丙戊酸钠增强免疫细胞对人膀胱癌细胞的杀伤作用

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)对膀胱癌细胞MICA表达的影响以及所产生的肿瘤免疫作用,以期为防治膀胱癌复发和浸润提供新的治疗方法。方法:采用不同浓度VPA处理人膀胱尿路上皮癌T24细胞后,用半定量RT-PCR和流式细胞术检测癌细胞中MICA mRNA和蛋白表达。用乳酸脱氢酶法检测外周血单个核细胞(PBMCs)对经VPA处理的T24细胞的杀伤作用。结果:VPA从mRNA和蛋白水平诱导T24细胞表达MICA,并增强T24细胞对PBMCs细胞毒作用的敏感性。结论:VPA能增强膀胱癌对免疫细胞杀伤作用的敏感性,可作为防治膀胱癌的辅助药物。     

PTEN基因对人膀胱癌细胞系BIU-87化疗敏感性的影响

目的 研究抑癌基因PTEN转染对人膀胱癌细胞系BIU-87化疗敏感性的影响.方法 将携有PTEN基因的重组真核表达质粒pBp-PTEN转化大肠杆菌DH5α并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定;pBp-PTEN体外转染BIU-87细胞(pBp-PTEN-BIU87),筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pBp的BIU-87细胞(pBp-BIU87)和正常BIU-87细胞为对照,用RT-PCR检测PTEN的表达情况,应用MTT法分别研究转染前、后膀胱癌细胞对不同浓度抗癌药物丝裂霉素(MMC)、羟基喜树碱和吡柔比星的敏感性变化. 结果 RT-PCR证实PTEN在转染的BIU-87细胞中能稳定表达.PTEN转染后,BIU-87细胞对MMC的药物敏感性明显提高.对吡柔比星和羟基喜树碱的药物敏感性无明显变化. 结论 PTEN基因转染能提高人膀胱癌细胞系BIU-87对抗癌药物MMC的敏感性.     

吡柔比星诱导膀胱癌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨吡柔比星诱导膀胱癌细胞凋亡的机制.方法 采用MTT法、流式细胞术、透射电子显微镜和RT-PCR技术,研究不同浓度的吡柔比星对人膀胱癌细胞株T24的抑制作用,并检测Survivin mRNA表达的变化.结果 吡柔比星浓度为10.0和100.0 mg/L时,对T24细胞生长的抑制率分别为89.48%和90.89%,G期前出现明显的凋亡峰.吡柔比星能明显下调Survivin蛋白的表达水平,具有浓度依赖性.结论 吡柔比星诱导膀胱癌细胞凋亡是通过抑制Survivin蛋白的表达,且在一定剂量范围内具有浓度依赖性.     

shRNA抑制NOTCH1基因对膀胱癌细胞BIU87生物学行为的影响

目的:探讨NOTCH1基因沉默对人源性膀胱癌细胞增殖及分化的影响.方法:用pGenesil质粒构建靶向NOTCH1的shRNA真核表达载体psiRNA1并将其转染到膀胱癌细胞系BIU87中,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)、流式细胞术(FCM)检测NOTCH1沉默后膀胱癌细胞生长变化、细胞周期和凋亡情况.WesternBlot和RT-PCR法检测NOTCH1基因的蛋白和mRNA在转染前后表达变化.结果:转染psiRNA1质粒后BIU87细胞中NOTCH1基因在蛋白和mRNA表达水平相对于对照组明显下调(P<0.05),BIU87的生长受到明显抑制,呈现一定的时间依赖性(<60 h).凋亡率增加,G0/G1期细胞明显增多,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:沉默NOTCH1基因能够抑制膀胱癌细胞的增殖和分化,NOTCH1在膀胱癌中可能具有癌基因的作用.     

Fibulin-5表达对膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨fibulin-5表达在膀胱尿路上皮癌中的影响作用. 方法 经尿道切除获取膀胱尿路上皮癌标本20例,其中低级别(G_1和G_2)13例、高级别(G_3)7例.蛋白质印迹法检测fibulin-5在膀胱尿路上皮癌和正常膀胱黏膜组织中的表达.将PCR扩增的fibulin-5 cDNA克隆到pMD-19T载体中,构建p-EGFP-fibulin-5质粒.脂质体介导法将p-EGFP-fibulin-5质粒转染到人膀胱癌5637细胞株内,流式细胞仪分选,经G418筛选形成稳定的表达克隆.Boyden小室法检测未转染、转染空载体和转染fibulin-5的膀胱癌细胞迁移和侵袭能力. 结果 正常膀胱黏膜、低级别和高级别膀胱尿路上皮癌组织中fibulin-5蛋白相对表达量分别为1.16±0.28、0.57±0.32和0.44±0.42.与正常膀胱黏膜相比,膀胱癌组织中fibulin-5蛋白表达显著下调(P<0.01),低级别和高级别癌之间差异无统计学意义(P>0.05).转染成功的膀胱癌5637细胞显示绿色荧光.未转染、转染空载体和转染fibulin-5的膀胱癌细胞的迁移细胞数分别为136.9±5.7、139.3±7.7和127.6±3.1,侵 袭细胞数分别为31.7±4.7、31.5±4.8和8.05±3.1.转染fibulin-5后膀胱癌细胞侵袭力明显降低 (P<0.01),其迁移力虽低于对照组但差异无统计学意义(P>0.05). 结论 Fibulin-5蛋白表达减 少可能是膀胱癌发生和发展的机制之一,过表达fibulin-5可以抑制膀胱癌细胞侵袭力.     

人卵巢癌细胞侵袭迁移及其化疗敏感性与双调蛋白的关系与机制研究

目的探究内源性干扰双调蛋白(AREG)的表达对卵巢癌细胞迁移与侵袭及化疗敏感性的影响。方法构建靶向AREG-siRNA干扰质粒并转染卵巢癌细胞COC1,此为AREG转染组,同时设立正常对照组和阴性转染组。采用MTT法检测各组COC1的体外生长抑制率及对顺铂化疗的敏感性,细胞划痕实验及Transwell侵袭实验探索AREG对COC1迁移及侵袭行为的影响,实时荧光定量PCR检测各组细胞中AREG mRNA的表达量,Western blot法检测各组细胞中AREG、表皮生长因子受体(EGFR)及细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白表达水平。结果与正常对照组及阴性转染组相比较,AREG转染组细胞的增殖受到抑制,随着作用时间的延长,COC1生长抑制率显著上升(P0.01),且AREG转染组细胞的侵袭及迁移也被抑制(P0.05);AREG转染组细胞对顺铂药物的化疗敏感性增强(P0.05)。与正常对照组及阴性转染组相比,AREG转染组细胞中AREG mRNA的表达量和AREG、EGFR及ERK蛋白表达水平显著下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论 AREG可显著抑制卵巢癌细胞COC1的体外生长、迁移和侵袭,提高卵巢癌细胞的化疗敏感性,推测其可能的作用机制与AREG参与调控EGFR-ERK信号通路相关蛋白的表达有关。     

转染NK4基因对膀胱癌移行上皮细胞HGF基因表达的影响

目的观察转染NK4基因对膀胱癌上皮细胞HGF基因表达的影响。方法利用脂质体Lipofectin-2000将质粒pcDNA3（＋）／NK4导入BIU-87膀胱癌细胞，用pcDNA3（＋）作为阴性对照。G418稳定筛选阳性细胞克隆后，逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）检测转染细胞和对照组细胞NK4基因mRNA水平表达，Western blot检测转染后细胞培养上清液NK4和细胞胞质HGF蛋白的表达含量。结果转染阳性细胞NK4 mRNA恒定表达，RT-PCR和Western blot分别显示在mRNA转录水平和蛋白表达水平，稳定转染的膀胱癌细胞NK4含量明显高于对照组。转染了NK4基因的肿瘤细胞HGF蛋白表达水平明显降低，而转染空载体则无作用。结论脂质体将外源NK4基因导入肿瘤细胞后能稳定表达NK4蛋白，而且可以有效降低肿瘤细胞HGF表达的水平。     

膀胱癌组织中X-染色体连接的凋亡抑制蛋白表达及其对化疗敏感性的影响

目的探讨X-染色体连接的凋亡抑制蛋白(XIAP)在膀胱癌组织中的表达及其对化疗敏感性的影响。方法采用免疫组织化学方法检测6例正常膀胱黏膜上皮组织、47例膀胱移行细胞癌组织中XIAP的表达。脂质体方法介导XIAP基因转染膀胱癌T24细胞,通过G418进行稳定筛选。逆转录聚合酶链反应检测转染前后T24细胞内XIAP的表达。分别采用0．005 mg/ml、0．05 mg/ml低剂量丝裂霉素诱导凋亡启动,MTT比色分析检测癌细胞生长活性,3’末端脱氧核苷酰转移酶介导生物素标记法检测细胞凋亡率。结果膀胱癌组织中XIAP呈中度阳性表达,阳性率78．7%,其阳性率与肿瘤分级和分期无关(P＞0．05)。转染XIAP后T24细胞高表达XIAP,与未转染XIAP组比较,XIAP mRNA表达增高3．8倍。0．005 mg/ml丝裂霉素作用下转染组细胞生存率较对照组上升(11．60±0．25)%、凋亡率下降(10．1±0．2)%(P＜0．05)。0．05 mg/ml丝裂霉素作用下转染组细胞生存率较对照组上升(16．51±0．87)%、凋亡率下降(11．9±0．2)%(P＜0．05)。结论XIAP在人类膀胱癌中呈中高度表达,XIAP表达升高可明显降低化疗药物诱导的膀胱癌细胞凋亡,提示其可能影响化疗的敏感性。     

光动力纳米载体联合si-P3H4治疗膀胱癌的初步探索

目的 探讨光动力纳米载体联合小干扰-脯氨基3-羟化酶家族成员（si-P3H4精准治疗膀胱肿瘤的疗效。方法 RT-qPCR和Western Blot分别检测转染siRNA后膀胱癌EJ和T24细胞株中的P3H4mRNA和蛋白表达量。CCK8、划痕实验和Transwell小室检测敲低P3H4后对EJ和T24膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。以氨基树脂为底物合成高分子纳米载体CH3-R9-cRGD,将纳米载体药物包裹si-P3H4、光敏剂Ce6转染至膀胱癌细胞（HCV29细胞）,检测不同pH及激光照射条件下药物体外释放情况。同时,探索纳米药物与膀胱癌细胞靶向结合内吞机制,检测细胞内活性氧（ROS）水平。将不同分组纳米复合物转染至膀胱癌细胞,CCK8法检测各组细胞活力,体内试验进一步探索不同分组纳米复合物肿瘤抑制能力。结果 RT-qPCR显示EJ组和T24组P3H4mRNA表达量分别降低至对照组的68.4%和57.1%。Western Blot显示EJ组和T24组P3H4蛋白表达较阴性对照组分别下降至20.3%和36.5%。CCK8实验吸光度A值为EJ组相对于对照组96 h(:0.785±0.0...     

转Fas基因对膀胱癌细胞的作用

目的　探讨Fas基因转染对膀胱癌细胞的作用。　方法　将人FascDNA通过脂质体导入膀胱癌细胞EJ中 ,并利用Northernblot、原位杂交、流式细胞术检测细胞的FasmRNA和分子表达。用流式细胞仪、DNA梯形带和MTT法分析顺铂对转染前后的EJ细胞抑制增殖和诱导凋亡的能力。　结果　Fas基因转染可明显增强膀胱癌细胞EJ的Fas表达 ,顺铂对转染后的EJ细胞抑制细胞增殖和诱导凋亡的能力明显增强。　结论　转染的Fas基因可显著上调膀胱癌细胞EJ的Fas表达 ,促进细胞凋亡 ,联合应用Fas基因转染和顺铂可获得协同的细胞毒作用     

MDR1 siRNA对胰腺癌细胞株BxPC-3耐药性影响的实验研究

目的：观察阻断多药耐药基因1（MDR1）表达后胰腺癌细胞对化疗药物敏感性的变化,探索提高胰腺癌化疗疗效的新方法。方法：采用RNA干扰技术．构建MDR1 siRNA重组质粒．脂质体介导转染人胰腺癌细胞株BxPC-3,并筛选稳定转染细胞克隆,RT-PCR和Western印迹法检测MDR1 mRNA和蛋白的表达变化。将细胞接种于裸鼠,观察移植瘤对化疗药物吉西他滨敏感性的变化。结果：转染MDR1 siRNA质粒后胰腺癌细胞株BxPC-3 MDR1 mRNA与蛋白表达水平明显降低。体内实验结果显示,将转染前后的细胞接种于裸鼠,转染组移植瘤对化疗药物吉西他滨更为敏感（P〈0．05）。结论：通过RNA干扰技术,可在转录和翻译水平降低MDR1在胰腺癌细胞株BxPC-3中的表达,并能提高细胞对化疗药物的敏感性。     

靶向沉默Notch1基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨沉默Notch1基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响. 方法 将靶向Notch1的siRNA真核表达载体psiRNA Notch1-1转染膀胱癌细胞株T24和BIU-87,噻唑盐法、流式细胞术检测沉默Notch1后膀胱癌细胞生长、细胞周期和凋亡情况.RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后Notch1基因mRNA和蛋白表达的变化. 结果 转染后72 h,T24和BIU-87细胞G0/G1期细胞比例明显增加,分别为(80.13±2.69)%和(69.44±2.41)%,与T24对照组(23.89±1.32)%和BIU-87对照组(24.63±1.68)%比较差异有统计学意义(P值均<0.05).转染后72 h,T24和BIU-87细胞凋亡率分别为(13.75±1.23)%和(8.72±1.01)%,与T24对照组(1.28±0.14)%和BIU-87对照组(1.01±0.27)%比较差异均有统计学意义(P值均<0.05).转染后24 h细胞生长明显受到抑制,该抑制作用持续到转染后96 h.转染后72 h,T24和BIU-87细胞中Notch1基因mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05). 结论 Notch1在膀胱癌细胞株中可能起致癌作用.沉默Notch1基因能够抑制膀胱癌细胞的增殖.     

膀胱癌转移与Raf激酶抑制蛋白的关系

目的 观察转移性不同的3种膀胱癌细胞株中Raf激酶抑制蛋白(RKIP)的表达,探讨其与膀胱癌侵袭、转移的关系.方法 选取膀胱移行细胞癌细胞株EJ、T24和BIU-87,用Western blot检测各细胞株中RKIP的蛋白表达,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各系RKIP的mRNA水平,比较它们的差异.结果 EJ、124和BIU-87三者RKIP蛋白相对表达量分别为1.99±0.24、0.82±0.16、0.15±0.03(P<0.05),mRNA相对表达量分别为1.87±0.33、0.86±0.25、0.29±0.12(P<0.05),均依次降低.结论 RKIP可抑制膀胱癌细胞株的侵袭、转移,其表达下调可能在膀胱癌的进展中具有重要作用,RKIP可能与膀胱癌的侵袭和转移呈负相关.     

SiRNA联合介导Livin和Survivin基因沉默诱导人肾癌细胞786-O化疗敏感性的实验研究

目的:观察siRNA联合介导Livin和Survivin基因的沉默诱导人肾癌细胞786-O化疗敏感性的作用。方法:构建Livin和Suvivin联合靶向的小干扰RNA(siRNA)重组表达载体shRNA,然后将目的载体转染于人肾癌细胞株786-O。应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot方法分别检测转染前细胞经顺铂、5-FU和丝裂霉素处理后的Livin和Survivin基因的mRNA与蛋白水平的变化。应用CCK-8试验检测转染前后细胞对顺铂、5-氟尿嘧啶(5-FU)和丝裂霉素的半数致死量(IC50)、细胞增殖的变化。结果:CCK-8结果显示,联合介导Livin和Survivin基因沉默组细胞较分别单独介导细胞组化疗的敏感性明显增强(P0.05),且转染前后细胞对顺铂、5-FU和丝裂霉素的IC50发生显著变化(P0.05)。结论:SiRNA联合介导Livin和Survivin基因表达下调,发挥协同增强的siRNA作用。     

分化抑制因子1表达对膀胱癌细胞系化疗敏感性及细胞凋亡的影响

目的 探讨分化抑制因子1(inhibitor of differentiation,Id-1)下调对膀胱癌细胞系化疗敏感性及药物诱导细胞凋亡的影响.方法 选取膀胱上皮癌细胞系MGH-U1,在构建Id-1si-RNA载体后,通过逆转录病毒将其转染至MGH-U1细胞,筛选出稳定低表达Id-1的克隆(si-Id-1)和对照载体克隆(sscon).MTT法和集落形成实验比较sscon细胞和si-Id-1克隆细胞对表柔比星的敏感性;Ⅰ型胶原侵袭实验证明Id-1下调对膀胱癌细胞侵袭能力的影响;Western blot实验检测凋亡相关蛋白,比较凋亡蛋白表达水平,研究Id-1下调对表柔比星诱导的细胞凋亡的影响.结果 si-Id-1克隆细胞对表柔比星的敏感性显著高于sscon细胞;si-Id-1克隆细胞的侵袭能力明显低于sscon细胞;Id-1下调会诱导凋亡通路激活因子Cleaved PARP和Cleaved Caspase 3的表达水平增高,从而证明Id-1下调会增加表柔比星诱导的细胞凋亡.结论 膀胱癌细胞Id-1下调可以增加抗肿瘤药物诱导的细胞凋亡,从而增加肿瘤细胞的化疗敏感性.     

黄芪对肝癌耐药细胞株Bel/Fu化疗敏感性的影响

目的:评估黄芪对肝癌耐药细胞化疗敏感性的影响,探讨黄芪对血红素加氧酶调节作用的可能机制.方法:黄芪注射液作用于Bel/Fu肝癌化疗耐药细胞株,分别应用MTT、免疫细胞化学、流式细胞术、RT-PCR检测细胞株对化疗药物敏感性、P-糖蛋白表达量、P-糖蛋白功能、血红素加氧酶(HO-1)核酸水平表达量.结果:黄芪注射液作用于Bel/Fu细胞诱导24 h后,化疗药物半数抑制浓度显著降低;P-糖蛋白阳性表达明显减少,黄芪组罗丹明荧光曲线明显右移,细胞化疗药物外排功能降低;HO-1 mRNA表达显著减少.结论:黄芪注射液可增强肝癌耐药细胞株Bel/Fu的化疗敏感性,下调P-糖蛋白表达,降低P-糖蛋白药物外排功能,实现这种作用的同时伴随有HO-1 mRNA表达的减少.     

siRNA抑制S100A4蛋白对人胃腺癌细胞增殖和凋亡及化疗敏感性的影响

目的 研究应用小干扰RNA沉默S100A4蛋白后对人胃腺癌细胞BGC-823增殖、凋亡及化疗敏感性的影响.方法 人胃腺癌BGC-823细胞系转染siRNA,RT-PCR检测转染效果后将对数期胃腺癌细胞分为干扰组、阴性对照组、正常对照组,MTT检测不同浓度奥沙利铂对胃腺癌细胞中效浓度IC50值;绘制细胞生长曲线;TUNEL法检测细胞凋亡;RT-PCR检测各组细胞mRNA变化;Western blot检测蛋白水平的变化,计量资料选用t检验,SPSS17.0分析RT-PCR检测各组细胞mRNA的变化,Western blot检测蛋白水平的变化,细胞生长曲线描述细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡,MTT法检测不同浓度奥沙利铂对胃腺癌细胞中效浓度IC50值.计量资料以((x)±s)表示,多个样本比较采用单因素方差分析和LSD检验方法.P＜0.05为差异有统计学意义.结果 RT-PCR结果显示BGC-823细胞转染S100A4siRNA 48 h后,S100A4mRNA的表达量分别为:(0.674±0.011)、(0.652±0.021)、(0.345±0.040),正常对照组与干扰组相比差异有统计学意义(P =0.012,P＜0.05),阴性对照组与干扰组差异均有统计学意义(P =0.000,P＜0.05),正常对照组与阴性对照组差异无统计学意义(P =0.380,P＞0.05);Western blot结果显示BGC-823细胞转染S100A4 48 h后表达量明显下调分别为:(0.654±0.025)、(0.642 +0.014)、(0.317 +0.061),正常对照组与干扰组相比差异有统计学意义(P=0.01,P＜0.05),阴性对照组与干扰组差异均有统计学意义(P=0.000,P＜0.05),正常对照组与阴性对照组无统计学差异(P =0.341,P＞0.05).S100A4siRNA转染后人胃腺癌BGC-823细胞增殖下降;TUNEL法结果显示转染后凋亡明显增加;MTT结果表明人胃腺癌BGC-823单用奥沙利铂中效浓度IC50分别为56.31 μmol/L,转染后奥沙利铂中效浓度IC50为0.654 μmol/L.结论 本研究结果表明,siRNA沉默S100A4蛋白后抑制胃腺癌细胞增殖、诱导凋亡并提高奥沙利铂化疗敏感性,提示S100A4可能是治疗胃腺癌的有效靶点.     

人硫酸酯酶1转染对胰腺癌细胞膜结构及对细胞生物学行为的影响

目的检测人硫酸酯酶1在胰腺癌细胞株中的表达水平,及转染后对胰腺癌细胞膜的结构及生长增殖能力的影响。方法应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测7株胰腺株硫酸酯酶1mRNA的表达水平。采用脂质体Lipofectamine方法对Panc-1细胞进行硫酸酯酶1基因转染。Western blot检测转染前后Panc-1细胞硫酸酯酶1蛋白表达。共聚焦显微镜检测细胞膜表面硫酸肝素蛋白多糖（HSPG）结构的变化,应用噻唑蓝（MTT）比色分析法测定胰腺癌细胞的生长增殖能力,并检测转染前后的胰腺癌细胞对3种化疗药物（5-氟尿嘧啶、吉西他滨及放线菌素D）敏感性的影响。结果7株人胰腺癌细胞株中3株硫酸酯酶1mRNA呈高表达,其余4株低表达或无表达。硫酸酯酶1稳定转染后,Panc-1细胞稳定表达硫酸酯酶1蛋白成分。转染后细胞膜表面HSPG结构明显改变,并且硫酸酯酶1表达细胞增殖速度减慢,转染组细胞倍增时间为（68．2±4．3）h,明显慢于对照组（50．3±3．2）h,P〈0．05。转染后的胰腺癌细胞对化疗药物的敏感性并无明显改变。结论人硫酸酯酶1的表达通过影响细胞膜表面HSPG的结构,影响胰腺癌细胞的生长增殖能力,可能作为胰腺癌基因治疗的靶点。     

DPC4基因转染对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响

目的 运用基因转染技术,观察DPC4基因转染对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响.方法 构建表达DPC4基因的逆转录病毒载体,转染胰腺癌细胞BxPC-3,获取稳定表达DPC4的子代胰腺癌的细胞株BxPC-3/DPC4.观察5-Fu、吉西他滨(作用72 h)对胰腺癌细胞的抑制作用.同时应用半定量RT-PCR检测胰腺癌细胞内Mdr-1、Chk1基因的表达情况.结果 DPC4基因转染并稳定表达后,BxPC-3细胞对5-Fu、吉西他滨的IC50浓度(72 h)分别降低了1倍左右.同一浓度下,5-Fu、吉西他滨联合DPC4基因转染对BxPC-3细胞的体外抑制作用也明显增强,癌细胞内的Mdr-1、Chk1基因的mRNA表达明显下调.显示单独使用pLXSN/DPC4、5-Fu、吉西他滨,均能在体外抑制胰腺癌细胞的生长,但pLXSN/DPC4联合化疗药物,对癌细胞生长的抑制作用更为明显.结论 DPC4基因转染能够提高胰腺癌细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能是通过下调Mdr-1、Chkl的表达来实现的.     

DPC4基因转染对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响

目的 运用基因转染技术,观察DPC4基因转染对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响.方法 构建表达DPC4基因的逆转录病毒载体,转染胰腺癌细胞BxPC-3,获取稳定表达DPC4的子代胰腺癌的细胞株BxPC-3/DPC4.观察5-Fu、吉西他滨(作用72 h)对胰腺癌细胞的抑制作用.同时应用半定量RT-PCR检测胰腺癌细胞内Mdr-1、Chk1基因的表达情况.结果 DPC4基因转染并稳定表达后,BxPC-3细胞对5-Fu、吉西他滨的IC50浓度(72 h)分别降低了1倍左右.同一浓度下,5-Fu、吉西他滨联合DPC4基因转染对BxPC-3细胞的体外抑制作用也明显增强,癌细胞内的Mdr-1、Chk1基因的mRNA表达明显下调.显示单独使用pLXSN/DPC4、5-Fu、吉西他滨,均能在体外抑制胰腺癌细胞的生长,但pLXSN/DPC4联合化疗药物,对癌细胞生长的抑制作用更为明显.结论 DPC4基因转染能够提高胰腺癌细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能是通过下调Mdr-1、Chkl的表达来实现的.