柴黄胃溃宁对肝郁脾虚证胃溃疡模型大鼠脾IL-6、TNF-α mRNA表达的影响

目的:探讨柴黄胃溃宁对肝郁脾虚证胃溃疡脾脏中IL-6 mRNA和TNF-αmRNA表达的影响和可能疗效机制。方法:40只大鼠随机取10只作为空白组,其余30只按多因素复合模拟中医病因结合乙酸法建立模型,造模2周后,随机分为模型组、柴黄胃溃宁组和法莫替丁组,各10只,连续灌胃给药14天。用HE染色观察大鼠胃窦部溃疡的病理学改变,采用RT-PCR技术检测脾脏中IL-6 mRNA和TNF-αmRNA表达水平。结果:模型组大鼠血清去甲肾上腺素水平较空白组升高,5-羟色胺、D-木糖、胃泌素水平较空白组下降(P0.05)。与正常组比较,模型组TNF-αmRNA升高(P0.01),IL-6 mRNA升高(P0.05)。与模型组比较,柴黄胃溃宁组TNF-αmRNA降低(P0.01),IL-6 mRNA升高;法莫替丁组TNF-αmRNA、IL-6 mRNA均降低(P0.01)。结论:柴黄胃溃宁通过下调TNF-αmRNA和升高IL-6mRNA水平调节肝郁脾虚证胃溃疡模型大鼠免疫功能。     

柴黄胃溃宁对胃溃疡肝郁脾虚证大鼠GST-α表达的影响

目的探讨柴黄胃溃宁对胃溃疡肝郁脾虚证大鼠胃组织GST-α基因表达的影响。方法 SD大鼠随机分为正常组,模型组,黄芪组,柴黄中、低、高剂量组,每组10只。除正常组外,其余各组以多因素复合模拟中医病因并结合乙酸法建立胃溃疡肝郁脾虚证大鼠模型。造模成功后,各组予以相应干预。用Real-Time PCR技术检测柴黄胃溃宁干预模型大鼠GST-α基因的表达。结果模型组大鼠差异性基因GST-α低表达。中药干预后,柴黄胃溃宁各剂量组GST-α基因出现不同程度的高表达,以中剂量组作用最明显(P0.05)。结论柴黄胃溃宁对病证结合模型大鼠胃组织中GST-α基因表达有明显调节作用,可能为其起效途径之一。     

肝郁脾虚证胃溃疡大鼠胃窦组织差异蛋白质表达及柴黄胃溃宁的干预研究

目的:探讨肝郁脾虚证胃溃疡大鼠胃窦组织总蛋白质的差异表达及柴黄胃溃宁的可能疗效机制。方法:以多因素复合模拟中医病因结合乙酸法建立肝郁脾虚证胃溃疡大鼠模型,采用双向凝胶电泳技术分析模型大鼠与正常大鼠胃窦组织总蛋白质的表达差异;同时,采用笔者临床经验方柴黄胃溃宁对模型大鼠进行复健。结果:模型组大鼠的血清胃泌素、血清淀粉酶活性、血浆去甲肾上腺素和血浆5-羟色胺等指标出现紊乱,与正常组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与正常组匹配后,模型组5个蛋白质点表达下调,2个蛋白质点表达上调;经柴黄胃溃宁治疗后,大鼠上述血清、血浆指标复健;模型组和中药组匹配后,模型组5个蛋白点表达低于中药组,1个点表达高于中药组。结论:与正常组的蛋白质可能是肝郁脾虚证胃溃疡的相关蛋白;柴黄胃溃宁对肝郁脾虚证胃溃疡的疗效可靠,其作用机制可能与调控上述目的蛋白质有关。     

基于代谢组学方法研究柴黄胃溃宁对肝郁脾虚证胃溃疡大鼠的干预作用

目的：研究肝郁脾虚证胃溃疡大鼠经柴黄胃溃宁治疗后血清代谢物的变化,探讨胃溃疡发病及药物作用机制。方法：基于高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用的代谢组学方法,探寻差异代谢物。结果：发现对照组、肝郁脾虚胃溃疡模型组、柴黄胃溃宁治疗组和法莫替丁治疗组的代谢图谱存在较明显的差异,鉴定出8种差异代谢物。柴黄胃溃宁能有效调节差异代谢物的相对含量。结论：肝郁脾虚证胃溃疡发病会导致体内不饱和脂肪酸和能量代谢通路显著变化,而柴黄胃溃宁对紊乱的代谢通路具有一定修复调节作用。     

肝郁脾虚证大鼠中枢BDNF的表达及疏肝健脾法的干预研究

目的:观察肝郁脾虚型大鼠海马及杏仁核中BDNF mRNA及蛋白表达变化,以及GluR1/2水平的变化,探讨其在肝郁脾虚型大鼠模型发病中的作用机制。方法:将45只Wistar大鼠随机分为3组:空白组、模型组和逍遥散组,每组15只,采用夹尾激怒+饮食失节法建立肝郁脾虚型大鼠模型,免疫组化S-P法和RT-PCR法检测各组大鼠海马及杏仁核中BDNF基因和蛋白表达,并采用ELISA法检测GluR1/2水平的变化。结果:模型组大鼠海马及杏仁核中BDNF mRNA和蛋白的表达与空白组比较均降低,经过逍遥散治疗后的BDNF表达量则有所升高(P<0.01,P<0.05);模型组GluR1升高GluR2降低,治疗后GluR1降低GluR2升高(P<0.05),差异均有显著性意义。结论:肝郁脾虚证的发生与BDNF的表达受抑密切相关,上调BDNF的表达有望成为肝郁脾虚证的治疗新方向。     

舒胃汤对FD肝郁脾虚证模型大鼠胃肠平滑肌Beclin-1、mTOR、Cx43蛋白与mRNA表达的影响

目的通过研究舒胃汤(柴胡、香附、白术,等)对功能性消化不良(FD)肝郁脾虚证模型大鼠胃窦和幽门区平滑肌中自噬调控基因Beclin-1、雷帕霉素靶蛋白mTOR、连接蛋白Cx43蛋白与mRNA表达的影响,从自噬与细胞间缝隙连接通道探讨舒胃汤对功能性消化不良的治疗作用及机制。方法取60只Wistar大鼠随机分为空白组,模型组,莫沙必利组(1.37 mg/kg),舒胃汤低、中、高剂量组(7.67、15.34、30.68 g/kg)。除空白组外,各组大鼠按复合病因造模法造模21 d复制FD肝郁脾虚证大鼠模型。于造模结束后第1天开始给药,空白组与模型组大鼠给予等量蒸馏水,其余各组大鼠按剂量要求灌胃给药,每天1次,连续给药14 d。末次给药2 h后,颈静脉放血处死大鼠,摘取各组大鼠胃窦与幽门组织,Western blot法检测Beclin-1、mTOR、Cx43蛋白表达,RT-qPCR法检测Beclin-1、mTOR、Cx43 mRNA表达。结果 Western blot结果显示,舒胃汤低、中、高剂量组Beclin-1表达明显降低(P0.01),舒胃汤高剂量组Cx43表达明显升高(P0.05);RT-qPCR结果显示,舒胃汤中、高剂量组Beclin-1表达明显降低(P0.01),mTOR表达明显升高(P0.01),舒胃汤低、中、高剂量组Cx43表达明显升高(P0.01)。结论舒胃汤可通过上调FD模型大鼠胃肠平滑肌细胞mTOR mRNA、Cx43蛋白及mRNA表达,下调Beclin-1蛋白及mRNA表达,抑制细胞自噬及增强细胞间缝隙连接治疗功能性消化不良。     

电针足三里对应激性胃溃疡大鼠胃组织HSP70mRNA的影响

目的观察电针足三里对应激性胃溃疡大鼠胃组织中热休克蛋白70(Heat Shock Protein 70,HSP70)m RNA表达的影响,探讨电针足三里防治胃溃疡的分子机制。方法将51只SD大鼠随机分为正常对照组(正常组)、应激性胃溃疡组(模型组)和电针足三里组(电针组)。采用冷-束缚法制作应激性胃溃疡模型。造模后次日起电针组每天电针足三里20 min,连续3 d,左右足三里穴交替进行;模型组只进行与电针组一样的固定处理;正常组不做任何处理。按GUTH’s法计算胃黏膜损伤指数(Ulcer Index,UI)、HE染色法观察胃组织病理形态、RT-PCR法检测胃组织HSP70 m RNA表达。结果模型组与正常组比较,胃黏膜上可见数量、大小不等的明显溃疡,UI显著升高(P0.001),HSP70 m RNA表达显著降低(P0.05);电针组与模型组比较,胃组织病理变化有所改善,胃黏膜UI显著降低(P0.05),HSP70 m RNA表达显著升高(P0.01)。结论电针足三里可以上调应激性胃溃疡大鼠胃组织HSP70 m RNA表达,促进胃黏膜损伤的修复。     

针刺对急性高血压脑出血大鼠HSP70mRNA表达的调整作用

目的：探索针刺对急性高血压脑出血治疗作用的分子机制。方法：采用分子生物学手段，动态观察针刺对急性高血压脑出血大鼠脑组织HSP70mRNA表达的影响。结果：针刺能促进HSP70mRNA在高血压脑出血大鼠脑组织中表达。结论：针刺促进高血压脑出血大鼠脑组织HSP70mRNA表达是针刺治疗急性高血压脑出血的重要机制。     

慢性胃炎脾胃湿热证与核因子-κB mRNA、热休克蛋白70 mRNA关系的研究

目的观察慢性胃炎脾胃湿热证患者胃黏膜核因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)mRNA、热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)mRNA转录水平表达,探讨其与脾胃湿热证发生及幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,HP)感染的关系。方法收集慢性胃炎患者51例(包括脾胃湿热证36例,脾气虚证15例),另设健康人8名作为对照。胃镜下取胃窦黏膜,采用苏木精伊红(HE)染色检测胃黏膜炎症,快速尿素酶和甲苯胺蓝法检测Hp感染,荧光定量PCR检测各组胃黏膜NF-κB mRNA和HSP70 mRNA表达水平。结果HSP70 mRNA表达:脾胃湿热证组高于健康对照组,差异有统计学意义(P0.05);脾胃湿热证Hp阴性组与健康对照组比较差异有统计学意义(P0.05),较健康对照组表达高;脾胃湿热Hp阳性与Hp阴性组比较差异无统计学意义(P0.05)。NF-κB mRNA表达:脾胃湿热证组表达高于脾气虚证组和健康对照组,差异有统计学意义(P0.05);脾胃湿热证Hp阳性组与Hp阴性组比较差异无统计学意义(P0.05)。脾胃湿热证组及脾胃湿热Hp阴性者HSP70 mRNA与NF-κB mRNA表达水平呈正相关。结论NF-κB和HSP70在一定程度上体现了机体邪气和正气的力量,慢性胃炎脾胃湿热证两者的高表达可能部分体现了"邪正交争"剧烈的状态;而代表正气和邪气力量的HSP70和NF-κB在交争过程中均可能会受到不同程度的影响。     

罗汉果甜苷对力竭运动大鼠胃组织HSP70mRNA及蛋白表达的影响

目的:研究运动前补充罗汉果甜苷(Mog)对力竭运动大鼠胃组织热休克蛋白70(HSP70)mRNA表达和HSP70蛋白表达的影响,以初步探讨罗汉果甜苷的作用机制。方法:SD雄性大鼠50只,随机分为5组,每组10只,分别为安静组(NC),运动组(ME),运动+低剂量罗汉果甜苷组(Mog L),运动+中剂量罗汉果甜苷组(Mog M),运动+高剂量罗汉果甜苷组(Mog H)。每天在运动前30 min ig 1次,连续ig 6周,6 d/周,低、中、高3组的ig剂量分别为100,200,400 mg·kg-1,对照组ig等量生理盐水。6周力竭训练结束后,宰杀大鼠。根据试剂盒的方法测定大鼠胃组织HSP70mRNA及蛋白表达。结果:运动组大鼠胃组织HSP70mRNA表达和HSP70蛋白表达水平高于安静组(P0.05);Mog L,Mog M,Mog H各组大鼠胃组织HSP70mRNA表达和HSP70蛋白水平都高于安静组和运动组(P0.05,P0.01)。结论:罗汉果甜苷能够提高大鼠胃组织HSP70mRNA表达和HSP70蛋白表达水平,对减少胃组织的溃疡、促进损伤后的恢复、细胞生长和发育等方面发挥重要的作用。     

心气虚证模型大鼠脑内细胞凋亡相关基因的变化研究

目的：建立心气虚证大鼠模型,研究模型大鼠脑神经元细胞凋亡情况。方法：75只SD大鼠随机分为5组：正常对照组、疲劳对照组、小剂量心得安＋疲劳组、中剂量心得安＋疲劳组和大剂量心得安＋疲劳组,采用强迫跑步加灌服心得安的方法建立心气虚证大鼠模型,观察其脑内凋亡相关基因Bax、Bcl-2和Caspase-3 mR-NA的表达情况。结果：中剂量心得安＋疲劳组大鼠的大脑皮层和海马Bcl-2 mRNA表达明显降低;大剂量心得安＋疲劳组大鼠的大脑皮层Bcl-2 mRNA表达明显降低、海马Caspase-3 mRNA表达明显升高。结论：心气虚证模型大鼠脑内存在神经元细胞的凋亡。     

灭幽汤对 Hp 相关性胃炎“脾胃湿热证”模型小鼠 HSP70 表达的影响

目的观察灭幽汤对Hp相关性胃炎“脾胃湿热证”模型小鼠热休克蛋白70（HSP70）蛋白及其mRNA的影响。方法采用复合因素（肥甘食物＋湿热环境＋幽门螺杆菌）建立BALB／c小鼠Hp相关性胃炎“脾胃湿热证”模型．造模成功后将小鼠随机分为5组：高浓度灭幽汤组、低浓度灭幽汤组、胃三联组（替硝唑＋克拉霉素＋枸橼酸铋钾颗粒）、模型组、对照组。连续给药14d后,分别采用Western Blot和qPCR检测HSP70蛋白、HSP70mRNA的表达情况。结果HSP70蛋白及其mRNA的表达：BALB／c小鼠模型组与对照组比较,HSP70蛋白、HSP70mRNA表达均增加（P〈0．01）;与模型组比较,高、低浓度灭幽汤组,胃三联组小鼠HSP70蛋白、HSP70mRNA表达均增加（P〈0．01）;胃三联组与高、低浓度灭幽汤组中HSPT0蛋白HSPT0mRNA表达均增加（P〈0．05）。结论灭幽汤可能通过上调HSP70蛋白及其mRNA表达而发挥治疗Hp相关性胃炎的作用。     

艾灸对应激性胃溃疡大鼠胃粘膜细胞增殖和凋亡的影响及其与热休克蛋白表达关系的研究

目的:观察艾灸“足三里”等穴对应激性胃溃疡大鼠胃粘膜细胞增殖及凋亡的影响,分析热休克蛋白70基因表达(HSP70 mRNA)与上述效应的关系,探讨艾灸促进胃粘膜损伤修复的细胞分子生物学机制。方法:60只健康SD大鼠随机分为4组,即束缚对照组、模型组、艾灸“足三里”-“梁门”穴组和艾灸非穴对照点组。束缚水浸应激法制备胃溃疡模型,采用放射免疫方法测定胃粘膜转化生长因子(TGFα-)的含量,RT-PCR法测定HSP70 mRNA,免疫组织化学方法检测胃粘膜增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞凋亡指数。结果:束缚水浸应激法造模后可致胃粘膜损伤指数升高,胃粘膜TGFα-含量下降,PCNA下降,细胞凋亡指数、HSP70 mRNA增加(P<0.05或P<0.01)。艾灸“足三里”“梁门”可降低胃粘膜损伤指数,增加胃粘膜TGFα-含量,促进HSP70 mRNA和PCNA的表达,降低胃粘膜细胞凋亡指数,与模型组和对照组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论:艾灸“足三里”“梁门”对应激性胃溃疡的胃粘膜具有保护作用,其机制可能是促进了TGFα-合成,刺激胃粘膜细胞增殖,抑制细胞凋亡,而这一过程可能与艾灸诱导HSP70表达有关。     

基于不同模式高温对大鼠死亡率和 HSP70表达水平的影响探讨六淫相对性

目的比较不同模式高温对大鼠死亡率和热休克蛋白(HSP)70表达的影响,从"热应激"角度探讨六淫相对性产生机制。方法40只SD大鼠随机分为5组:对照组、南方1组、南方2组、北方1组、北方组2组,每组8只,湿度均为60%。对照组保持温度24℃。南方组初始温度28℃,第15 d南方1组温度提高至35℃,南方2组则提高至41℃;北方组初始温度20℃,第15 d北方1组温度提高至35℃,北方2组则提高至33℃。第22 d处死全部大鼠。记录各组大鼠不同时间肛温和死亡情况。RT-PCR检测五脏(心、肝、脾、肺、肾)HSP70 mRNA表达水平。结果南方2组大鼠在温度调高至41℃后3 d内全部死亡,死亡率较其他4组(均死亡0只)升高(P<0.01)。与本组初始温度和7 d肛温比较,北方1组21 d肛温升高(P<0.01)。与对照组和北方2组同时间比较,北方1组21 d肛温升高(P<0.01)。与对照组比较,南方1组、北方2组大鼠五脏HSP70 mRNA表达水升高(P<0.01,P<0.05),南方2组大鼠五脏HSP70 mRNA表达水平降低(P<0.01),北方1组大鼠心、肺两脏HSP70 mRNA表达水平降低(P<0.01、P<0.05)。与南方1组比较,南方2组及北方1组五脏HSP70 mRNA表达水平降低(P<0.01),北方2组肝脏HSP70 mRNA表达水平升高(P<0.05)。与南方2组比较,北方1、2组五脏HSP70 mRNA表达水平升高(P<0.01)。与北方1组比较,北方2组五脏HSP70 mRNA表达水平升高(P<0.01)。结论不同模式高温影响大鼠适应性及HSP70表达水平,心、肺二脏最为敏感,证明了中医学"六淫致病具有相对性"理论。     

冷水束缚应激下脾虚大鼠胃黏膜H~+,K~+-ATP酶活性及mRNA的表达变化

目的观察脾虚大鼠模型在冷水束缚应激负荷下,胃黏膜损伤程度与H+,K+-ATP酶活性及基因表达的变化。方法 SD大鼠随机分为正常组、脾虚组、应激组、脾虚应激组。采用100%大黄水煎液灌胃10 d造成脾虚模型。冷水束缚应激负荷6 h后观察各组大鼠胃黏膜损伤指数,用无机磷法测定胃黏膜H+,K+-ATP酶的活性;用RT-PCR法检测胃黏膜H+,K+-ATP酶mRNA的表达。结果脾虚大鼠胃黏膜肉眼未见明显损伤,应激及脾虚应激组大鼠胃黏膜均出现点状及条索状损伤,且脾虚应激组损伤程度更为显著。脾虚组H+,K+-ATP酶活性及mRNA的表达率较正常组低(P均<0.05);应激及脾虚应激组H+,K+-ATP酶活性及mRNA的表达较正常组高(P均<0.05);且脾虚应激组大鼠H+,K+-ATP酶活性及mRNA的表达增高幅度有所增大。结论脾虚大鼠在冷水束缚应激状态下胃黏膜易损伤性增高,其机制之一可能与脾虚应激后胃黏膜H+,K+-ATP酶功能升高有关。     

三仁汤对脾胃湿热型大鼠NLRP3、Caspase-1蛋白的影响＊

目的 探究三仁汤对脾胃湿热型大鼠NLRP3、Caspase-1蛋白的调控及胃黏膜细胞焦亡的影响。方法 将50只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、三仁汤高、中、低剂量组，每组各10只。根据前期的研究方法，利用高脂、高糖、湿热的条件，复制脾胃湿热证的模型，给予三仁汤干预，高、中、低剂量分别为16.4 g/kg，8.2 g/kg，4.1 g/kg。HE染色观察胃黏膜病理变化，免疫印迹法检测大鼠胃黏膜细胞NLRP3、Caspase-1蛋白的表达。结果HE结果显示，三仁汤高、中、低剂量组均对胃黏膜细胞焦亡有所改善。免疫印迹的结果显示模型组大鼠NLRP3和Caspase-1高表达，三仁汤高、中、低剂量组下调NLRP3和Caspase-1蛋白的表达，具有统计学差异（P < 0.05）。结论 三仁汤可能通过降低脾胃湿热大鼠的NLRP3、Caspase-1蛋白的表达，减少胃粘膜细胞焦亡，抑制胃粘膜炎症的爆发，从而防治脾胃湿热证模型大鼠，为临床治疗脾胃湿热证的胃痛提供了理论依据。     

龟鹿二仙胶抵抗化疗小鼠脾T淋巴细胞凋亡的实验研究

目的 探讨龟鹿二仙胶对化疗小鼠的抗凋亡作用及作用机理。方法 将荷瘤昆明种小鼠72只随机分为环磷酰胺（CTX）加龟鹿二仙胶高、中、低3个剂量组,CTX组,单纯中药组,生理盐水组6组。给药9天后处死小鼠取脾组织,采用流式细胞仪检测T淋巴细胞凋亡;RT PCR法检测bcl 2、Caspase 3 mRNA的表达。结果 CTX组荧光素标记的膜联蛋白阳性（FITC+Annexin V）/碘化丙啶(PI)染色阴性比例（FITC+/ PI－）T细胞较生理盐水组增高,差异有统计学意义（P<0.05）;CTX加用龟鹿二仙胶的3个剂量组FITC+/ PI－T细胞比例较CTX组明显降低（P<0.05）。CTX组bcl 2 mRNA表达量较生理盐水组减少（P<0.05）;CTX加用龟鹿二仙胶的3个剂量组其表达量较CTX组明显升高（P<0.05）。Caspase-3 mRNA表达量CTX组升高（P<0.05）;CTX加用龟鹿二仙胶的3个剂量组表达量较CTX组明显减少。结论 龟鹿二仙胶能有效抑制化疗小鼠淋巴细胞凋亡。上调bcl-2 mRNA表达、下调Caspase-3mRNA表达可能是其作用机理之一。