RT-PCR定量检测汉坦病毒RNA及在临床诊断中的价值

目的建立敏感特异的检测肾综合征出血热(HFRS)病人血清中汉坦病毒RNA的定量RT-PCR方法,探讨HFRS患者血清中病毒RNA持续时间,水平及其病情严重程度的关系。方法应用套式RT-PCR扩增引物,自行设计和制备标准品获得标准曲线,使用实时荧光定量PCR技术检测了HFRS(SEO型)血清中的汉坦病毒的载量。结果14例HFRS病人血清中,SEO RNA阳性11例,SEO型病人的病毒载量一般可达102~104copies/ml。其中2例发病第8天,2例第9天的病人血清PCR结果仍为阳性。结论:我们采用的实时荧光定量PCR方法可很好的反映HFRS病人血清中汉坦病毒RNA含量,HFRS病人病毒血症持续时间可超过1周,血清中RNA水平与病情严重程度有关。     

血管紧张素转移酶mRNA在胃癌中的表达

目的 定量分析血管紧张素转移酶(ACE)mRNA在胃癌组织和癌旁组织的表达及其临床意义.方法 采用实时荧光定量PCR检测34例胃癌组织及对应癌旁组织ACE mRNA表达水平,分析其与分化程度、临床分期和转移状态等临床病理特征的相关性.结果 ACE mRNA在胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P=0.003).胃癌组织ACE mRNA表达与分化程度、临床分期和转移状态等临床病理特征无相关性(P＞0.05).结论 ACE mRNA在胃癌组织中呈明显高表达,提示其与胃癌的发病密切相关.     

CD44v17在胃癌组织中的表达及其与临床生物学特性之间的关系

目的 探讨一种新的CD44变异体（CD44v17）在胃癌组织中的表达及其与临床生物学特性之间的关系.方法根据本实验室在MCF-7／Adr中新发现的1种CD44剪切拼接变异体CD44v17设计特异性引物,应用SYBR Green I荧光染料,采用实时PCR法检测87例胃癌组织及相应癌旁组织CD44v17 Mrna的表达,根据标准曲线计算CD44v17mRNA的表达量,分析CD44v17mRNA表达与胃癌临床生物学特性之间的关系.结果胃癌组织CD44v17 Mrna表达明显高于相应癌旁正常组织（P〈0.05）;肿瘤〉5 cm组CD44v17 Mrna表达与肿瘤≤5 cm组表达比较差异无显著性（P〉0.05）;未分化腺癌组表达明显高于乳头状腺癌及管状腺癌组（P〈0.05）,乳头状腺癌组CD44v17 Mrna表达与管状腺癌组比较差异无显著性（P〉0.05）;肿瘤累及浆膜及浆膜外组CD44v17 Mrna表达显著高于侵及黏膜、黏膜下层及肌层组（P〈0.05）,而肿瘤侵及黏膜及黏膜下层组的CD44v17 Mrna表达与侵犯肌层组表达比较差异无显著性（P〉0.05）.淋巴结转移组CD44v17 Mrna表达明显高于淋巴结无转移组（P〈0.05）;有肝脏转移组CD44v17 Mrna表达显著高于无肝脏转移组（P〈0.05）.结论CD44v17 Mrna在胃癌组织中高表达,可能与胃癌的侵袭、转移及预后有关.     

趋化因子CXCL5在胃癌组织中的表达

目的研究趋化因子生长调节基因(CXCL5)在胃癌组织中的表达情况及临床意义。方法应用实时荧光定量PCR技术及免疫组织化学方法检测胃癌组织和胃正常组织中CXCL5表达情况。结果 CXCL5在胃癌组织中的表达高于胃正常组织(P<0.05)。结论 CXCL5是胃癌发生、发展过程中的重要成分,与胃癌新生血管形成、基因调节通路以及胃癌的转移密切相关。     

实时荧光定量PCR技术检测肺炎衣原体的诊断价值

目的探讨实时荧光定量PCR技术检测肺炎衣原体的诊断价值。方法对呼吸道感染的186例患者的痰液分别采用实时荧光定量PCR技术和基因测序检测,以评价实时荧光定量PCR技术检测肺炎衣原体感染的准确性。结果实时荧光定量PCR检测肺炎衣原体的灵敏度为100.0%,特异度为93.1%,阳性预期值为80.8%,阴性预期值为100.0%,准确率为94.6%。结论实时荧光定量PCR技术检测肺炎衣原体具有较高的可靠性,适用于临床快速诊断肺炎衣原体感染的相关疾病。     

miR-18a在老年胃癌患者血清中的表达及意义

目的探讨胃癌患者血清microRNA-18a表达变化及其临床诊断意义。方法采用实时荧光定量PCR检测52例老年胃癌患者和33例健康体检者血清mi R-18a表达水平。通过分析受试者工作特征曲线(ROC)判断mi R-18a表达水平在胃癌诊断中的灵敏度和特异度。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测患者血清肿瘤标记物水平。结果胃癌患者血清mi R-18a较健康对照组高(P0.05)。血清mi R-18a水平与患者年龄、性别无关(P0.05),与分化程度、临床分期、浸润深度和淋巴结转移明显相关(P0.05或P0.01)。ROC分析结果显示最佳的mi R-18a相对表达量的临界值为2.77,诊断灵敏度77.2%,特异度82.8%,ROC曲线下面积为0.791。血清mi R-18a水平与胃癌相关抗原MG7-Ag明显正相关,与糖抗原(CA)-72-4、CA-50和甲胎蛋白(AFP)正相关,与癌胚抗原(CEA)无明显相关性。结论 mi R-18a在胃癌患者血清中水平升高,作为新的血清学指标在胃癌筛查诊断中有重要参考价值。     

MACC-1 mRNA和c-Met mRNA在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的检测胃癌组织中结肠癌转移相关因子-1（MACC-1）mRNA和肝细胞生长因子受体原癌基因c-Met mRNA的分子表达水平,并探讨其与胃癌临床病理生物学行为的关系以及它们之间的相关性。方法采用实时荧光定量PCR（QT-PCR）技术检测45例胃癌及其癌旁组织标本中MACC-1 mRNA和c-Met mRNA的表达水平。结果 MACC-1 mRNA和c-Met mRNA的表达与组织学分级、浸润深度、临床分期、淋巴结转移显著相关（P〈0.05）,与年龄、肿瘤大小无关（P〉0.05）。且两者表达呈正相关（r=0.366,P〈0.05）。结论 QT-PCR技术可对胃癌组织中的MACC-1 mRNA和c-Met mRNA表达进行定量检测;MACC-1 mRNA和c-Met mRNA的高表达与胃癌的侵袭转移有关,可作为胃癌腹膜转移的预后评估因子。     

荧光定量PCR法在胃癌血清miR-21检测中的应用

目的:探讨miR-21对胃癌无创性诊断以及对手术效果的评判.方法:选取5类人员胃肠消化系统样本血清,通过荧光定量PCR方法对miR-21表达情况进行检测,对照分析正常体检人员和胃窦溃疡患者、胃窦炎性息肉患者、肠上皮化生人员以及胃癌患者的血清样本中分别与配对的胃组织miR-21表达情况.结果:通过对照分析,不同人员的血清中miR-21含量分别和配对的胃肠组织中表达的量具有正相关性(r=0.826,P<0.001).经过检测,和正常对照组进行比较,miR-21在胃癌患者的血清中含量出现明显升高,且术后,血清中miR-21的含量和手术之前比较降低明显(t=0.511,P=0.030).另外,miR-21在五组研究对象的血清中含量具有明显差异,具有统计学意义(χ2=10.841,P=0.028).结论:通过分析,利用检测血清中miR-21含量变化,可以无创性的诊断胃癌,并通过miR-21含量变化对手术的效果进行评价,临床上具有重要意义.     

MAL基因在胃癌组织中的甲基化及其mRNA的表达

目的:研究MAL基因在胃癌和癌旁组织中的甲基化状态及其mRNA表达.方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)和实时荧光定量RT-PCR法检测37例人胃癌组织及对应癌旁5 cm组织中MAL基因的甲基化状态和mRNA表达,并分别将其与各临床病理指标进行统计学分析.结果:37例胃癌组织中MAL基因甲基化率为78.4%.对应37例癌旁组织中MAL基因甲基化率为5.4%.癌组织与癌旁组织的甲基化率差异有统计学意义(P<0.01).胃癌组织中MAL基因甲基化状态与患者年龄、性别、肿瘤大小、有无淋巴结转移、胃癌分化程度、临床分期无统计学意义(P>0.05).在胃癌组织与对应癌旁组织中MAL基因mRNA定量表达差异有统计学意义(P<0.05),胃癌组织中MAL基因mRNA定量表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、胃癌分化程度、有无淋巴结转移、有无神经束浸润及肿瘤TNM分期无相关(P>0.05).结论:胃癌组织中MAL基因表达缺失或低下,并且存在高甲基化率,MAL基因发生甲基化可能与胃癌发生有关.     

实时荧光定量PCR检测肝癌患者外周血甲胎蛋白mRNA水平

在生理状态下 ,甲胎蛋白 (AFP)基因主要由胎肝细胞表达产生 ,出生后该基因表达迅速受到抑制。肝细胞大量坏死或发生原发性肝癌时 ,AFP基因再次激活[1] 。我们采用以Taqman技术为基础的实时荧光定量PCR技术 ,检测各型肝癌患者外周血细胞中AFPmRNA水平 ,分析外周血中是否存在肝癌细胞 ,并判断该方法检测肝癌细胞血液转移的可行性。一、材料与方法1 病人与标本 :本院 2 0 0 2年 8～ 12月收治的 5 7例肝癌患者 ,血清学AFP检测阳性 ,经影像学、组织病理学检查确诊为原发性肝癌。抽取肝癌住院患者晨血 5ml,EDTA抗凝。对照组为健康体检者…     

实时荧光定量PCR技术在侵袭性真菌感染诊断中的应用价值

目的探讨实时荧光定量PCR(RTFQ-PCR)技术在侵袭性真菌感染(IFI)诊断中的应用价值。方法采集IFI高危患者102份血清,收集其相关临床资料。以"重症患者IFI的诊断和治疗指南(2007年)"作为金标准,计算RTFQ-PCR和G试验的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。以血培养为金标准,计算RTFQ-PCR的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。结果根据"2007年指南"的诊断标准,确诊病例2例,临床诊断病例20例,拟诊病例31例,非IFI病例49例。以确诊和临床诊断病例作为感染组,非IFI病例作为非感染组。两组年龄、慢性肾功能不全、糖尿病、预后差患者的比例比较均有统计学差异(P<0.05)。IFI感染部位主要为呼吸道感染10例(50.0%)、泌尿感染8例(40.0%)、血液感染2例(10.0%)。在24例IFI患者中共分离出17株真菌,分别为9株白色念珠菌(52.9%),1株热带念珠菌(5.9%),3株光滑念珠菌(17.6%),2株念珠菌属(11.8%),2株烟曲霉(11.8%)。以"2007年指南"作为金标准,RTFQ-PCR灵敏度为50.0%,特异度为95.9%,阳性预测值为81.8%,阴性预测值为83.9%;G试验的敏感度为61.1%,特异度为91.8%,阳性预测值为73.3%,阴性预测值为86.5%。以血培养为金标准,RTFQ-PCR的敏感度为100.0%,特异度为88.2%,阳性预测值为15.4%,阴性预测值为100.0%。结论 RTFQ-PCR检测技术可以作为重症患者IFI早期诊断的一种有效手段,在临床上对IFI的早期诊断具有一定的价值。     

肺泡灌洗液不同检测方法在肺结核诊断中的临床价值

目的比较灌洗液标本的荧光定量PCR、纤支镜灌洗液刷片抗酸染色和结核分枝杆菌快速培养的灵敏度和特异性对于肺结核的临床诊断应用价值。方法选取安徽省胸科医院2016年1月-2016年12月临床确诊的649例肺结核患者、1328例肺炎、肺脓肿等其它呼吸系统疾病共1977例患者送检的纤维支气管镜灌洗液标本,同时进行灌洗液荧光定量PCR、纤支镜灌洗液结核分枝杆菌快速培养和灌洗液刷片抗酸染色3种方法的检查,比较其灵敏度和特异性。结果灌洗液荧光定量PCR、灌洗液结核分枝杆菌快速培养和灌洗液刷片抗酸染色的灵敏性分别为80. 3%,66. 3%和38. 1%,特异性分别为97. 7%,97. 4%和97. 1%。结论纤维支气管镜肺泡灌洗液的荧光定量PCR对于辅助肺结核的快速诊断较其他方法有较明显的优势,对肺结核的诊断有重要意义。     

miR-191在胃癌组织中的表达及其靶基因的预测

目的:分析胃癌组织中miR-191的表达及预测其靶基因,并检测靶基因在胃癌组织中的表达.方法:胃癌及配对癌旁正常组织标本50例,应用基于SYBRGreenⅠ的实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-191的表达情况,后用2-??CT方法进行相对定量分析.利用生物信息学软件对miR-191进行靶基因预测.用免疫组织化学检测靶基因在胃癌组织中的表达情况,并分析其与miR-191表达情况的关系.结果:miR-191在胃癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织[0.0314(0.0037-0.4924)vs0.0240(0.0037-0.1593),P<0.05],miR-191与临床病理特征(性别、年龄、病理组织分型、淋巴结转移和TNM分期)无显著相关性.对miR-191预测得到磷脂酶C-delta1(phospholipaseC-delta1,PLCD1)、SOX4等9个靶基因,其中SOX4和NDST1被证明是miR-191的靶基因.PLCD1在胃癌组织中的表达显著低于癌旁正常组织(56.7%vs96.7%,P<0.01),且其与miR-191在胃癌中的表达呈负相关(90%vs30%,r=-0.639,P<0.01).结论:miR-191在胃癌组织中呈高表达,可能通过调控PLCD1对胃癌的发病起重要作用.     

实时荧光定量检验在结核病患者中的临床诊断价值

目的:观察分析实时荧光定量检验在结核病患者中的临床诊断价值.方法:回顾性分析2018年2月-2020年3月本院收治的134例结核病患者的临床资料,对比分析两种检验方法的阳性检出率.结果:所选的134例疑似结核病患者中,经χ2检验,实时荧光定量检验的阳性检出率(81.34％)明显高于抗酸染色镜检法的阳性检出率(31.34...     

荧光光谱检测对胃癌的诊断价值

胃癌是人类最常见的消化道肿瘤 ,严重威胁人类的健康和生命。早期发现及治疗能从根本上改变胃癌患者的预后 ,减轻患者的经济负担和疾病痛苦。目前临床上诊断胃癌的主要手段仍是胃镜和上消化道造影检查 ,由于这两种方法要求具备先进的仪器设备及专门的操作人员 ,费用高 ,且存在一定痛苦 ,故很难用于大规模的人群普查。多年来 ,许多学者致力于研究一些用于胃癌诊断的实验室方法 ,如尝试检测血清和胃液中的多种肿瘤标志物[1 6] ,但因灵敏度和特异度不高 ,实用价值有限 ,尚未取得令人满意的结果。另有学者试图通过揭示胃癌的基因组来早期诊断胃…     

血浆结核分枝杆菌游离DNA检测对结核病的诊断价值

目的探讨血浆结核分枝杆菌游离DNA(cfDNA)检测对结核病(TB)诊断的临床应用价值。方法选取临床细菌学确诊结核病患者118例作为研究组,另选取同期非结核其他肺部疾病患者61例作为对照组。采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)技术检测研究对象血浆中的结核分枝杆菌cfDNA,绘制ROC曲线分析其对结核病的诊断价值。并应用T-SPOT.TB检测、Xpert MTB/RIF (Xpert)检测对入组对象进行验证性诊断,采用配对四格表χ~2检验比较结核分枝杆菌cfDNA检测与T-SPOT.TB、Xpert检测在结核病诊断中的差异。结果结核分枝杆菌cfDNA检测诊断结核病的ROC曲线下面积(AUG)为:0.884,最佳诊断阈值(cut-off值)为38.69。T-SPOT.TB、Xpert、结核分枝杆菌cfDNA检测诊断结核病的灵敏性和特异性分别为:81.36%和40.98%、61.01%和96.72%、79.70%和95.10%。另外,结核分枝杆菌cfDNA检测对肺结核组(PTB)或肺外结核组(EPTB)患者的阳性检出率均高于Xpert检测(P0.05),但与T-SPOT.TB检测相比差异均无统计学意义(P0.05)。结论通过Q-PCR技术可以在结核病患者血浆中检测到结核分枝杆菌cfDNA,能够显著提高结核病的阳性检出率,并且有望成为肺外结核病快速诊断的新靶标。     

粪便Alu序列的检测在胰腺癌诊断中的价值

目的 检测胰腺癌患者粪便Alu序列表达量,探讨其对胰腺癌的诊断价值.方法 收集41例胰腺癌、27例慢性胰腺炎及23例健康者的粪便样本,采用酚-氯仿方法抽提粪便中基因组DNA,应用实时定量PCR方法检测Alu重复序列的表达量.结果 胰腺癌、慢性胰腺炎、正常健康者粪便Alu重复序列表达量分别为(5.17±0.99)、(3.79 ±0.94)、(0.28±0.35) ng/g,三组间差异有统计学意义(P值均＜0.05).通过接受者操作特征(ROC)曲线分析,胰腺癌的曲线下面积为74.8％,95％可信度为0.661～0.835,诊断胰腺癌的敏感性为75.6％,特异性为67.1％.结论 胰腺癌患者粪便Alu序列表达量显著增加,对胰腺癌的诊断可能有一定价值.     

Bmal1在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨钟基冈Bmal1在胃癌和癌旁组织中的表达及其临床意义.方法 收集15例胃癌和癌旁非癌新鲜手术标本,以实时荧光定量PCR检测Bmall mRNA表达.收集64例胃癌和癌旁组织,以免疫组化方法检测Bmal1表达,用图像分析技术分析Bmal1在不同组织中的表达差异,结合临床资料探讨其与胃癌临床病理的相关性.结果 胃癌组织中Bmal1 mRNA转录量为1.02±0.05,癌旁组织中为0.57-0.03,二者比较差异有统计学意义(P＜0.05).Bmal1蛋白在癌旁组织中主要位于细胞的胞核,平均吸光度值为0.1041 ±0.0543,而在胃癌组织中主要位于胞质,平均吸光度值0.1816±0.0128,Bmall在胃癌组织与癌旁组织差异有统计学意义(P＜0.05).Bmal1表达强度与年龄、胃癌分化程度相关(P＜0.05),Bmal1与性别、肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移无相关性(P＞0.05).结论 Bmal1蛋白在胃癌组织中表达移位和表达上调可能与胃癌发生、发展相关,可能成为影响胃癌预后的重要因素.     

痰液MicroRNAs检测在非小细胞肺癌诊断中的应用价值

目的检测肺癌患者痰中miRNA-21、miRNA-155、miRNA-137及let-7a的表达,探讨其在肺癌诊断中的价值。方法选取非小细胞肺癌(NSCLC)患者24例。肺良性疾病(OPD)患者24例。11例健康志愿者为对照。Real-time PCR检测痰中miRNA表达。结果 NSCLC患者痰中miRNA-21、miRNA-155表达均显著高于OPD患者及健康对照者,P均<0.01。NSCLC患者let-7a表达均显著低于OPD患者和健康对照者,P均<0.001。三组患者痰中miRNA-137表达无统计学差异,P均>0.05。miRNA-21、miRNA-155及let-7a从OPD中诊断NSCLC的ROC曲线下面积依次为0.863、0.840和0.887,P均<0.01。结论痰miRNAs可能成为肺癌诊断的一种新指标。     

荧光定量检测HBV cccDNA在慢性乙型肝炎患者中的应用

目的:研究慢性乙型肝炎患者HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)在外周血的分布、肝组织中含量及探讨抗病毒治疗对慢性乙型肝炎患者血清HBV cccDNA的影响。方法:随机选取HBV DNA阳性慢性乙型肝炎患者、肝硬化患者、重型肝炎患者共125例。使用实时荧光定量PCR法检测血清中cccDNA。选取36例慢性乙型肝炎患者肝组织和外周血样本,酶切后进行荧光定量PCR检测。60例慢性乙型肝炎患者,按1:1随机分配接受拉米夫定或干扰素治疗,所有患者均治疗24周以上;应用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测慢性乙型肝炎患者0周、8周、12周、24周、HBV cccDNA及HBV DNA含量。结果:125例患者中cccDNA阳性率为71.2%,以肝硬化患者阳性率最低。肝硬化患者HBVcccDNA检出阳性率与慢性乙型肝炎患者及重型肝炎患者比较,差异有显著性意义(P0.05)。肝组织中HBV cccDNA与肝组织总HBV DNA及血清HBV DNA存在相关性(P0.05),HBeAg阳性组与阴性组患者比较差异有显著性意义(P0.05)。患者接受抗病毒治疗后血清HBV DNA及HBV cccDNA下降。结论:乙型肝炎肝硬化患者外周血HBV cccDNA阳性率低,慢性乙型肝炎患者中HBeAg(+)组病毒复制较HBeAg(-)组活跃。抗病毒治疗对血清HBV cccDNA有抑制作用;血清HBV cccDNA可作为抗病毒治疗的重要监测指标。