脂肪乳逆转布比卡因心肌细胞毒性中线粒体形态和膜电位的变化

目的观察线粒体在脂肪乳逆转布比卡因心肌细胞毒性中形态结构和膜电位的变化,探讨脂肪乳逆转布比卡因心肌细胞毒性的可能机制。方法原代培养15只健康SD大鼠(3d龄以内)的心肌细胞,随机分为三组:对照组(C组)、布比卡因组(B组)、布比卡因+脂肪乳组(BL组),每组5只。采用CCK-8法检测心肌细胞活力;透射电镜观察心肌细胞线粒体形态结构;倒置荧光显微镜观察线粒体膜电位。结果 B组心肌细胞活性和线粒体膜电位明显低于C组(P0.05),线粒体发生髓样变和空泡样变等损伤;BL组心肌细胞活力明显低于B组(P0.05),线粒体损伤明显轻于B组(P0.05),线粒体膜电位明显高于B组(P0.05)。结论脂肪乳逆转布比卡因心肌细胞毒性的作用可能与线粒体有关。     

脂肪乳剂减轻布比卡因抑制原代培养海马神经元活力

目的研究脂肪乳剂对布比卡因致原代培养海马神经元神经毒性的影响。方法选择原代培养第8天的海马神经元,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法计算布比卡因对海马神经元的半抑制浓度(IC50),用接近IC50的3个浓度分别作用12h、24h和36h,MTT法检测神经元活力,观察布比卡因对海马神经元的神经毒性作用,得出最佳布比卡因浓度和作用时间进行后续实验。将原代海马神经元细胞分为四组(n=3):空白对照组(C组)不做任何处理;布比卡因组(B组)加入布比卡因;脂肪乳剂组(L组)加入1%脂肪乳剂;布比卡因+脂肪乳剂组(BL组)加入布比卡因和1%脂肪乳剂。各组均处理一定时间后光学显微镜观察海马神经元生长状态,检测各组神经元活力,免疫荧光染色法检测裂解半胱天冬酶-3(cleaved caspase-3)的表达并统计cleaved caspase-3阳性神经元占神经元总数的比例。结果布比卡因的IC50为0.033 62%,摩尔浓度为980.4μM。选择布比卡因浓度为1mmol/L和作用时间为24h进行后续实验。与C组比较,B组海马神经元细胞活力明显减弱(P0.01)。与B组比较,L组和BL组海马神经元细胞活力明显增强(P0.01)。与C组比较,B组和BL组cleaved caspase-3阳性率明显升高(P0.01),与B组比较,BL组神经元cleaved caspase-3阳性率明显降低(P0.01),C组和L组cleaved caspase-3阳性率差异无统计学意义。结论布比卡因诱发海马神经元神经毒性呈浓度剂量和时间依赖性,脂肪乳剂减轻布比卡因的神经毒性可能与增加海马神经元的细胞活力有关。     

异丙酚对布比卡因致PC12细胞毒性时细胞Ca2+浓度和一氧化氮合酶活性的影响

目的 评价异丙酚对布比卡因致PC12细胞毒性时细胞Ca2+浓度和一氧化氮合酶(NOS)活性的影响.方法 PC12细胞悬液(105/ml)随机分成4组:对照组(C组)、异丙酚组(P组)、布比卡因组(B组)和异丙酚+布比卡因组(PB组),每组PC12细胞分别接种于36孔板(每孔1 ml,每组9孔)、激光共聚焦显微镜专用培养皿(每皿1 ml,每组6皿)和24孔板(每孔 1 ml,每组6孔).C组加入D-Hank液500 μl;P组加入异丙酚至终浓度为2 mmol/L;B组加入布比卡因至终浓度为0.09 mmol/L;PB组同时加入异丙酚和布比卡因,终浓度分别为2 mmol/L和0.09 mmol/L.于36孔板中孵育24 h后测定PC12细胞凋亡率;于激光共聚焦显微镜专用培养皿中孵育6、24 h时,测定PC12细胞游离Ca2+浓度;于24孔板中孵育6、24 h时测定细胞NOS活性.结果 与C组相比,B组和PB组PC12细胞游离Ca2+浓度、NOS活性和凋亡率均升高(P<0.01),P组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与B组相比,PB组PC12细胞游离Ca2+浓度、NOS活性和凋亡率均降低(P<0.05).结论 在细胞水平,异祆丙酚可能通过抑制NOS活性和钙超载,减轻布比卡因诱导的神经毒性.     

p38MAPK信号通路在右美托咪定抗布比卡因神经毒性损伤中的作用

目的评价p38MAPK信号通路在右美托咪定抗布比卡因神经毒性损伤中的作用。方法取鞘内置管成功的SD大鼠72只,采用随机数字表法将其分为六组,每组12只:二甲基亚砜对照组(C组)、p38MAPK抑制剂组(SB组)、右美托咪定组(D组)、布比卡因组(B组)、右美托咪定+布比卡因组(DB组)及p38MAPK抑制剂+布比卡因组(SBB组)。C组鞘内注射二甲基亚砜20μl,SB组和B组分别鞘内注射p38MAPK抑制剂30μg和5%布比卡因20μl,DB组和SBB组在鞘内注射5%布比卡因20min前分别腹腔注射右美托咪定75μg/kg和鞘内注射p38MAPK抑制剂30μg;D组腹腔注射右美托咪定75μg/kg。于鞘内置管前(T_0)、鞘内给药前(T_1)、鞘内给药后4、8、12h和1、2、3、4、5、6d(T_2~T_(10))时测定大鼠后肢机械缩足阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL);于给药24h后每组随机取6只大鼠,取L4~5脊髓组织,TUNEL法检测凋亡细胞;Western blot法检测pp38MAPK蛋白表达水平。结果与T_0时比较,T_2~T_9时B组、T_2~T_7时DB组和T_2~T_5时SBB组MWT明显升高,T_2~T_9时B组、T_2~T_6时DB组和T2~T5时SBB组TWL明显延长(P0.05);与C组比较,T_2~T_9时B组MWT明显升高、TWL明显延长,B组细胞凋亡指数及pp38MAPK蛋白表达明显升高(P0.05);与B组比较,T_2~T_9时DB、SBB组MWT明显下降,TWL明显缩短,B组细胞凋亡指数及p-p38MAPK蛋白表达明显下降(P0.05)。结论右美托咪定可通过抑制神经细胞凋亡来减轻布比卡因诱发的大鼠脊髓神经毒性,其机制与抑制p38MAPK信号通路活化有关。     

脂肪乳对布比卡因中毒大鼠心肌线粒体能量代谢损伤的影响

目的探讨脂肪乳对布比卡因中毒大鼠心肌线粒体能量代谢损伤的影响。方法雄性Wistar大鼠40只,6月龄,体重250～300 g。采用随机数字表法分为四组:空白对照组(C组)、布比卡因中毒模型组(B组)、脂肪乳治疗组(T组)、脂肪乳预防组(P组),每组10只。C组经股静脉输注生理盐水3 ml/kg; B组经股静脉输注0.5%布比卡因10 mg/kg,出现心律失常后立即输注生理盐水3 ml/kg; T组经股静脉输注0.5%布比卡因10 mg/kg,出现心律失常后立即输注20%脂肪乳3 ml/kg; P组经股静脉输注20%脂肪乳3 ml/kg后5 min,输注0.5%布比卡因10 mg/kg。C组在开始输注生理盐水的第8分钟,B组、T组和P组在开始输注布比卡因的第8分钟处死大鼠。取左室心肌组织,分离心肌细胞线粒体。采用ELISA法测定心肌线粒体ATP酶(ATPase)活性,磷钼酸比色法测定ATP浓度,荧光比色法测定线粒体膜电位(MMP),Western blot法测定心肌线粒体过氧化物酶体增生物激活受体γ辅激活因子-1α(PGC-1α)、核呼吸因子1(NRF1)、线粒体转录因子A(mtTFA)蛋白含量,透射电镜观察线粒体结构。结果与C组比较,B组、T组和P组心肌线粒体ATPase活性、ATP浓度、MMP和PGC-1α、NRF1蛋白含量均明显降低(P0.05),B组和T组心肌线粒体mtTFA蛋白含量均明显降低(P0.05),P组心肌线粒体mtTFA蛋白含量差异无统计学意义。与B组比较,T组和P组心肌线粒体ATP浓度、MMP、PGC-1α、NRF1、mtTFA蛋白含量均明显升高(P0.05),P组心肌线粒体ATPase活性均明显升高(P0.05),T组心肌线粒体ATPase活性差异无统计学意义。与T组比较,P组心肌线粒体ATPase活性、PGC-1α、NRF1、mtTFA蛋白含量均明显升高(P0.05),心肌线粒体ATP浓度和MMP差异无统计学意义。电镜下C组心肌纤维排列紧密,线粒体丰富,包膜完整;B组心肌纤维排列紊乱,线粒体分布不均匀,部分线粒体变形;T组和P组心肌纤维排列尚可,线粒体较丰富,部分线粒体变形。结论脂肪乳可以升高心肌线粒体ATPase活性、ATP浓度、MMP及线粒体内ATP合成相关蛋白PGC-1α、NRF1、mtTFA含量,减轻布比卡因中毒大鼠心肌损伤,预防使用脂肪乳效果更优。     

丙泊酚对布比卡因诱导的PC12细胞毒性、活性氧和过氧化氢酶的影响

目的探讨丙泊酚对布比卡因诱导的PC12细胞毒性的保护作用及活性氧(ROS)和过氧化氢酶(CAT)在其中的作用。方法培养的PC12细胞分成四组:正常对照组(C组);丙泊酚组(P组),在细胞培养基中加入2mmol/L丙泊酚;布比卡因组(B组),在细胞培养基中加入0.09mmol/L布比卡因;丙泊酚加布比卡因组(PB组),在细胞培养基中同时加入2mmol/L丙泊酚和0.09mmol/L布比卡因;每组6孔。培养6h和24h后,用倒置相差显微镜观察细胞形态、MTT比色微量分析细胞活性,测定上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性和细胞内CAT、ROS活性。结果与C组相比,B组PC12细胞活性和细胞内CAT活性显著降低(P<0.01),LDH活性和细胞内ROS活性显著增加(P<0.01);P组PC12细胞活性及其它指标无显著变化;与B组相比,PB组PC12细胞活性和细胞内CAT活性显著增加(P<0.05),LDH活性和细胞内ROS活性显著降低(P<0.01)。结论布比卡因对PC12细胞具有毒性作用,可能与降低细胞内CAT活性、增加ROS活性有关;丙泊酚通过保护细胞内CAT活性和清除ROS而减轻布比卡因诱导的PC12细胞毒性。     

神经节甘脂预处理对布比卡因诱导N2a神经细胞凋亡后caspase-3表达的影响

目的探讨神经节甘脂(gangliosides,GM-1)预处理对布比卡因诱导的N2a神经细胞凋亡后caspase-3表达的影响。方法采用小鼠神经母细胞瘤细胞N2a细胞,进行实验一:将对数生长期N2a细胞随机分为:对照组(C组),N2a细胞不进行任何干预;布比卡因组,N2a神经细胞与不同浓度布比卡因600μmol/L(B1组)、900μmol/L(B2组)、1 200μmol/L(B3组)、1 500μmol/L(B4组)、2 000μmol/L(B5组)分别培养6、12、24和36h,以CCK-8法评价N2a神经细胞存活率,每组实验重复3次,观察布比卡因对N2a神经细胞最低有效损伤浓度和时间,结束后行实验二。实验二:将N2a神经细胞分为:对照组(A组),无布比卡因损伤及GM-1预处理;布比卡因组(B组),在布比卡因最低有效损伤浓度和时间前24h,不进行GM-1预处理;不同浓度的GM-1预保护组,在布比卡因最低有效损伤浓度和时间前24h,培养液加入不同浓度GM-1 0.1μmol/L(BG1组)、1.0μmol/L(BG2组)、10μmol/L(BG3组)进行预处理,以CCK-8法评价N2a细胞存活率,每组实验重复3次。以Western Blot法检测损伤细胞caspase-3的表达,每组实验重复3次,并进行N2a神经细胞形态学观察。结果实验一:选择布比卡因诱导致N2a神经细胞损伤的最低有效浓度900μmol/L和培养时间为12h。实验二:B组caspase-3蛋白表达明显高于A、BG1、BG2和BG3组,A组和BG3组caspase-3蛋白表达明显低于BG1和BG2组(P0.05)。结论布比卡因对N2a细胞有损伤作用,呈剂量和时间双重正性相关,而经GM-1预处理可显著下调布比卡因所致的神经细胞凋亡时caspase-3的表达。     

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸对布比卡因所致神经细胞毒性的影响

目的 明确布比卡因是否导致SH-SY5Y细胞内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)水平降低,以及NAD水平降低是否与布比卡因神经细胞毒性有关.方法 以1 mmol/L布比卡因培养液处理SH-SY5Y细胞30 min～7 h,检测细胞内NAD含量及细胞活性;以1～10 mmol/L布比卡因处理细胞30 min,检测细胞内NAD含量及细胞活性;于5 mmol/L布比卡因处理细胞30 min前后,以不同NAD培养液预处理、后处理SH-SY5Y细胞30 min,检测细胞内NAD水平的变化及细胞活性.结果 1 mmol/L布比卡因处理后3h,细胞内NAD水平开始下降,至处理7h,细胞内NAD水平降至处理前的(28±8)％;2、5、10 mmol/L布比卡因处理30 min后,细胞内NAD水平分别降至对照组的(22±3)％、(26±7)％及(16±14)％,明显低于对照组(P＜0.05).1 mmol/L布比卡因处理后各时点细胞存活率差异无统计学意义(P＞0.05);1～10 mmol/L布比卡因处理后,细胞存活率随着布比卡因浓度的增高而降低,2、5、10 mmol/L布比卡因组细胞存活率分别降至对照组的(49±9)％、(36±16)％及(26±-4)％(P＜0.05).以2.50、5.00、10.00 mmol/L NAD预处理的细胞,其细胞内NAD水平分别达到对照组的(86±12)％、(89±12)％及(105±59)％,明显高于单独以布比卡因处理的细胞(P＜0.05).以不同浓度NAD预处理或后处理干预后,细胞存活率明显高于单独以5 mmol/L布比卡因处理的细胞,且预处理效果好于后处理(P＜0.05).结论 布比卡因引起神经细胞毒性与NAD水平下降有关,外源性NAD能提升细胞内NAD水平,且能减轻布比卡因的细胞毒性.     

丙泊酚降低高糖环境下H9C2心肌细胞缺氧后的损伤

目的探讨小窝蛋白3(Cav-3)在丙泊酚降低高糖环境下H9C2心肌细胞缺氧后损伤中的作用。方法培养大鼠原代H9C2心肌细胞,构建细胞缺氧-复氧模型。将心肌细胞分为六组:正常培养组(NC组)、高糖培养组(HG组)、高糖缺氧-复氧组(HR组)、丙泊酚处理组(P组)、Cav-3抑制剂组(PI组)和DMSO溶剂组(D组)。比较六组心肌细胞损伤程度、氧化应激反应、线粒体功能、Cav-3蛋白含量、蛋白激酶B(AKT)及信号传导及转录激活因子3(STAT3)活化情况。结果与HR组比较,P组细胞活力、总SOD(T-SOD)活性、线粒体活力、ATP含量、Cav-3蛋白含量、AKT及STAT3活化明显增加,LDH、CK-MB活性、cTnI含量、Bcl-2相关X蛋白(Bax)与B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)比值(Bax/Bcl-2)明显下降,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase 3)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-9(caspase-9)蛋白含量、MDA浓度、JC-1染色的荧光绿红比明显降低,DCF-DA荧光阳性细胞数、MPTP开放明显减少(P0.05);与P组比较,PI组和D100组细胞活力、T-SOD活性、线粒体活力、ATP含量、Cav-3蛋白含量明显降低,AKT及STAT3活化明显减少(P0.05),LDH、CK-MB活性、cTnI含量、Bax/Bcl-2值、caspase-3及caspase-9蛋白含量、MDA浓度、JC-1染色的荧光绿红比明显升高,DCF-DA荧光阳性细胞数、MPTP开放明显增加(P0.05)。结论丙泊酚通过上调Cav-3减少高糖环境下H9C2心肌细胞的缺氧后线粒体的损伤及细胞的死亡。     

脂肪乳剂、肾上腺素及脂肪乳剂复合肾上腺素对布比卡因诱导离体大鼠心脏停搏的复苏作用比较

背景目前对于脂肪乳剂复合肾上腺素治疗布比卡因的心脏毒性是否优于单纯脂肪乳剂或肾上腺素尚不清楚。我们比较了在治疗布比卡因引起的离体大鼠心脏停搏中脂肪乳剂、肾上腺素及复合物的作用。同时也测定了脂肪乳剂、肾上腺素及其复合物对布比卡因在心脏组织中浓度的影响。方法从Sprague—Dawley雄性大鼠游离出心脏并进行再灌注建立Langendofrr离体心脏灌注模型。以100μmol／L布比卡因诱导心脏停搏后继续灌注3分钟。脂肪乳剂组含2％脂肪乳剂复合30μmol／L布比卡因;肾上腺素组含0．15μg／ml肾上腺素复合30μmol／L布比卡因;脂肪乳剂复合肾上腺素组含2％脂肪乳剂复合0．15μg／ml肾上腺素及30μmol／L布比卡因;单独以30μmol／L布比卡因灌注为对照组。心脏复跳的定义为有自主规则的心律,恢复后心率血压乘积（rate．pressureproduct,RPP）值〉基础值的10％且持续1分钟以上。我们比较每组100μmol／L布比卡因输注结束至心脏复跳的时间。复跳后对心功能变化继续观察40分钟。4组中能复跳的心脏于试验末截取心尖心肌采用高效液相色谱法测定心肌组织中布比卡因的浓度。结果脂肪乳剂组和复合组的心脏复跳时间（Trecovery）显著短于肾上腺素组和对照组（P〈0．001）,肾上腺素组的T短于对照组（P〈0．）。心脏复跳后分钟内4组平均值从高到低依次排序为复合组〉脂肪乳剂组、肾上腺素组〉对照组（P〈0．01）。心脏复跳过程中RPP的最大值（RPPmaximum）、RPPmaximum与基础值之比（RPPmaximum／RPPbaselinc）从最高到最低的依次排序为复合组〉脂肪乳剂组、肾上腺素组〉对照组（P〈0．01）。RPPmaximum 、RPPmaximum／RPPbaseline在脂肪乳剂组和肾上腺素组之间无显著差异。肾上腺素组和对照组中的心肌组织中布比卡因的浓度高于脂肪乳剂组和复合组（P〈0．001）。结论脂肪乳剂复合肾上腺素治疗布比卡因诱导的离体大鼠心脏停搏,较单纯使用脂肪乳剂或肾上腺素能更好地改善复苏后的心脏功能。     

缺氧复氧对H9C2心肌细胞凋亡、自噬和焦亡的影响

目的:探讨缺氧复氧(hypoxia reoxygenation,HR)对H9C2心肌细胞凋亡、自噬和焦亡3种细胞死亡方式的影响。方法:将培养的H9C2心肌细胞按随机数字表法分为正常对照组(Ctrl组)和HR组,其中HR组H9C2心肌细胞在缺氧培养箱中进行氧糖剥夺8h,然后复氧12 h。通过检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量及四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5 diphenyl tetrazolium bromide,MTT]比色法检测细胞活力来评估细胞损伤情况(每组6孔),Western blot检测(每组9孔)细胞凋亡相关蛋白[天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(cysteinyl aspartate-specific proteinase,caspase)-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia 2,Bcl-2)、Bcl相关蛋白(bcl-associate x protein,Bax)]、自噬相关蛋白[(轻链蛋白3(light chain 3,LC3)Ⅱ/Ⅰ、p62、Beclin-1、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of ra-pamycin,p-mTOR)]、焦亡相关蛋白[Nod样受体蛋白-3(nod-like receptor pyrin domain3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apopto-sis associated speck-like protein,ASC)、caspase-1p20、IL-1β、IL-18]。通过免疫荧光染色进一步评估细胞凋亡、自噬及焦亡情况(每组6孔)。结果:与Ctrl组比较,HR组H9C2心肌细胞HR后细胞活力降低(P<0.05),LDH释放增加(P<0.05),活化的cas-pase-3及Bax的表达上调(P<0.05),Bcl-2表达下降(P<0.05),TUNEL染色显示HR后细胞凋亡显著增加(P<0.05),提示HR后细胞凋亡及损伤增加;而p-mTOR、p62均表达增加(P<0.05),但LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1蛋白降低(P<0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ免疫荧光染色显示HR后细胞内的自噬小体增加(P<0.05),表明HR后H9C2心肌细胞自噬受到明显抑制;同时炎性小体NLRP3、ASC、cas-pase-1p20蛋白均显著上调(P<0.05),活化的炎症细胞因子IL-1β、IL-18表达增加(P<0.05),提示HR后NLRP3炎性小体活化,细胞焦亡增加。结论:H9C2心肌细胞在HR损伤过程中自噬被抑制,细胞焦亡及凋亡增加。     

黄连素在脊髓损伤中对线粒体的保护作用及机制

目的探讨黄连素对脊髓损伤(SCI)后线粒体氧化损伤的作用和可能机制。方法将36只C57小鼠随机分为假手术组、SCI组(伤后立即腹腔注射10 mg/kg生理盐水)和黄连素组(SCI后立即腹腔注射10 mg/kg黄连素),每组12只。使用PSI-IH脊髓打击器建立小鼠SCI模型,于损伤后24 h处死小鼠,取脊髓组织。使用全自动酶标仪检测各组小鼠脊髓组织线粒体内丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)的变化;用蛋白质印迹法检测脊髓组织caspase-3、cleaved caspase-3的表达及细胞质内和线粒体内细胞色素C(Cyt C)的表达;用免疫荧光双标染色法检测脊髓组织中神经细胞凋亡情况。结果与假手术组相比,SCI组小鼠脊髓组织线粒体内MDA水平升高,GSH、SOD水平降低;细胞质内Cyt C和脊髓组织中caspase-3、cleaved caspase-3表达水平增高,线粒体内Cyt C表达水平降低;脊髓组织中神经元凋亡比例增高;差异均有统计学意义(P 0.05)。与SCI组相比,黄连素组小鼠脊髓组织线粒体内MDA水平降低,SOD和GSH水平增高;细胞质内Cyt C和脊髓组织中caspase-3、cleaved caspase-3表达水平降低,线粒体内Cyt C表达水平增高;脊髓组织中神经细胞凋亡比例减少;差异均有统计学意义(P 0.05)。结论黄连素可减轻SCI小鼠脊髓组织中神经细胞凋亡,这可能与其抑制线粒体氧化损伤、减少Cyt C释放、降低凋亡蛋白表达有关。     

Effect of hypertonic saline on electrocardiography QRS duration in rabbit model of bupivacaine toxicity resuscitated by intravenous lipid

Intravenous lipid emulsion is established therapy for bupivacaine induced cardiotoxicity. The benefit of combined hypertonic saline and lipid treatment is unexplored. In this experiment, sedated rabbits were resuscitated from bupivacaine‐induced asystole with intravenous lipid according to the Association of Anaesthetists of Great Britain and Ireland’s guideline, or by identical lipid dosing with hypertonic saline: 6 mEq.kg^?1 21% sodium chloride. Early electrocardiography QRS prolongation was less with lipid plus hypertonic saline (mean (SD) QRS 0.19 (0.07) s lipid only vs 0.09 (0.01) s lipid plus hypertonic saline; p = 0.003) at 9 min though not different from the lipid only group at 20 min. No difference was observed in rates of circulatory return (7/10 lipid only and 9/10 lipid plus hypertonic saline; p = 0.58) or survival (5/10 lipid only and 6/10 lipid plus hypertonic saline; p = 1.00). Some benefit to cardiac conduction may be afforded by hypertonic saline co‐administered with lipid emulsion in bupivacaine‐induced cardiotoxicity.     

GM-1预处理减轻布比卡因诱导的N2a细胞凋亡

目的 研究单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM-1)预处理对布比卡因诱导N2a细胞凋亡后对c-Jun氨基末端激酶(JNK)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达的影响.方法 体外培养小鼠神经母细胞瘤细胞N2a细胞株,取对数生长期N2a细胞,将细胞随机分为四组:对照组(C组),N2a细胞无任何药物处理;GM-1组...     

Genistein预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨genistein预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。
方法：54只SD大鼠完全随机分成3组。A组为I/R组:70%热缺血60 min及再灌注;B组为I/R
 genistein（GST）预处理组;C组为假手术组。于成模后2,6,12 h取大鼠血清和肝组织,检测血清AST,ALT浓度和肝组织MDA浓度,免疫组化法检测肝组织casepase-3蛋白的表达,光镜下观察肝脏组织病理变化。
结果：与I/R组相比,genistein预处理血清中AST及ALT浓度明显降低,肝组织病理损伤明显减轻。肝组织casepase-3蛋白表达及MDA浓度显著降低（均P＜0.05）。
结论：genistein预处理对大鼠肝脏热缺血再灌注具有保护作用,其机制与清除氧自由基,抑制细胞凋亡有关。     

基于TNFR/RIPK1通路探索紫草素对大鼠脊髓损伤的作用及机制

目的:初步探讨紫草素对大鼠急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后神经功能恢复的影响及作用机制。方法:将96只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠分为4组:假手术组,即A组;假手术+紫草素组,即B组;脊髓损伤+二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组,即C组;脊髓损伤+紫草素组,即D组;每组24只。C、D组采用钳夹法制作大鼠急性SCI 模型。所有大鼠硬膜下置管,A 组不给药,B组和D组造模后30 min 经导管注射紫草素100 mg·kg^-1,C组注射等量 DMSO,每日1次,至取材时间点。各组分别于造模后6、12 h和3 d 每组取8只大鼠,行 Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分及造模后1、3、7、14、21 d行斜板实验,再处死动物取脊髓组织。造模后1 h 每组大鼠腹腔注射碘化丙啶(propidine iodide,PI)1 mg·kg^-1,术后24 h取材检测脊髓组织 PI 红染细胞数;24 h 时取材采用苏木素-伊红(haematoxylin eosin,HE)染色观察脊髓损伤情况,尼氏(Nissl)染色观察神经元存活数量,使用Western-blot技术检测 B细胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白及凋亡相关蛋白受体相互作用蛋白激酶1(receptor-interacting protein kinase 1,RIPK1)的表达水平。结果:造模后A组和B组各时间点的 BBB 评分均正常,C、D组各时间点均低于A、B组,D组造模后12 h和3 d的 BBB 评分高于同时间点C组(P<0.05)。造模后12 h,D组PI 红染细胞较C 组明显减少,神经元崩解减轻(P<0.05)。造模后24 h,A 组和 B 组脊髓组织 HE 和 Nissl 染色正常,D 组脊髓组织损伤程度和存活神经元数量均优于 C 组(P<0.05)。Bcl-2、RIPK1蛋白在A 组、B 组表达很低; RIPK1 在C组表达明显增高,在D组表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);Bcl-2蛋白在D 组表达高于C 组(P<0.05)。结论:紫草素可减轻大鼠急性SCI后的病理变化,改善行为学评分,促进脊髓神经功能恢复。其具体机制可能与抑制TNFR/RIPK1信号通路介导的坏死性凋亡有关。     

7,8-二羟基黄酮对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的评价7,8-二羟基黄酮(7,8-dihydroxyflavone,7,8-DHF)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H₂O₂)引起PC12细胞损伤的影响,并探究其机制。方法采用随机数字表法将PC12细胞分为4组(每组4皿):对照组(C组)、7,8-DHF组(D组)、H₂O₂组(H组)、7,8-DHF+H₂O₂组(D+H组)。C组加入PBS缓冲液,D组加入25μmol/L 7,8-DHF,H组和D+H组均加入200μmol/L H₂O₂,D+H组在加入H₂O₂前采用25μmol/L 7,8-DHF预处理1 h。各组细胞孵育24 h后采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞活力,2,4-二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率,Hoechst染色法和膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-fluorescein isothiocyanate,FITC)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染法结合流式细胞仪观察并分析细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)法测定酸敏感离子通道3(acid-sensing ion channel 3,ASIC3)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)/B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(B-cell lymphoma-2 related X protein,Bax)的mRNA表达,Western blot法测定ASIC3、Bcl-2/Bax、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-3,cleaved caspase-3)蛋白水平。结果与C组比较:H组PC12细胞数量和细胞活力明显降低,LDH释放率及细胞凋亡率明显升高,ASIC3 mRNA表达和蛋白水平均上调,cleaved caspase-3蛋白水平上调,Bcl-2/Bax mRNA比值和蛋白比值均降低(P<0.05);D组和D+H组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。与H组比较,D+H组细胞形态接近正常,细胞数量和细胞活力明显升高,LDH释放率及细胞凋亡率明显降低,ASIC3 mRNA表达和蛋白水平均下调,cleaved caspase-3蛋白表达下调,Bcl-2/Bax mRNA比值和蛋白比值均升高(P<0.05)。结论7,8-DHF可以减轻H₂O₂引起的PC12细胞损伤,其机制可能与抑制ASIC3信号从而减轻细胞凋亡有关。     

JAK2/STAT3信号通路介导姜黄素在骨性关节炎软骨细胞代谢中的影响

目的 :探讨酪氨酸蛋白激酶2/信号转导和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路对软骨细胞代谢的影响以及线粒体抗氧化应激能力的改变,及JAK2/STAT3信号通路在此过程中的作用以及姜黄素对其影响。方法:选取雄性SPF级C57BL/6小鼠15只,体重10.05~15.00 g,平均12.80 g,随机分为对照组、OA组(Glasson法建立OA模型)及姜黄素+OA组(在OA组处理的基础上,术后每日腹腔注射100 mg/kg姜黄素),每组各5只。4周后用脱颈法处死3组小鼠取材,观察各组大体标本形态学变化及采用免疫组织化学法观察标本改变;采用Western blot蛋白印迹法检测各组p-JAK2、p-STAT3和Bax蛋白的表达,同时检测各组线粒体氧化应激指标琥珀酸脱氢酶(SDH)及细胞色素C氧化酶(COX)改变。结果:4周后,在软骨组织标本形态学方面,对照组软骨组织呈半透明状,无肿胀、充血,软骨细胞数量多,胞核呈椭圆形,染色质分布均匀;姜黄素+OA组关节轻微肿胀,无充血,软骨细胞形态较规则,细胞数量略减少;OA组关节面粗糙,表面变薄、有轻度破损现象,细胞排列稍紊乱,视野下可见核消失,染色不均匀。与对照组相比,OA组和姜黄素+OA组软骨细胞p-JAK2、p-STAT3蛋白表达降低(P0.05)、Bax蛋白表达升高(P0.05),SDH和COX蛋白水平表达均降低(P0.05);与OA组比较,姜黄素+OA组软骨细胞p-JAK2、p-STAT3蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,SDH和COX蛋白水平表达均升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:JAK2/STAT3信号通路与骨性关节炎软骨退变的病理过程密切相关,姜黄素可激活JAK2/STAT3信号通路,增加软骨细胞线粒体抗氧化应激能力,明显缓解关节软骨的退变,降低OA进展水平。     

活血止痛汤对硬膜外瘢痕中线粒体凋亡途径相关基因的影响

目的:探讨中药活血止痛汤对硬膜外瘢痕中线粒体凋亡途径及Caspase3,9,Bax,Bcl2相关基因表达水平的影响。方法:雌性新西兰白兔60只(体重:2.5～3.0kg)按随机数目表分成假手术组(A)、空白对照组(B)、透明质酸钠组(C)和活血止痛汤组(D,主要药物有当归20g、赤芍20g、红花20g、乳香15g、没药15g等11味),每组15只。除A组外,其余各组手术切除L4,5椎板,造成1.0cm×1.0cm硬脊膜裸露区。C组于硬膜囊外均匀地涂上一层透明质酸钠约0.5ml,B、D组以等量生理盐水处理,术后2周内D组予活血止痛汤(2.5ml/kg,每日1次,连续14d)灌胃。术后第2、4、8周末每组各处死5只,逆转录酶链反应(RT-PCR)测定其硬膜外瘢痕组织中Caspase3,9,Bax,Bcl2的表达水平。结果:RT-PCR检测发现各组Caspase3,9,Bax,Bcl2的表达水平在各个时期均与A组存在统计学差异(P0.01)。第2、4、8周时,C组和D组Caspase3,9,Bcl2的表达水平均明显低于B组(P0.05),Bax则明显高于B组(P0.05);在第8周时,D组Caspase3,9,Bax,Bcl2的表达水平与C组亦有统计学意义(P0.05)。结论:活血止痛汤通过调节Caspase3,9,Bax,Bcl2的表达,可进一步诱导线粒体的凋亡通路,从而达到预防硬膜外瘢痕增生、粘连的效果。     

L-carnitine reduces susceptibility to bupivacaine-induced cardiotoxicity: an experimental study in rats

Background

The primary aim of this study was to evaluate the effect of acute administration of L-carnitine 100 mg·kg^?1 iv on susceptibility to bupivacaine-induced cardiotoxicity in rats.

Methods

In the first of two experiments, L-carnitine 100 mg·kg^?1 iv (n = 10) or saline iv (n = 10) was administered to anesthetized and mechanically ventilated Sprague-Dawley rats following which an infusion of bupivacaine 2.0 mg·kg^?1·min^?1 iv was given until asystole occurred. The primary outcome was the probability of survival. Secondary outcomes included times to asystole, first dysrhythmia, and to 50% reductions in heart rate (HR) and mean arterial pressure (MAP). To determine whether the same dose of L-carnitine is effective in treating established bupivacaine cardiotoxicity, we also conducted a second experiment in which bupivacaine 20 mg·kg^?1 iv was infused over 20 sec. Animals (n = 10 per group) received one of four iv treatments: 30% lipid emulsion 4.0 mL·kg^?1, L-carnitine 100 mg·kg^?1, 30% lipid emulsion plus L-carnitine, or saline. The primary outcome was the return of spontaneous circulation (ROSC) during resuscitation.

Results

In the first study, L-carnitine 100 mg·kg^?1 increased the probability of survival during bupivacaine infusion (hazard ratio, 12.0; 95% confidence interval, 3.5 to 41.5; P < 0.001). In L-carnitine-treated animals, the times to asystole, first dysrhythmia, and to 50% reductions in HR and MAP increased by 33% (P < 0.001), 65% (P < 0.001), 71% (P < 0.001), and 63% (P < 0.001), respectively. In the second study, no animal in the control or L-carnitine alone groups achieved ROSC when compared with the lipid emulsion groups (P < 0.01).

Conclusion

These findings suggest that acute administration of L-carnitine 100 mg·kg^?1 decreases susceptibility to bupivacaine cardiotoxicity, but is ineffective during resuscitation from bupivacaine-induced cardiac arrest.