金属硫蛋白对阿霉素致心肌细胞氧化损伤的保护作用

目的 观察金属硫蛋白(metallothionein,MT)对阿霉素(adriamycin,ADR)致心肌细胞氧化损伤的保护作用.方法 将培养的心肌细胞随机分5组进行实验:①对照组;②阿霉素(1 mg/L)组;③阿霉素(1 mg/L)+MT1(5×10-9mol/L)组;④阿霉素(1 mg/L)+MT2(10-8mol/L)组;⑤阿霉素(1 mg/L)+MT3(5×10-8mol/L)组.MTT法计算心肌细胞存活率;试剂盒检测细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、细胞丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力.结果 与对照组相比,阿霉素组心肌细胞存活率下降(P＜0.01),细胞LDH漏出量增加(P＜0.01),细胞MDA及NO含量升高(P＜0.01),细胞SOD活力降低(P＜0.01).分别应用5×10-9,10-8,5×10-8 mol/L MT与阿霉素共同处理心肌细胞,细胞存活率分别较单用阿霉素增加31.8%,47.8%和51.4%(均P＜0.01);细胞LDH漏出量分别较单用阿霉素降低20.5%,23.3%和34.6%(均P＜0.01);细胞MDA含量分别较单用阿霉素降低16.3%(P＜0.05),21.1%(P＜0.01),36.5%(P＜0.01);NO含量分别较单用阿霉素降低17.7%(P＜0.05),19.8%(P＜0.05)和30.1%(P＜0.01);心肌细胞SOD活性分别较单用阿霉素增加31.2%,36.5%和39.1%(均P＜0.01).结论 阿霉素导致心肌细胞氧化损伤,外源性MT具有降低这种心肌细胞氧化损伤的作用.     

黄芩素对阿霉素致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用机制研究

目的：观察黄芩素对阿霉素所致心肌细胞损伤的保护作用及其NF-κB及JNK信号通路的关系。方法：采用乳鼠心肌细胞培养法,实验分为空白对照组、阿霉素处理组、阿霉素合并黄芩素高中低剂量组。MTT法检测心肌细胞存活率,Westernblot法检测NF-κBp65和JNK磷酸化水平。结果：高剂量组黄芩素能够显著对抗阿霉素所致心肌细胞损伤（P〈0．05）,并显著抑制炎症通路NF-κB和细胞凋亡通路JNK的磷酸化水平。结论：黄芩素能抑制NF-κB和JNK的磷酸化水平,以对抗阿霉素所引起的心肌细胞损伤。     

EPO预处理在心肌细胞缺氧复氧损伤中的抗凋亡作用研究

目的 观察促红细胞生成素(EPO)预处理在培养心肌细胞缺氧复氧损伤中的抗凋亡效应,进一步研究其可能机制.方法 建立大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型,将细胞分为对照组、EPO组[缺氧复氧前24h培养液中加入终浓度10u/mL重组人EPO(rhEPO)]、EPO+吡咯烷二硫氨基甲酸盐(PDTC)组(缺氧复氧前24h加入终浓度10u/mL rhEPO和5μg/mL PDTC)及PDTC组(缺氧复氧前24h加入终浓度5μg/mLPDTC).于缺氧复氧损伤前后观察各组心肌细胞存活率(MTT法),用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,EMSA检测缺氧复氧损伤前后各组心肌细胞NF-κB活性变化,RT-PCR检测损伤前后各组心肌细胞bcl-2 mRNA表达变化.结果 缺氧复氧损伤后各组细胞存活率较损伤前对照组显著降低(P<0.01),EPO组高于其余各组(P<0.01);损伤后各组心肌细胞凋亡率较损伤前显著升高(P<0.01),EPO组凋亡率低于其余各组(P<0.01);损伤前EPO组心肌细胞NF-κB活性显著高于其余各组(P<0.01),损伤后各组NF-κB活性较损伤前显著升高(P<0.01),EPO组低于其余各组(P<0.05);损伤前EPO组bcl-2mRNA表达水平显著高于其余各组(P<0.01),损伤后各组心肌细胞bcl-2mRNA表达水平均较损伤前显著升高(P<0.01),EPO组仍高于其余各组(P<0.01).结论 EPO预处理在培养心肌细胞缺氧复氧损伤中具有显著抗凋亡效应;EPO预处理心肌细胞抗凋亡保护作用与预处理过程中NF-κB活化有关;EPO预处理过程中NF-κB活化,通过上调抗凋亡基因bcl-2表达,产生抗凋亡效应.     

NF-κB在EPO预处理对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤保护效应中作用的研究

目的观察促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)预处理对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤(H/R)的保护效应及其与预处理过程中NF-κB的关系.方法采用培养的新生大鼠心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,细胞分组为:对照组,EPO预处理组(EPO组)(EPO 10 U/ml),EPO 吡咯烷二硫氨基甲酸盐(PDTC)预处理组(EPO PDTC组)(EPO 10 U/ml PDTC 5 μg/ml),PDTC预处理组(PDTC组)(PDTC 5 μg /ml),共4组,分别于缺氧/复氧损伤前后,检测培养液LDH含量,MTT比色法观察细胞活力及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡.采用EMSA检测缺氧复氧损伤前后各组心肌细胞NF-κB活性.结果 EPO预处理显著降低心肌细胞缺氧/复氧损伤后细胞培养液LDH含量,提高细胞存活率,并降低心肌细胞凋亡率,预处理过程中同时加入NF-κB阻断剂PDTC使EPO预处理的以上心肌保护效应显著减弱或消失.EMSA显示EPO预处理使H/R前心肌细胞NF-κB活性较对照组、EPO PDTC组、PDTC组显著升高(P<0.05),EPO PDTC组心肌细胞NF-κB活性与PDTC组和对照组无显著差异(P>0.05).缺氧复氧损伤后各组心肌细胞NF-κB活性较正常对照组显著升高(P<0.01),但EPO组的NF-κB活性低于其余各组(P<0.05),其余各组间无显著差异(P>0.05).结论 EPO预处理对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护效应,这一作用与EPO预处理过程中NF-κB的活化有关,NF-κB的活化可能通过其负反馈调节机制抑制H/R后心肌细胞NF-κB活性的升高.     

核转录因子-κB在高浓度葡萄糖诱导INS-1细胞凋亡中的作用

目的 研究核转录因子(NF-κB)在高浓度葡萄糖诱导INS-1细胞凋亡中的作用.方法 大鼠胰岛素瘤细胞系(INS-1)细胞以RPMI 1640培养基常规培养.实验分对照组(11.1 mmol/l葡萄糖组)、高糖组(33.3 mmol/l葡萄糖组)、高糖+NF-κB抑制剂组(33.3 mmol/l葡萄糖+NF-κB抑制剂(5 μmol/l)干预组)3组.以荧光定量RT-PCR检测IKKβmRNA水平,Western blot法检测细胞核内NF-κB亚基P65蛋白表达量,Annexin V-PI双染法检测细胞凋亡率.结果 与对照组相比较,高糖组IKKβ mRNA水平显著升高(P＜0.01),INS-1细胞胞核内P65蛋白表达显著增多(P＜0.01),细胞凋亡率显著升高(P＜0.05).与高糖相比较,高糖+NF-κB抑制剂组IKKβ mRNA水平显著下降(P＜0.01),胞核内P65蛋白表达显著减少(P＜0.01),INS-1细胞凋亡率显著下降(P＜0.05).结论 高浓度葡萄糖诱导INS-1细胞NF-κB活化,抑制NF-κB活化可有效抑制高糖诱导的INS-1细胞凋亡.     

辛伐他汀对慢性心力衰竭兔心肌沉默信息调节因子2相关酶2/核因子-κB信号通路的影响

目的研究辛伐他汀对慢性心力衰竭兔心肌沉默信息调节因子2相关酶2(SIRT2)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法 24只雄性新西兰大白兔随机分为正常组、心力衰竭组和辛伐他汀组,每组8只。心力衰竭组和辛伐他汀组兔每日经耳缘静脉注射1 g·L-1阿霉素生理盐水注射液建立慢性心力衰竭模型,正常组兔经耳缘静脉注射相同剂量的生理盐水注射液;同时,辛伐他汀组兔每日给予1.5 mg·kg-1辛伐他汀灌胃,正常组和心力衰竭组兔给予相同剂量生理盐水灌胃,均连续12周。造模结束时各组兔做心脏超声观察心功能情况,并处死取左心室做石蜡包埋切片,苏木精-伊红染色观察心肌组织变化,免疫组织化学法检测各组兔心肌细胞中SIRT2、NF-κB蛋白表达,反转录-聚合酶链式反应检测心肌组织中SIRT2 mRNA、NF-κB mRNA的变化。结果与正常组比较,心力衰竭组和辛伐他汀组兔的左心室射血分数(LVEF)降低(P<0.01),左心室舒张末期内径(LVDd)增高(P<0.01);辛伐他汀组兔的LVEF高于心力衰竭组(P<0.01),LVDd低于心力衰竭组(P<0.01)。与正常组比较,心力衰竭组兔心肌细胞SIRT2蛋白阳性表达率降低(P<0.01),辛伐他汀组兔心肌细胞SIRT2蛋白阳性表达率升高(P<0.01),且辛伐他汀组兔心肌细胞SIRT2蛋白阳性表达率高于心力衰竭组(P<0.01)。与正常组比较,心力衰竭组兔心肌细胞NF-κB蛋白阳性表达率升高(P<0.01),辛伐他汀组兔心肌细胞NF-κB蛋白阳性表达率降低(P<0.01),且辛伐他汀组兔心肌细胞NF-κB蛋白阳性表达率低于心力衰竭组(P<0.01)。与正常组比较,心力衰竭组兔心肌组织中SIRT2 mRNA相对表达量降低(P<0.05),辛伐他汀组兔心肌组织中SIRT2 mRNA相对表达量升高(P<0.01)。与心力衰竭组比较,辛伐他汀组兔心肌组织中SIRT2 mRNA相对表达量升高(P<0.01)。与正常组比较,心力衰竭组兔心肌组织中NF-κB mRNA相对表达量升高(P<0.01),辛伐他汀组兔心肌组织中NF-κB mRNA相对表达量降低(P<0.01);与心力衰竭组比较,辛伐他汀组兔心肌组织中NF-κB mRNA相对表达量降低(P<0.01)。结论辛伐他汀可能通过上调SIRT2的表达而抑制NF-κB的表达,从而改善兔的心功能。     

苦碟子注射液对氧糖剥夺损伤脑微血管内皮细胞NF-κB表达的影响

目的研究苦碟子注射液对氧糖剥夺/复氧损伤大鼠脑微血管内皮细胞(Rat Brain Microvascular Endothelial Cells,RBMEC)中核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)表达的影响,探究其治疗急性脑梗死可能的炎性作用机制。方法采用氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)的方法建立RBMEC缺血再灌注损伤模型。分为正常组、OGD/R组、苦碟子注射液组。氧糖剥夺6 h后,分别复氧0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h,并予模型细胞2%、4%、8%浓度的苦碟子注射液(KDZ),采用MTS法测定细胞活性,分别筛选造模最佳时效点及药物最佳量效。采用免疫荧光染色法观察3组NF-κB表达,Western Blot方法检测3组NF-κB分别在总蛋白、胞浆蛋白、核蛋白中的表达量。结果免疫荧光染色观察NF-κB的表达:与正常组相比,OGD 6 h/R 3 h组NF-κB表达显著增加(P0.01);与OGD 6 h/R 3 h组相比,KDZ 4%组NF-κB表达显著降低(P0.01)。Western Blot法检测NF-κB蛋白表达量:在总蛋白、核蛋白中,与正常组相比,OGD 6 h/R 3 h组NF-κB蛋白表达增加(P0.05,P0.01);与OGD 6 h/R 3 h组相比,KDZ 4%组NF-κB蛋白表达降低(P0.05,P0.01)。而在胞浆蛋白中,三组的NF-κB蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。结论苦碟子注射液可以下调缺血再灌注损伤RBMEC中NF-κB蛋白的异常高表达,并可以一定程度上抑制NF-κB的活化,减少NF-κB的核内转移。     

丹参酮ⅡA对脑微血管内皮细胞损伤的防护作用

目的:观察丹参酮ⅡA对β淀粉样蛋白(Aβ_(1-42))诱导的脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cell,BMEC)损伤模型活性的影响。方法:建立Aβ_(1-42)致BMEC损伤模型,用不同质量浓度(10 mg·L~(-1)、30 mg·L~(-1)、50 mg·L~(-1))的丹参酮ⅡA干预,MTT法检测细胞活性,微板法检测上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平,Western blot法检测核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)相关蛋白表达结果。结果:与模型组比较,丹参酮ⅡA的3个剂量组BMEC活力显著升高(P0.05)。与模型组比较,丹参酮ⅡA的3个剂量组LDH活性显著降低(P0.05)。与模型组比较,丹参酮ⅡA的3个剂量组NF-κB p65蛋白表达显著减低,IKB-α蛋白表达显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,丹参酮ⅡA的3个剂量组NF-κB p65磷酸化表达水平显著降低(P0.05)。结论:丹参酮ⅡA能提高Aβ_(1-42)致BMEC损伤模型的BMEC的活力,降低LDH活性、NF-κB p65蛋白表达、NF-κB p65磷酸化表达水平,升高IKB-α蛋白表达。     

核因子-κB和caspase-3在高糖诱导的心肌细胞代谢记忆中的表达

目的探讨核因子-κB(NF-κB)和caspase-3在高糖诱导的心肌细胞代谢记忆中的表达作用。方法原代培养乳鼠心肌细胞,随机分为4组:持续低糖组、持续高糖组、代谢记忆组、NF-κB特异抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐组(PDTC组)。采用TUNEL检测细胞凋亡指数,免疫组化检测核内NF-κB的表达,Westernblot检测caspase-3蛋白表达。结果 TUNEL染色结果:代谢记忆组和持续高糖组中平均每视野心肌细胞凋亡指数均较持续低糖组的显著升高(P<0.01),PDTC组中平均每视野心肌细胞凋亡指数明显低于代谢记忆组(P<0.05)。代谢记忆组和持续高糖组中的NF-κB核内蛋白水平均较持续低糖组的显著升高(P<0.01),PDTC组中的NF-κB核内蛋白水平明显低于代谢记忆组(P<0.05)。代谢记忆组和持续高糖组中的caspase-3的表达较持续低糖组有明显的增加(P<0.01),而PDTC组较代谢记忆组caspase-3的表达有明显降低(P<0.01)。结论 PDTC能抑制代谢记忆中所致的心肌细胞的损伤,NF-κB的激活可能导致caspase-3的活性增加,从而介导了高糖诱导的代谢记忆所致的心肌细胞的凋亡。     

二甲双胍对饱和脂肪酸诱导的大鼠H9C2型心肌细胞损伤的保护作用研究

目的 探讨二甲双胍(Met)对饱和脂肪酸所诱导的大鼠H9C2型心肌细胞损伤作用的保护机制.方法 在对照、棕榈酸(PA)及3种不同浓度梯度Met与PA联合组培养液中培养大鼠H9C2型心肌细胞株24 h.采用蛋白质印迹法(Western blot)测定各组细胞核因子κB(NF-κB)p65、细胞间黏附因子(ICAM1)、磷酸化核因子κB抑制蛋白(p-IκBα)及磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)的蛋白表达,实时荧光定量PCR测定各组细胞NF-κB、单核细胞趋化因子(CCL2)和ICAM1的mRNA表达.结果 与对照组相比,PA组的细胞中NF-κB p65、ICAM1、p-IκBα蛋白表达量增加(P<0.05);与PA组相比,Met+PA联合组细胞NF-κB p65、ICAM1、p-IκBα的蛋白表达量随Met浓度梯度增加表现为不同程度递减(P<0.05),p-AMPK蛋白表达量随Met浓度增加而显著增加(P<0.05).与对照组相比,PA组CCL2、ICAM1的mRNA表达量增加(P<0.05);与PA组相比,Met+PA联合组细胞CCL2和ICAM1的mRNA表达量下降(P<0.05).结论 Met可以减轻由饱和脂肪酸诱导细胞黏附因子和趋化因子表达增加而引起的大鼠H9C2型心肌细胞损伤.