二烯丙基二硫下调LIMK1抑制人结肠癌SW480细胞迁移与侵袭

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人结肠癌SW480细胞LIMK1表达及迁移、侵袭能力的影响,阐明其抑制肿瘤细胞迁移和侵袭的分子机制。方法 RT-PCR、Western blot、免疫细胞化学检测DADS对SW480细胞LIMK1表达的作用;划痕愈合和侵袭实验检测DADS对SW480细胞迁移、侵袭能力的影响。结果 RT-PCR结果显示,与对照组相比,DADS处理SW480细胞后其LIMK1 mR-NA表达明显下调。免疫细胞化学检测发现LIMK1蛋白在人结肠癌SW480细胞中高表达,DADS作用后LIMK1蛋白表达明显下调。Western blot检测显示,DADS呈时间浓度依赖性下调SW480细胞LIMK1蛋白表达。划痕愈合实验结果显示,随着DADS浓度增高,细胞划痕距离增宽,表明DADS呈浓度依赖性抑制SW480细胞迁移能力。Transwell侵袭实验结果表明,随着DADS浓度增高,细胞穿膜数逐渐减少,表明DADS呈浓度依赖性抑制SW480细胞侵袭能力。结论 DADS下调LIMK1表达可抑制人结肠癌SW480细胞迁移、侵袭,DADS抑制人结肠癌SW480细胞迁移、侵袭的分子机制可能与降低LIMK1蛋白表达水平有关。     

二烯丙基二硫下调LIMK1抑制人胃癌MGC803细胞迁移与侵袭

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人胃癌MGC803细胞迁移侵袭及LIMK1表达的影响。方法MTT、划痕愈合和侵袭实验分别检测DADS对MGC803细胞增殖、迁移与侵袭能力的作用;RT-PCR、Western blot与免疫细胞化学检测LIMK1表达。结果 MTT显示,30 mg.L-1DADS作用MGC803细胞24、48、72、96 h后,增殖抑制率分别为31.8%、66.1%、83.6%、89.2%,呈明显的时间依赖关系(P<0.05)。划痕实验显示,10、20、30、40、50 mg.L-1DADS分别作用MGC803细胞,划痕愈合明显慢于对照组,呈剂量依赖关系(P<0.05)。侵袭实验显示,10、20、30、40、50 mg.L-1DADS作用MGC803细胞24 h后,穿过基质胶的细胞数分别为(35.8±3.74)、(34.1±2.02)、(31.7±4.81)、(17.2±3.08)、(13.2±3.36)个,较对照组(39.5±2.99)个数明显减少,呈剂量依赖性(P<0.05)。RT-PCR显示,30 mg.L-1DADS与MGC803细胞作用48 h后,LIMIK1mRNA明显下调(P<0.05)。Western blot与免疫细胞化学检测显示,30 mg.L-1DADS作用MGC803细胞6、12、24、48h后,LIMK1蛋白的表达水平呈时间依赖性下降(P<0.05)。结论 DADS可抑制人胃癌MGC803细胞迁移与侵袭能力,其机制可能与下调LIMK1有关。     

二烯丙基二硫抑制SW480细胞系生长增殖的相关蛋白质分子鉴定

目的应用前期比较蛋白质组学筛出的部分差异表达蛋白质分子,进行进一步分析与鉴定。方法采用MTT法,观察不同浓度和作用时间DADS对SW480细胞的生长抑制作用;使用流式细胞仪,分析50 mg.L-1DADS对SW480细胞的周期分布的影响;运用Western blot方法,分析50 mg.L-1DADS处理SW480细胞系后泛肽和FKBP的表达水平。结果MTT法显示,DADS能明显抑制SW480细胞系生长增殖,呈浓度和时间依赖性,SW480细胞系经不同浓度DADS处理后,生长增殖速度明显减慢。流式细胞仪分析结果显示,50 mg.L-1DADS将SW480细胞阻滞在G2/M期。应用Western blot分析结果显示,50 mg.L-1DADS处理SW480细胞48 h,泛肽表达较对照组增强,而FKBP的表达明显降低,差异均为2倍以上。结论DADS抑制SW480细胞系生长增殖,可能与泛肽表达上调,FKBP表达下调,将细胞阻滞在G2/M期有关。     

山慈菇提取物对人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭能力的影响及其分子机制

目的 探讨山慈菇提取物对人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭能力的影响及其分子机制。方法 选择人结直肠癌SW480细胞株,分为空白对照组,不同浓度山慈菇组(200 mg·L^-1、400 mg·L^-1),5-Fu组(10μmol·L^-1),分别进行划痕实验、细胞增殖抑制实验、细胞迁移与侵袭实验。同时,通过细胞转染技术沉默SW480细胞中的AEG-1基因,采用Western blotting检测AEG-1基因沉默对SW480细胞AEG-1、E-cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响,并观察不同浓度山慈菇组各蛋白表达的变化。结果 不同浓度山慈菇组和5-Fu组SW480细胞的划痕愈合率、细胞迁移率及侵袭率均较空白对照组明显下降,而细胞生长增殖抑制率较空白对照组明显升高(P<0.05);山慈菇提取物具有与5-Fu相似的抑制结直肠癌细胞增殖和侵袭的效果,且与SW480细胞的迁移与侵袭率呈浓度依赖性,与细胞增殖抑制率呈浓度、时间依赖性;不同浓度山慈菇组和5-Fu组SW480细胞中AEG-1、MMP-2、MMP-9蛋...     

小白菊内酯通过下调NOX4抑制结肠癌SW480细胞增殖和侵袭

目的:探讨小白菊内酯对人结肠癌细胞SW480增殖及侵袭的影响,并探讨其抗肿瘤的可能作用机制。方法:以不同浓度(5,10,15μmol·L^-1)小白菊内酯作用于体外培养的人结肠癌SW480细胞,以环磷酰胺(30μmol·L^-1)作为阳性对照。采用CCK8法以及平板克隆法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移及侵袭;免疫印迹法(Western blotting)检测NOX4蛋白以及增殖相关蛋白[β-连环蛋白(β-catenin)、G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、侵袭相关蛋白金属基质蛋白酶2(MMP-2)、金属基质蛋白酶9(MMP-9)蛋白]表达情况。结果:随着小白菊内酯浓度的增加,对SW480细胞增殖抑制率明显升高,与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05);同一浓度作用下,随作用时间的延长,增殖抑制率显著升高(P<0.05),小白菊内酯10,15μmol·L^-1浓度组与阳性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);与空白对照组相比,小白菊内酯组克隆细胞形成数、侵袭、迁移细胞数、增殖相关蛋白β-catenin、Cyclin D1、侵袭迁移关蛋白MMP-2、MMP-9以及NOX4蛋白水平显著下降(P<0.05),且小白菊内酯各组间呈浓度依赖(P<0.05);与阳性对照组相比,小白菊内酯10,15μmol·L^-1浓度组以上各指标差异有统计学意义(P<0.05)。结论:小白菊内酯可能通过下调NOX4表达,抑制结肠癌细胞SW480细胞增殖、侵袭能力。     

二烯丙基三硫抑制Hela细胞的迁移和侵袭能力观察

目的研究二烯丙基三硫(diallyl trisulfide,DATS)对Hela细胞迁移能力和侵袭力的影响。方法用100μmol/L的DATS处理Hela细胞24h(以等量的PBS为对照),Transwell小室观察细胞体外迁移能力的变化,Matrigel和Transwell小室检测Hela细胞侵袭力的变化。结果 DATS处理组Hela细胞的迁移能力比对照组明显减弱(P<0.01),处理组Hela细胞的侵袭力较对照组也明显降低(P<0.01)。结论 DATS能够抑制Hela细胞的迁移能力和侵袭力。     

人结肠癌SW480细胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的建立人结肠癌SW480细胞移植瘤模型,研究其形态学及生物学特性。方法将处于对数生长期的人结肠癌SW480细胞接种于10只裸鼠右侧背部皮下,待瘤体生长至直径1～2 cm时处死裸鼠,取出肿瘤组织,将其磨碎并与培养基混合、过滤,滤液与基质胶混合,再将基质胶细胞悬液接种于30只裸鼠右侧背部皮下7,d后处死裸鼠,观察肿瘤大体特征,光镜及电镜下观察肿瘤病理学特征。结果接种SW480细胞的裸鼠于接种后4周有3只成瘤。接种基质胶细胞悬液的裸鼠在接种后7 d有28只成瘤,瘤体形状规则,肿瘤组织呈现典型癌变特征。结论本实验成功建立了人结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,该模型成瘤率高,瘤体形状规则,病理学改变与临床非常相似,为研究人结肠癌干预措施提供了较为理想的动物模型。     

二烯丙基二硫上调miR-22通过Wnt-1通路抑制人胃癌细胞增殖与迁移侵袭

目的探讨二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)上调miR-22是否通过Wnt-1通路抑制人胃癌MGC803细胞增殖与迁移侵袭。方法 MTT、细胞划痕实验、侵袭实验分别检测DADS与miR-22对MGC803细胞增殖与迁移侵袭的影响。在线预测软件寻找miR-22调控的靶基因,荧光素酶报告基因检测miR-22对Wnt-1 3'UTR荧光酶活性的影响。qRT-PCR检测Wnt-1mRNA表达变化。Western blot检测Wnt-1、β-catenin与TCF-4蛋白表达。结果MTT显示,DADS与miR-22可明显抑制MGC803细胞增殖(P<0.05)。划痕实验显示,DADS与miR-22可明显抑制MGC803细胞迁移,而miR-22+DADS更为明显(P<0.05)。侵袭实验显示,miR-22可抑制人胃癌MGC803细胞侵袭,而miR-22+DADS更为明显(P<0.05)。在线预测软件寻找miR-22调控的靶基因显示,Wnt-1可能是miR-22的靶基因,荧光素报告基因检测证实Wnt-1是miR-22直接调控的靶基因;qRT-PCR显示,DADS与miR-22能下调Wnt-1 mRNA表达,而miR-22+DADS更为明显(P<0.05)。Western blot显示,DADS与miR-22能下调Wnt-1、β-catenin与TCF-4蛋白表达,而miR-22+DADS尤为明显(P<0.05)。结论 DADS可上调miR-22通过Wnt-1通路明显抑制MGC803细胞增殖与迁移侵袭。     

MTA1沉默抑制鼻咽癌侵袭能力的体外研究

【摘要】目的探究MTA1基因敲除后对鼻咽癌细胞株5-8F细胞转移能力的影响。方法设计并构建针对 MTA1基因的RNAi片段,脂质体（Lipofectamine TM 2000）介导Si-MTA1-01（Si-MTA1-01组）和Si-MTA1-02（Si-MTA1-02组）感染5-8F细胞,同时设无义序列转染组（Si-ctr组）为对照。应用荧光定量PCR和蛋白印迹法检测转染后各组细胞的MTAl mRNA和蛋白表达;细胞划痕实验、基底膜侵袭实验和细胞黏附实验检测转染后5-8F细胞迁移和侵袭能力的变化,并进行比较分析。结果与Si-ctr组相比,Si-MTA1-01和Si-MTA1-02组MTA1mRNA及蛋白表达水平下降,穿膜细胞数减少,细胞黏附率增加（均P<0.05）,划痕实验显示细胞阻滞效果明显。结论沉默MTA1能明显减弱鼻咽癌细胞的迁移和侵袭能力,MTA1有望成为治疗鼻咽癌的有效靶点。     

MCL-1 siRNA通过线粒体凋亡途径部分逆转耐顺铂结肠癌细胞系SW480的耐药性

目的 探讨顺铂耐药结肠癌细胞的MCL-1表达水平与顺铂耐药性的关系。方法 用MTT法检测顺铂耐药结肠癌细胞系SW480(SW480-R)对顺铂的敏感性。通过检测siRNA下调SW480-R 细胞MCL-1的表达作用观察其对细胞耐药性的影响。Western blot试验检测SW480-R 细胞Bcl-2家族蛋白及线粒体来源促凋亡因子的表达水平。Annexin V/PI染色检测SW480-R 细胞的凋亡。结果 SW480-R细胞相比于常规SW480细胞对顺铂的敏感性显著下降,western blot结果表明SW480-R细胞的MCL-1水平显著上调而其他Bcl-2蛋白家族成员(Bcl-2,Bcl-xl,BIM,BAK,BAX)表达水平变化不明显。体外转染MCL-1 siRNA能逆转SW480-R细胞的耐药性,提高顺铂对SW480-R的杀伤活性。在SW480-R细胞中,MCL-1 siRNA能促进线粒体来源的促凋亡因子(细胞色素C、凋亡诱导因子、Smac/DIABLO)在顺铂治疗下从线粒体中释放到细胞质中,进而诱导耐药肿瘤细胞发生凋亡。结论 MCL-1的高表达可能是结肠癌细胞产生顺铂耐药性的重要机制,MCL-1基因沉默能通过线粒体凋亡途径逆转耐顺铂结肠癌细胞系SW480的耐药性。     

二烯丙基二硫对人结肠癌HT-29细胞G_1期的阻滞作用

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对人结肠癌HT-29细胞G1期的阻滞作用及分子机制。方法采用MTT、细胞计数法、流式细胞术和免疫细胞化学方法分析DADS对体外培养的HT-29细胞增殖抑制作用、细胞周期分布及细胞周期相关蛋白表达的影响。结果MTT法显示,60、120μmol.L-1DADS作用HT-29细胞24 h后,生长抑制率分别达23.1%、45.6%。细胞计数法表明,常规培养HT-29细胞群体倍增时间为22.58 h,60μmol.L-1DADS作用HT-29细胞后,其细胞群体倍增时间延长到31.20 h。流式细胞仪分析结果显示,60μmol.L-1DADS阻滞HT-29细胞在G1期,与对照组相比,可使G1期细胞增加约2倍,而120μmol.L-1DADS显著地将细胞阻滞在G2/M期。免疫细胞化学分析表明在G1期阻滞同时有p21W af1蛋白表达上调,Cyc lin E、C-myc蛋白表达下降。结论低剂量DADS对HT-29细胞的抑制增殖作用可能与G1期阻滞有关,DADS对HT-29细胞G1期阻滞的分子机制可能与调节p21W af1、Cyc lin E、C-myc表达相关。     

二烯丙基二硫抑制人胃癌SGC7901细胞侵袭及相关机制

目的探讨二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人胃癌SGC7901细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法划痕愈合和侵袭实验检测DADS对SGC7901细胞迁移与侵袭能力的影响;RT-PCR、Western blot检测DADS作用SGC7901细胞后MMP-9和TIMP-3表达。结果划痕实验结果显示,15 mg.L-1DADS处理SGC7901细胞12 h、24 h后,较未处理组划痕距离明显增加(P<0.05),表明DADS可抑制SGC7901细胞迁移。Transwell实验结果显示,15 mg.L-1DADS处理SGC7901细胞12 h与24 h后,穿膜细胞数分别为(31.9±0.46)、(23.5±0.52)个,较未处理组的(51.6±0.68)、(41.3±0.72)个明显减少(P<0.05),表明DADS可抑制SGC7901细胞侵袭能力。RT-PCR结果显示,15 mg.L-1DADS处理SGC7901细胞12 h与24 h后,MMP-9 mRNA表达明显下调(P<0.05),而TIMP-3 mRNA表达明显上调(P<0.05)。Western blot结果显示,15 mg.L-1DADS处理SGC7901细胞12 h、24 h、48 h后,MMP-9蛋白表达明显降低(P<0.05),而TIMP-3蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论 DADS可抑制人胃癌SGC7901细胞迁移与侵袭能力,其机制可能与下调MMP-9和上调TIMP-3有关。     

二烯丙基二硫诱导人胃癌MGC803细胞凋亡及细胞周期阻滞的研究

目的　研究二烯丙基二硫 (diallyldisulfide ,DADS)诱导人胃癌MGC80 3细胞凋亡和对细胞周期的影响。方法　采用MTT法、丫啶橙染色、流式细胞仪等方法检测DADS对MGC80 3的增殖抑制 ,诱导凋亡以及细胞周期分布的影响。结果　MTT法显示 ,DADS对MGC80 3细胞有明显的抑制增殖作用 ,2 0、3 0、40mg·L- 1DADS作用MGC80 3细胞72h后 ,生长抑制率分别达 2 5 7%、58 6%、69% ;经 3 0mg·L- 1DADS作用MGC80 3细胞 48h后 ,用丫啶橙染色法观察到不同阶段的凋亡细胞形态学改变 ;流式细胞仪分析结果显示 ,DADS对MGC80 3细胞有明显的G2 /M期阻滞作用 ,3 0mg·L- 1DADS作用MGC80 3细胞 2 4h ,与对照组相比 ,可使G2 /M期细胞增加到 4倍多 ,且DADS呈时间依赖性诱导MGC80 3细胞凋亡 ,3 0mg·L- 1DADS作用MGC80 3细胞48h ,凋亡率从对照组的 3 5%升高到 3 9 5%。结论　DADS引起MGC80 3细胞G2 /M期阻滞并诱导凋亡可能是其抗肿瘤的机制之一     

建立结肠癌SW480细胞原位移植瘤模型的实验研究

目的建立接近于临床表现的结肠癌动物模型,以便了解结肠癌生长及形态学变化。方法选SPF级Balb／c品系裸鼠,皮下接种SW480细胞,4周后取出瘤体,种植于裸鼠结肠系膜根部,建立结肠癌外科原位手术移植动物模型,4周后取出结肠原位肿瘤,应用病理学方法对结肠癌原位移植动物模型进行评价和鉴定。结果5只裸鼠皮下接种SW480细胞后4周,皮下成瘤3只;10只裸鼠结肠原位移植肿瘤,8只结肠成瘤,显微镜下可见肿瘤浸润肠壁。结论实验成功建立了结肠癌SW480细胞动物结肠原位移植瘤模型,为结肠癌相关实验提供临床研究动物模型。     

Diallyl sulfide,diallyl disulfide,and diallyl trisulfide inhibit migration and invasion in human colon cancer colo 205 cells through the inhibition of matrix metalloproteinase‐2, ‐7, and ‐9 expressions

Diallyl sulfide (DAS), diallyl disulfide (DADS), and diallyl trisulfide (DATS) are major organosulfur compounds exiting in garlic (Allium sativum). These compounds are reported to exhibit various pharmacological properties such as antibacteria, antiangiogenesis, anticancer, and anticoagulation, and they also induce cytotoxicity and induction of apoptosis in human cancer cells. Although these compounds show wide spectrum of biological activities, there are no reports to show that DAS, DADS, and DATS affected migration and invasion of human colon cancer cells, and their exact molecular mechanisms are not well investigated. Therefore, the purpose of this study was to determine whether DAS, DADS, and DATS affected the invasion and migration abilities of colo 205 human colon cancer cells. The results indicate that DAS, DADS, and DATS at 10 and 25 μM inhibited the migration and invasion of colo 205 cells in the order of DATS < DADS < DAS. DATS is the highest for inhibition of migration and invasion of colo 205 cells. DAS, DADS, and DATS induce downregulation expression of PI3K, Ras, MEKK3, MKK7, ERK1/2, JNK1/2, and p38 and then lead to the inhibition of MMP‐2, ‐7, and ‐9. DAS, DADS, and DATS inhibited NF‐κB and COX‐2 for leading to the inhibition of cell proliferation. Taken together, these results demonstrated that application of DAS, DADS, and DATS might serve as potential antimetastatic drugs. © 2011 Wiley Periodicals, Inc. Environ Toxicol 28: 479–488, 2013.