p53抑制剂对热化疗损伤结肠上皮细胞p53、Bax和MDM2表达的影响

目的 探讨p53抑制剂PFT-α（pifithrin alpha，PFT-α）对热化疗诱导原代培养结肠上皮细胞凋亡及p53靶基因Bax和MDM2表达的影响。方法 原代培养结肠上皮细胞分为正常对照组、热化疗组和PFT-α加热化疗组，运用顺铂联合温热（43℃）处理结肠上皮细胞30min，对比加入不同浓度的PFT-α后，Annexin V-FITC／PI染色，流式细胞仪检测细胞凋亡。MTT法分析PFT-α对热化疗杀伤DLD1细胞的影响。Western blot检测结肠上皮细胞的p53、Bax和MDM2蛋白表达。结果 热化疗导致结肠上皮细胞发生凋亡，Bax和MDM2蛋白表达明显高于对照组。PFT-α作用于顺铂联合温热处理结肠上皮细胞后，细胞凋亡率下降呈剂量依赖性，同时p53在结肠上皮细胞胞核／胞质表达比例下降，Bax和MDM2的表达逐渐降低。热化疗杀伤肿瘤细胞的效应并未受到低剂量PFT-α影响。结论 PFT-α对热化疗损伤结肠上皮细胞具有保护作用，其机制可能与改变p53核转位和抑制促凋亡基因Bax和MDM2的表达相关，抑制p53可作为克服热化疗抗肿瘤治疗副效应的新策略。     

抑癌基因p16在结肠癌中表达及意义

探讨抑癌基因ｐ１６在结肠癌中表达及意义。方法 采用免疫组织ＳＰ方法标记５７例大肠癌组织中抑癌基因ｐ１６。结果 ５７例大肠癌中Ｐ１６基因的阳性率为８４．２％，其阳性率在肿瘤的临床分期，特别是病理分级等方面有显著性差异。     

p53,p21在乳癌中的表达及意义

目的 探讨p53,p21蛋白在乳癌中表达的临床意义。方法 用免疫组化SP法对20例癌旁乳腺组织和69例乳癌组织中p53和p21蛋白进行半定量检测。结果 癌旁乳腺组织中p53和p21表达阴性;乳腺癌组织中p53和p21阳性率分别为47．8％和43．5％;随细胞分化程度降低;p53表达阳性率明显升高,p21表达的阳性率明显降低。p21表达的阳性率在有、无淋巴结转移组差异显著（P＜0．05）;p53阳性、p21阴性组术后5年无瘤生存率明显低于p53阴性、p21阳性组（P＜0．05）;在乳癌组织中p21表达与p53明显相关（P＜0．05）。结论 p53和p21在乳癌中的表达可判断乳癌细胞分化程度及患者预后。     

p53抑制剂对热化疗损伤结肠上皮细胞p53、Bax和MDM2表达的影响

目的探讨p53抑制剂PFT-α(pifithrinalpha,PFT-α)对热化疗诱导原代培养结肠上皮细胞凋亡及p53靶基因Bax和MDM2表达的影响。方法原代培养结肠上皮细胞分为正常对照组、热化疗组和PFT-α加热化疗组,运用顺铂联合温热(43℃)处理结肠上皮细胞30min,对比加入不同浓度的PFT-α后,AnnexinV-FITC/PI染色,流式细胞仪检测细胞凋亡。MTT法分析PFT-α对热化疗杀伤DLD1细胞的影响。Westernblot检测结肠上皮细胞的p53、Bax和MDM2蛋白表达。结果热化疗导致结肠上皮细胞发生凋亡,Bax和MDM2蛋白表达明显高于对照组。PFT-α作用于顺铂联合温热处理结肠上皮细胞后,细胞凋亡率下降呈剂量依赖性,同时p53在结肠上皮细胞胞核/胞质表达比例下降,Bax和MDM2的表达逐渐降低。热化疗杀伤肿瘤细胞的效应并未受到低剂量PFT-α影响。结论PFT-α对热化疗损伤结肠上皮细胞具有保护作用,其机制可能与改变p53核转位和抑制促凋亡基因Bax和MDM2的表达相关,抑制p53可作为克服热化疗抗肿瘤治疗副效应的新策略。     

ras和p53在甲状腺癌中的表达

目的 探讨ｒａｓ和ｐ５３基因过度表达在甲状腺癌发生中的相互作用,以及甲状腺癌的临床病理标准与ｒａｓ和ｐ５３基因过度表达的关系。方法 采用ＬＳＡＢ免疫组化法检测了ｒａｓ和ｐ５３在８０例甲状腺病变中的表达,其中５４例为甲状腺癌,２６例为良性甲状腺结节性病变。结果 ｒａｓ和ｐ５３在甲状腺癌和良性甲状腺结节性病变中的表达阳性率分别为９０．７％及２３．０％和５５．５％及３０．７％,两者相比较,差异有显著性意     

凋亡相关基因p53和PDCD5表达水平对结肠癌的分级和预后影响

目的考察凋亡相关基因p53和程序化死亡基因5(PDCD5)表达水平对结肠癌的分级和预后影响。方法采用免疫组织化学检测60例结肠癌组织、60例癌旁组织和30例正常组织中p53和PDCD5蛋白表达水平,并比较其表达水平和结肠癌分级、预后等病理参数关系。应用SPSS 20.0软件包进行数据分析,p53、PDCD5与结肠癌病理因素之间的分析应用χ~2检验。p53和PDCD5之间的相关性检验采用Spearman相关分析。以P0.05为检验标准。结果 p53表达率:分化程度越高的患者组织中表达越低(χ~2=8.695,P0.05);预后生存期33个月的患者组织p53表达率为66.7%,≥33个月的患者组织为30.0%,生存期越长的患者组织p53表达率越低(χ~2=8.076,P0.05)。PDCD5表达率:分化程度越高的组织表达率越高(χ~2=6.906,P0.05);有淋巴转移的患者组织中为8.3%,无淋巴转移的患者组织中为33.3%,(χ~2=5.031,P0.05);预后生存期33个月的患者组织中为10.0%,≥33个月的患者组织中为36.7%,生存期越长的患者组织PDCD5表达率越高(χ~2=5.963,P0.05)。以上比较差异具有统计学意义。p53和PDCD5表达水平负相关(r=-0.297,P0.05)。结论凋亡相关基因p53和PDCD5参与到了结肠癌的分级并因此影响了患者的预后。     

抑癌基因p16和p53在原发性胆囊癌中的表达及其相关性的初步研究

目的 探讨ｐ１６和ｐ５３蛋白在胆囊癌发生、发展中的作用及其相关性。方法 应用免疫组化法对４０例胆囊癌组织中ｐ１６和ｐ５３蛋白的表达情况进行检测。结果 ｐ１６和５３蛋白的表达与胆囊癌的组织学分化，淋巴结转移以及预后相关；ｐ１６蛋白的表达还与临床分期有关。结论 ｐ１６蛋白的失表达是发生是胆囊癌发展的晚期阶段，认为ｐ１６和ｐ５３蛋白的表达有助于原发性胆囊癌的分化及其预后的判断。     

p53在胃间质瘤中的表达及其意义

为研究胃间质瘤中 p5 3的表达情况 ,笔者对 40例胃间质瘤石蜡包埋病理标本进行切片和免疫组化染色和分析。结果示p5 3在胃间质瘤的阳性表达率仅为 15 .0 %。其中良性组均无 p5 3表达 ,交界性组仅有 6.7%呈阳性 ,而恶性组的阳性率达 71.4%。恶性组与良性组、恶性组与交界性组之间的阳性表达率差异非常显著 ( P <0 .0 0 5 ) ,而良性组与交界性组相比无显著差异 ( P >0 .0 5 )。提示p5 3在胃间质瘤性质的判别及其预后判断方面有重要作用 ,p5 3阳性表达提示预后不良。     

肿瘤坏死因子alpha上调人结肠癌细胞株突变型p53蛋白的表达

目的：研究TNF-alpha对人结肠癌细胞株HT-29及HCT116 p53表达的影响。方法：给予人结肠癌细胞株HT-29（表达突变型p53蛋白）及HCT116（表达野生型p53蛋白）不同浓度的TNF-alpha刺激后,应用细胞免疫荧光及实时荧光定量PCR检测突变型p53蛋白表达及p53 mRNA水平的改变。结果：免疫荧光显示TNF-alpha刺激后能显著提高HT-29细胞核突变型p53蛋白的表达（P〈0.05）,而对表达野生型p53的HCT116的p53水平无明显改变。实时荧光定量PCR结果表明TNF-alpha刺激对HT-29及HCT-116的p53 mRNA水平无明显改变。结论：TNF-alpha能显著上调HT-29突变型p53蛋白的表达,但是该上调作用并不是发生于转录水平。TNF-alpha刺激对表达野生型p53的HCT116细胞株p53水平无明显改变。     

大肠癌组织生长抑素、胃泌素表达与细胞凋亡及p53基因的相关性研究

目的探讨大肠癌组织中胃泌素 (gastrin ,GAS)、生长抑素 (somatostatin ,SS)与大肠癌细胞凋亡指数 (apoptosisindex ,AI)和凋亡调控基因 p5 3的相关性。 方法采用免疫组织化学SABC法和原位凋亡检测TUNEL法 ,检测 6 2例大肠癌组织中GAS、SS、p5 3及细胞凋亡的表达。 结果在大肠癌组织SS高表达组、中表达组的AI明显高于SS低表达组 (q高与低 =5 0 6 ,q中与低 =3 95 ,均P <0 0 1) ;而在GAS各表达组中的AI变化与此相反。p5 3阳性表达率在SS (GAS)低表达组、中表达组、高表达组三组间相比较存在着明显差别 (χ2 SS=10 16 9,χ2 GAS=7 833,均P <0 0 5 ) ,其中p5 3在GAS高表达组、中表达组的阳性表达率明显高于低表达组 (χ2 高与低 =3 85 9,χ2 中与低 =4 796 ,均P <0 0 5 ) ;p5 3在SS高表达组的阳性表达率明显低于低表达组 (χ2 =6 710 ,P <0 0 5 ) ;而 p5 3在SS中表达组表达的阳性表达率低于低表达组 ,但差异无显著性 (χ2 =2 180 ,P >0 0 5 )。GAS/SS积分比值变化与AI呈负相关 ,与 p5 3呈正相关。 结论GAS、SS对大肠癌细胞凋亡的调控可能与 p5 3基因突变有关。     

p53对胃癌细胞BGC823中Survivin基因表达的影响

目的 探讨p53基因对胃癌细胞株BGC823中Survivin基因表达的影响及其作用机制。方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot技术检测胃癌细胞株BGC823中Survivin和p53基因表达情况；利用质粒pcDNA3．0-rpS3转染该细胞株。应用实时聚合酶链反应（PCR）和Western blot检测细胞在培养后不同时间点Survivin mRNA和蛋白表达水平。结果 确认了胃癌细胞株BGC823中Survivin和突变型p53基因的表达。受野生型p53质粒转染的胃癌细胞在培养16和24h后，Survivin mRNA和蛋白质水平呈明显下降趋势。结论 野生型p53在转染胃癌细胞株BGC823后可显著抑制后者Survivin基因的转录和表达。     

Survivin基因在胰腺癌组织中的表达及与bcl-2和p53蛋白表达的关系

目的探讨Survivin基因在胰腺癌中的表达及与bcl 2、p5 3蛋白表达的相互关系。方法用RT PCR法检测 4 9例胰腺癌、5例慢性胰腺炎和 12例正常胰腺组织中SurvivinmRNA的表达 ,免疫组织化学法检测胰腺癌中bcl 2、p5 3蛋白表达。结果SurvivinmRNA在胰腺癌中表达率为76 % ,在慢性胰腺炎及正常胰腺组织中不表达 (P <0 0 5 )。Survivin基因表达与胰腺癌的分化程度、临床分期及淋巴结转移无相关性 (P >0 0 5 )。Survivin基因表达与bcl 2蛋白表达不相关 ,与p5 3蛋白表达显著相关。结论Survivin基因在胰腺癌中过度表达 ,提示该基因对胰腺癌发生和发展起重要作用 ;抑癌基因p5 3的失活与Survivin基因的表达可能在胰腺癌的发生中起协同作用。     

膀胱癌复发与p53、p21WAF1/CIP1和细胞周期素E基因表达的相关性研究

目的：探讨膀胱癌p53、p21^WAF1/CIP1和细胞周期素E(CyclinE)基因的表达、相互间的调控及其与膀胱肿瘤复发生为的关系。方法：采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶法（SP）检测64例有随访资料的膀胱癌患者p53、p21^WAF1/CIP1、CyclinE基因和Ki-67抗原表达，并用双变量相关分析、Kaplan-Meier分析及Cox regression多因素分析。结果：p53与p21WAF1/CIP1之间有明显相关（rs=-0.630，P=0.000）。p21^WAF1/CIP1与CylinE之间无明显相关（rs=-0.160，P=0.206），p53、Ki-67阳性表达患者有较高的肿瘤复发率。结论：肿瘤的临床病理特征、p53、Ki-67可作为评估膀胱肿瘤恶性程度及预后的指标。     

肝细胞肝癌中p53、ras基因与血管内皮生长因子表达的关系

目的 研究肝细胞肝癌中血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）的表达与ｐ５３,ｒａｓ基因之间的关系。方法 用免疫组织化学方法研究４５例肝癌标本ＶＥＧＦ,ｐ５３及ｒａｓ基因的表达。结果 ＶＥＧＦ的表达率为６４．４％（２９／４５）,ｐ５３的表达率为４８．９％（２２／４５）,ｒａｓ表达率为５３．３％（２４／４５）,经连续切片对比分析表明,在ＶＥＧＦ表达较高的区域,ｐ５３,ｒａｓ的表达亦较强,但Ｘ＾２检验仅提示ｐ５３     

胰腺癌PC-3细胞株外源性p14ARF抑癌基因表达与内源性p53表达水平的关系

目的　探讨外源性 p1 4ARF基因表达于胰腺癌PC 3细胞后与另一重要细胞周期调控蛋白 p53表达水平的相互关系。 方法　将含人 p1 4ARFcDNA的重组质粒通过脂质体介导转染入胰腺癌PC 3细胞中 ,并筛选出阳性克隆 ,逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、Westernblot法检测PC 3细胞转染前后p1 4ARF的mRNA及蛋白的表达 ,同时用Westernblot分析其内源性 p53蛋白表达水平的变化。噻唑蓝 (MTT)比色法测定PC 3细胞在转染前、后的生长曲线变化。结果　胰腺癌PC 3细胞中p1 4ARF基因缺失。外源性 p1 4ARF基因成功转染入PC 3细胞并获得 1 4× 1 0 3大小的p1 4蛋白表达 ,且内源性 p53蛋白表达水平在转染后明显增高。PC 3细胞在导入 p1 4ARF基因后第 1天及第 5天的生长抑制率分别为 2 2 %及 2 6 % ,两者差异有显著性 (P <0 .0 5)。结论　p1 4ARF基因可上调胰腺癌PC 3细胞的内源性p53蛋白表达水平 ,从而发挥其细胞周期阻滞功能。     

脊索瘤与脆性组氨酸三联体基因的相关性研究

目的 探讨脆性组氨酸三联体（FHIT）基因改变与脊索瘤发生的关系。方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组织化学（SP）方法对18例脊索瘤和瘤旁正常组织FHIT基因RNA转录本和蛋白表达进行检测。结果 RT-PCR检测可见11例（61．1％）存在FHIT基因RNA转录本缺失．1例还同时含有正常和异常转录本。对其中2例进行测序，证实1例转录本缺失全部E5～E7外显子及部分E8外显子和部分E10外显子等2个片段；另1例转录本缺失全部E5～E9外显子及绝大部分E10外显子。脊索瘤中FHIT蛋白表达阳性百分比为55．6％（10／18）．瘤周正常组织为100．0％（18／18），差异有统计学意义（P〈0．05），FHIT蛋白在脊索瘤中表达减低。结论 FHIT基因表达缺失是脊索瘤发生的重要事件之一，可能与脊索瘤的发生机制有关。     

野生型p53基因对不同内源性p53状态的肝癌细胞株生长的影响

目的探讨外源性野生型p53(wild-type p53,WT-p53)基因对具有不同内源性p53功能状态肝癌细胞生长的影响.方法通过表达WT-p53的重组腺病毒载体(Ad-p53),将p53基因导入具有不同内源性p53功能状态的肝癌细胞株Bel-7402、QGY-7701和PLC/PRF/5中,用MTT法检测Ad-p53对各细胞株生长的影响,流式细胞仪分析各组细胞中DNA含量及凋亡的比例.结果当取40、200、800 MOI值的表达p53的腺病毒分别转染PLC/PRF/5、Bel-7402和QGY-7701细胞时,72 h后行MTT检测,OD值分别为在 PLC/PRF/5细胞,空载体(Ad-LacZ)组0.98±0.16,Ad-p53组0.02±0.00(P＜0.01);在Bel-7402细胞Ad-LacZ组1.04±0.23,Ad-p53组0.10±0.02(P＜0.01);而在QGY-7701细胞Ad-LacZ组1.88±0.24,Ad-p53组1.86±0.19(P>0.05).细胞周期分析显示,在PLC/PRF/5,表现为既诱导细胞凋亡,又诱导细胞周期阻滞.在Bel-7402,表现为诱导细胞周期阻滞.结论外源性p53对肝癌细胞生长的抑制可能与内源性p53功能状态无关.