富马酸二甲酯对小鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

目的探讨富马酸二甲酯(DMF)在小鼠肾脏缺血再灌注损伤中的保护作用及可能的机制。方法将小鼠随机分成3组(n=8):假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)和DMF预处理组(DMF组)。IR组及DMF组制备肾脏IR模型,再灌注24h后收集血清及肾组织,测定血清肌酐(SCr)及尿素氮(BUN)值;评定肾脏组织形态学改变;检测肾脏组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力;Western-blot检测各组肾组织内核因子E2相关因子2(Nrf2)及血红素氧化酶-1(HO-1)蛋白含量。结果IR组SCr及BUN显著高于S组[(143.17±14.18)μmol/L,(26.52±3.56)mmol/L vs.(24.50±5.54)μmol/L,(8.25±2.14)mmol/L,P0.01];DMF组SCr及BUN均低于IR组[(81.83±9.39)μmol/L,(18.62±2.75)mmol/L vs.(143.17±14.18)μmol/L,(26.52±3.56)mmol/L](P0.01);和IR组比较,DMF组的组织形态学损伤较轻(P0.01);DMF组过氧化损伤指标MDA水平低于IR组[(3.55±0.48)μmol/g vs.(5.48±0.70)μmol/g](P0.01),而抗氧化酶SOD水平高于IR组[(35.02±4.13)kU/g vs.(23.80±4.36)kU/g](P0.01)。Western-blot及免疫组化结果显示DMF组Nrf2和HO-1蛋白表达水平高于IR组(P0.05)。结论 DMF对小鼠肾缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1通路进而提高肾脏抗氧化应激能力有关。     

腹腔镜胆囊切除术中应用不同器械对机体氧化应激的影响

目的探讨在腹腔镜胆囊切除术(laparoscopic cholecystectomy,LC)术中应用不同器械对机体氧化应激的影响。方法选择2007年10月～2008年10月符合标准的胆囊切除术78例,LC术中分别使用超声刀(A组,n=30)和电刀(B组,n=30),18例因经济原因要求开腹手术(C组,n=18)。术前、术后0h、12h、24h检测3组患者丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平并进行比较。结果与术前相比,LC术后0h MDA[A组:(7.141±1.024)nmol/Lvs(6.483±0.721)nmol/L,q=3.940,P0.05;B组:(7.357±1.151)nmol/Lvs(6.562±0.730)nmol/L,q=4.545,P0.05]均明显升高,C组升高不明显[(6.676±0.920)nmol/Lvs(6.575±0.762)nmol/L,q=0.505,P0.05]。术后24h MDALC组均恢复至术前水平[A组:(6.635±0.903)nmol/Lvs(6.483±0.721)nmol/L,q=0.910,P0.05;B组:(6.762±0.884)nmol/Lvs(6.562±0.730)nmol/L,q=0.890,P0.05],而C组持续升高[(7.715±1.183)nmol/L vs(6.575±0.762)nmol/L,q=4.880,P0.05]。与术前相比,术后0hLC组SOD活性降低[A组:(99.405±18.840)U/ml vs(121.821±15.535)U/ml,q=7.039,P0.05;B组:(101.516±19.304)U/ml vs(124.242±16.301)U/ml,q=6.962,P0.05],C组降低不明显[(111.019±18.425)U/ml vs(118.748±18.247)U/ml,q=2.443,P0.05];术后24hLC组均恢复至术前水平[A组:(120.487±17.004)U/ml vs(121.821±15.535)U/ml,q=0.420,P0.05;B组:(119.118±18.235)U/ml vs(124.242±16.301)U/ml,q=1.570,P0.05],而C组继续降低[(102.363±15.741)U/ml vs(118.748±18.247)U/ml,q=4.009,P0.05]。A组术后各时点MDA水平较B组无明显差异(P0.05),而术后12h SOD活性较B组明显偏高[(119.836±18.208)U/ml vs(109.917±17.543)U/ml,q=3.080,P0.05]。结论 LC术中CO2气腹可导致氧化应激的产生,但较开腹胆囊切除术恢复快;LC术中应用超声刀较电刀更有利于机体术后氧化应激的恢复。     

线粒体靶向抗氧化剂Mitoquinone对人精子冻融氧化应激损伤的保护作用

目的:探讨线粒体靶向抗氧化剂Mitoquinone(Mito Q)对冻融人精子的保护作用。方法:选取60份健康生育男性精液标本,每份精液一式6份,不含Mito Q者设为对照组(G0),而G1、G2、G3、G4、G5实验组混合液中分别含有2 nmol/L、20 nmol/L、200 nmol/L、2μmol/L、20μmol/L Mito Q,37℃孵育1 h后检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)和线粒体膜电位(MMP)变化。选取合适Mito Q浓度B1、B2组用于精子冷冻保存,B0组未添加Mito Q,B1、B2组在精子冷冻保护液中分别含有200 nmol/L和2μmol/L Mito Q,进行冷冻保存,检测冷冻复苏后的ROS水平、MDA含量和MMP改变。结果:新鲜精液添加Mito Q孵育后,G3组和G4组前向运动精子百分率[(30.8±10.2)%和(32.7±13.5)%]和总活动率[(70.6±9.0)%和(70.3±11.9)%]显著高于G0组[(17.6±5.0)%、(54.9±11.5)%](P0.05);随着Mito Q浓度的增加,ROS水平呈下降趋势,G3、G4、G5组(分别为86.5±31.6、93.6±42.0、45.1±15.0)显著低于G0组(160.8±39.7)(P0.05);MDA含量G3、G4组[分别为(0.9±0.5)、(0.9±0.5)μmol/mg]明显低于G0组[(1.9±1.1)μmol/mg](P0.05),而G5组[(1.7±0.7)μmol/mg]不但没有降低,反而显著高于G3、G4组(P0.05);与G0组MMP(1 701±251)相比,G5组(1 156±216)显著降低(P0.05),而G1、G2、G3、G4组(分别为1 810±298、1 995±437、1 950±334、1 582±314)无明显变化。冷冻复苏后各组前向运动精子百分率和总活动率均较新鲜精液明显下降(P0.01),B1组前向运动精子百分率[(3.2±2.3)%]较B0组[(0.8±0.6)%]明显改善(P0.05);B1组精子总活动率[(43.0±9.5)%]较B0组[(26.5±11.4)%]明显改善(P0.05);B1组ROS[(34.6±12.3)]和B2组ROS[(37.0±10.5)]均较B0组[(56.9±14.3)]显著下降(P0.05),B1组MDA[(1.4±0.5)μmol/mg]和B2组MDA[(1.4±0.6)μmol/mg]均较B0组[(2.6±1.0)μmol/mg]显著下降(P0.05),B1组MMP[(1 010.0±131.5)]和B2组MMP[(880.6±128.6)]均显著高于B0组[(721.1±24.8)](P0.05)。结论:在精液冻存液中添加200 nmol/L的Mito Q能有效提高人精子质量,可作为精液冷冻保护添加剂用于精液的冷冻保存。     

大鼠精索静脉曲张氧化应激介导附睾上皮紧密连接蛋白ZO-1损伤及对附睾功能的影响

目的:探索精索静脉曲张(VC)大鼠模型中氧化应激介导附睾上皮紧密连接蛋白ZO-1损伤及对附睾功能影响。方法:将45只体重220～235 g的SD大鼠随机分为假手术组(单纯暴露并分离左肾静脉)、实验组(部分缩窄左肾静脉并充分结扎精索静脉侧支)和治疗组[造模术后给予150 mg/(kg·d)维生素E灌胃60 d],每组各15只。模型构建后60d分别观察左侧附睾组织学改变,采用qPCR、免疫组化染色、免疫荧光染色及Western印迹等检测左侧附睾上皮连接蛋白ZO-1及连接相关蛋白表达水平,同时检测附睾组织超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)活性,丙二醛(MDA)、α葡糖苷酶含量以及精子活力指标。结果:与假手术组相比,实验组左侧附睾上皮结构紊乱,上皮细胞数量减少,可见部分上皮细胞脱落至附睾管腔。qPCR检测claudin11、β-catenin、JAM-A、cadherin12、ZO-1等多个连接蛋白表达,结果显示除实验组较假手术组ZO-1表达明显下调外(P0.05),其余蛋白均无显著差异。免疫组化染色、免疫荧光染色Western印迹结果显示,与假手术组相比,实验组ZO-1表达明显降低(P0.05);经维生素E治疗后,治疗组ZO-1表达较实验组明显升高(P0.05)。实验组较假手术组大鼠附睾组织中MDA明显升高[(1.21±0.18)nmol/mg protein vs(0.41±0.05)nmol/mg protein,P0.05)],SOD[(298.62±67.84)U/mg protein vs(814.65±73.64)U/mg protein,P0.05)]、T-AOC[(0.24±0.04)nmol/mg protein vs(0.84±0.07)nmol/mg protein,P0.05)]、α葡糖苷酶[(5.82±1.24)U/mg protein vs(11.72±2.72)U/mg protein,P0.05)]明显降低;经维生素E干预后,治疗组SOD [(497.73±48.03)U/mg protein]、T-AOC[(0.42±0.06)nmol/mg protein]、α葡糖苷酶[(9.11±1.91)U/mg protein]较实验组明显回升(P0.05),MDA[(0.69±0.12)nmol/mg protein]明显下降(P0.05)。附睾精子活力检测,实验组较假手术组前向运动精子百分率明显降低[(31.33±6.32)%vs(71.21±5.21)%,P0.05],经维生素E干预后治疗组[(60.68±5.31)%]明显提高(P0.05)。结论:精索静脉曲张通过氧化应激导致附睾上皮紧密连接蛋白ZO-1表达下调,附睾功能损伤。抗氧化剂维生素E能有效改善精索静脉曲张附睾氧化应激水平,促进ZO-1表达上调,改善附睾功能。     

线粒体ATP敏感性钾通道阻断剂对在体大鼠肺缺血后处理的作用及其机制

目的 探讨缺血后处理(IPO)对大鼠在体肺缺血-再灌注损伤(I/R)的保护作用及线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)在缺血后处理效应中的作用.方法 将Wistar大鼠35只随机分为5组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注损伤组(I/R组)、缺血后处理组(IPO组)、缺血再灌注损伤+5-羟基葵酸盐组(I/R+5-HD组)、缺血后处理+5-羟基葵酸盐组(IPO+5-HD组).观察各组肺组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、湿/干比值(W/D)以及病理形态学改变.结果 I/R组与Sham组比较MDA含量增加[(5.07±1.60)nmol/mg prot比(1.43±0.41)nmol/mgprot,P＜0.01],SOD活性减低[(12.38±2.24)U/mg prot比(45.51±5.42)U/mg prot,P＜0.01],W/D比值增高(5.45±0.82比3.05±0.47,P＜0.01),肺组织形态及超微结构明显受损;IPO+5-HD组与IPO组比较MDA含量增加[(3.74±0.71)nmol/mg prot比(2.60±0.43)nmol/mg prot,P＜0.01],SOD活性减低[(22.91±2.71)U/mg prot比(28.74±2.03)U/mg prot,P＜0.01],W/D比值增高(4.64±0.79比3.89±0.60,P＜0.01),肺组织形态及超微结构明显受损;IPO组与I/R组比较,肺组织MDA含量减少[(2.60±0.43)nmol/mg prot比(5.07±1.60)nmol/mg prot,P＜0.01],SOD活性增高[(28.74±2.03)U/mg prot比(12.38±2.24)U/mg prot,P＜0.01],W/D比值减低(3.89±0.60比5.45±0.82,P＜0.01),肺组织病理形态学改变轻于I/R组;I/R+5-HD组与I/R组比较,肺组织MDA含量[(5.14±1.30)mol/mg prot比(5.07±1.60)mol/mg prot,P＞0.05)、SOD活性[(11.65±1.82)U/mg prot比(12.38±2.24)U/mg prot,P＞0.05]、W/D比变化(5.54±0.61比5.45±0.82),差异无统计学意义(P＞0.05),肺组织病理形态学改变无明显差异.IPO+5-HD组的各项指标介于IPO组和I/R组之间.结论 缺血后处理能减轻大鼠在体肺缺血再灌注损伤,mitoKATP参与了肺缺血后处理效应.

Abstract：

Objective To investigate the protective effect of ischemic postconditioning (IPO) on lung ischemic reperfusion (L/R) in rats in vivo and the mechanism of mitochondrial ATP-sensitive potassium channel (mitoKATP) blocker in the ischemic postconditioning. Methods Thirty five Wistar rats were randomly divided into 5 groups: sham group, I/R group, ischemic postconditioning (IPO) group, I/R +5-hydroxydecanoate (I/R + 5-HD) group, IPO + 5-HD group. The concentration of malondialdehyde (MDA) and activity of superoide dismutase (SOD) were determined in the lung homogenate, wet to dry weight ratio (W/D) was measured and pathological changes were also observed. Results The levels of MDA[(5.07±1.60) vs (1.43 ±0.41) nmol/mg prot,P＜0. 01]and W/D (5.45 ±0.82 vs 3.05 ±0. 47,P ＜0. 01 ) were increased significantly in I/R group as compared with sham group, while the activity of SOD[( 12. 38 ±2. 24) vs (45.51 ±5.42) U/mg prot,P ＜0. 01]was decreased, and the injury of lung tissues was significantly aggravated in IPO + 5-HD group as compared with IPO group[MDA: (3.74 ±0. 71 ) nmol/mg prot vs (2. 60 ± 0. 43 ) nmol/mg prot , P ＜ 0. 01]; W/D: 4. 64 ± 0. 79 vs 3. 89 ± 0. 60,P＜0.01; SOD:[(22.91 ±2.71) U/mg prot vs (28.74±2.03) U/mg prot,P＜0. 01]. The levels of MDA[(2.60±0.43) vs (5.07 ±1.60) nmol/mg prot,P＜0. 01]and W/D (3.89 ±0.60 vs 5.45 ±0. 82,P ＜0. 01 ) were decreased significantly in IPO group as compared with I/R group, the activity of SOD[(28.74±2.03) vs (12.38 ±2.24) U/mg prot,P＜0. 01]increased and lung tissue histological damage attenuated. The difference in MDA[(5.14 ± 1.30) vs (5.07 ± 1.60) nmol/mg prot, P ＞ 0. 05],W/D (5.54±0.61 vs5.45 ±0.82,P＞0.05) and SOD[(11.65 ±1.82) vs (12.38 ±2.24) U/mgprot,P ＞ 0. 05]levels had no statistical significance between I/R + 5-HD group and I/R group, and the injury of lung tissues had no significant difference too. Each index in IPO + 5-HD group was between IPO and I/R groups. Conclusion Ischemic postconditioning can attenuate the lung I/R injury, and mitoKATP plays a vital role in the protective procession of ischemic postconditioning on lung ischemic reperfusion.     

结直肠癌患者血清25(OH)D、IGF1和IGFBP3水平变化

目的:分析结直肠癌(CRC)患者血清25羟基维生素D[25(OH)D];胰岛素样生长因子1(IGF1);胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)水平的变化,探讨三者间关系及其与肿瘤临床病理特征之间的关系。方法:检测150例健康对照人群及150例CRC患者血清25(OH)D、IGF1、IGFBP3等指标,收集CRC患者肿瘤临床病理特征资料,进行统计分析。结果:CRC患者血清25(OH)D[(33.17±15.75)nmol/L]及IGFBP3[(133.06±53.42)μg/L]均低于健康对照人群[分别为(41.18±11.59)nmol/L、(150.48±49.32)μg/L,P0.05];但CRC患者血清IGF1水平与健康对照人群未见显著差异;CRC患者血清IGFBP3低水平组血清IGF1[(122.46±66.35)ng/mL]及25(OH)D[(30.11±14.91)nmol/L]均低于IGFBP3高水平组[分别为(147.63±61.44)ng/mL、(35.20±16.38)nmol/L,P0.05];肿瘤细胞高中分化组血清IGF1水平[(124.64±59.34)ng/mL]低于低分化组[(172.78±66.92)ng/mL],浸润突破肌层组血清IGFBP3水平[(141.25±48.43)μg/L]高于浸润未突破肌层组[(116.89±60.78)μg/L,P0.05]。结论:联合检测CRC患者血清25(OH)D、IGF1、IGFBP3水平,对疾病早期诊断及预估病情具有临床应用意义。     

深低温期间高氧血气管理对停循环兔脑组织的保护作用

目的通过研究深低温期间高氧血气管理对深低温停循环(DHCA)兔血气、生化指标、脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、脑组织含水量的影响,探讨高氧管理的脑保护作用。方法建立兔DHCA+选择性脑灌注(ASCP)动物模型,将24只11～13周龄雄性新西兰兔(体重2.7～3.4 kg)用随机数字表法分为3组:假手术组(Sham组),ASCP组(S组),ASCP+高氧管理组(SH组),每组8只。术中检测动脉血氧分压(PaO2)、动脉血氧饱和度(SaO2)、颈静脉球血氧分压(PjvO2)、颈静脉球血氧饱和度(SjvO2)和血乳酸(Lac)含量,术后检测脑组织SOD活性、MDA含量和脑组织含水量。结果停循环前、复灌前和复灌5 min SH组PaO2、PjvO2和SjvO2均高于S组和Sham组(P0.05)。SH组脑组织SOD活性与S组[(213.53±33.52)U/mg.prot vs.(193.02±27.67)U/mg.prot]和Sham组[(213.53±33.52)U/mg.prot vs.(244.38±35.02)U/mg.prot]比较差异无统计学意义(P0.05),但S组SOD活性低于Sham组(P0.05)。SH组脑组织MDA含量低于S组[(1.42±0.30)nmol/mg.prot vs.(2.37±0.55)nmol/mg.prot,P0.05]。结论深低温期间的高氧血气管理在DHCA+ASCP中能提供更好的氧供,有效地提高兔PjvO2和SjvO2,维持脑组织SOD活性,降低MDA含量,具有脑保护作用。     

金匮肾气丸对环磷酰胺所致睾丸损伤小鼠睾丸组织Nrf2信号通路基因表达的影响

目的:探究金匮肾气丸对环磷酰胺致小鼠睾丸损伤保护作用及其抗氧化机制。方法:将30只雄性小鼠均分为空白组、模型组和金匮肾气丸治疗组。治疗组小鼠给予1.2 g/kg体重剂量的金匮肾气丸进行灌胃,空白组和模型组小鼠给予相同体积的生理盐水灌胃,每天1次;在治疗的第7天,模型组和治疗组小鼠给予50 mg/kg体重剂量环磷酰胺进行腹腔注射,每周1次,连续用药35 d。实验结束后对所有小鼠称重(体重和睾丸重量)并采集血液进行睾酮含量检测,取附睾头用于精子质量检测,取睾丸进行组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),病理组织学及核因子E2相关因子2 (Nrf2)信号通路相关基因PCR检测。结果:实验结束时,模型组小鼠体重[(34.63±1.92) g vs(48.32±1.64) g]、睾丸质量[(80.0±3.9) mg vs(140.0±6.1) mg]、睾丸脏器系数[(0.22±0.01)%vs(0.31±0.03)%]、精子活率[(48.66±8.08)%vs(89.33±4.04)%]、精子浓度[(28.42±5.26)×10~6/ml vs(77.67±8.73)×10~6/ml]、SOD [(140.82±10.08) U/mg prot vs(358.52±40.41) U/mg prot]和血清睾酮[(8.75±0.96) pg/ml vs(21.75±1.71) pg/ml]水平较空白组显著降低(P<0.05),畸形精子百分率[(37.33±2.08)vs(15.33±1.53)%]和MDA[(54.89±6.09) nmol/ng prot vs(30.21±2.17) nmol/ng prot]水平显著升高(P<0.05);金匮肾气丸治疗组小鼠体重[(39.80±2.89) g vs(34.63±1.92) g]、睾丸质量[(130.00±11.00) mg vs(80.00±3.90) mg]、睾丸脏器系数[(0.28±0.01)%vs(0.22±0.01)%]、精子活率[(76.00±5.29)%vs(48.66±8.08)%]、精子浓度[(56.08±4.29)×10~6/ml vs(28.42±5.26)×10~6/ml]、SOD[(206.59±16.38) U/mg prot vs(140.82±10.08) U/mg prot]和血清睾酮[(15.50±1.29) pg/ml vs(8.75±0.96) pg/ml]水平较模型组显著升高(P<0.05),畸形精子百分率[(25.01±2.99)%vs(37.33±2.08)%]和MDA[(35.84±3.61) nmol/ng prot vs(54.89±6.09) nmol/ng prot]水平显著降低(P<0.05)。模型组依赖还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ醌氧化还原酶1(NOQ-1)、Nrf2、血红素氧合酶1(HO-1)mRNA的表达水平较空白组显著降低(P<0.05),半胱天冬酶3(Caspase 3)mRNA表达水平显著升高(P<0.05);金匮肾气丸治疗组小鼠Nrf2和HO-1 mRNA的表达水平较模型组显著升高(P<0.05),Caspase 3 mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。病理组织学结果发现,模型组小鼠生精小管管腔内各级生精细胞层数减少,部分生精小管细胞完全脱落,精子数量减少;治疗组小鼠生精小管恢复趋于正常。结论:金匮肾气丸可有效抑制环磷酰胺造成的睾丸损伤,其机制可能与金匮肾气丸能调控Nrf2信号通路基因表达,增强抗氧化酶的活性有关。     

肥胖对雄性大鼠生殖功能影响的机制研究

目的研究肥胖对雄性大鼠生殖功能的影响,初步探讨其氧化损伤的相关机制。方法 6周龄SD雄性大鼠随机分成对照组(普通饮食,15只)和肥胖组(高脂饮食,30只)。喂养16周后,处死,测定体重、脏器系数、代谢参数和生殖内分泌激素(GnRH、FSH、LH、TT、E_2)和SHBG,检测睾丸生精细胞凋亡、氧化应激和附睾精子参数,比较两组各指标差异。结果与对照组大鼠相比,肥胖组大鼠体重和Lee指数明显增加,血清瘦素(Lep)[(3.17±0.23)ng/ml vs.(2.33±0.21)ng/ml]、胰岛素(INS)[(28.99±2.43)μU/ml vs.(20.62±1.72)μU/ml]和甘油三酯(TG)[(0.55±0.03)mmol/L vs.(0.36±0.04)mmol/L]显著升高,血清GnRH[(36.46±1.95)pg/ml vs.(45.51±2.75)pg/ml]、LH[(3.06±0.37)U/L vs.(4.67±0.70)U/L]、总睾酮(TT)[(0.81±0.13)ng/ml vs.(1.98±0.32)ng/ml]、SHBG[(55.31±3.80)nmol/L vs.(71.69±4.65)nmol/L]显著降低,差异均有统计学意义(P0.05);TUNEL结果显示,肥胖组大鼠睾丸生精细胞凋亡指数显著高于对照组[(4.26±0.35)%vs.(3.09±0.28)%,P0.05];氧化应激结果表明,肥胖组大鼠的MDA上升、SOD降低,差异有统计学意义(P0.05);附睾精子分析发现,与对照组相比,肥胖组大鼠的精子活力显著下降[(14.36±7.67)%vs.(36.40±9.17)%,P0.01],而精子浓度无显著性差异(P0.05)。结论高脂饮食诱导雄性大鼠的肥胖,代谢和生殖内分泌紊乱,氧化损伤增加,导致生精细胞凋亡增加,并最终使精子活力下降。     

无创远程肢体缺血联合处理对大鼠肾脏急性缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨无创远程肢体缺血联合处理对大鼠肾脏急性缺血再灌注损伤的保护及作用机制.方法 30只健康雄性SD大鼠,随机分为3组(每组10只):A组为假手术组(Sham组)、B组为缺血再灌注组(IR组)、c组为无创远程肢体缺血联合处理组(RIperC+ RIpostC组).再灌注24h测定血清中肌酐(cr)和尿素氮(BUN)含量,肾脏组织中髓过氧化物酶(MPO)活力、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力并在光镜下观察肾脏组织形态学变化.结果 B组的Cr(429.52±29.08) μmol/L、BUN(39.05± 2.23) mmol/L、MPO(7.31±1.48) U/g、MDA (3.94±0.48) nmoL/mgprot均高于A组Cr(103.91±21.45)μmol/L(P＜0.001)、BUN(12.20±1.86) mmol/L(P＜0.001)、MPO(2.25±0.89) U/g(P=0.009)、MDA(1.95±0.29) nmol/mgprot(P=0.003);而SOD(4.03±0.38) U/mgprot低于A组SOD(6.819±0.68) U/mgprot(P=0.003).c组的Cr(244.85±40.30) μmol/L(P=0.002) 、BUN(23.48±1.80) mmol/L(P＜0.001)、MPO(3.65±0.73) U/g(P =0.045)、MDA(2.19±0.31) nmol/mgprot(P=0.006)均低于B组,而SOD(5.71±0.30) U/mgprot(P=0.003)高于B组.A组组织形态基本正常,c组组织形态学改变较B组明显减轻.结论 无创远程肢体缺血联合处理对肾脏急性缺血再灌注损伤有显著保护作用.其保护作用可能通过对肢体短暂的缺血再灌注激发了机体内源性的抗氧化能力,从而达到减轻肾脏的急性缺血再灌注损伤.     

虾青素在奥硝唑致少弱精子症大鼠氧化损伤中的保护作用研究

目的:探讨虾青素(AST)对奥硝唑(ORN)致少弱精子症大鼠精子质量的改善作用及其机制。方法:40只成年雄性SD大鼠,随机分成5组,每组8只。分别为A组(溶剂对照组):0.5%羧甲基纤维素钠溶剂+1 ml玉米油、B组(ORN低剂量造模组):ORN 400 mg/(kg·d)、C组(ORN高剂量造模组):ORN 800 mg/(kg·d)、D组(ORN低剂量造模+AST治疗组):ORN 400 mg/(kg·d)+AST 20 mg/(kg·d)、E组(ORN高剂量造模+AST治疗组):ORN 800 mg/(kg·d)+AST 20 mg/(kg·d),灌胃3周后水合氯醛腹腔麻醉大鼠;取1侧附睾尾部检测精子浓度和活力,另1侧附睾组织匀浆,检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽还原酶(GR)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。结果:与A组相比,B组附睾尾精子活力,附睾GSH-Px、SOD活性显著降低,MDA含量显著上升(P﹤0.05);C组附睾尾精子活力、浓度、睾丸系数,附睾组织GSH-Px、GR、CAT、SOD活性均显著降低,而MDA含量显著上升(P﹤0.05)。AST治疗组:与B组相比,D组附睾尾精子活力和附睾组织SOD活性显著增加[(45.3±8.7)%vs(66.3±8.9)%;(116.7±25.3)U/mg prot vs(146.1±23.8)U/mg prot,P﹤0.05],而MDA含量显著下降[(1.68±0.45)nmol/mg prot vs(1.19±0.42)nmol/mg prot,P﹤0.05];与C组相比,E组实验后体重增量、精子活力显著增加,而MDA含量显著下降[(89.0±9.5)%vs(99.9±4.1)%;(17.9±3.5)%vs(27.3±5.3)%;(2.03±0.30)nmol/mg prot vs(1.52±0.41)nmol/mg prot,P﹤0.05]。结论:AST可提高ORN致大鼠少弱精子症模型的精子质量,其机制可能是提高了大鼠附睾的抗氧化能力。     

小剂量氯胺酮预处理对大鼠肠缺血/再灌注后肝脏血红素加氧酶-1表达的影响

目的 观察小剂量氯胺酮对血红素加氧酶-1 (heme-oxygenase 1,HO-1)在大鼠肠缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)后肝脏中表达的影响,并对其可能的保护机制作一初步探讨. 方法 48只雄性成年SD大鼠按随机数字表法分为A组(氯胺酮10 mg/kg术前30 min腹腔注射+假手术)、B组(盐水0.2 ml术前30 min腹腔注射+假手术)、C组(氯胺酮10 mg/kg术前30 min腹腔注射+小肠I/R)、D组(盐水0.2 ml术前30 min腹腔注射+小肠I/R)、E组(锌原卟啉5 mg/kg、氯胺酮10 mg/kg术前30 min腹腔注射+小肠I/R)、F组(锌原卟啉5 mg/kg、盐水0.2 ml术前30 min腹腔注射+小肠I/R),每组8只.小肠I/R造模组大鼠通过夹闭肠系膜上动脉60 min,然后松血管夹,于再灌注6h后取材,测定肝组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;采用免疫组化法测定肝组织HO-1的表达和定量;光镜下观察肝脏病理学改变;取外周静脉血测血清谷丙转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,GPT)、谷草转氨酶(glutamic-oxaloacetic transaminase,GOT). 结果 A、B两组间各项数据比较差异无统计学意义(P＞0.05);各缺血造模组大鼠肝组织MDA含量:C组[(2.69±0.35) μmol/g]、D组[(4.62±0.36) μmol/g]、E组[(4.35±0.24) μmol/g]、F组[(4.74±0.34) μmol/g]与B组[(1.08±0.26) μmol/g]比较,显著升高;SOD活力:C组[(129±6) μU/L]、D组[(102±5) μU/L]、E组[(99±4)μU/L]、F组[(96±6)μU/L]与B组[(133±7) μU/L]比较,显著下降;血清GOT、GPT含量:C组[GPT(212±21) U/L,GOT(129±16) U/L]、D组[GPT(416±33) U/L,GOT(362±15)U/L]、E组[GPT(407±29) U/L,GOT(359±14) U/L]、F组[GPT(414-±40) U/L,GOT(366±16) U/L]与B组[(GPT(53±9) U/L,GOT(83±7) U/L]比较,显著升高;HO-1表达:C组(0.472±0.126)、D组(0.324±0.078)、E组(0.337±0.092)、F组(0.328±0.083) OD与B组(0.078±0.010) OD比较,显著上调(P＜0.05或P＜0.01);与D组比较,C组血清GPT、GOT、肝组织MDA含量均显著降低,SOD活力显著上升,HO-1表达上调(P＜0.05);与D组比较,E组、F组血清GPT、GOT及MDA、SOD值差异无统计学意义(D0.05);E组和C组比较,血清GPT、GOT,肝组织MDA含量显著升高,SOD活力显著下降,HO-1表达下调(P＜0.05). 结论 小剂量氯胺酮预处理能减轻肠I/R后造成的肝脏损伤,这种作用在一定程度上是通过上调HO-1的表达来实现的.     

阿司匹林对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

目的 探讨阿司匹林对于局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法 将雄性SD大鼠40只随机分为3组,对照组(CTL,n=16)行大脑中动脉阻断(MCAO)及生理盐水术前灌胃7d;阿司匹林处理组(ASA,n=16)于MCAO前7d开始经胃管给予阿司匹林30 mg/(kg·d);另设立假手术组(Sham,n=8).脑缺血90 min后恢复血流,于MCAO后24 h处死大鼠,测定上述3组脑组织中白细胞介素-1 β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平(n=8);同时检测CTL组和ASA组的脑水肿指数、脑梗死体积、神经功能评分(n=8).结果 与对照组比较,ASA组大鼠缺血侧脑水肿指数、脑梗死体积及神经功能评分较对照组明显改善(P＜0.01);同时ASA组与CTL组比较,脑组织中IL-1β[(78.03±9.28) pg/mg比(439.10±71.80) pg/mg,P＜0.01]、IL-6[(86.35±10.19) pg/mg比(486.00±56.90) pg/mg,P＜0.01]、MDA含量[(1.74±0.31) nmol/mg比(3.96±0.68) nmoL/mg,P＜0.05]均降低,SOD活性提高[(274.26±31.64) U/mg比(195.35 ±26.31) U/mg,P＜0.05],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 围手术期采用阿司匹林可减轻脑组织氧化应激反应、抑制促炎因子释放,对局灶性脑缺血造成的中枢神经系统损伤具有保护作用.     

自体血回输对全髋关节置换术患者免疫功能的影响

目的 比较回收式自体血回输和异体血输血对全髋关节置换手术患者免疫功能的影响. 方法 选择50例全髋关节置换手术,随机数字表法分为自体血回输组(A组)和异体血输血组(B组),每组25例.术中根据血容量丢失情况分别用自体血回输及异体血输血,于麻醉前、输血后第2天和输血后第5天采用流式细胞仪测定血浆CD4+T淋巴细胞(CD4+)、CD8+T淋巴细胞(CDx+)、自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)的比例以及白细胞介素(interleukin,IL)-2(IL-2)和白细胞介素-6(IL-6)的值.结果 B组输血后CD4+、CD8+、NK细胞、IL-2的值在第2天[(35±6)、(22±6)、(7±3)％、(523±407) ng/L]和第5天[(35±6)、(26±8)、(6±4)％、(442±376) ng/L]均低于术前[(40±8)、(28±9)、(9±4)％、(839±472)ng/L] (P＜0.05);A组输血后CD4+、CD8+的值在第5天[(39±8)、(27±9) ng/L]、NK细胞、IL-2的值在第2天[(8±4)％、(807±534) ng/L]和第5天[(8±4)％、(821±437) ng/L]均较术前有所下降,但差异无统计学意义(P＞0.05);IL-6的值在第2天[(3198±698) ng/L]和第5天[(3076±703) ng/L]均较术前[(2593±784) ng/L]有所升高(P＜0.05). 结论 自体血回输对全髋关节置换手术患者细胞和体液免疫功能均无明显抑制作用,是安全、可靠的血液保护方式.     

小檗碱对梗阻性黄疸大鼠肾脏沉默信息调控因子1蛋白表达的影响及意义

目的 检测肾组织沉默信息调控因子1(SIRT1)蛋白表达和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的水平变化,以及肾细胞凋亡率等变化,探讨小檗碱(BBR)对梗阻性黄疸大鼠肾脏SIRT1蛋白表达的影响及其与肾功能保护的作用.方法 雄性Wistar大鼠45只,随机分为3组,A(Sham)组:假手术组,B(BDL)组:梗阻性黄疸组,C(BDL+BBR)组:梗阻性黄疸+小檗碱干预组.实验结束时取血清检测总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr),肾组织匀浆检测SOD、MDA、GSH,Western blot检测肾组织SIRT1蛋白表达,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾组织SIRT1 mRNA,原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测肾细胞凋亡.结果 B组与A组比较:血清BUN、Cr升高,肾组织SOD、GSH、SIRT1 mRNA及蛋白降低,细胞凋亡率升高(P＜0.05);C组与B组比较:血清BUN、Cr降低,肾组织SOD、GSH、SIRT1 mRNA及蛋白升高,细胞凋亡率降低(P＜0.05).A、B、C组BUN、Cr和肾组织SOD、GSH、SIRT1 mRNA及蛋白、细胞凋亡率指标为:A组(3.14 ±0.53) mmol/L、(31.32±11.08) μmol/L、(19.45 ±2.41) nu/mg、(2.31 ±0.14) nmol/g、1.00±0.00、0.27±0.01、(0.28±0.13)％;B组(8.37±1.57) mmol/L、(102.43±9.32) μmol/L、(5.96±1.43) nu/mg、(1.39±0.25) nmol/g、0.51 ±0.05、0.17±0.01、(19.36±2.56)％;C组(6.04±1.52) mmol/L、(78.58±13.63) μmol/L、(13.52±1.47) nu/mg、(1.97±0.19) nmol/g、0.79 ±0.04、0.22±0.01、(11.47±3.61)％.结论 BBR通过上调SIRT1蛋白促进SOD基因表达,而发挥抗氧化、抗凋亡作用,减轻梗阻性黄疸氧化性肾损害.     

西维来司钠对重症急性胰腺炎大鼠肝细胞凋亡及B-淋巴细胞/白血病-2/bax表达的影响

目的 观察西维来司钠(Sivelestat)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肝细胞凋亡及B-淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)/bax基因表达的影响,并探讨其机制.方法 健康雄性SD大鼠54只,随机分为C组(对照组)、P组(SAP组)、S组(SAP+ Sivelestat治疗组),每组18只.C组为假手术组,P组大鼠以4％牛黄胆酸钠胆胰管逆行注射制造重症急性胰腺炎模型,S组造模后立即给予Sivelestat [0.2mg/(kg·h)]尾静脉注射治疗.3组大鼠术后3、6、12h分别取6只检测血清中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)含量;取肝组织测定丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量;原位末端标记(TUNEL)法检测造模后大鼠肝细胞凋亡并计算凋亡指数(AI);流式细胞术方法测定肝细胞凋亡率;Western blot法检测造模后12 h bcl-2/bax基因表达.结果 与C组比较,各时点P组大鼠血清NE含量[(5.62±1.70)、(6.83±2.01)、(10.88±3.72) μg/L]、肝细胞凋亡指数(11.4±1.1、15.3±1.1、21.3±1.2)及细胞凋亡率均明显升高;肝组织内MDA含量升高[(9.13±1.32)、(11.62±3.71)、( 13.57±3.29) nmol/mg],SOD含量下降[(154.00±22.38)、(138.05±29.48)、(122.63±28.71) U/mg];肝组织bcl-2表达减少,bax表达增多.与P组比较,各时点S组大鼠血清NE含量[(3.57±2.30)、(4.11±2.16)、(6.66±2.69) μg/L]、肝细胞凋亡指数(8.1±0.7、11.2±0.8、15.1±1.0)及细胞凋亡率均有明显降低;肝组织内MDA含量降低[(5.75±0.86)、(7.95 ±3.01)、(9.77±3.45) nmol/mg]而SOD含量升高[(187.12±37.39)、(179.23±44.59)、( 163.55±25.79) U/mg];肝组织bcl-2表达增多而bax表达下降.结论 西维来司钠可抑制SAP大鼠肝细胞凋亡,具体机制可能与其拮抗NE及氧自由基从而提高bel-2/bax比值有关.     

盐酸曲美他嗪对大鼠肾脏急性缺血-再灌注损伤及氧化应激反应的影响

目的观察盐酸曲美他嗪(trimetazidine,TMZ)预处理对大鼠肾组织急性缺血再灌注损伤及氧化应激反应的影响。方法选择SD大鼠90只,随机均分为A、B两组。A组给予TMZ,剂量10 mg/kg,灌胃5 d后建立缺血再灌注(ischemia-reperfusion injury,IR1)、缺血再灌注后处理(ischemic postconditioning,IPO1)、假手术(sham operated,S1)模型;B组生理盐水灌胃5 d后建立缺血再灌注(IR2)、缺血再灌注后处理(IPO2)、假手术(S2)模型。检测各组末次恢复肾脏血供0、6、12、24、48 h后血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平。结果与IR1组相比,IR2组6 h的VCAM-1、MDA及24 h、48 h时BUN、SCr、VCAM-1、MDA、肾小管损伤程度评分明显较IR1组上升,SOD下降;IPO2组与IPO1组相比,6 h、12 h、24 h时VCAM-1、MDA均明显升高,SOD下降;24 h BUN、SCr、肾小管损伤程度评分也明显上升;IR1组与IPO1组相比,在24 h时除SCr外,BUN、VCAM-1、MDA、肾小管损伤程度评分均上升,SOD下降,48 h时VCAM-1、肾小管损伤程度评分明显较IPO1组上升,SOD下降;IPO2组与IR1组相比,在12 h、24 h时,VCAM-1、MDA、肾小管损伤程度评分均上升,SOD下降;在48 h时除MDA外,BUN、SCr、VCAM-1、肾小管损伤程度评分明显上升,SOD下降(P均0.05)。结论在大鼠肾脏缺血再灌注损伤发生之前即预防性使用TMZ可减轻氧化应激反应,使血清VCAM-1水平下降,与单纯缺血再灌注后处理(IPO)比较,氧化应激反应明显减轻,VCAM-1水平降低。     

香辛方外敷对肺癌骨癌痛小鼠炎性介质和MCP-1的影响

目的:应用活体荧光成像肺癌骨转移癌模型,探讨香辛方外敷缓解骨转移癌痛的机制。方法:通过股骨内注射表达绿色荧光蛋白的人肺腺癌A549细胞建立肺癌骨转移癌模型,随机分为中药外敷组、扶他林组、模型组,每组10只。中药外敷组香辛方0.5 g/(kg·d)外敷,造模后7～21 d 1次/d;扶他林组0.1g/(kg·d)外涂,造模后7～21 d 1次/d;模型组生理盐水0.5 mL/只外涂,1次/d;另设假手术组生理盐水0.5 mL/只外涂,1次/d。造模21 d后检测小鼠血脊髓单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNFα)以及白介素-6(IL-6)的表达水平。结果:MCP-1表达模型组脊髓MCP-1表达水平[(1.88±0.18) mg/L]比假手术组[(1.21±0.19) mg/L]高,中药外敷组脊髓MCP-1表达水平[(1.51±0.09) mg/L]比模型组和扶他林组[(1.67±0.11) mg/L]降低(均P0.05)。IL-1β水平扶他林组[(99.11±10.52) ng/L]和模型组[(104.46±11.07) ng/L] IL-1β水平比假手术组[(75.69±16.57) ng/L]高,中药外敷组IL-1β水平[(85.97±11.88) ng/L]比模型组和扶他林组低(均P0.05)。TNFα水平中药外敷组[(447.91±44.67) ng/L]、扶他林组[(504.14±44.30) ng/L]和模型组[(534.84±48.89) ng/L] TNFα水平均比假手术组[(357.69±35.96) ng/L]升高,中药外敷组TNFα水平比模型组和扶他林组低(均P0.05)。IL-6水平各组小鼠IL-6水平差异无统计学意义(P0.05)。结论:香辛方可能通过减少脊髓MCP-1蛋白的表达,抑制中枢敏化;同时降低血IL-1β和TNFα水平。本方可能通过下调炎性介质表达,起到缓解骨转移癌痛的作用。     

保留肝动脉血流间断门静脉阻断在肝切除术中的实验研究

目的探索新型的肝切除术中血流阻断方法。方法采用经尾状叶转流门静脉血流模型,根据阻断方式不同随机将大鼠分成3组,每组30只:对照手术组(SO)、间断完全肝门阻断组(IC)和保留肝动脉血流间断门静脉阻断组(HIC),设定阻断时间为90 min。阻断完成后切除肝左叶及尾叶,比较各组肝断面出血量,术后第0、1、3、7天共4个时相点血清谷丙转氨酶(ALP)活性、肝组织三磷酸腺苷(ATP)水平、肝组织丙二醛(MDA)水平及肝组织病理学改变情况。结果 SO组肝断面出血量[(302.6±10.2)mL]明显高于HIC组[(37.2±5.3)mL]和IC组[(35.8±4.5)mL];IC组术后1、3 d ALT[(5 455.0±424.6)U/L、(2 356.2±325.6)U/L]明显高于HIC组[(3 230.0±332.5)U/L、(1 653.5±176.7)U/L];术后IC组MDA[(7.15±1.22)nmol/mg]较HIC组[(4.16±0.89)nmol/mg]升高明显;术后HIC组ATP[(1.51±0.44)μmol/mg]明显高于IC组[(0.85±0.21)μmol/mg];以上差异均有统计学意义(P0.05)。病理形态观察,HIC组较IC组能明显减轻肝窦充血、肝细胞水肿,术后恢复快。结论与间断Pringle法相比,保留肝动脉血流间断门静脉阻断方法不会明显增加术中肝断面的失血量,但可以明显减轻肝脏缺血再灌注损伤,是值得在临床应用的一种入肝血流控制方法。     

补肾健脾、益气通络方加减配合缬沙坦治疗糖尿病肾病蛋白尿的临床疗效观察

目的:探讨补肾健脾、益气通络方加减配合缬沙坦治疗糖尿病肾病的临床疗效,及对蛋白尿的影响。方法:选取我院肾病科2015年02月~2017年02月DN患者100例,采用随机数字表法分为治疗组和对照组各50例,两组均给予基础降压、降糖、降脂等治疗,治疗组给予补肾健脾、益气通络方+缬沙坦治疗,对照组给予雷公藤多甙片+缬沙坦治疗,8周为1疗程,1疗程后分别观察中医证候分级量化评分;血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、空腹血糖(FBG)、血脂(TC、TG)含量变化;血浆白蛋白(Alb)、24 h尿蛋白定量(24 h Upr)、24 h尿微量蛋白排泄率(UAER)变化及有效率,并进行对比分析。结果:治疗后治疗组腰膝酸软[(1.33±0.64)分比(1.92±0.73)分,t=-2.321]、气短懒言[(1.28±0.71)分比(2.01±0.82)分,t=-2.543]、疲倦乏力[(1.03±0.54)分比(1.84±0.63)分,t=-1.972]、食少纳呆[(0.92±0.73)分比(1.36±0.25)分,t=-1.883]、面色昏暗[(0.85±0.21)分比(1.30±0.22)分,t=-1.702]、浮肿[(1.17±0.76)分比(1.83±0.82)分,t=-2.003]均低于对照组(P0.05);治疗后两组在大便溏、夜尿多、肢体麻木等方面比较差异无统计学意义(P0.05);两组前TC、TG、Scr、BUN、FBG无显著性差异(P0.05);两组组内治疗后与治疗前比较差异均有统计学意义(P0.05);治疗后治疗组TC[(2.09±0.55)mmol/L比(2.87±0.74)mmol/L,t=-1.889]、BUN[(5.01±0.74)mmol/L比(5.88±0.63)mmol/L,t=-2.231]、FBG[(6.04±1.03)mmol/L比(7.15±1.20)mmol/L,t=-2.012]均低于对照组(P0.05);治疗后TG、Scr含量与对照组比较,差异无明显统计学意义(P0.05);两组前Alb、24 h Upr、UAER比较无显著性差异(P0.05);两组组内治疗后与治疗前比较差异均有统计学意义(P0.05);治疗后治疗组Alb[(36.22±3.10)g/L比(35.12±3.08)g/L,t=2.013]高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)、治疗后治疗组24 h Upr[(1.62±0.18)g/d比(1.97±0.22)g/d,t=2.341]、UAER[(462.71±40.86)g/d比(502.67±44.38)mg/d,t=4.220]均低于对照组(P0.05);治疗组总有效率为90.0%(45/50),对照组为78.0%(39/50),两组比较差异有统计学意义(Z=-2.089,P=0.037)。结论:在常规西药治疗的基础上给予补肾健脾、益气通络方加减治疗糖尿病肾病能够改善患者脾肾气虚的临床症候,可能作用机制与降低血清TC、TG、Scr、BUN、FBG和尿中24 h Upr、UAER相关,为临床治疗提供治疗依据。