P53途径在辛伐他汀诱导K562细胞凋亡中的作用

目的 探讨辛伐他汀处理后的P53通路和细胞周期的分子水平变化,以说明P53途径在辛伐他汀抑制K562细胞增殖和诱导细胞凋亡中的作用.方法 体外培养和用辛伐他汀处理K562细胞,用流式细胞仪检测辛伐他汀作用后的细胞周期和凋亡率的变化,用RT-PCR检测P53通路和细胞周期相关基因的变化.采用免疫组化LDP法检测P21蛋白变化的水平.结果 辛伐他汀能使K562细胞停滞在G0/G1期,明显诱导K562细胞凋亡,大多数P53通路基因和细胞周期相关基因出现差异表达.P21蛋白随药物作用时间的延长,表达上调.结论 P53通路可能在辛伐他汀诱导的K562细胞增殖抑制和凋亡发生的过程中起重要作用.     

紫草素对大鼠血管平滑肌细胞增殖与凋亡作用的实验研究

目的研究紫草素对体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC)抑制增殖、促进凋亡及诱导细胞周期停滞的作用。方法组织块贴壁法原代培养的大鼠VSMC,经不同浓度的紫草素作用不同时间后,应用MTT法、台盼蓝拒染法、3H胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法测定紫草素对VSMC的细胞活力的影响、生长及增殖抑制;应用流式细胞仪分析细胞周期分布及观察凋亡现象;应用荧光显微镜计数凋亡细胞百分率并观察形态学变化;应用Western印迹法检测细胞周期调节蛋白的变化。结果(1)与对照组相比,0.25～1μmol/L紫草素对VSMC细胞活力无明显影响(均P>0.05);可时间和剂量依赖性地抑制细胞生长,以1μmol/L作用72h最为显著(1.9×105/孔vs5.8×105/孔,P<0.05);并呈时间和剂量依赖性地抑制DNA合成(抑制率达33%～98%,P<0.05及P<0.01)。(2)1μmol/L紫草素显著抑制增殖VSMC细胞周期进程,使S及G2/M期减少(P<0.05)、G0/G1期增加(P<0.05),接近静止细胞水平,并在48h出现subG1期凋亡峰(10.9%±0.3%)。(3)1～2μmol/L紫草素可显著提高凋亡细胞百分率(2.8%～23.7%vs0.2%～0.4%,P<0.05),呈时间和剂量依赖性,可见典型的凋亡细胞核形态学变化。(4)1μmol/L紫草素可显著抑制细胞周期蛋白D1、E及增殖细胞核抗原的表达,促进p21waf1/cip1表达,对p27kip1及p53表达无显著影响。结论紫草素对VSMC具有明确的抗增殖、促凋亡、阻滞细胞周期进程的作用,并且与细胞周期调节蛋白的变化密切相关。     

DNA损伤后细胞凋亡与周期停滞中△40P53的作用

目的 探讨HCT116 p53-/-细胞△40P53在脱氧核糖核酸(DNA)损伤时细胞凋亡和细胞周期停滞中的作用,明确△40P53与野生型P53的不同作用.方法 荧光素酶报告基因和免疫印迹法检测△40P53在DNA损伤后转录活性和表达情况,流式细胞技术检测DNA损伤后细胞周期停滞情况,乳酸脱氢酶(LDH)检测分析DNA损伤后细胞凋亡情况,分析△40P53的生物学功能.结果HCT116 p53+/+细胞中bax和p21基因的启动子活性在甲烷磺酸甲酯(MMS)刺激时比无MMS刺激时高3～5倍,HCT116 p53-/-细胞中bax和p21基因的启动子活性在有无MMS刺激时无显著不同;免疫印迹表明有和无MMS刺激的细胞△40P53保持在较高水平,野生型P53经MMS刺激过度表达;LDH法检测50 μg/ml的MMS刺激后52.2％的HCT116 p53+/+细胞凋亡,而只有32.5％的HCT116 p53-/-细胞凋亡,差异有统计学意义(t=84.2,P＜0.05);流式细胞仪检测MMS处理后88％的HCT116 p53-/-细胞进入G2/S期细胞,66％的HCT116 p53+/+细胞进入G2/S期细胞.结论 经MMS刺激的HCT116 p53-/-细胞的△40P53不能诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞.     

姜黄素通过P53/P21/PCNA/eIF4E信号通路抑制A549细胞增殖

目的研究姜黄素对A549细胞增殖的抑制作用,并探讨其可能的分子机制。方法不同浓度姜黄素处理A549细胞后,分别用平板克隆形成实验、MTT法检测A549细胞的克隆形成数和增殖。20μmol/L姜黄素处理A549细胞24、48、72 h后,FCM检测细胞周期;RT-PCR、Western blot检测P53、P21、PCNA及eIF4E mRNA和蛋白的表达水平。结果 20μmol/L姜黄素可引起A549细胞S期阻滞,抑制细胞增殖,减少细胞的克隆形成数。20μmol/L姜黄素作用A54924 h后P53、P21 mRNA和蛋白表达上调,48 h或72 h后变得尤明显。此外,20μmol/L姜黄素处理A549细胞48 h后可引起PCNA、eIF4E mRNA和蛋白表达水平下调,72 h后尤明显。结论姜黄素可抑制A549的克隆形成数和细胞增殖,其机制可能与姜黄素促进P53和P21基因表达,抑制PCNA和eIF4E基因表达有关。     

姜黄素对大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察姜黄素对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和凋亡的影响及其机制.方法:采用组织块法体外培养大鼠VSMCs,MTT法测定姜黄素对VSMCs增殖的抑制作用.流式细胞术分析细胞凋亡,Western Blot印迹法检测VSMCsP21,P53,Bcl-2蛋白表达的变化.结果:MIT显示不同浓度姜黄素(7.5～120 μmol/L)在24～72 h范围内,浓度和时间依赖性抑制VSMCs增殖;流式细胞术显示30,60 μmoL/L姜黄素作用VSMCs 24 h后,凋亡率较对照组明显升高;30 μmol/L姜黄素在不同时间点可上调VSMCs P21蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,对P53蛋白表达没有影响.结论:姜黄素具有明确的抑制VSMCs增殖,并能诱导血管平滑肌细胞凋亡,与上调VSMCa P21蛋白表达和下调Bcl-2蛋白表达有关.     

卵巢癌耐药细胞株的P38MAPK活性与凋亡关系的研究

目的 研究卵巢癌细胞耐药过程中P38MAPK活性与凋亡的关系,探讨P38MAPK信号转导途径在卵巢癌细胞耐药中的作用.方法 流式细胞技术分析P38MAPK特异性抑制剂SB203580对A2780/Taxol细胞凋亡的影响;利用免疫细胞化学法观察SB203580处理后细胞内P38MAPK表达水平.四甲基偶氮唑蓝检测细胞对紫杉醇的半数抑制浓度(IC50),Western blot检测细胞内P-gp蛋白表达.结果 与未干预组和对照组比较,SB203580(10μmol/L)干预24h后A2780/Taxol细胞凋亡率为23.7%(P＜0.01);A2780/Taxol细胞的P38MAPK表达颗粒密度减低,数量减少;紫杉醇对A2780/Taxol细胞的IC50显著降低(P＜0.01);P-gp蛋白表达水平明显降低.结论 P38 MAPK信号转导途径与卵巢癌耐药密切相关,可能参与卵巢癌耐药的形成.其可能机制为P38MAPK通路起到保护A2780/Taxol细胞逃避凋亡的作用.因此,阻断该通路可增强卵巢癌耐药细胞发生凋亡.     

小檗胺对人多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞作用的体外研究

目的:探讨小檗胺(berbamine,BBM)体外诱导人多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞的凋亡及其机制.方法:采用MTT法测定不同浓度BBM作用后细胞增殖抑制率并求得IC50;DNA凝胶电泳、流式细胞术分析细胞凋亡;RT-PCR检测BBM作用前后细胞p53、p21和GADD45 mRNA的表达;Western blot检测BBM作用前后细胞p53、JNK、p-JNK及c-Jun蛋白表达.结果:BBM抑制RPMI 8226细胞增殖呈剂量依赖性(P<0.05),48 h的IC50值为3.83 μg/ml;8 μg/ml BBM作用RPMI 8226细胞24 h后DNA凝胶电泳可见典型梯形条带,流式细胞术检测细胞凋亡率由1.07%升高至24.84%;BBM作用后细胞p53、p21及GADD45γ mRNA表达上调,同时伴有胞核内p53蛋白上调及p-JNK、c-Jun蛋白活化.结论:BBM能抑制RPMI 8226细胞的增殖,其作用可能通过活化GADD45/JNK信号通路诱导细胞凋亡.     

大肠癌P21WAF1/CIP1和P53蛋白表达及其与预后的关系

目的 探讨细胞周期调控因子P212^WSAF1／CIP1和P53蛋白表达在大肠癌发生发展中的作用及其临床意义。方法 采用免疫组化染色对113例大肠癌P21和P53的蛋白表达进行了检测。结果 高分化腺癌P21蛋白阳性表达率显著高于低分化腺癌（P＜0．05）,大肠癌中P53、P21^WAF1／CIPI蛋白表达进行了检测。结果 高分化腺癌P21蛋白阳性表达显著高于低分化腺癌（P＜0．05）,大肠癌中P53、P21^WAF1/CIP1蛋白表达有显著负相关（r＝－0．585,P＜0．01）。P53阳性表达患者的3、5年生存率显著低于阴性表达者（P＜0．05）,而P21阳性表达者高于阴性表达者,且P21^ /P53^-大肠癌死亡率较P21^-/P53^ 患者显著降低。结论 P21蛋白过度表达可能与大肠癌发化有关,p53基因突变,介导P21蛋白产生减少,阻止细胞周期的作用减弱,从而加速大肠癌的发展。P21与P53蛋白联合检测可能有助于其预后判断。     

Aβ25-35诱导PC12细胞周期紊乱及对P53和Cyclin D1基因表达的影响

目的:探讨Aβ25-35诱导体外去血清培养的PC12细胞周期变化及对P53和Cyclin D1基因表达的影响。方法:PC12细胞同步于G0期,采用终浓度为0-45μmol/L或浓度为25μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞,用MTT比色法分析细胞存活率;流式细胞仪检测分析细胞周期的改变;RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测P53和Cyclin D1基因的变化。结果:随着Aβ25-35剂量的增加,PC12细胞存活率降低(P<0.01);流式细胞仪分析表明去血清培养24 h可使约90%PC12细胞停滞于G0/G1期,25μmol/L Aβ25-35诱导组8,16,24 h与对照组比较,S期百分率明显增加(P<0.01),16 h后细胞凋亡率明显增加(P<0.01),可见明显的亚二倍体峰(Ap峰);P53 mR-NA表达和P53蛋白表达降低、Cyclin D1 mRNA表达和Cyclin D1蛋白表达增高。结论:Aβ25-35降低去血清培养的PC12细胞存活率,诱导同步化于G0/G1的PC12细胞重新进入细胞周期,并阻滞于S期,同时出现凋亡,可能与下调P53的表达,上调Cyclin D1的表达有关。     

新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂DWP0016诱导神经胶质瘤细胞U251周期阻滞及凋亡作用研究

目的：观察新型组蛋白去乙酰化酶（Histone Deacetylases,HDACs）抑制剂DWP0016对神经胶质瘤U251细胞株的作用,探讨诱导U251细胞周期阻滞及凋亡作用的机制。方法：采用噻唑蓝（MTT）法检测DWP0016对U251细胞株的增殖抑制作用;采用流式细胞术观察DWP0016对U251细胞周期的影响及凋亡诱导作用;采用实时定量PCR（real-time PCR）检测抑癌因子P21,P53的mRNA水平变化;蛋白免疫印迹法（Western blotting）测定Ac-H3,P21,P53,Pi3K,p-Pi3K,Akt,p-Akt的蛋白表达并进行光密度定量。结果：DWP0016抑制U251细胞增殖的半数抑制浓度（IC50=0.531μmol.L-1）明显低于阳性对照奥沙利铂（IC50=4.792μmol.L-1）,组蛋白H3乙酰化水平显著上升;DWP0016作用后,U251细胞中细胞周期阻滞于G1期并产生凋亡,P21,P53的mRNA水平和蛋白水平明显上升,Pi3K/Akt通路中的Pi3K,Akt的磷酸化水平下降。结论：DWP0016能明显抑制U251细胞增殖,诱导细胞周期阻滞和凋亡产生,其机制与促进抑癌因子P21,P53的转录及蛋白表达,抑制细胞中Pi3K/Akt生长信号通路有关,具有良好的抗神经胶质瘤潜力和开发应用前景。     

食管鳞癌P16、P15基因杂合子缺失的研究

目的：探讨P16和P15基因与ESCC发生发展的关系。方法：应用显微切割、PCR、凝胶电泳、AgNO3染色等技术,检测食管鳞癌（ESCC）和高级别不典型增生中P16、P15基因杂舍子缺失（LOH）,对照正常细胞,分析ESCC和高级别不典型增生组织中LOH的变化,并就LOH率与患者的临床病理参数分别进行单因素分析。结果：ESCC组织中的LOH率为29．7％,高级别不典型增生组织中的LOH率为16．5％。应用SPSS软件对LOH率与患者的性别、组织分化、淋巴结转移进行单因素分析,差异均无显著性（P〉0．05）。结论：①从正常鳞状上皮到不典型增生再到癌变的过程中存在基因的异常累积。②P15基因可能与食管鳞癌的发生发展相关。（3）D9S162住点或其附近可能存在与ESCC发展相关的抑癌基因。     

145例胃腺癌P21和P53免疫组化分析

目的：研究同一胃癌中癌基因和抑癌基因蛋白产物的表达。方法;应用免疫组织化学SP方法检测10例正常胃粘膜、10例萎缩性胃炎、10例肠上皮化生的胃壁组织和145例胃癌组织中P21和P53蛋白的表达水平。结果：10例正常胃粘膜、10例萎缩性胃炎、10例肠上皮化生的胃壁组织中未发现P21和P53。145例胃癌组织中P21和 P53的阳性检出率分别为55.2%和51.2%。表达阳性的P53定位于肿瘤核内,P21定位于细胞膜或细胞浆上。P21和P53的阳性表达率与胃癌的分化程度呈正相关。结论;检测P21和P53有助于评估胃癌的预后。     

P16、P53、PCNA在膀胱癌中的表达及意义

目的：研究P16、P53、PCNA在膀胱癌中表达及其意义。方法：应用免疫组化S-P法检查52例膀胱癌组织中P53、P16、PCNA表达水平。结果：52例膀胱移行细胞癌中P16、P53、PCNA阳性表达率分别为42.3%5、7.6%、59.6%,P16阳性率在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级肿瘤中分别为58.8%3、8.5%和22.2%,P53阳性率在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级肿瘤中分别为41.2%、57.7%和88.9%,PCNA阳性率在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级肿瘤中分别为17.3%3、0.8%和66.7%;随着膀胱癌病理分级上升,P16表达阳性率逐渐下降,P53和PCNA阳性率逐渐上升。结论：P16、P53、PCNA的免疫组化检测具有评估膀胱癌预后的价值。     

早期肺癌组织中P16、P21、P53的表达

目的 探讨早期肺癌组织中P21、P53、P16蛋白表达及其相互关系。方法 57例肺癌患者，男49例，女8例；年龄33～83岁，平均60．7岁。腺癌13例，鳞癌43例，腺鳞混合癌1例。采用免疫组织化学SP法检测所有患者标本的基因表达，应用SPSS进行相关性分析(Pearson’s correlation)和多因素分析(COX regression)。结果 P16、P21、P53在病理分期T2期(肿瘤直径≥3cm)患者中的阳性表达率分别是23．1％、43．1％、68．6％，三者之间无相关性。COX回归分析表明P16、P53及肿瘤的病理分期是影响预后的重要指标。结论 P16蛋白缺失、P53蛋白阳性对早期肺癌的影响明显，且不具有明显的相关性，可作为判断预后的独立因素。     

人脑胶质细胞瘤组织中P16和P53的表达

目的:探讨脑胶质细胞瘤组织中P16和P53蛋白表达的意义及与病理分级之间的关系.方法:利用免疫组织化学方法检测56例脑胶质细胞瘤组织(其中Ⅰ级12例,Ⅱ级16例,Ⅲ级18例,Ⅳ级10例)及10例正常脑组织中P16和P53的表达情况.结果:脑胶质细胞瘤组织中P53的表达与病理分级呈正相关(r=0.367,P＜0.05),P16的表达与病理分级呈负相关(r=-0.516,P＜0.05).与Ⅰ、Ⅱ级及正常组织比较,Ⅲ、Ⅳ级脑胶质细胞瘤组织中P53(x2=8.302,P=0.040)和P16(x2=15.069,P=0.002)阳性表达率间差异均有统计学意义.结论:P16及P53的异常表达与脑胶质细胞瘤的病理分级和恶性程度密切相关,并在脑胶质细胞瘤的发生发展中起重要作用.     

P3a,P3b和气质性格量表TCI人格纬度的相关研究

目的：探讨气质性格量表TCI人格纬度与听觉诱发电位P300的亚成分P3a，P3b的关系。方法：采用听觉事件相关电位Three-tone oddball作业和Cloninger的气质性格量表测定20名健康自愿者P3a，P3b和TCI的7个人格纬度分数。结果：P3a的潜伏时与自我超越性人格纬度呈正相关；P3b的振幅与报酬依存人格纬度呈正相关。P3b的潜伏时与自我超越性人格纬度呈正相关。结论：主要的人格纬度是有电生理基础的。然而应用这些电生理指标的差异来区分人格素质尚需深入的研究。     

P27kip1和突变型P53蛋白在甲状腺肿瘤中表达的意义

目的:研究P27kip1和突变型P53的表达与甲状腺肿瘤临床病理因素的关系,了解P27kip1和突变型P53在甲状腺肿瘤进展中的作用.方法:用免疫组化方法检测P27kip1及突变型P53在甲状腺肿瘤中的表达水平,并作相关分析.结果:P27kip1在甲状腺腺瘤中的阳性表达率(90.0%,18/20)显著高于在甲状腺癌中的表达率(60.0%,24/40),P<0.05;突变型P53在甲状腺腺瘤中不表达(0/20),而在甲状腺癌中表达率为32.5%(13/40),P<0.01.P27kip1在分化好、分期早、无淋巴结转移的甲状腺癌的阳性表达率明显高于分化差、分期晚、有淋巴结转移的甲状腺癌的阳性表达率(P<0.05, P<0.01);而突变型P53在分化差伴有淋巴结转移的甲状腺癌中表达率显著增高(P<0.01,P<0.05);P27kip1与突变型P53的阳性表达率呈显著负相关(r=-0.450,-0.414,P<0.01).结论:P27kip1表达下调和突变型P53的表达上调可能是甲状腺肿瘤高度恶性的重要标志.     

P16蛋白和P73蛋白在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的　探讨鼻咽癌组织中P16 蛋白和P73蛋白的表达及其临床意义。方法　采用免疫组化S -P法 ,检测P16 蛋白和P73蛋白在 4 0例鼻咽癌组织和 2 0例鼻咽癌黏膜慢性炎症组织中的表达情况。结果　 4 0例鼻咽癌组织中P16 蛋白阳性表达率明显低于鼻咽黏膜慢性炎症组织 (P <0 0 5 ) ,而P73蛋白在 4 0例鼻咽癌组织中的表达较鼻咽黏膜慢性炎症组织相比明显增高 (P <0 0 5 )。P16 蛋白和P73蛋白的表达与颈部淋巴结转移、局部区域复发以及远处转移无明显相关 (P >0 0 5 ) ,且P16 蛋白与P73蛋白的表达亦无明显相关。结论　P16 蛋白的低水平表达和P73蛋白的高水平表达可能与鼻咽癌的发生发展有关。     

食管上皮内瘤变和癌组织中P15 P16的表达及其生物学意义

目的检测食管上皮内瘤变及鳞癌组织中P15、P16的表达,探讨它们在食管癌发生、发展过程中的意义。方法收集山西省肿瘤医院病理科2003—2005年手术切除的食管鳞癌标本105例,病理复诊证实为食管鳞癌并伴有食管上皮内瘤变和正常食管鳞状上皮组织,用免疫组织化学S-P法检测P15、P16蛋白的表达。结果P15、P16蛋白在鳞癌组织中的表达明显低于食管上皮内瘤变和正常食管鳞状上皮组织(P<0.01)。结论P15、P16蛋白的失表达参与了食管癌的发生发展。     

P73、P53在胃癌组织中的表达及二者相关性

目的:检测P73、P53蛋白在胃组织的表达及二者相关性,探讨其临床意义。方法:免疫组织化学方法(SP法)检测40例胃癌患者胃组织标本中P73、P53蛋白的表达情况,结合临床病理资料进行分析,并与正常组织、慢性萎缩性胃炎和胃溃疡标本比较。结果:胃癌组织中P73、P53蛋白的阳性表达率分别为62.5%(25/40)、55.0%(22/40),高于正常胃粘膜组织、萎缩性胃炎、胃溃疡的表达(P<0.05);P73蛋白阳性表达率与胃癌组织类型、浸润深度及淋巴结转移无关(P>0.05);而P53蛋白阳性表达率则与其有关(P<0.05);且二者成正相关(P<0.05)。结论:P73、P53作为抑癌基因有其组织特异性,与胃癌临床病理和生物学行为存在密切关系,二者可能共同参与胃癌的发生发展过程。