老年洁阴舒油的制备及质量标准研究

目的建立老年洁阴舒油的制备方法及质量标准.方法以氯霉素和已烯雌酚为主药,以甘油和液体石蜡为基质制成擦剂;含量测定方法采用HPLC法,以甲醇:水(70:30)为流动相,流速为1.0ml/min,柱温40℃,C18柱.结果老年法阴舒油制备方法简单、质量标准可控.     

基于HPLC指纹图谱探讨当归-白芍不同比例配伍的差异性

目的 建立当归-白芍药对不同比例的HPLC指纹图谱,探讨当归-白芍不同比例配伍在化学成分和溶出率上的差异性.方法 采用HPLC法,采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温30℃;乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1;检测波长220...     

氨基葡萄糖3种含量测定方法的比较

目的比较了USP法、HPLC衍生化法和紫外分光光度法测定氨基葡萄糖含量的准确性和可靠性。方法①USP法参照USP28,采用C8色谱柱（250 mm×4.6 mm, 5 μm）,以乙腈-0.05%磷酸溶液（调pH 3.0）（40∶60）为流动相,检测波长195 nm,柱温：30 ℃;②HPLC衍生化法采用C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-0.05%磷酸溶液（调pH 3.0）为流动相进行梯度洗脱,检测波长265 nm,柱温：30 ℃,氨基葡萄糖与芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺（FMOC-Osu）溶液反应的衍生物在上述条件下检测;③紫外分光光度法采用在碳酸钠溶液环境下铁氰化钾与氨基葡萄糖反应后在420 nm处测定吸收值。结果3种方法的线性均较好, HPLC衍生化法和UV法测定原料药的精密度和回收率均比USP方法好。USP法测定氨基葡萄糖硫酸盐及其制剂的含量偏低。结论USP方法测定结果不理想,HPLC衍生化法和UV法均适合氨基葡萄糖原料的测定,而HPLC衍生化法更适合制剂的含量测定。     

粉葛的高效液相色谱指纹图谱

目的对不同来源的葛根药材指纹图谱进行比较,为葛根的质量控制提供可靠方法。方法应用RP HPLC法。色谱柱为Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇水,流速0.5 mL.min-1,检测波长250 nm,柱温30℃,以葛根素为参照物。结果通过对11批不同产地粉葛药材的测定,初步建立了粉葛的HPLC指纹图谱,标定了10个共有峰。通过中药指纹图谱计算机辅助相似度软件计算出其相似度均在0.9以上。结论RP HPLC法能较好地识别葛根药材,为葛根的质量控制提供方法学依据。     

一种假冒醋酸地塞米松片真实成份的鉴定

目的鉴定假冒醋酸地塞米松片的真实成份。方法HPLC法用HypersilC18柱(5μm4.6×150mm),以甲醇-水(70:30)为流动相,检测波长为240nm;IR法用KBr压片法;GC—MS法用HP-5(30m×0.32mm)毛细管柱,柱温初始180℃5min,然后20℃/1min升温,终温280℃10min。结果HPLC色谱图中有一个与醋酸地塞米松对照品不同的峰,IR光谱图与贝诺酯标准图谱基本一致,GC总离子流图和主峰的MS图与贝诺酯对照品基本一致。结论鉴定出假冒醋酸地塞米松片真实成份是贝诺酯。     

以HPLC-ESI-MS法定量分析贯叶金丝桃中的主要成分

作者建立了一个以HPLC-ESI-MS同时对贯叶金丝桃多种制剂中的主要成分进行定性和定量分析的方法。该方法比HPLC-MS法简单,比HPLC-UV法更具有特异性和灵敏度。采用HPLC分析,选用Waters Alliance2690分离系统,Luna苯基.己基柱(150mm×4.6mm,5μm),并配有相同材料的保护柱,柱温36℃     

HPLC在奥利司他纯化制备工艺开发中的应用

目的探讨HPLC在奥利司他纯化制备工艺开发中的应用,并建立奥利司他DAC纯化方法。方法在配备大容量定量环的HPLC上,以反相C8、C18硅胶柱为固定相,奥利司他对照溶液进样后,以甲醇、乙醇、丙酮、乙腈为溶剂与水在线混合配制流动相,依次进行梯度、等度洗脱以分别确定解析浓度及出峰时间。将供试溶液按1%硅胶质量为载样率进样,等度洗脱,分段收集各组分并检测,合并纯度≥99%的洗脱液,计算收率,以收率最高的试验组所选用的色谱条件作为最终的奥利司他纯化制备工艺。结果对比各组供试品纯化制备结果,其中以C18柱为固定相、89%乙腈溶液为流动相的试验组奥利司他收率最高。结论在配备大容量定量环的分析型HPLC上,用装载了制备级填料的色谱柱进行奥利司他的DAC制备液相色谱纯化工艺开发,更加经济易行。结合运行成本、环保及职业安全因素,可最终开发出直接应用于工业化生产的成熟制备工艺。     

HPLC法与UPLC法对比测定胰岛素类似物

目的用高效液相色谱(HPLC)法与超高效液相色谱(UPLC)法对比测定胰岛素类似物。方法 HPLC法采用Inertsil ODS-SP C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以0.2 mol/L硫酸盐缓冲液(pH 2.3)-乙腈(82∶18)为流动相A,0.2 mol/L硫酸盐缓冲液(pH 2.3)-乙腈(50∶50)为流动相B,流速1.0 mL/min,梯度洗脱;检测波长214nm;柱温40℃。UPLC法采用Halo C18(4.6 mm×150 mm,2.7μm)色谱柱,以0.2 mol/L硫酸盐缓冲液(pH 2.3)-乙腈(82∶18)为流动相A,0.2 mol/L硫酸盐缓冲液(pH 2.3)-乙腈(50∶50)为流动相B,流速0.5 mL/min,梯度洗脱;检测波长214 nm;柱温40℃。结果 2种方法所得测定结果一致,精密度、回收率均符合要求。结论 UPLC较HPLC法更加简便迅速,UPLC法能够成功替代HPLC法,为胰岛素类似物及其制剂的质量控制提供新的检测方法。     

银杏叶制剂指纹图谱的研究及其应用

目的建立银杏叶提取物及其制剂的HPLC指纹图谱分析方法.方法应用HPLC-DAD法检测银杏叶提取物和制剂中主要化学成分, 以DiamonsilTMC18(200 mm×4.6 mm, 5 μm)柱为分析柱; CH3CN-0.01 mol·L-1 KH2PO4缓冲液(pH 2)为流动相, 梯度洗脱, 柱温24 ℃.分析测定了不同制剂和银杏叶对照提取物的指纹图谱, 应用相似度计算软件, 对银杏叶对照提取物与各种制剂的整体化学成分信息进行分析.结果来自不同厂家的不同制剂的指纹图谱有差异, 但来自不同厂家不同批次的提取物的指纹图谱差别不大, 同一厂家生产的不同批号的同一种制剂的指纹图谱也十分相似, 这些结果表明不同制剂因制备工艺的不同造成指纹图谱的差异, 但每种银杏叶制剂的指纹图谱非常相似, 说明银杏叶制剂生产工艺稳定, 质量恒定.结论本方法精确、简便、重复性好, 可用于各种银杏叶制剂的质量控制.     

高效液相色谱法测定依可舒乳膏中主药含量

目的 :建立依可舒乳膏中主药联苯苄唑与氯霉素的含量测定方法。方法 :采用HPLC法以不同的色谱条件分别测定。结果 :以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ;测定联苯苄唑的流动相为甲醇 水 (80∶2 0 ) ,检测波长 2 5 6nm ,流速 1.0mL·min-1,柱温 35℃ ,在此条件下 ,浓度与峰面积的线性范围 19.8～ 6 9.3mg·L-1,平均加样回收率 98.9% (RSD为 0 .4 % ) ;测定氯霉素的流动相为甲醇 水 (5 0∶5 0 ) ,检测波长 2 78nm ,流速 1.0mL·min-1,柱温 35℃ ,在此条件下浓度与峰面积的线性范围2 0 .4～ 71.4mg·L-1,平均加样回收率 10 2 % (RSD为 0 .7% )。结论 :方法简便 ,准确     

Improved Folding Yields of a Model Protein Using Protein Disulfide Isomerase

Purpose. To study the effects of recombinant human protein disulfide isomerase (rhPDI) concentration, reduced glutathione:oxidized glutathione ratio (GSH:GSSG) and temperature on the efficiency of oxidative folding of a model protein, recombinant human interleukin 2 (C125A mutation) (C125A rhIL-2). Methods. C125A rhIL-2 inclusion bodies were reduced and denatured by guanidium hydrochloride (Gdm.Cl) and 100 mM GSH. The solution was diluted 10 times into folding buffer, allowing C125A rhIL-2 to fold either in the absence or presence of rhPDI. The renatured and unfolded C125A rhIL-2 species were quantitated by reversed phase-HPLC. Results. The initial folding rate of C125A rhIL-2 linearly increased with rhPDI:C125A rhIL-2 molar ratio in the first 2.5 minutes, and reached the highest rate when the rhPDI:C125A rhIL-2 ratio was 1:1. The oxidative folding of C125A rhIL-2 linearly increased as the GSH:GSSG molar ratio decreased from 10:0 to 10:3. The folding of C125 A rhIL-2 was also dependent on temperature, and optimum folding was realized at 23°C. Conclusions. These results demonstrate that under optimal redox potential and temperature, rhPDI enhances the oxidative folding of C125A rhIL-2. In the oxidative folding of C125A rhIL-2, rhPDI exerts its effect on folding by the acceleration of thiol/disulfide interchange.     

重组人白细胞介素21表达条件的探讨

目的探讨重组人白细胞介素21工程菌诱导表达的最佳条件。方法用摇瓶发酵的方法探索不同诱导条件(诱导温度、诱导时间、接种量I、PTG浓度等)对目的蛋白质表达的影响。结果该工程菌表达目的蛋白质的最佳温度是42℃;高密度接种更有利于目的蛋白质的表达。结论建立了BL21/pET-30a(+)-IL21工程菌最佳诱导表达条件,为重组人白细胞介素21的制备奠定了基础。     

重组人白细胞介素-21的原核表达及其复性与纯化

目的构建工程菌BL21/pET30a(+)-IL-21表达体系,表达并纯化出具有生物学活性的目的蛋白质。方法用基因工程方法构建表达质粒pET30a(+)-IL-21;在BL21大肠杆菌中诱导表达基因重组人白细胞介素-21(rhIL-21);提取包涵体并建立复性条件;用Ni-NTA凝胶纯化出rhIL-21;以NK92为效应细胞,观察rhIL-21对NK92的生物学作用,以此检测其活性。结果构建了重组质粒pET30a(+)-IL-21,工程菌BL21/pET30a(+)-IL-21能大量表达目的蛋白质;经复性和纯化得到具有生物学活性的rhIL-21。结论成功建立了人IL-21的原核表达体系,得到了有生物学活性的rhIL-21蛋白质。     

rhIL-6表达载体的构建及其在大肠杆菌中的高效表达

通过PCR技术扩增出约0.5kb的IL-6基因片段,并且采用含有P_RP_L串联启动子及SD区的高效表达载体pBV_220,经DNA重组技术,成功地构建了rhIL-6的基因工程菌E.coli DH_5a/pBV_220IL-6。所表达的IL-6经SDS-PAGE证明约17.5kD,表达量占菌体总蛋白的30%以上。以IL-6依赖细胞株MH_60·BSF_2检测,表达产物粗提物1:100复性后效价可达到5×10~8u/ml,每升发酵菌液可获10~12u IL-6粗品。     

丁香苦苷冻干粉针的处方优化及制备工艺的研究

目的:研究适合注射用丁香苦苷冻干粉针的处方配比和制备工艺。方法:以产品外观,复水性,含量等为指标,运用正交试验法优化其处方配比;采用真空冷冻干燥法制备其样品,用高效液相色谱法检测其含量,并对制备条件如装量、共晶点、预冻温度、升华温度、解吸温度等进行研究。结果:经优化,确定丁香苦苷含量为8%(A2),赋形剂用量为5%甘露醇(B2),装量为2.5mL(C3),西林瓶规格为7mL(D1);生产工艺为pH值为7.0,-45℃下预冻、-30℃下升华干燥和25℃时解吸干燥。结论:该工艺制备的丁香苦苷冻干粉针符合《中国药典》(2005版)冻干粉针的相关规定。     

藁本内酯稳定剂的研制及稳定性考察

目的:研制藁本内酯稳定剂,预测其稳定的保存期。方法:以高纯度藁本内酯为原料,加入不同的稳定剂,密封后置于-20℃冰箱、4℃冰箱、室温见光、室温避光环境下,放置一定时间后,从外观、薄层色谱图和藁本内酯含量3个方面考察不同稳定剂对藁本内酯的稳定作用。采用初均速法进行加速试验,测定藁本内酯在常温下稳定的保存期。结果:氟碳气体能使藁本内酯在各种环境下保持稳定,加速试验预测其分别能在室温(25℃)和4℃冰箱内稳定保存8个月和6年零9个月。结论:氟碳气体能使藁本内酯长期保持稳定,是藁本内酯较好的稳定剂。     

重组蓝藻抗病毒蛋白N的纯化复性及其抗单纯疱疹病毒1型活性的研究

目的 纯化复性重组蓝藻抗病毒蛋白N(cyanovirin-N,CV-N)并研究其抗病毒活性.方法 将诱导表达的重组CV-N经Ni Sepharose柱纯化并以稀释法复性,在Vero细胞中进行CV-N抗单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)活性的研究.通过观察细胞病变效应(CPE)及MTT比色法检测细胞活性,以判断CV-N的抗病毒效应.结果 重组CV-N经Ni Sepharose柱纯化后,SDS-PAGE显示11KDa处清晰的单一条带,复性的重组CV-N对Vero细胞毒性极低,对HSV-1无直接灭活作用,CV-N对病毒的吸附及生物合成均有抑制作用,且强于阳性对照药物阿昔洛韦.结论 经纯化复性的CV-N具有良好的抗HSV-1活性,值得进一步研究和开发.     

Acid-Catalyzed Peptide Bond Hydrolysis of Recombinant Human Interleukin 11

Recombinant human interleukin 11 (rhIL-11) is a multispectrum cytokine that plays an important role in megakaryocytopoiesis and platelet production. Probing rhIL-11 chemical reactivity in aqueous solution is an important initial step in developing a dosage form for rhIL-11 clinical trials. This report documents rhIL-11 degradation kinetics at 50°C in solutions adjusted to pH 3.0 to 9.5. Stressed samples were analyzed by reverse-phase HPLC and degradation product peaks were isolated for structural characterization. The results show maximal stability in the region pH 6.5 to 7.0. Degradation product identification shows that the major reaction pathway in acidic solution involves peptide cleavage at aspartate₁₃₃–proline₁₃₄. In alkaline solution, protein disappearance proceeds via nonspecific loss to container surfaces. Degradation products at alkaline pH have not been identified.     

Stability of Ala 125 recombinant human interleukin-2 in solution

Herein, we describe the preformulation study of Ala 125- recombinant human interleukin-2 (rhIL-2A(125)) in solution. This modified form of the natural human IL-2 is obtained by the replacement of cysteine with alanine at position 125. The compatibility of this rhIL-2A(125) with type I borosilicate glass vials showed no significant adsorption at liquid-vial interface. The effect of single excipients on the stability of this lymphokine was evaluated through RP-HPLC, SDS-PAGE and biological activity assay. Polysorbate 80 at high concentrations decreased the stability of rhIL-2A(125) in solution. On the other hand, the use of antioxidants (methionine and EDTA Na(2)) diminished the oxidation rate of the active ingredient. Additionally, a group of amino acids (glutamine, alanine, glycine and histidine) stabilized rhIL-2A(125) in different grades, and glycine at 5 mg mL(-1) allowed for the best stability behaviour. Taken together, these preformulation results can be used to design an adequate liquid vehicle for rhIL-2A(125) to be manufactured for human use.     

新型冠状病毒灭活方式对高效液相色谱法监测万古霉素血药浓度的影响

目的考察新型冠状病毒不同灭活方式对高效液相色谱(HPLC)法监测万古霉素血药浓度的影响。方法经56℃水浴加热0 min和30 min,以及紫外照射0,30,60 min后,采用HPLC法测定质控液和患者血样中万古霉素的质量浓度。结果56℃水浴加热30 min不会影响监测结果;紫外照射30 min和60 min后,质控液和患者血样中万古霉素均降解,对监测结果影响较大。结论采用HPLC法监测新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者万古霉素血药浓度时,可用湿热法56℃水浴30 min灭活病毒,不可用紫外照射灭活病毒,且万古霉素质控液与患者血样均要注意避免紫外照射。