EGCG对TF/Ⅶa/PAR2促进SW620细胞增殖与迁移的干预作用

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对组织因子(TF)/凝血因子Ⅶa/蛋白酶激活受体(PAR)2促进结肠癌细胞株SW620细胞增殖与迁移的干预作用.方法 用不同浓度EGCG、蛋白酶激活受体2激动剂(PAR2-AP)、Ⅶa刺激SW620细胞,采用MTT法、transwell法分别检测细胞增殖及迁移能力,实时定量PCR检测细胞TF及半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)7 mRNA表达,发色底物法与Western blot分别检测TF活性、Caspase-7蛋白表达.结果 与PAR2-AP或Ⅶa单独处理相比,EGCG+PAR2-AP、EGCG+Ⅶa对SW620细胞增殖、迁移的促进作用明显降低,TFmRNA表达及活性下降,Caspase-7 mRNA及蛋白表达上调(P＜0.05).结论 EGCG可干预SW620细胞TF和Caspase-7的表达,抑制TF/Ⅶa/PAR2对细胞增殖与迁移的促进作用.     

钙信号在PAR2激动剂促进SW620细胞增殖中的作用

目的 探讨钙信号在蛋白酶活化受体2激动剂(PAR2-AP)促进结肠癌SW620细胞增殖中的作用.方法 PAR2-AP 100 μmol/L作用于SW620细胞,用fluo-4/AM荧光法测定细胞内Ca2+荧光强度的变化;乙二醇-双-(2-氨基乙醚)四乙酸(EGTA)1 mmol/L、毒胡萝卜内酯(TG)1 tmol/L、PAR2-AP 100 μmol/L预处理细胞后,Western blot检测磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)的变化,MTT法检测SW620细胞增殖活力的变化,流式细胞术检测细胞周期的变化.结果 PAR2-AP刺激SW620细胞后,Ca2+荧光强度短暂升高后减低;EGTA和TG预处理细胞能明显干预PAR2-AP对p-ERK1/2的升高作用及其促细胞增殖作用.结论 PAR2-AP活化PAR2受体后经钙信号通路影响p-ERK1/2表达,促进SW620细胞的增殖.     

蛋白酶激活受体-1在肺纤维化大鼠肺组织中的表达

目的探讨在博莱霉素所致大鼠肺纤维化模型肺组织中蛋白酶激活受体-1的表达。方法将体重180-250g的SD清洁级雄性大鼠48只,按完全随机方法分为对照组及博莱霉素(BLM)组,BLM组大鼠气管内注入0.9-1.25ml博莱霉素A5(BLMA5,5mg/kg),对照组在同样条件下向气管内注入等量的生理盐水。两组动物于气管灌注后第7、14、28、40d分别随机处死6只。组化方法检测肺组织PAR-1的表达;Masson染色检测肺组织纤维化,按Ashcroft评分法,评估肺纤维化的严重程度,结果(1)对照组无明显胶原沉积,BLM组随着时间的延长,可见明显胶原沉积,BLM组/对照组两组在第7、14、28、40d肺间质纤维化Ashcroft评分分别为24±3.72/3±0.63、46.4±4.09/4±0.63、69.3±3.78/3±1.41、64.5±5.96/3±1.67,两组有显著性差异(P﹤0.05)。(2)BLM组/对照组两组在第7、14、28、40d平均每高倍镜视野肺组织PAR-1阳性细胞数分别为:9.93±1.47/2.5±1.52、16.67±2.16/1.83±1.17、17.67±2.16/2.17±0.75、16.0±2.28/2.17±1.17。BLM组各时间点肺组织PAR-1阳性细胞数较正常对照组增多,两组具有显著统计学差异(P﹤0.05)。(3)肺间质纤维化程度与PAR-1阳性细胞数呈正相关(r=0.76)。结论博莱霉素所致大鼠肺纤维化模型肺组织中蛋白酶激活受体-1的表达增强;蛋白酶激活受体-1的表达可能在博来霉素所致肺纤维化中其重要作用。     

蛋白酶激活受体在肿瘤血管生成中的作用及其靶向抗肿瘤药物研究进展

肿瘤血管生成是肿瘤生长过程中一个重要的步骤,可以为肿瘤细胞提供氧气和营养物质,也与肿瘤细胞转移有关。目前,抗血管生成被认为是肿瘤治疗的一个重要靶点。蛋白酶激活受体（PAR）是G蛋白偶联受体家族成员之一,已被证明可以作为癌基因,在多种肿瘤细胞中高表达。研究发现,PARs可被凝血酶激活,诱导血管内皮生长因子（VEGF）表达,参与肿瘤血管生成,可作为抗肿瘤血管生成的靶点。本文主要介绍了PARs的活化机制及其在肿瘤血管生成中的作用,并对近年来靶向PARs抑制肿瘤血管生成的抗肿瘤药物的结构、药理活性的研究进展进行总结。     

低pH插入肽-蛋白酶激活受体1复合物抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的实验研究★

目的 观察低pH插入肽-蛋白酶激活受体1（pHLIP-P1AP）复合物对三阴性乳腺癌（TNBC）MDA-MB-231细胞增殖的影响。方法 设计、合成荧光标记的pHLIP-P1AP。观察MDA-MB-231细胞与MCF-10A细胞表面蛋白酶激活受体1（PAR1）的表达情况。分析不同pH值（7.4、6.0）条件下荧光标记的pHLIP-P1AP与MDA-MB-231细胞的结合情况及其对MDA-MB-231细胞增殖的影响。结果 成功合成了pHLIP-P1AP并进行荧光标记。在酸性环境下（pH 6.0），荧光标记的pHLIP-P1AP与表面高表达PAR1的MDA-MB-231细胞有较强的结合能力，可明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖，pHLIP-P1AP为0.5 μg、1 μg、2 μg、4 μg、8 μg时，细胞的增殖抑制率分别为3.39%，5.27%，14.29%，22.14%、35.69%。结论 MDA-MB-231细胞表面表达大量的PAR1。pHLIP-P1AP在酸性环境下能够有效靶向MDA-MB-231细胞，并抑制MDA-MB-231细胞的生长，有望成为治疗TNBC的有价值的新型药物。     

芍药苷通过激活腺苷A1和A2a受体促进低氧条件下EPO基因的表达

目的探讨芍药苷影响促红细胞生成素(EPO)表达的靶受体及其下游分子信号通路。方法以不同剂量(0.02、0.2、2、20μmol·L-1)芍药苷,以及PI-3K通路抑制剂(LY294002 30 μmol·L-1)、腺苷A2a受体拮抗剂(SCH582610.2μmol·L-1)、腺苷A1受体拮抗剂(DPCPX 10 μmol·L-1)和激动剂(CPA1μmol·L-1)处理HepG2细胞在低氧条件下培养,用RT-PCR和Western blot的方法检测促红细胞生成素(EPO)表达。结果常氧条件下芍药苷抑制EPO的表达,低氧时2μmol·L-1浓度的芍药苷能促进EPO基因的表达但对蛋白表达没有影响,SCH58261、DPCPX、LY294002能抑制芍药苷升高EPO mRNA的现象。结论芍药苷能通过同时激活A1和A2a受体,然后进一步激活PI-3K通路促进低氧条件下EPO基因的表达。     

TOLL样受体 9/激活蛋白-1信号通路在过敏性鼻炎中的作用

目的 探讨TOLL样受体9/激活蛋白-1(TLR9/AP-1)信号通路在过敏性鼻炎中的作用机制.方法 48只SD大鼠采用随机数字表法分为对照组、实验组、干预组,每组16只.实验组、干预组制备过敏性鼻炎大鼠的动物模型.干预组造模成功后给予治疗药物干预.将各组16只大鼠采用随机数字表法分为两组,每组8只,分别于末次干预后6、12 h处死后采集血液标本和鼻黏膜标本.检测各组大鼠干预后免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、症状评分、鼻黏膜组织中C-Fos、C-Jun表达.结果 实验组大鼠IgE[(18.65±1.09)IU/mL比(11.39±1.56)IU/mL]、IL-4[(75.33±7.16)ng/L比(56.55±6.08)ng/L]、TNF-α[(57.25±5.15)ng/L比(32.33±2.26)ng/L]、症状评分、C-Fos[(0.850±0.012)比(0.425±0.050)]、C-Jun[(0.950±0.052)比(0.425±0.030)]均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).干预组大鼠IgE[(15.95±1.02)IU/mL]、IL-4[(65.12±5.47)ng/L]、TNF-α[(48.53±4.18)ng/L]、症状评分、C-Fos[(0.575±0.047)]、C-Jun[(0.615±0.047)]均明显低于实验组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 药物治疗过敏性鼻炎的机制与抑制TLR9/AP-1信号通路及其下游因子的释放和分泌有关.     

蛋白酶激活受体-2在大鼠体内体外脑缺血模型中的作用研究

目的研究蛋白酶激活受体-2(PAR-2)在大鼠体内外脑缺血模型中的作用。方法以PAR-2激活肽(AP)和拮抗剂(Anta)为工具药,使用大脑中动脉阻塞和氧糖剥夺的方法分别建立大鼠和大鼠胚胎脑皮质神经元的缺血模型,观察PAR-2在缺血损伤中的作用及表达变化。用肌动描记器记录PAR-2对正常或来自脑缺血大鼠的大脑中动脉(MCA)血管张力的影响。结果蛋白质印迹法表明PAR-2在缺血侧大脑皮质中表达增多,缺血前给予PAR-2 AP(SLIGRL-NH2)显著改善了体内和体外模型缺血导致的损伤,且能够被PAR-2 Anta(ENMD-1068)所抑制。PAR-2 AP能够使MCA产生一氧化氮依赖性舒张,但是不能被ENMD-1068所抑制。结论 PAR-2有望作为预防性治疗脑缺血疾病的靶点进行研究,ENMD-1068能够抑制SLIGRL-NH2对脑缺血的保护作用。     

莱菔硫烷促进KG1a细胞凋亡及其作用机制

目的：研究莱菔硫烷对急性髓系白血病细胞株KG1a细胞凋亡的影响及作用机制。方法：利用细胞增殖实验CCK-8试剂盒检测SFN对KG1a细胞增殖的抑制作用,利用流式细胞术检测SFN对KG1a细胞早期凋亡率的影响,进一步利用PCR、Western-blot技术研究SFN对KG1a细胞Bax和bcl2 mRNA和蛋白水平表达的影响。结果：（1）SFN可抑制KG1a细胞的增殖,且随SFN浓度增加和作用时间延长抑制率增加;（2）在0,4,8,12 μmol·L^-1SFN作用KG1a细胞后,其早期凋亡率呈浓度依赖性增加,早期凋亡率分别为0,3.12%,13.33%,28.18%;（3）SFN可增加KG1a细胞的Bax的mRNA和蛋白的表达,与对照组（0 μmol·L^-1浓度组）存在统计学差异（P<0.05）。SFN可降低bcl2 mRNA和蛋白表达水平,12 μmol·L^-1SFN浓度组的蛋白表达与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：SFN可通过调控Bax和bcl2基因促进KG1a细胞凋亡,抑制KG1a细胞增殖。     

GD1a对基质金属蛋白酶-9在不同细胞类型中表达的调控作用

目的在不同的细胞类型中,检测神经节苷脂GD1a是否抑制基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。方法采用逆转录PCR法和酶谱法检测MMP-9及MMP-2的表达。结果在鼠黑色素瘤B16细胞中,神经节苷脂GD1a促进MMP-9的表达,而在小鼠肺癌Lewis细胞、人单核细胞THP-1及人子宫颈癌HeLa细胞中,神经节苷脂GD1a降低MMP-9的表达。在上述细胞中,神经节苷脂GD1a不影响基质金属蛋白酶MMP-2的表达;肿瘤坏死因子TNF-α在这几种细胞中均能促进MMP-9的表达,但对MMP-2无影响;在B16细胞中,GD1a通过胞窖膜介导信号传递,并且主要通过ERK促进MMP-9的表达,而在Lewis细胞中,GD1a不通过胞窖膜介导信号传递,但部分通过p38、ERK和JNK抑制MMP-9表达。结论在不同的细胞类型中,神经节苷脂GD1a能够激活不同的信号转导途径。     

大鼠海马β-肾上腺素受体和烟碱受体亚型在烟碱激活p44/42MAPK中的作用

目的　为探讨烟碱对海马脑片p4 4/ 4 2MAPK磷酸化的影响 ,以及 β 肾上腺素受体 (β AR)、烟碱受体亚型在其中的作用。方法　将 4 0 0 μm厚的海马脑片置于预先经 95 %O2 和 5 %CO2 饱和的 2 8℃人工脑脊液中预孵 90min后分别加入普萘洛尔、α 银环蛇毒素和美卡拉明 ,30min后再加入烟碱 ,使其终浓度分别为 1和 10 0 μmol·L- 1。于烟碱作用 90min时 ,运用免疫印迹法检测这 3个受体阻断剂对烟碱引起的p4 4/ 4 2MAPK磷酸化的抑制效果。结果　烟碱对p4 4/ 4 2MAPK磷酸化的作用与烟碱浓度有关 ,10 0 μmol·L- 1烟碱比 1μmol·L- 1烟碱作用强。美卡拉明单独作用可阻断 1μmol·L- 1烟碱和部分阻断10 0 μmol·L- 1烟碱引起的p4 2MAPK磷酸化 ;α 银环蛇毒素只能阻断 10 0 μmol·L- 1烟碱引起的p4 2 /4 4MAPK磷酸化 ;但同时使用这两种烟碱受体阻断剂时 ,两种浓度烟碱引起的p4 4/ 4 2MAPK磷酸化均可被完全阻断 ;普萘洛尔对 1μmol·L- 1烟碱引起的p4 4MAPK磷酸化和 10 0 μmol·L- 1烟碱引起的p4 2MAPK磷酸化仅有部分阻止作用。结论　在烟碱激活的p4 4/ 4 2MAPK中 ,不同烟碱受体亚型在不同烟碱浓度中起作用 ;β AR仅参与烟碱引起的p4 4/4 2MAPK部分磷酸化。     

白杨素通过调控miR 199a 3p/ZHX1抑制食管鳞癌细胞增殖和侵袭

摘 要 目的：探究白杨素（Chrysin,CR）对食管鳞癌细胞增殖和侵袭的影响及其潜在的分子机制。方法: 将食管鳞癌细胞分为对照组（未转染、未CR处理细胞常规培养）、miR NC组（稳定转染的miR 199a 3p NC用等量DSMO培养）、miR mimic组（稳定转染的miR 199a 3p mimic用等量DSMO培养）、CR miR NC组（稳定转染的miR 199a 3p NC用终浓度100 μmol·L-1 CR培养）、CR miR mimic组（稳定转染的miR 199a 3p mimic用终浓度100 μmol·L-1CR培养）,48 h后,采用流式细胞仪检测转染效率,采用实时荧光定量PCR（qRT PCR）检测EC9706细胞中miR 199a 3p和锌指和同源框蛋白1（Zinc fingers and homeoboxes protein 1,ZHX1）表达情况,采用荧光素活性和蛋白免疫印迹（Western blot）检测miR 199a 3p对ZHX1的调控作用,分别采用MTT和transwell小室实验检测EC9706细胞增殖和侵袭能力。结果: 流式细胞仪检测结果显示转染效率达到80%以上;CR miR NC组miR 199a 3p的表达水平显著低于miR NC组（P＜0.05）;CR miR mimic组miR 199a 3p的表达水平显著低于miR mimic组（P＜0.05）,CR miR NC组ZHX1的表达水平显著高于miR NC组（P＜0.05）;CR miR mimic组ZHX1的表达水平显著高于miR mimic组（P＜0.05）。荧光素酶活性测定显示,在转染ZHX1 3’UTR的细胞中,与miR 199a 3p NC组相比,miR 199a 3p mimic组荧光素酶活性显著降低（P＜0.05）,而在转染ZHX13’UTR Mut的细胞中,miR 199a 3p mimic组与miR 199a 3p NC组的荧光素酶活性差异无统计学意义（P＞0.05）,CR miR NC组EC9706细胞增殖和侵袭能力显著低于miR NC组（P＜0.05）,CR miR mimic组EC9706细胞增殖和侵袭能力显著低于miR mimic组（P＜0.05）。结论: CR通过调控miR 199a 3p/ZHX1抑制食管鳞癌细胞增殖和侵袭,为食管鳞癌的靶向治疗提供一定的理论依据。     

微小 RNA-34a在紫草素抑制肺癌 H1299细胞增殖和侵袭中的作用及其机制

目的探讨微小 RNA-34a(microRNA-34a，miR-34a)在紫草素抑制肺癌 H1299细胞增殖和侵袭中的作用及其机制。方法 2019年 9月至 2020年 3月，采用 1、2.5和 5 mg/L紫草素处理体外培养的肺癌 H1299细胞后，采用噻唑蓝( MTT)法检测细胞的存活率；平板克隆实验和 Transwell实验分别检测细胞克隆形成能力和侵袭能力； RT-PCR检测细胞中 miR-34a的表达情况。采用生物信息软件预测、双萤光素酶报告基因实验检测 miR-34a与 Yin Yang-1(YY1)的靶向关系。采用脂质体法转染 miR-34a抑制剂和 pcDNA3.1-YY1-GFP过表达质粒后， RT-PCR检测细胞中 miR-34a的表达情况，蛋白质印迹法(western blotting)检测细胞 YY1蛋白的表达， MTT法、平板克隆实验和 Transwell小室实验观察下调 miR-34a和上调 YY1表达对紫草素处理的 H1299细胞增殖和侵袭的影响。结果与 0 mg/L紫草素相比， 1、2.5和 5 mg/L紫草素能够呈浓度依赖性抑制 H1299细胞存活率、克隆细胞数［( 127.63±7.38)、(108.85±6.34)、(91.72±6.15)比( 156.55±9.06)］和侵袭细胞数［( 93.12±5.56)、(75.25±4.68)、(59.85±3.20)比( 116.00±7.85)］并促进 miR-34a表达。生物信息软件预测到 miR-34a与 YY1存在互补的结合位点，双萤光素酶报告基因实验证实 YY1是 miR-3，4a的靶基因。下调 miR-34a可逆转紫草素对 H1299细胞增殖和侵袭的抑制作用，并促进 YY1蛋白的表达，     

Caspase-3和缺氧诱导因子-1在缺血性脑损伤中的作用

脑卒中、癫痫、颅脑外伤、颅内肿瘤及一些少见脑血管病变(如烟雾病、脑型Buerger病)会导致中枢神经系统缺血性事件,严重影响人类健康,具有发病率、死亡率、致残率、复发率高等特点.神经元凋亡是缺血性脑损伤的重要形式,脑组织面对缺血低氧状态会相应的启动一些应答机制来减轻低氧缺血带来的不良后果,其中Caspase-3、缺氧诱导因子-1( hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)最具代表性.干预上述两因子可能为缺血性脑损伤治疗提供新的途径.     

MRP-1/CD9和MMP-2在舌鳞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨能动性相关蛋白-1(MRP-1/CD9)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在舌鳞癌中的表达及临床意义.方法 免疫组化法检测MRP-1/CD9和MMP-2在53例舌鳞癌中的表达,将检测结果与患者的临床特征进行相关性分析.结果 MRP-1/CD9和MMP-2在舌鳞癌中的强阳性表达率分别为60.4％和62.3％;MRP-1/CD9蛋白的表达与肿瘤的淋巴结转移相关(P＜0.05);MMP-2蛋白的表达与肿瘤的淋巴结转移及病理分级相关(P＜0.05).MRP-1/CD9表达和MMP-2表达有相关性(P＜0.05).结论 MRP-1/CD9和MMP-2对舌鳞癌的发生、发展起重要作用;检测其蛋白表达水平对于评价患者的预后有一定的价值.     

线粒体通路和死亡受体通路在中华眼镜蛇毒组分诱导KG1a细胞凋亡中的作用

目的研究线粒体通路和死亡受体通路在中华眼镜蛇毒组分(naja naja actra venom component,NNAVC)诱导KG1a细胞凋亡过程中的作用。方法以人急性髓系白血病细胞株KG1a细胞为研究对象,采用Annexin V-FITC/PI荧光染色法进行凋亡细胞的形态学观察,流式细胞仪检测细胞凋亡率,分光光度法检测Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3的活性,ELISA法检测胞质内细胞色素C的表达水平,流式细胞仪分析TRAIL死亡受体(DR4、DR5)和诱骗受体(DcR1、DcR2)的改变。结果 NNAVC作用后,荧光显微镜下可见明显的凋亡细胞,细胞凋亡率随药物作用浓度的增加而升高;Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3蛋白被激活,胞质内细胞色素C的表达明显增加;流式细胞仪检测结果显示,NNAVC具有降低死亡受体DR4和诱骗受体DcR1的表达率,而提高DR5和DcR2的表达水平的作用。结论线粒体凋亡通路和死亡受体通路均参与NNAVC诱导KG1a细胞凋亡的过程,这可能是NNAVC发挥抗白血病作用的机制之一。     

NLRP3和TLR4调控的细胞焦亡在痛风性关节炎中的作用

细胞焦亡是一种强烈促炎性的程序性细胞死亡过程,由半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)介导,NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体和Toll样受体蛋白4(TLR4)信号通路共同调控,其在痛风性关节炎发病过程中扮演了重要角色.本文对痛风性关节炎中细胞焦亡的调控机制进行系统阐述,为新药研究提供方向.