。×10-9~10-6mol/L TAM作用后下调细胞中ERRα蛋白表达,×10-5mol/L TAM及孕酮作用后上调ERRα蛋白表达。结论孕酮及高浓度他莫西芬（×10-5mol/L）可抑制子宫内膜癌细胞的增殖,这种抑制作用可能通过调控细胞中ERRα表达实现;而低浓度他莫西芬则促进子宫内膜癌细胞的增殖。     

小檗碱体外抗子宫内膜癌HEC-1A细胞的作用研究

目的研究小檗碱体外对非激素依赖型人子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、迁移、周期、凋亡的影响。方法 MTT法检测小檗碱对人子宫内膜癌HEC-1A[中分化腺癌,雌激素受体(ER)弱阳性,孕激素受体(PR)阴性]细胞株的抑制作用;倒置显微镜观察细胞形态变化;将实验组分成50、25、12.5 mg/L高、中、低剂量组。Transwell法测定细胞体外迁移能力,流式细胞仪观察细胞周期分布,Annexin V-FITC/PI双染检测HEC-1A细胞凋亡。结果小檗碱可显著抑制HEC-1A细胞生长,在100、50、25、12.5、6.25 mg/L浓度范围内呈剂量依赖性(P0.05)。小檗碱能明显改变细胞形态,小檗碱作用于子宫内膜癌HEC-1A细胞后,倒置显微镜下可见部分细胞体积改变,细胞内出现空泡,结构破坏,裂解成碎片,贴壁细胞减少,并散在排列。抑制子宫内膜癌HEC-1A细胞体外迁移的能力,高剂量组效果更佳,迁移细胞数明显减少。小檗碱低剂量组可以将HEC-1A细胞阻滞于G0/G1期。小檗碱作用24 h能提高HEC-1A细胞总凋亡率、早期凋亡率及晚期凋亡率,早期凋亡率更明显。结论小檗碱能够抑制非激素依赖型子宫内膜癌HEC-1A细胞株的增殖、迁移,并且促进HEC-1A细胞凋亡,低剂量小檗碱能将细胞阻滞在G0/G1期。     

番茄红素对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究番茄红素对人子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响。方法培养人子宫内膜癌Ishikawa细胞株并给予番茄红素进行干预,48h后,采用MTT法测定番茄红素对Ishikawa细胞增殖的影响,通过流式细胞术测定细胞凋亡率。结果与模型组比较,番茄红素组Ishikawa细胞增殖率显著降低,细胞凋亡率显著提高,差异均具有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论番茄红素具有抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖并促进其凋亡的作用。     

桂枝茯苓丸逆转lncRNA H19介导的miR-195-5p/SGK1通路治疗子宫内膜癌机制研究

目的探究桂枝茯苓丸对子宫内膜癌Ishikawa细胞的作用和调控机制。方法进行实时定量PCR(qRT-PCR)检测lncRNA H19在人正常子宫内膜细胞EMC和子宫内膜癌细胞HEC-1A、HEC-1B、Ishikawa细胞表达。向Ishikawa细胞转染sh-H19,利用细胞计数试剂盒8(CCK8)检测细胞生长活力,流式细胞术评估细胞凋亡率,qRT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western blot)分析自噬标志蛋白P62、Beclin1和LC3II的表达。采用双荧光素酶报告基因检测验证lncRNA H19与miR-195-5p及miR-195-5p与SGK1的靶向结合关系。将oe-H19转染到Ishikawa细胞,并将转染oeH19的Ishikawa细胞在桂枝茯苓丸含药培养液中培养。qRT-PCR检测lncRNA H19表达,CCK8、流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡,Western blot检测自噬相关蛋白P62、Beclin1和LC3II的表达。结果与人正常子宫内膜细胞EMC (1.00±0.09)比较,lncRNA H19在子宫内膜癌细胞HEC-1A(1.73±0.13)、HEC-1B(2.12±0.14)、Ishikawa(3.18±0.16)表达显著升高(P0.05或P0.01)。与对照组比较,下调lncRNA H19使子宫内膜癌细胞增殖活性显著降低[(45.00±3.95)%比(100.00±8.12)%,P0.05],细胞凋亡率明显升高[(10.06±1.12)%比(5.35±0.55)%,P0.05]。敲减lncRNA H19的子宫内膜癌细胞P62表达显著降低,Beclin1和LC3II表达显著上调。双荧光素酶报告基因检测和Western blot结果表明,lncRNA H19靶向负调控miR-195-5p表达,miR-195-5p靶向抑制SGK1表达。在挽救实验中,与oe-NC组(1.00±0.09)比较,oe-H19组(3.23±0.29)Ishikawa细胞lncRNA H19含量显著增高(P0.01),而桂枝茯苓丸能够逆转oe-H19转染引起的lncRNA H19水平上升(1.14±0.12)(P0.05)。oe-H19组[(240.00±15.89)%]细胞存活率较oe-NC组[(100.00±7.88)%]显著增高(P0.05),转染oe-H19后的Ishikawa细胞经桂枝茯苓丸含药培养液处理后,其存活率明显降低(92.00±8.47)%(P0.05)。oe-H19转染提高Ishikawa细胞P62表达,抑制Beclin1和LC3II表达,经桂枝茯苓丸含药培养液处理,Ishikawa细胞P62 Beclin1和LC3II表达部分恢复。结论桂枝茯苓丸具有抗子宫内膜癌活性,其作用机制可能是抑制lncRNA H19介导的miR-195-5p/SGK1通路,进而抑制子宫内膜癌细胞的增殖,促进细胞自噬。     

肿瘤坏死因子受体相关因子6高表达对子宫内膜癌细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响

目的:探究肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)高表达对子宫内膜癌细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响。方法:将Ishikawa细胞随机分为三组：对照组(子宫内膜癌细胞Ishikawa未转染)、NC组(子宫内膜癌细胞Ishikawa转染空载质粒)和TRAF6高表达组(子宫内膜癌细胞Ishikawa转染TRAF6过表达质粒);实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(WB)检测TRAF6 mRNA以及蛋白表达情况;Transwell实验、划痕实验以及裸鼠移植瘤实验检测细胞侵袭、迁移能力;WB检测上皮间质转化标志蛋白E型钙黏蛋白(E-cadherin)、闭合蛋白(Occludin)、N型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达水平。结果:相较于人子宫内膜上皮细胞,子宫内膜癌细胞Ishikawa中TRAF6 mRNA和蛋白表达显著降低(均P<0.05)。相较于对照组和NC组,TRAF6高表达组的TRAF6 mRNA水平和蛋白表达显著升高,细胞侵袭、迁移能力和Vimentin、N-cadherin蛋白表达显著降低,Occludin、E-cadherin...     

高迁移率族蛋白A1在子宫内膜癌中的表达及意义

目的 探讨高迁移率族蛋白A1(high mobility group protein A1,HMGA1)在子宫内膜癌细胞系AN3CA、ECC-1、Ishikawa以及子宫内膜癌组织、正常子宫内膜组织中的表达及意义.方法 采用半定量RT-PCR和Western Blot检测子宫内膜癌细胞系AN3CA、Ecc-1、Ishikawa以及21例子宫内膜癌组织(研究组)、18例正常子宫内膜组织(对照组)中HMGA1-mRNA与HMGA1蛋白的表达水平.结果 HM-GA1-mRNA与HMGA1蛋白在子宫内膜癌细胞系AN3CA、ECC-1、Ishikawa以及两组子宫内膜组织标本中均有不同程度的表达,研究组中HMGA1-mKNA与HMGA1蛋白的平均表达水平显著高于对照组(P＜0.05),并与手术一病理分期有关(P＜0.05),与子宫内膜癌组织的分化程度无关(P＞0.05).结论 HMGA1的过度表达可能参与了子宫内膜癌的发生和发展,在子宫内膜癌细胞的增殖与侵袭中可能发挥重要作用.     

番茄红素对子宫内膜癌Ishikawa细胞生长的抑制作用

目的研究番茄红素对人子宫内膜癌Ishikawa细胞生长的抑制作用。方法体外培养Ishikawa细胞株,给予番茄红素干预48h后测定各组Ishikawa细胞增殖抑制率并通过流式细胞术测定细胞凋亡率。结果番茄红素治疗组Ishikawa细胞增殖抑制率较模型组显著升高、细胞凋亡率显著提高(P0.05,P0.01)。结论番茄红素具有抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞生长的作用。     

反义寡核苷酸对子宫内膜癌细胞雌激素受体亚型α特异性调控的研究

目的:初步建立子宫内膜癌雌激素受体亚型α(estrogen receptor α, ERα)弱表达细胞模型,探讨ERα在子宫内膜癌发病机制中的作用,研究17β-雌二醇(17β-estradiol, E2)及三苯氧胺(tamoxifen, TAM)在子宫内膜癌发病过程中与ERα的关系。方法:设计针对ERα的反义寡核苷酸 (antisense oligodexyribonucleotides, AS-ODN),转染入子宫内膜癌HEC-1B细胞,Western blot 测定转染后细胞ERα的表达;检测转染反义寡核苷酸后E2和TAM对子宫内膜癌细胞生长影响的变化。结果: (1)针对ERα翻译启动区设计的反义寡核苷酸可以选择性下调ERα的表达。 (2) E2和TAM可以促进子宫内膜癌细胞系HEC-1B的生长。转染ERα-AS-ODN后可抑制E2对子宫内膜癌细胞HEC-1B的促生长作用,这种抑制作用以转染后的24,48及72 h尤为明显。转染ERα-AS-ODN可抑制TAM对子宫内膜癌细胞HEC-1B的促生长作用,这种抑制作用在转染后的48 h最为明显。结论: 初步建立了ERα弱表达的子宫内膜癌细胞模型。反义核酸技术可以作为一种有效的特异性下调子宫内膜癌细胞中ERα的实验手段。在HEC-1B细胞中,ERα抑制E2和TAM的促进子宫内膜癌细胞生长的作用。     

靶向干扰ARTN对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖能力的影响

目的:通过RNA干扰技术靶向抑制ARTN基因在子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达,探讨抑制ARTN基因对Ishikawa细胞增殖能力的影响.方法:体外培养子宫内膜癌Ishikawa细胞,以pGPU6/GFP/Neo为载体构建ARTN基因的短发夹RNA(pGPU6/GFP/Neo-ARTN shRNA)干扰质粒,利用脂质体法转染人子宫内膜癌Ishikawa细胞,荧光显微镜下观察转染效率,应用Western Blot法检测转染后细胞ARTN蛋白的表达情况,CCK法检测Ishikawa细胞的增殖活性.结果:pGPU6/GFP/Neo-ARTN shRNA干扰质粒成功转染Ishikawa细胞,转染效率为80％;转染后48h,干扰组Ishikawa细胞ARTN蛋白的表达水平明显低于阴性对照组和正常组(P<0.05);转染后48h、72h、96h,干扰组Ishikawa细胞的增殖活性明显低于阴性对照组和正常组(P<0.05).结论:靶向干扰ARTN基因可抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖能力.