p38MAPK表达与血管平滑肌细胞增殖关系的研究

目的探讨丝裂素活化蛋白激酶p38(p38MAPK)的表达与血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的关系以及检测p38MAPK反义寡核苷酸(AODN)对VSMC增殖的抑制作用。方法将培养大鼠胸主动脉VSMC,随机分为对照组、p38MAPKAODN组、正义寡核苷酸(SODN)组。采用噻唑蓝比色分析法(MTT)和流式细胞仪检测VSMC,用蛋白免疫印迹法测定p38MAPK蛋白量。结果p38MAPKAODN能减少p38MAPK蛋白表达,明显抑制VSMC增殖,其抑制作用与p38MAPK蛋白表达相关,呈剂量依赖性。结论p38MAPKAODN能抑制大鼠VSMC增殖,该信号分子与VSMC增殖密切相关,可能是VSMC增殖的信号途径。     

p38丝裂素活化蛋白激酶介导自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的 研究p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号传导通路在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)与血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用.方法 本实验采用体外培养SHR胸主动脉平滑肌细胞,用3H-胸腺嘧啶核苷([3H]-TdR)掺入法测定细胞增殖状况.用特异性的Phospho-p38MAPK抗体的蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p38MAPK的活性.结果 1)Ang Ⅱ、PDGF成剂量依赖性促进SHR血管平滑肌细胞[3H]-TdR掺入率,当Ang Ⅱ为10-7 mol/L、PDGF为10 ng/L时,[3H]-TdR掺入率显著增加[Ang Ⅱ组:(11 588±1322)比对照组(2546±207)计数/min;PDGF:(5279±391)比对照组(2587±230)计数/min,P＜0.05].p38MAPK选择性阻断剂SB202190(10-9～10-7 mol/L)呈浓度依赖性地降低Ang Ⅱ、PDGF诱导的VSMC增殖活度.2)Ang Ⅱ、PDGF对p38MAPK的磷酸化均有显著增强作用,此作用同样被SB202190抑制.3者作用都呈剂量依赖性.结论 Ang Ⅱ、PDGF能激活SHR血管平滑肌细胞的p38MAPK发生磷酸化,进而导致血管平滑肌细胞增殖.     

p38MAPK信号途径与血管损伤后平滑肌细胞增殖关系的研究

目的检测大鼠颈动脉球囊损伤后平滑肌细胞增殖及p38丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)的表达,探讨血管损伤后平滑肌细胞增殖的信号途径.方法雄性Sprague-dawley大鼠30只,体重250～300 g.随机分为假手术组、手术后7 d组、手术后14d组,每组10只大鼠,进行球囊血管损伤术,术后7、14 d分别取15 mm颈动脉作为实验标本.血管组织行苏木精-伊红染色、免疫组化和免疫印迹,检测血管壁增生、增殖细胞核抗原(PCNA)和p38MAPK表达情况.结果术后7、14d组有动脉壁增厚、新生内膜形成和中膜平滑肌胶原化,PCNA细胞阳性率分别是(39.5±7.9)%和(44.8±9.9)%,与假手术组[(1.3±0.4)%]相比明显增加(P＜0.01);p38MAPK表达明显高于假手术组(P＜0.05).p38MAPK表达与血管平滑肌细胞增殖率呈正相关(r=0.714,P＜0.05).结论球囊损伤血管能促进血管平滑肌细胞增殖和血管内膜增生;血管损伤后p38MAPK表达明显增强,与平滑肌细胞增殖呈正相关;p38MAPK信号途径参与了血管平滑肌细胞的增殖.     

p38丝裂素活化蛋白激酶介导自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的研究p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号传导通路在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)与血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用。方法本实验采用体外培养SHR胸主动脉平滑肌细胞,用3H-胸腺嘧啶核苷([3H]-TdR)掺入法测定细胞增殖状况。用特异性的Phospho-p38MAPK抗体的蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测p38MAPK的活性。结果1)AngⅡ、PDGF成剂量依赖性促进SHR血管平滑肌细胞[3H]-TdR掺入率,当AngⅡ为10-7mol/L、PDGF为10ng/L时,[3H]-TdR掺入率显著增加[AngⅡ组:(11588±1322)比对照组(2546±207)计数/min;PDGF:(5279±391)比对照组(2587±230)计数/min,P<0.05]。p38MAPK选择性阻断剂SB202190(10-9～10-7mol/L)呈浓度依赖性地降低AngⅡ、PDGF诱导的VSMC增殖活度。2)AngⅡ、PDGF对p38MAPK的磷酸化均有显著增强作用,此作用同样被SB202190抑制。3者作用都呈剂量依赖性。结论AngⅡ、PDGF能激活SHR血管平滑肌细胞的p38MAPK发生磷酸化,进而导致血管平滑肌细胞增殖。     

反义ras寡聚脱氧核苷酸对血管平滑肌细胞生物学行为的影响

为了研究调控小分子Ｇ蛋白（ｒａｓ蛋白）以抑制血管平滑肌细胞对生长因子的反应机制，用合成的反义ｒａｓ寡聚脱氧核苷酸作用碱性纤维母细胞生长因子以刺激培养的大鼠血管平滑肌细胞，通过氚标胸腺嘧啶脱氧核苷酸掺入法及免疫组织化学方法，来观察反义ｒａｓ寡聚脱氧核苷酸对在碱性纤维母细胞生长因子刺激下的大鼠血管平滑肌细胞ＤＮＡ合成和增殖细胞核抗原的影响。结果表明：反义ｒａｓ寡聚脱氧核苷酸可明显抑制血管平滑肌细胞ＤＮ     

反义ras寡聚脱氧核苷酸对血管平滑肌细胞生物学行为的影响

为了研究调控小分子G蛋白（ras蛋白）以抑制血管平滑肌细胞对生长因子的反应机制，用合成的反斗ras寡聚脱氧核苷酸作用于碱性纤维母细胞生长因子以刺激培养的大鼠血管平滑肌细胞，通过鼠标胸腺嘧啶脱氧核苷酸掺入法及免疫细胞化学方法，来观察反斗ras聚脱氧核苷酸对在碱性纤维母细胞生长因子刺激下的大鼠血管平滑肌细胞DNA合成和增殖细胞核抗原的影响。结果发现，反义ras寡策脱氧核苷酸可明显抑制血管平滑肌细胞DNA的合成，作用12h和24h的抑制率分别为92％和90％；而相同浓度的正义链组仅呈现较弱的抑制作用（P＜0．01）．反义ras寡聚脱氧核苷酸亦可显著减少血管平滑肌细胞增殖细胞核抗原蛋白的表达．提示该策略的应用有可能解决以生长因子为始因引起的细胞增殖性疾病、经文腔内冠状动脉成形术后再狭窄、动脉粥样硬化及高血压等问题的临床防治．     

p38MAPK与血管再狭窄

p38mitogen activatedproteinkinase(p38MAPK)是丝裂素激活蛋白激酶超家族的新成员 ,参与多种细胞的胞内信号传递。p38MAPK调节着细胞的许多应激反应[1,2 ] 。近年的研究表明 ,p38MAPK参与多种生物反应 ,特别是在肌细胞分化中起着至关重要的作用[3 4] 。本文就其在血管再狭窄中对血管平滑肌和内皮细胞增殖的影响作一综述。1　p38MAPK的结构和功能哺乳动物 p38MAPK与酵母HOG1MAPK同源 ,犬p38MAPK氨基酸序列 99%与人一样 ,仅有 2个保守序列不一样 ,分子量为 4 1.2kD(≈ 4 .12× 10 -4u) ,等电点 5 .4 1[5] 。新近资料认为[6,7] …     

miR-145抑制VSMC增殖的作用及其相关信号通路研究

目的探讨miR-145对PDGF-BB诱导的大鼠原代血管平滑肌细胞(VSMC)的作用及丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导途径的作用。方法体外培养大鼠原代VSMC,再将细胞分为空白对照组、miR-NC组、PDGF-BB+miR-145组及PDGF-BB组。CCK-8法检测各组细胞的增殖情况;实时RT-PCR方法检测PCNA、c-Jun及SM22a的表达水平;Western印迹方法检测ERK1/2和p-ERK1/2的表达、JNK和p-JNK的表达以及p38MAPK和p-p38MAPK的表达。结果 miR-145过表达后能够抑制PDGF诱导的大鼠原代VSMC增殖,并下调VSMC增殖相关基因PCNA、c-Jun的表达、上调分化相关基因SM22a的表达;PDGF-BB诱导VSMC后,ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平均明显上调,而转染miR-145慢病毒后再加PDGF刺激,ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平均明显下调。结论 miR-145能够抑制去分化型VSMC中的MAPK信号通路,进而抑制VSMC的增殖。     

PDGFR-β反义寡核苷酸防治血管再狭窄的作用机制

目的 :观察血小板衍化生长因子 -β受体 （PDGFR-β）反义寡核苷酸 （AODN）对血管平滑肌细胞 （VSMC）的增殖、迁移、凋亡和细胞周期的影响以及 AODN的摄取和细胞内定位 ,以期从细胞和分子水平上探讨其防治血管再狭窄的作用机制。方法 :建立大鼠胸主动脉 VSMC体外增殖模型 ,实验选用 5～ 10代 VSMC并将之分为 4组 :空白组、反义组、正义组及错义组。改良的 Boyden’s小室观察细胞迁移 ;MTT比色法测定细胞增殖活力 ;TUNEL及流式细胞仪观察细胞凋亡及周期 ;激光共聚焦显微镜观察 FITC标记 AODN摄取及细胞内定位。结果 :1反义组对VSMC的增殖和迁移抑制作用均高于空白、正义及错义组 （P<0 .0 5 ） ;2 AODN干预后 48h,TUNEL染色呈阳性结果 ,且凋亡率为 30 .8%,而空白组仅为 10 .3%,两组间有显著性差异 （P0 .0 5 ） ;3反义组细胞 G1 期数量明显增多 ;4加药后 2 4h AODN位于胞浆内 ,48h位于胞核内。结论 :PDGFR-β反义寡核苷酸可抑制体外 VSMC增殖和迁移 ,使 VSMC停留于 G1 期 ,并促进细胞凋亡 ,初步阐明了 PDGFR-β反义寡核苷酸防治血管再狭窄的作用机制。     

可罗卡林对血管平滑肌细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的：观察对大鼠主动脉平滑肌细胞起负调节作用的可罗卡林(cromakalim对同型半胱氨酸(hcy)刺激的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMC)增殖及c—myc基因表达的影响。方法：在建立hcy诱导的平滑肌细胞增殖模型后，应用流式细胞术观察VSMC增殖周期的变化；并用免疫细胞化学方法观察可罗卡林对VSMC增殖及c—myc基因蛋白表达的影响。结果：可罗卡林使VSMC处于G0／G1期的细胞数显著增多(P＜0．01)，S期G2 M期的细胞数显著减少(P＜0．01．)，能够抑制hcy诱导的VSMC增殖和c—myc基因蛋白表达的增加。结论：可罗卡林对hcy诱导的VSMC增殖有显著的抑制作用，其作用机制与抑制c—myc基因表达有关。     

Inhibition of p38 mitogen-activated protein kinase may decrease intestinal epithelial cell apoptosis and improve intestinal epithelial barrier function after ischemia- reperfusion injury

AIM: To investigate the role of p38 mitogen-activated protein kinase in rat small intestine after ischemia-reperfusion (I/R) insult and the relationship between activation of p38 MAPK and apoptotic cell death of intestine. METHODS: Ninety Wistar rats were divided randomly into three groups, namely sham-operated group (C), I/R vehicle group (R) and SB203580 pre-treated group (S). In groups R and S, the superior mesenteric artery (SMA) was separated and occluded for 45 min, then released for reperfusion for 0.25, 0.5, 1, 2, 6, 12 and 24 h. In group C, SMA was separated without occlusion. Plasma D-lactate levels were examined and histological changes were observed under a light microscope. The activity of p38 MAPK was determined by Western immunoblotting and apoptotic cells were detected by the terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUDP-biotin nick end labeling (TUNEL). RESULTS: Intestinal ischemia followed by reperfusion activated p38 MAPK, and the maximal level of activation (7.3-fold vs sham-operated group) was reached 30 min after I/R. Treatment with SB 203580, a p38 MAPK inhibitor, reduced intestinal apoptosis (26.72±3.39% vs62.50±3.08% in I/R vehicle, P<0.01) and decreased plasma D-lactate level (0.78±0.15 mmol/L in I/R vehicle vs0.42±0.17 mmol/L in SB-treated group) and improved post-ischemic intestinal histological damage. CONCLUSION: p38 MAPK plays a crucial role in the signal transduction pathway mediating post-ischemic intestinal apoptosis, and inhibition of p38 MAPK may attenuate ischemia-reperfusion injury.     

阻断p38信号转导通路对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究老年大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和凋亡与p38信号转导通路的关系,明确以p38为靶向的信号转导在VSMCs中的分子调控机制。方法: 将p38特异性抑制剂SB203580(25 μmol/L)作用于大鼠VSMCs,运用MTT比色法检测细胞增殖状态,流式细胞术检测SB203580对细胞凋亡的影响,Western blot法检测药物作用前后p38通路相关蛋白p38α、MKK3、GADD153和c-myc的表达及相关蛋白磷酸化活性。结果: SB203580可以时间、剂量依赖的方式抑制VSMCs增殖促进其凋亡。加入SB203580的VSMCs中p-p38α、GADD153和c-myc表达的水平,随作用时间的延长而下降（P<0.01）。结论: 阻断p38信号转导通路可能通过下调其下游靶基因GADD153和C-myc的表达,抑制血管平滑肌细胞增殖,促进其凋亡。     

川芎嗪对哮喘小鼠p38蛋白激酶及类胰蛋白酶表达的影响

目的探讨川芎嗪对哮喘小鼠p38蛋白激酶（p38MAPK）及类胰蛋白酶表达的影响。方法将30只BALB/c小鼠随机分为3组：A组（对照组）、B组（哮喘组）及C组（川芎嗪组）,每组10只,采用鸡卵清蛋白（OVA）与免疫佐剂（氢氧化铝）腹腔注射致敏及用1%OVA生理盐水溶液雾化激发的方法制备哮喘小鼠模型,C组小鼠于每次激发前1 h腹腔注射川芎嗪（80mg/kg/d）,每天1次,持续5 d,A组腹腔注射等量生理盐水致敏及雾化吸入。行HE染色镜下观察各组肺组织病理改变,并采用免疫组织化学染色SP法半定量测定行肺组织中p38MAPK及类胰蛋白酶表达情况。结果 C组小鼠肺组织HE染色病理改变较B组有减轻,且免疫组化结果显示测定C组小鼠肺组织较B组p38MAPK及类胰蛋白酶MOD有降低（P〈0.05）。结论川芎嗪减轻哮喘气道炎症,部分机制可能是通过影响p38蛋白激酶信号通路及肥大细胞活化实现。     

Interaction between resistin and adiponectin in the proliferation of rat vascular smooth muscle cells

We investigated the effect between resistin and adiponectin on the proliferation of vascular smooth muscle cells (VSMCs). We confirmed that resistin significantly increases the number of rat VSMCs as well as thymidine incorporation with them, whereas adiponectin diminishes resistin-induced cell proliferation. Resistin significantly increased p42/44 mitogen-activated protein kinase (MAPK) phosphorylation within rat VSMCs, whereas adiponectin inhibited resistin-induced MAPK phosphorylation. Moreover, resistin significantly increased c-fos expression, whereas adiponectin suppressed resistin-induced c-fos expression. Cell cycle progression is a tightly controlled event that is negatively regulated by cyclin-dependent kinases inhibitors (CDKIs) such as p53, p21, and p27. Resistin significantly decreased the expression of these CDKIs, whereas adiponectin restored the resistin-induced decrease in CDKIs expression. These effects were abolished in the MAPK inhibitors.     

淫羊藿苷通过雌激素受体和p38MAPK信号诱导MC3T3-E1Subclone14细胞的分化

目的观察淫羊藿苷(ICA)对MC3T3-E1Subclone14前体成骨细胞株活力、分化的影响,以及雌激素受体(ER)信号、p38MAPK信号在分化过程中的作用。方法 WST-8方法检测MC3T3-E1Subclone14细胞活力;pNPP法检测细胞碱性磷酸酶活性(ALP);ELISA检测I型胶原(ColI)和骨钙素(BGP);Western印迹法检测p38MAPK的蛋白磷酸化;并分别用ICI182780阻断ER受体或SB203580阻断p38MAPK信号后检测ICA对细胞ALP、Col I、BGP的影响;Western印迹法检测ICI182780阻断ER受体信号后,ICA对p38MAPK蛋白磷酸化的影响。结果 ICA(10-7、10-6、10-5mol/L)对细胞活力与对照组比较,在统计学上无显著差异(P>0.05);ICA可以浓度依赖性的提高细胞的ALP、Col I和BGP和矿化结节数量(P<0.01,P<0.05);ICI182780阻断ER受体信号后,10-5mol/L浓度的ICA促细胞分化的特性明显下降(P<0.01);ICA可以浓度组依赖性的提高细胞p38MAPK的蛋白磷酸的水平(P<0.01);SB203580阻断p38MAPK信号后,10-5mol/L浓度的ICA促分化的特性下降(P<0.01);ICI182780阻断ER受体信号后,10-5mol/L浓度ICA促p38MAPK磷酸化明显减弱(P<0.01)。结论 ICA可以促进MC3T3-E1Subclone14细胞分化,ER受体信号、p38MAPK信号在促分化过程中起着重要作用,ER受体信号通路在p38MAPK信号通路的上游。     

实验性结肠炎p38丝裂原活化蛋白激酶表达的研究

目的观察三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的大鼠结肠炎结肠组织p38MAPK表达与激活及大鼠血清TNF-α、IL-10水平变化,探讨p38MAPK在实验性结肠炎中的作用与机制。方法20只SD大鼠随机分为正常对照组（N）与模型组（M）,TNBS／乙醇法构建结肠炎模型,观察炎症活动指数（DAI）、大体形态损伤指数（CMDI）、组织学损伤指数（TDI）,ELISA法检测血清TNF-α、IL-10水平,免疫组化染色检测大鼠结肠p38MAPK、p-p38MAPK表达。结果与N组相比,M组DAI、CMDI、TDI显著升高（P〈0．01）,血清TNF-α升高,IL-10水平下降（P〈0．01）,结肠组织p38MAPK表达增加（P〈0．05）,p-p38MAPK表达显著增加（P〈0．01）。结论p38MAPK在实验性结肠炎的表达与激活均有明显增加,可能通过调节TNF-α、IL-10等细胞因子的表达参与结肠炎的发病。     

慢性低氧对肺动脉高压大鼠肺血管ERK 1/2、p38MAPK表达的影响

目的：通过建立慢性低氧性肺动脉高压大鼠模型,研究慢性低氧对大鼠肺血管细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)、p38MAPK蛋白表达的影响。方法建立慢性常压低氧肺动脉高压大鼠模型,将雄性SD大鼠随机分为正常对照组、低氧1d、3d、7d、14d和21d组,应用免疫组织化学技术检测肺动脉高压形成过程中大鼠肺血管 ERK1/2、p38MAPK 蛋白表达水平。结果①RVSP 和 RV/(LV+S)比值较正常对照组明显增加(P<0.05),低氧后3 d、7 d、14 d和21 d后大鼠肺血管明显增厚;②ERK1/2、p38MAPK蛋白广泛分布于肺血管内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞中,且随着低氧时间的延长,ERK1/2、p38MAPK蛋白表达量增加。结论 ERK1/2、p38MAPK 蛋白表达量的上调可能参与了慢性低氧诱导的大鼠肺动脉高压肺血管重塑的发生、发展过程。     

血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞p38丝裂素激活蛋白激酶通路的作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)激活人脐静脉内皮细胞(HUVECs)p38丝裂素激活蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路的作用。方法用含20%胎牛血清的DMEM培养基与CO_2培养箱(5%CO_2+95%空气)培养HUVECs。待细胞生长至80%融合时,无血清培养16h后分组:(1)AngⅡ不同时点观察组:用AngⅡ(终浓度100 nmol/L)分别刺激细胞0、5、10、15、30、45 min和60 min。(2)AngⅡ不同剂量作用组:分别用终浓度为0、10、100、1000 nmol/L和10 000 nmol/L的AngⅡ刺激细胞15 min。(3)AngⅡ+p38MAPK特异性抑制剂SB202190组:在AngⅡ(终浓度100 nmol/L)刺激前30 min,分别将1000 nmol/L和5000 nmol/L(终浓度)的SB202190加入培养基,共同孵育30 min。上述各组作用一定时间后收集细胞,用Western blot方法测定细胞p38MAPK磷酸化表达。结果 AngⅡ(100 nmol/L)可诱导HUVECs p38MAPK磷酸化表达,15～30 min达到高峰,分别升高2.25和2.51倍(P<0.005,n=5),随时间呈峰形变化;AngⅡ呈剂量依赖性诱导HUVECs p38MAPK磷酸化,在AngⅡ100 nmol/L时p38MAPK磷酸化表达即有明显增强,在AngⅡ刺激剂量为1000 nmol/L和10 000 nmol/L时,p38MAPK磷酸化表达分别增加2.03和2.11倍(P<0.005,n=5);p38MAPK特异性抑制剂SB202190可显著抑制HUVECs p38MAPK磷酸化,且呈剂量依赖性,5000 nmol/L SB202190的抑制率为53.9%(P<0.01,n=6)。结论 AngⅡ可激活人脐静脉内皮细胞p38MAPK信号通路。     

钙网蛋白介导缺氧预处理对心脏保护机制的研究

目的探讨缺氧预处理(HPC)对于心肌钙网蛋白表达与肌浆网钙稳态的影响及其信号转导机制。方法选择SD大鼠22只,随机分为假手术组6只,模型组8只,HPC组8只。复制SD大鼠HPC和心肌梗死模型,检测左心室压力最大上升速率和最大下降速率(±dp/dtmax)、TTC法测定心肌梗死面积,差速离心法制备心肌肌浆网并鉴定其纯度,以Millipore滤过法测定肌浆网Ca2+摄取活性和肌浆网Ca2+释放速率,Western blot检测钙网蛋白、p38丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶水平。结果与假手术组比较,模型组+dp/dtmax和-dp/dtmax分别下降39%和46%(P<0.05);与模型组比较,HPC组分别升高43%和59%(P<0.05),肌浆网Ca2+摄取升高[(60.38±5.76)nmol Ca2+/(mg·min)vs(31.10±3.13)nmol Ca2+/(mg·min)],肌浆网Ca2+释放降低[(32.12±1.18)nmol Ca2+/(mg·15s)vs(39.61±1.16)nmol Ca2+/(mg·15s),P<0.05],钙网蛋白表达和p38丝裂原活化蛋白激酶水平明显升高(P<0.05)。结论 HPC通过p38丝裂原活化蛋白激酶途径上调钙网蛋白表达,改善心肌肌浆网Ca2+摄取和肌浆网Ca2+释放功能、减轻细胞内钙超载而保护缺血心肌。