蓝萼甲素的药理活性及其机制和毒理作用的研究进展

蓝萼甲素(glaucocalyxin A,GLA)是一种具有对映15-氧-16贝壳杉烯(ent-15-oxo-16-kaurene)骨架结构的二萜类化合物。其具有心血管保护、内皮保护、抗凝血、抗乙肝病毒、抗肿瘤、抑菌、抗炎、耐缺氧、免疫抑制及调节钙离子浓度等多种药理作用,并且有很高的体内安全性。民间常用蓝萼香茶菜治疗肝炎、胃炎、乳腺炎、腹痛、关节痛等疾病,临床上蓝萼香茶菜主要用于治疗冠心病、心绞痛、脑供血不足等缺血、缺氧性心脑血管疾病。本研究将对蓝萼甲素的药理作用及其机制和毒理学作用做一总结。     

蓝萼甲素对人宫颈鳞癌SiHa细胞株生长抑制作用

<正>蓝萼甲素(Glaucocalyxin A)是由唇形科香茶菜属植物香茶菜Rabdosia amethystoieds(Benth)Ham中分离提取出的二萜化合物[1]。研究证明不同浓度的蓝萼甲素可抑制某些肿瘤细胞的增殖,如肝癌BEL-7402细胞株[2]、卵巢癌HO8910细胞株[3],然而,蓝萼甲素抑制肿瘤细胞增殖的机     

蓝萼甲素在体外对DNA, RNA和蛋白质生物合成的影响

本实验采用~3H—TdR、~2H—udR、~3H—Leucine在体外掺入S_(180)腹水癌细胞的放射性同位素示踪法,探讨蓝萼甲素对DNA、RNA和蛋白质合成的抑制作用,抑制程度呈剂量相关性。对DNA、RNA的抑制发生较早,恢复较快,对蛋白质作用持久、且均为可逆性抑制。蓝萼甲素(glaucocclyxinA)为唇形科,香茶菜属植物蓝萼香茶菜(Isodom glaucocalyx kudo)的一种二萜类成份,经药理实验证明:蓝萼甲素具有细胞毒作用,对艾氏腹水癌有一定抑制作用,体内对S_(180)实体瘤实验抑制率达30.4％(10mg/kg×7d),     

蓝萼香茶菜药材的质量标准研究

目的建立蓝萼香茶菜的质量标准。方法以咖啡酸为对照品,采用薄层色谱法对药材进行定性鉴别;采用高效液相色谱法对芦丁、齐墩果酸和熊果酸进行含量测定;并根据2015年版中国药典对蓝萼香茶菜药材的水分、总灰分、酸不溶性灰分进行定量测定。结果 TLC分离度良好,斑点清晰。芦丁、齐墩果酸及熊果酸分别在0.1838~2.7570 mg·mL~(-1)、0.009 98~0.149 70 mg·mL~(-1)及0.01132~0.169 80 mg·mL~(-1)与峰面积线性关系良好,含量分别不得少于0.2%、0.05%及0.08%。7批蓝萼香茶菜样品的水分测定结果为9.93%~10.81%,总灰分测定结果为8.17%~9.45%,酸不溶性灰分测定结果为2.87%~3.61%。结论上述方法简便,高效,专属性强,可有效控制蓝萼香茶菜药材的质量。     

蓝萼香茶菜化学成分和生物活性研究近况

蓝萼香茶菜作为1种民间抗炎草药,已被广泛应用于多种炎症和肿瘤疾病的治疗。从蓝萼香茶菜中提取的萜类、黄酮、甾体等化合物具有多种生物活性,包括抗炎、抗肿瘤、保护心血管等。综述了国内外对蓝萼香茶菜化学成分和生物活性研究近况。     

蓝萼香茶菜中蓝萼甲素提取工艺研究

目的：考察蓝萼香茶菜中蓝萼甲素提取工艺。方法：采用L9（34）正交试验法优选甲醇回流提取时间、提取次数、固/液比;采用HPLC测定蓝萼甲素含质量。结果：蓝萼香茶菜甲醇提取的最佳工艺条件为（A2B2C3）,即提取时间为1.5h,回流提取2次,固/液比为1：15时,测得的蓝萼甲素含质量最高。结论：该法提取与测定蓝萼甲素含质量准确,数据可靠,适用于蓝萼香茶菜中蓝萼甲素含质量测定。     

蓝萼甲素在大鼠体内外的代谢转化

目的研究蓝萼甲素在大鼠体内外的代谢转化。方法采用大鼠肝微粒体体外温孵法,研究对蓝萼甲素的代谢转化。采用RP-HPLC法同时分离检测蓝萼甲素及其体外代谢产物。结果用液-液萃取、制备HPLC法,从大鼠胆汁中分离了一个代谢产物,经质谱分析推测结构为羟基化蓝萼甲素,并采用HPLC-MS连用,分析了肝微粒体体外温孵样品中的代谢产物,推测了蓝萼甲素的可能代谢转化途径。结论蓝萼甲素在大鼠肝微粒体和胆汁中可被代谢转化,主要代谢产物为羟基化蓝萼甲素。     

抗肿瘤药物新靶点半胱天冬酶-10

细胞凋亡过程是依赖天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白酶（半胱天冬酶）产生的级联反应。半胱天冬酶-10是凋亡途径中关键的启动子，能够通过寡聚而自身切割活化，并能激活下游其他半胱天冬酶，参与细胞凋亡过程。半胱天冬酶-10基因突变及其它表达异常可导致细胞凋亡和增殖失调，从而参与某些肿瘤和免疫系统疾病的发生和发展。半胱天冬酶-10有可能是抗肿瘤药物的新靶点。     

拓扑替康对肺癌细胞生长周期的影响及诱导凋亡的作用机制

目的　研究拓扑替康 (topotecan ,TPT)对人肺癌SPC A 1细胞生长周期的影响及诱导凋亡的作用 ,并探讨Caspase 3及Bcl 2在此过程中的作用。 方法　体外培养肺癌细胞 ,分为对照组 (未处理组 )、TPT(5、10、15和 2 0mg·L-1)组、半胱天冬酶 3 (Caspase 3 )特异性拮抗剂Ac DEVD CHO +TPT组 ,加药后培养 2 4h ,TUNEL法观察肺癌细胞凋亡形态学特征 ;流式细胞仪观察细胞生长周期变化并检测凋亡率和肺癌细胞Bcl 2蛋白的表达。结果　TPT (5mg·L-1)处理细胞 2 4h ,流式细胞仪未检测到凋亡峰 ,随着TPT浓度增大 ,凋亡率显著增高 ,各浓度组间差异具有显著性 (P<0 0 1) ;TUNEL及透射电镜检测到典型的凋亡细胞形态学特征 ,凋亡细胞DNA呈梯状电泳 ;流式细胞仪检测到细胞周期发生改变 ,G1期细胞较对照组增多 (P <0 0 1) ,S期细胞减少 (P <0 0 1) ;TPT(2 0mg·L-1)处理细胞后肺癌细胞凋亡率为 11 9%± 2 6% ,高于对照组细胞 (P <0 0 1) ;Bcl 2蛋白阳性表达细胞率为 7 9%± 1 2 % ,较对照组 (44 7%±7 1% )降低 (P <0 0 1) ;Ac EDVD CHO (5 0 μmol·L-1)和TPT(2 0mg·L-1)共同处理细胞 2 4h其凋亡率为 6 1%±1 8% ,较单纯TPT作用组降低 (P <0 0 1) ;Bcl 2蛋白阳性表达率为 3 3 4%± 5 2 % ,较单纯TPT作用组增高     

反式白藜芦醇对Aβ_(25-35)损伤大鼠海马旁回caspase-8、caspase-9的影响

目的观察反式白藜芦醇(TR)对β-淀粉样肽(Aβ25-35)损伤大鼠的海马旁回的作用。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、TR高、低剂量组、多奈哌齐对照组。在大鼠海马内注射Aβ25-35后分别灌胃给相应药物10 d,采用TUNEL法检测5组大鼠海马细胞及周围皮质凋亡情况;采用real time RT-PCR法检测5组大鼠海马及皮质caspase-8、caspase-9 mRNA表达。结果大鼠海马及周边脑组织细胞凋亡情况,模型组与其他各组差异显著(P<0.01),说明造模成功。TR对caspases-8、caspase-9表达水平的下调非常显著(P<0.01),低剂量组与高剂量组之间也有统计学差异(P<0.05)。结论 TR对损伤的大鼠海马周围皮层神经元有保护作用,其机制可能部分与下调caspase-8、caspase-9 mRNA表达有关。     

Pyroptosis: A Common Feature of Immune Cells of Haemodialysis Patients

NLRP-3 inflammasome activation can result in interleukin-1β (IL-1β) release and inflammatory cell death (pyroptosis). Caspase-1 is able to trigger both processes. However, other caspases, caspase-4, -5 and -8, are believed to initiate pyroptosis without affecting IL-1 secretion. In this study, we evaluated two cardiovascular risk groups, haemodialysis patients (HD) and patients with intact kidney function but high blood pressure (BP), to analyse the mechanisms driving pyroptosis. Twenty HD were age-, gender- and diabetes-matched to BP. We found a common pyroptotic pattern in both patient groups, at which pyroptosis rates but not IL-1 β levels were significantly higher in monocytes (HD vs. BP: p < 0.05), granulocytes (p < 0.01) and lymphocytes (p < 0.01) of HD patients. As uremic toxins are drivers of inflammation and regulated cell death, we applied a monocyte- and macrophage-like THP-1 model system to demonstrate that the protein-bound uremic toxin indoxyl sulfate (IS) is an inducer of pyroptotic cell death, particularly engaging caspase-4/caspase-5 and to a lesser extent caspase-8 and caspase-1. These data suggest that the uremic toxin IS can mediate pyroptosis in HD patients and the inflammatory caspase-4 and/or caspase-5 contribute to pyroptosis rates to a higher extent in comparison to caspase-1.     

大肠癌细胞生长抑素的表达与Fas及其信号系统的关系

目的研究大肠癌细胞生长抑素的表达与Fas及其信号系统的关系。方法采用免疫组化方法检测60例大肠癌细胞的生长抑素及Fas,caspase-8,caspase-3的表达情况,并分析它们之间的关系。结果在60例大肠癌细胞中,Fas,caspase-8,caspase-3在生长抑素高表达组中的表达均比低表达组高。结论生长抑素在大肠癌细胞中可能是通过提高Fas受体的表达或增加其信号系统的敏感性来促进癌细胞的凋亡。     

蓝萼甲素对宫颈癌HeLa细胞的作用及其相关机制研究

目的观察蓝萼甲素对宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用,探讨其诱导凋亡的机制。方法采用体外细胞培养方法,以不同浓度蓝萼甲素作用于HeLa细胞,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞的存活率;透射电镜观察细胞的形态学变化;流式细胞仪(AnnexinV-FITC)检测细胞凋亡率的变化;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达情况。结果与对照组相比,蓝萼甲素对HeLa细胞有增殖抑制作用,呈剂量、时间依赖趋势;Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上调,Caspase-3、Caspase-9蛋白表达上调。结论蓝萼甲素对宫颈癌HeLa细胞有增殖抑制及诱导凋亡的作用,其分子机制可能与线粒体信号通路有关。     

白藜芦醇对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的观察白藜芦醇对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法用MTT法检测白藜芦醇对SMMC-7721细胞增殖影响的量效与时效关系;应用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率;比色法测定caspase-3酶活性。结果白藜芦醇（50、100、200μmol·L^-1）处理SMMC-7721细胞48h,呈浓度依赖性抑制SMMC-7721细胞增殖且诱导其凋亡;100μmol·L^-1白藜芦醇处理细胞24、48或72h显著抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡,且呈时间依赖性。白藜芦醇（50、100、200μmol·L^-1）处理SMMC-7721细胞48h,呈浓度依赖性增加SMMC-7721细胞caspase-3活性。结论白藜芦醇可抑制人肝癌细胞株洲C-7721的增殖,诱导细胞凋亡,其机制与增强细胞内caspase-3活性有关。     

阿托伐他汀对谷氨酸引起大鼠神经元损伤保护作用机制的研究

目的探讨阿托伐他汀对谷氨酸所致培养大鼠皮层神经元损伤保护作用的机制。方法 MTT法测定细胞存活率;Hoechst33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变;Western blot检测活性的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)和钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达水平。结果谷氨酸(100μmol.L-1)可使神经元细胞存活率下降,细胞凋亡百分比明显增加,活性的caspase-3和钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达增加。阿托伐他汀明显对抗谷氨酸诱导的神经元存活率下降及细胞凋亡百分比增加,同时明显抑制活性的caspase-3和钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达增加。磷酯酰肌醇-3激酶(phos-phoinositide3-kinase,PI3K)/磷酸化蛋白激酶B(protein ki-nase B,Akt)通路特异性阻断剂LY294002(10μmol.L-1)能抑制阿托伐他汀对抗谷氨酸引起神经元细胞存活率下降,细胞凋亡百分比增加及活性caspase-3和钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达增加的作用。结论阿托伐他汀能够明显对抗谷氨酸引起的皮层神经元损伤作用,这种作用可能与激活PI3K/Akt信号转导通路有关。     

米诺环素对缺血 再灌注损伤皮层的保护作用及对caspase 3活性与表达的影响

目的探讨米诺环素对脑缺血 再灌注损伤的保护机制。方法利用线栓法制备大脑中动脉栓塞局灶性脑缺血模型,根据Zea Longa神经缺损体征评分法评价综合体征,流式细胞仪测定凋亡率,Western Blot等检测缺血 再灌注损伤后,腹腔给予米诺环素对大鼠皮层caspase 3活性和表达的影响。结果米诺环素能显著改善缺血 再灌注损伤大鼠的神经缺乏体征及凋亡率（P＜0.05）,同时能抑制皮层caspase 3活性和表达（P＜0.05）。结论米诺环素可能通过调节caspase 3活性和表达,从而发挥抗缺血 再灌注损伤作用。     

安神补脑液含药血清对咖啡因致PC12细胞损伤的神经保护作用

目的:运用中药血清药理学方法探讨安神补脑液含药血清对咖啡因致PC12细胞损伤的保护作用及机制。方法:采用MTT法检测细胞存活率,以荧光显微镜观察细胞核的形态变化,用荧光分光光度仪定量分析细胞凋亡的关键酶caspase-3的活性。结果:安神补脑液含药血清可以提高咖啡因损伤PC12细胞的存活率,抑制咖啡因诱导的PC12细胞的早期凋亡,明显降低细胞内caspase-3活性。结论:安神补脑液健脑安神的作用机制可能与抑制神经细胞的凋亡有关。     

蚤休醇提物对H_2O_2损伤的ECV304细胞的细胞周期与凋亡的影响

目的制备中药蚤休醇提物,研究其对H2O2诱导的脐静脉内皮细胞(ECV304细胞)损伤的保护作用及其机制。方法体外培养ECV304细胞,建立氧化损伤的细胞模型,然后分为五个实验处理组:①正常对照组;②氧化损伤组;③高浓度蚤休醇提物(EFB500ng.L-1)组;④中浓度蚤休醇提物(50ng.L-1)组,⑤低浓度(5ng.L-1)组。应用流式细胞仪AnnexinV/PI染色检测该药物干预H2O2氧化损伤前后的细胞凋亡、PI染色检测细胞周期与凋亡的关系;RT-PCR检测各实验组caspase-3mRNA表达的变化。结果采用流式细胞仪PI染色检测结果对细胞周期进行分析,表明损伤作用于ECV-304细胞后,细胞在G0/G1期的数目增多,在S期的数目减少,同时流式细胞仪检测可见亚二倍体峰,而蚤休醇提物预处理以后,S期细胞数明显增多。流式细胞仪AnnexinV/PI检测方法显示,损伤组的早期与晚期凋亡率之和最高,预处理后细胞的早期与晚期凋亡率之和降低。caspase-3mRNA水平在各实验组的表达显示损伤组与内参照相比的灰度值最大,经过预处理之后其值明显下降(P<0.01)。结论蚤休醇提物可以保护H2O2造成的ECV304细胞的氧化损伤,是通过保护细胞周期正常进行、抑制凋亡蛋白caspase-3介导的凋亡信号转导通路实现的。     

caspase-8在卡铂诱导人食管鳞癌细胞凋亡中的作用研究

目的：探讨caspase-8在卡铂诱导人食管鳞癌细胞凋亡中的作用。方法：流式细胞术分别检测对照组及经卡铂处理的实验组人食管鳞癌细胞株Eca-109、TE-1、TE-10的凋亡率,同时采用RT-PCR及westernblotting检测各组细胞表达caspase-8mRNA及蛋白的变化情况。结果：用终浓度40μg/ml的卡铂可诱导人食管鳞癌细胞株Eca-109、TE-1、TE-10凋亡,同时发现经卡铂处理组Eca-109、TE-1、TE-10细胞表达caspase-8mRNA及蛋白水平均呈显著升高趋势。结论：卡铂可增加caspase-8在食管鳞癌细胞中的表达,从而诱导人食管鳞癌细胞凋亡,这可能是卡铂治疗食管鳞癌的分子机制之一。