博来霉素对人皮肤恶性黑素瘤A875细胞增殖的影响

目的 观察博来霉素在体外对人皮肤恶性黑素瘤A875细胞增殖的影响,为临床化疗提供参考.方法 体外培养A875细胞,分别给予不同浓度的博来霉素(0.5～32 μg/ml)、不同时间(24 h或48 h)作用于细胞,倒置显微镜观察细胞形态,CCK-8法检测不同浓度的博来霉素作用不同时间对A875细胞增殖的影响.结果 博来霉素使贴壁细胞密度下降,变圆、变形的漂浮细胞增多;博来霉素对A875细胞的生长增殖有明显的抑制作用,呈剂量和时间依赖性.结论 博来霉素能有效抑制人皮肤恶性黑素瘤A875细胞的增殖.     

肉桂醛对恶性黑素瘤A375细胞增殖和分泌VEGF的影响

目的 研究肉桂醛对体外培养的人恶性黑素瘤细胞株A375增殖和分泌血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响.方法 A375细胞在体外培养扩增后,在培养基中分别加入10、20、40 μmol/L肉桂醛,分别在培养24、48、72 h MTT法检测细胞活性.同时收集各个浓度肉桂醛处理不同时相的培养液样本,双抗体夹心ELISA法测定其中VEGF分泌量.结果 10 μmol/L肉桂醛作用24h即能抑制A375细胞增殖,10、20、40 μmol/L肉桂醛间的抑制强度具有统计学意义(P＜0.01).40 μmol/L的肉桂醛作用72 h后细胞增殖抑制率最高,达(88.91±4.5)％.随肉桂醛作用时间延长,A375细胞分泌VEGF的量逐渐减少,72 h后各浓度间的抑制作用具有统计学意义(P＜0.01).40 μmol/L肉桂醛作用72 h后A375细胞分泌的VEGF含量最低,为9.55 pg/ml.结论 肉桂醛能抑制人黑素瘤细胞增殖和VEGF的分泌,其抑制强度与药物浓度和作用时间成正比.     

川芎嗪对人皮肤恶性黑素瘤A875细胞增殖和凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨川芎嗪对人皮肤恶性黑素瘤A875细胞增殖和凋亡相关蛋白表达的影响。方法体外培养A875细胞,采用不同浓度(0 mg/mL、0.5 mg/mL、1 mg/mL、2 mg/mL)川芎嗪分别作用A875细胞48 h、72 h,采用四甲基偶氮唑盐法检测各组细胞存活率。采用不同浓度川芎嗪(0 mg/mL、2 mg/mL)分别作用A875细胞0 h、48 h、72 h,采用蛋白免疫印迹法检测环氧化酶-2(COX-2)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase3)蛋白相对表达水平,并分析经2 mg/mL川芎嗪干预48 h、72 h后两者表达水平的相关性。结果经川芎嗪干预48 h、72 h后,A875细胞的细胞存活率随着川芎嗪浓度的升高而降低(均P<0.05);当川芎嗪浓度为1或2 mg/mL时,A875细胞的细胞存活率随着药物作用时间延长而下降(均P<0.05)。2 mg/mL川芎嗪干预0 h、48 h、72 h,A875细胞中COX-2蛋白表达水平依次降低,Caspase3蛋白表达水平依次升高;与0 mg/mL川芎嗪干预比较,应用2 mg/mL川芎嗪干预48 h和72 ...     

黄芩苷对人皮肤恶性黑素瘤A875细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的 探讨黄芩苷对人皮肤恶性黑素瘤A875细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响.方法 体外培养A875细胞,将细胞分为0μg/mL(对照组)、80μg/mL、160μg/mL、320μg/mL黄芩苷组,每组分别给予相应浓度黄芩苷作用A875细胞,干预48 h、72 h后采用四甲基偶氮唑盐法检测各组细胞存活率,干预7 d后,采...     

靶向干扰CXCR7基因表达对肝癌(HCC)细胞增殖及凋亡的影响

 目的  探讨CXCR7基因在不同肝癌细胞系及肝癌组织中的表达情况,并研究靶向抑制CXCR7基因表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响。方法  应用Western blot检测不同肝癌细胞系及10例肝癌组织中CXCR7蛋白的表达水平。采用短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默HCCLM3与MHCC97L细胞中CXCR7基因的表达,分别采用Western Blot和qRT PCR检测shRNA的靶向沉默效果。通过CCK-8增殖实验与Annexin V-FITC/PI细胞双染色研究CXCR7抑制对HCCLM3与MHCC97L增殖及凋亡的影响。结果  CXCR7表达水平与肝癌细胞的恶性程度呈正相关,肝癌组织中CXCR7表达水平较癌旁显著升高。实验成功构建了9个慢病毒表达载体,其中CXCR7 shRNA 566序列干扰效率最高。增殖实验显示干扰表达组细胞生长速度受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪分析显示干扰CXCR7表达可诱导细胞凋亡的发生。结论  CXCR7表达水平与肝癌恶性程度呈正相关,靶向干扰CXCR7表达可抑制细胞的增殖能力,诱导细胞发生凋亡。     

白藜芦醇对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究白藜芦醇对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响.方法 MTT法测定细胞增殖;流式细胞术和DAPI染色法检测细胞凋亡.结果 白藜芦醇浓度≥25μmol/L时,对增殖的抑制作用呈时间和浓度依赖性(P<0.01).12.5、25.0、50.0、100.0和200.0μmol/L的白藜芦醇作用12h后,荧光显微镜下可见典型的凋亡形态学改变,流式细胞术检测凋亡率分别为(10.86±0.29)%、(17.36±1.20)%、(28.80±1.34)%、(38.78±1.19)%及(58.96±1.26)%,与对照组凋亡率(3.53±0.25)%比较及组间比较差异有显著性(P<0.01),存在浓度依赖关系.100μmol/L白藜芦醇作用12、24及48h,凋亡率由(38.78±1.19)%增加至(70.32±0.99)%,组间比较差异有显著性(P<0.01),存在时间依赖关系.结论 白藜芦醇以时间和浓度依赖方式抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖;并能诱导其凋亡.白藜芦醇可能通过诱导凋亡作用抑制MDA-MB-231细胞的增殖.     

MiR-194对恶性黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的研究miR-194对人恶性黑色素瘤细胞的增殖和凋亡的影响及机制。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）分别检测miR-194在原代正常人皮肤黑色素细胞系PIG1 和5种恶性黑色素瘤细胞系（A375、SK-MEL-1、SK-MEL-2、SK-MEL-5及SK-MEL-28）中的相对表达量。利用Lipofectamine TM 2000分别将A375 细胞系转染miR-194 mimics 和阴性对照质粒,从而将A375 细胞系分为miR-194 模拟物组和阴性对照组;应用MTT法和流式细胞术分别测定miR-194 模拟物组和阴性对照组细胞的增殖能力及凋亡率,蛋白印迹（Western blot）分别检测miR-194 模拟物组和阴性对照组的细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Cleaved Caspase-3）蛋白表达情况。结果miR-194 在5 种黑色素瘤细胞系A375、SKMEL-1、SK-MEL-2、SK-MEL-5及SK-MEL-28中的表达水平低于正常人皮肤黑色素细胞系PIG1,依次分别是正常细胞系的（0.18±0.03）、（0.25±0.05）、（0.37±0.03）、（0.39±0.04）及（0.45±0.03）倍（均p<0.05）。转染后第0、1、2、3、4 及5 天,miR-194 模拟物组vs阴性对照组的OD 值分别为：（0.18±0.02）vs（0.19±0.03）（p >0.05）、（0.29±0.02）vs（0.27±0.03）（p >0.05）、（0.42±0.08）vs（0.45±0.07）（p >0.05）、（0.63±0.09）vs（1.17±0.12）（p <0.05）、（1.05±0.15）vs（2.15±0.21）（p <0.05）及（1.87±0.23）vs（3.18±0.27）（p <0.05）。miR-194 模拟物组和阴性对照组的细胞凋亡率分别为24.2%和9.3%（p <0.05）。Cyclin D1 和Cleaved Caspase-3 蛋白在miR-194模拟物组中的表达量分别是阴性对照组的（0.36±0.04）和（3.2±0.28）倍（均p<0.05）。结论miR-194 在黑色素瘤细胞中低表达,miR-194表达上调可促进黑色素瘤细胞凋亡并抑制黑色素瘤细胞的增殖,其机制可能为下调Cyclin D1 蛋白及上调Cleaved Caspase-3 蛋白表达。     

三氧化二砷对鼠恶性黑素瘤B16细胞凋亡的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对鼠恶性黑素瘤B16细胞诱导凋亡的影响.方法:采用流式细胞术(FCM)检测不同浓度的As2O3诱导B16细胞的早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率.结果:As2O3浓度分别为5 μmol/L、10 μmol/L 、20 μmol/L时, B16细胞的早期凋亡率分别为7.18%、21.1%、3.59%,晚期凋亡率分别为2.63%、5.35%、6.34%,总凋亡率分别为9.81%、26.45%、9.93%.结论: B16细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率对As2O3有浓度依赖关系,高浓度的As2O3使B16细胞出现坏死.     

SIRT6基因沉默对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨SIRT6基因沉默对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建肝癌细胞系,转染SIRT6,检测SIRT6 mRNA及蛋白质的表达水平;将表达shSIRT6的慢病毒感染Huh-7细胞,培养后检测SIRT6 mRNA、蛋白质表达水平及凋亡情况.结果 成功构建了沉默SIRT6基因的Huh-7稳定细胞系,在Huh-7细胞中,mRNA表达的抑制率达81.25%,其SIRT6蛋白质水平亦受到抑制;Huh-7细胞的凋亡比例为(16.52±2.08)%.结论 SIRT6基因沉默可诱导人肝癌细胞凋亡,进而抑制其增殖.     

MALAT-1沉默对膀胱癌细胞增殖. 凋亡及caspase-3表达的影响

目的 检测MALAT-1在正常膀胱组织和膀胱癌组织间的表达差异,探讨MALAT-1沉默对膀胱癌细胞增殖.凋亡及caspase-3表达的影响。方法 RT-PCR检测膀胱癌组织及正常膀胱组织中MALAT-1基因的表达;CCK-8比色实验检测MALAT-1沉默和MALAT-1正常表达的膀胱癌EJ细胞的增殖;TUNEL免疫荧光法检测MALAT-1沉默和MALAT-1正常表达膀胱癌EJ细胞的凋亡;Western blot法检测MALAT-1沉默和MALAT-1正常表达的膀胱癌EJ细胞中caspase-3蛋白的表达。结果 膀胱癌组织中MALAT-1的表达显著高于正常膀胱上皮组织;MALAT-1沉默细胞的增殖能力显著弱于MALAT-1正常表达的细胞;MALAT-1沉默细胞的凋亡显著高于MALAT-1正常表达的细胞;MALAT-1沉默细胞caspase-3蛋白的表达显著高于MALAT-1正常表达的细胞。结论 MALAT-1在膀胱癌组织中的表达被激活,MALAT-1能促进膀胱癌细胞的增殖,抑制膀胱癌细胞的凋亡,这种抑制作用可能是通过直接调控caspase-3的表达而实现的。     

RNA干扰沉默CDKL1基因对人胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响

目的 利用RNA干扰(RNAi)在人胶质瘤U251细胞中沉默CDKL1(cyclin-dependent kinaselike 1)基因的表达,探讨其对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建针对CDKL1基因的短发卡(shRNA)慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒并感染人胶质瘤U251细胞,采用实时定量聚合酶链反应和Western印迹法验证CDKL1基因的mRNA和蛋白的表达,确定其抑制效率.采用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法和应用Annexin V染色流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡情况,观察沉默CDKL1基因对U251细胞增殖与凋亡表型的影响.结果 CDKL1-shRNA能有效抑制U251细胞中CDKL1基因的mRNA和蛋白的表达.CDKL1基因沉默后U251各时相的光密度值较感染无义序列的细胞均有降低趋势,第5天时差异有统计学意义(P＜0.05).同时,抑制CDKL1的U251细胞凋亡比例从无义小干扰RNA(siRNA)序列对照组的(9.80±0.21)%上升至(19.26±0.33)%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 采用RNAi方法 能有效沉默CDKL1基因的表达,同时显著降低U251细胞的增殖能力,促进肿瘤细胞凋亡,表明CDKL1基因可能具有影响胶质瘤发生、发展的作用.     

羟基喜树碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨羟基喜树碱在体外对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响,为乳腺癌的临床用药提供实验依据。方法：将不同浓度（10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L）的羟基喜树碱作用于人乳腺癌MCF-7细胞48 h,并设不加羟基喜树碱溶液的MCF-7细胞作为对照组,用MTT法测定MCF-7细胞的增殖情况,用Hoechst33258染色检测MCF-7细胞的凋亡情况,以RT-PCR检测羟基喜树碱对MCF-7细胞Casepase-3 mRNA表达的影响。结果：与对照组比较,50μmol/L、100μmol/L及200μmol/L羟基喜树碱对细胞增殖均有抑制作用（P〈0.05、P〈0.01）,尤以200μmol/L的抑制作用最明显,其抑制率呈浓度依赖性增加。荧光显微镜观察显示,100μmol/L及200μmol/L羟基喜树碱处理组中可见典型的凋亡形态学改变。与对照组比较,各羟基喜树碱处理组中MCF-7细胞Caspase-3 mRNA表达水平均升高（P〈0.05、P〈0.01）,并呈浓度依赖性升高趋势。结论：羟基喜树碱可在体外抑制MCF-7细胞增殖,并通过Caspase-3途径诱导细胞凋亡,达到抑制肿瘤细胞生长的作用。     

皮肤恶性黑素瘤的诊断与治疗

皮肤黑素瘤通常来源于表皮真皮交界处的黑素细胞,皮损常有长期的非侵袭性水平生长期,呈非对称性扩大,最后出现结节,呈垂直性生长,水平生长期切除肿瘤,可长期生存,而一旦肿瘤发生扩散,则预后较差。目前皮肤黑素瘤主要可分为原位及侵袭性二型,每型中又有多种不同的类型,现分类介绍如下。     

槲皮素对人内皮祖细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的研究氧自由基对内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的损伤及槲皮素(quercetin,Que)的保护作用,并探讨可能机制。方法①分离内皮祖细胞并诱导其分化,随机分为:空白对照组;60～120μmol/L Que组;H2O2组;60～120μmol/L Que+H2O2组。②WST-1观察细胞增殖情况;③应用免疫细胞化学染色法观察p-JNK蛋白;④流式细胞术分析细胞凋亡改变。结果①低浓度的Que可以促进EPCs的增殖,而高浓度的Que则表现为抑制其增殖(P<0.05);②Que在60～120μmol/L范围内呈浓度依耐性降低H2O2诱导的EPCs凋亡率(P<0.01);③Que能抑制加入JNK激动剂后EPCs凋亡率的增加(P<0.05)。结论Que可促进H2O2诱导的EPCs的增殖,并通过阻断JNK信号通路抑制其凋亡。Que具有拮抗氧化应激条件下EPCs损伤的潜在作用。     

靶向抑制survivin对胰腺癌细胞增殖和凋亡效应的影响

目的 探讨反义survivin—脂质体复合物对胰腺癌细胞增殖和凋亡效应的影响及机制,为胰腺癌及survivin阳性肿瘤的治疗提供理论依据。方法 用脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染胰腺癌细胞系PANC—1细胞;通过RT—PCR、Western印迹试验检测survivin表达水平;MTY法测量细胞生长情况;流式细胞术测定caspase—3活性及凋亡率;电镜观察细胞形态学变化;应用激光共聚焦显微镜免疫荧光分析法评价脂质体反义复合物在亚细胞水平对survivin蛋白分子的影响。结果 反义survivin脂质体复合物有效下调survivin表达水平,并呈剂量依赖关系,IC50值为300nmoL／L,最大效应浓度为500nmoL／L,此时表达水平下调了80％。类似细胞生长抑制结果为MTY实验所证实。与此同时,caspase—3活性和凋亡率随转染时间延长而逐渐递增,并出现凋亡形态学变化,如胞浆空泡变性、核浓缩和核碎裂。免疫荧光分析,标记有FITC—绿荧光染色的survivin蛋白分子在未转染的细胞浆中清晰可见,并呈“斑点”状分布;而在转染细胞中几乎没有发现,但是符合细胞凋亡的形态学特征。结论 靶向抑制联系细胞增殖和凋亡的关键分子—survivin在胰腺癌治疗中有良好的应用前景。     

盐酸小檗碱抑制TLR4的表达对恶性黑素瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的 探讨盐酸小檗碱对A375黑素瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 将黑素瘤A375细胞株根据盐酸小檗碱浓度分为4组：对照组（0μmoL／L）、低剂量组（40μmoL／L）、中剂量组（80μmoL／L）、高剂量组（120μmoL／L）。然后使用CCK8法检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,通过Transwell法检测各组细胞的迁移能力,同时使用RT-PCR和Western blot检测A375细胞TLR4 mRNA及蛋白表达水平。采用SPSS22.0软件进行统计分析,多组间数据比较采用单因素方差分析,两组间比较采用t检验。结果 盐酸小檗碱（0、40、80、120μmoL／L）分别处理A375细胞后,随盐酸小檗碱浓度的增加,A375细胞存活率（分别为100.00±4.76、70.37±3.06、48.33±0.64、26.60±2.67）逐渐降低（F=298.78,P<0.01）;细胞凋亡率逐渐升高（F=101.76,P<0.01）;细胞迁移力（分别为331.67±7.64、248.67±8.08、155.33±5.03、109.33±9.02）逐渐降低（F=510.81,P<0.01）;同时 TLR4 mRNA及蛋白表达量逐渐降低(p<0.05)。结论 盐酸小檗碱可以促进黑素瘤A375细胞凋亡、抑制A375细胞的增殖和迁移能力,且这种作用与盐酸小檗碱存在剂量-依赖关系。同时其抗肿瘤机制可能与抑制TLR4信号通路有关。     

不同浓度腐胺对人皮肤成纤维细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的探讨不同浓度腐胺对人皮肤成纤维细胞（human skin fibroblasts,HSF）增殖、迁移、凋亡的影响。方法将体外HSF
分为腐胺组和对照组,以含腐胺浓度分别为0.5、1、5、10、50、100、500、1000 μg/ml完全培养基培养细胞设为腐胺组,不添加腐胺
设为对照组。经对照组及不同浓度腐胺组处理的HSF培养24 h后,再以四唑化合物电子耦联显色法（MTS法）测定细胞增殖能
力（用吸光度值表示）,Transwell迁移实验测定细胞的迁移能力,流式细胞技术（Flow Cytometry, FCM）Annexin V/PI标记法测
定细胞凋亡率。结果（1）细胞增殖能力（MTS）测定结果显示,0.5、1、5、10 μg/ml 腐胺组HSF的吸光度值较对照组升高（P<
0.01）,并且1 μg/ml时达峰值（0.754±0.024）;500、1000 μg/ml腐胺组HSF吸光度值较对照组降低（P<0.01）;50、100 μg/ml腐胺
组HSF的吸光度值与对照组无明显差异（P>0.05）;（2）Transwell迁移实验结果显示,1 μg/ml腐胺组穿过微孔膜的细胞数目较对
照组显著增加（P<0.01）,且达到峰值309±21;50 μg/ml及以上浓度腐胺组HSF穿过微孔膜的数目较对照组减少（P<0.05）;0.5、
5、10 μg/ml腐胺组HSF穿过微孔膜的细胞数目与对照组比较无明显差异（P>0.05）;（3）流式细胞凋亡结果显示,0.5、1、5、10 μg/ml
腐胺组HSF凋亡率较对照组显著降低（P<0.05）,而且在1 μg/ml时细胞凋亡率达最低值（11.10±0.79）%;100 μg/ml及以上浓度
腐胺组细胞凋亡率较对照组显著升高（P<0.01）,而且随着浓度增加凋亡率逐渐升高;50 μg/ml腐胺组与对照组比较细胞凋亡率
无明显差异（P>0.05）。结论微量腐胺可维持细胞正常的迁移能力,显著提高HSF的细胞增殖能力,而较高浓度的腐胺能显著
抑制HSF迁移与增殖,并诱导细胞发生凋亡,提示不同浓度的腐胺会对创面愈合起到完全不同的作用。