慢病毒介导的新型Tet-On系统大鼠GDNF和TH双基因脑内转移对帕金森病大鼠模型的保护作用

目的探讨慢病毒介导的新型Tet-On系统大鼠胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因和酪氨酸羟化酶(TH)双基因直接转移对帕金森病(PD)大鼠的保护作用。方法将携带TH、GDNF基因并含启动子为Palb的四环素应答元件的慢病毒(Lv-TH-GDNF)和四环素反式作用子rtTA2s-M2病毒共同注射到SD大鼠左侧纹状体,用强力霉素(DOX)诱导大鼠目的基因GDNF和TH的表达。1周后在大鼠的同侧纹状体注射6-羟基多巴胺(6-OHDA)损毁纹状体的DA能神经元。通过旋转行为、黑质TH免疫组化染色以及高效液相色谱-电化学方法(HPLC-ECD)检测纹状体DA含量评估其保护效应;通过RT-PCR、免疫印迹观察Lv-TH-GDNF在脑内的表达。实验与健康对照组、磷酸缓冲液(PBS)对照组进行比较。结果在6-OHDA损伤后4周,Lv-TH-GDNF+rt-TA2s-M2+DOX组大鼠阿扑吗啡诱发的旋转效应均明显低于PBS对照组(P<0.01),损毁侧的的黑质区TH阳性细胞表达强度、纹状体DA含量均明显高于PBS对照组(P<0.01),但二者均低于健康对照组(P<0.01)。RT-PCR、免疫印迹结果显示,与PBS对照组比较,Lv-TH-GDNF+rtTA2s-M2+DOX组大鼠纹状体TH、GDNF基因的表达明显增高(P<0.01)。结论慢病毒介导的新型Tet-On系统大鼠GDNF和TH双基因脑内直接转移,在强力霉素诱导下可减缓6-OHDA诱发的大鼠DA能神经元进行性变性,具有保护作用。     

司来吉兰对帕金森病模型大鼠黑质纹状体TH及GDNF表达的影响

目的观察司来吉兰对帕金森病(PD)模型大鼠黑质纹状体内酪氨酸羟化酶(TH)及胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达的影响,探讨司来吉兰对多巴胺能神经元的保护作用及机制。方法 72只健康雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和司来吉兰组,每组均设4 d和8 d 2个亚组,各12只。模型组和司来吉兰组采用颈背部皮下注射鱼藤酮制备PD模型,对照组皮下注射等体积葵花油。之后司来吉兰组每日灌胃咪多吡0.5 mg/kg,模型组和对照组每日灌胃等体积生理盐水,4 d和8 d组分别连续灌胃4 d和8 d。采用免疫组化法和Western blotting法检测黑质纹状体TH和GDNF表达水平。结果免疫组化法和Western blotting法检测结果均显示,对照组大鼠黑质纹状体可见多量TH阳性细胞表达和少量GDNF阳性细胞表达,8 d和4 d组差异均无统计学意义。模型组TH和GDNF阳性细胞表达均明显低于对照组(均P<0.05),8 d和4 d组差异均无统计学意义。司来吉兰组TH阳性细胞表达低于对照组而高于模型组,GDNF阳性细胞表达高于对照组和模型组(均P<0.05),且8 d组均高于4 d组(均P<0.05)。结论司来吉兰可减轻PD模型大鼠黑质纹状体多巴胺能神经元的损伤,其作用机制可能与增加GDNF表达有关。     

尼莫地平对帕金森病大鼠模型多巴胺能神经元的保护作用

目的 观察尼莫地平对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的帕金森病(Parkinson disease,PD)大鼠多巴胺能神经元的保护作用.方法 脑立体定位注射6-OHDA建立大鼠PD模型,从行为学、病理、免疫组化方面观察尼莫地平干预后PD大鼠旋转行为、黑质细胞的变化.结果 (1)行为学观察:尼莫地平预先给药组PD大鼠模型成功率低于PD模型组.对照组、尼莫地平组治疗前后行为学无明显变化;左旋多巴组、尼莫地平与左旋多巴联合给药组治疗后旋转行为较给药前明显减慢(P＜0.05).(2)酪氨酸羟化酶(TH)组阳性细胞计数:第二阶段各组间TH阳性细胞计数无统计学差异,各组用药前后TH阳性细胞计数亦无统计学差异.结论 尼莫地平预先干预可降低PD模型成功率,即对PD的预防可能有一定作用;但模型成功后给予尼莫地平未能改善PD大鼠行为学和病理形态学的变化.     

毛钩藤碱对6-羟基多巴胺诱导的帕金森病模型大鼠神经保护作用及机制研究

目的 探讨毛钩藤碱对帕金森病(Parkinson′s disease, PD)模型大鼠的神经保护作用及机制。方法 采用右侧中脑黑质致密部注射6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine, 6-OHDA)制备大鼠PD模型,将建模成功的PD大鼠随机分为模型组、美多芭组、毛钩藤碱低剂量和高剂量组,同时设置正常对照组,每组12只。给予相应药物灌胃干预,每天1次,连续1个月。采用旋转试验、转棒试验和Morris水迷宫试验检测大鼠行为学变化;HE染色法观察大鼠右侧中脑黑质病理学变化;高效液相色谱法(HPLC)检测大鼠右侧纹状体中多巴胺(dopamine, DA)水平;免疫组化法检测大鼠右侧中脑黑质中多巴胺能神经元标志物酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase, TH)表达;ELISA法检测大鼠右侧中脑黑质IL-6、IL-1β和TNF-α水平;Western blot检测大鼠右侧中脑黑质中NF-κB p65、NF-κB抑制因子α(IκBα)、p-IκBα等蛋白表达水平。结果 毛钩藤碱能显著改善PD大鼠行为学障碍及中脑黑质损伤,升高纹状体DA含量及中脑黑质中TH阳性神经元数量和Iκ...     

螺旋藻多糖对MPTP致多巴胺能神经元损伤的保护

目的探讨螺旋藻多糖(PSP)对MPTP制备的C57BL小鼠帕金森病(PD)模型多巴胺能神经元的保护作用。方法C57BL小鼠分5组:对照组、MPTP组、PSP高、中、低剂量预处理+MPTP组。用免疫组化、RT-PCR和HPLC-ECD方法检测黑质中酪氨酸羟化酶(TH)和多巴胺转运体(DAT)免疫反应阳性表达水平,TH和DAT mRNA表达水平及纹状体中多巴胺(DA)及其代谢产物3,4-二羟苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)的含量。结果模型小鼠黑质中TH和DAT免疫阳性细胞数目减少,TH和DAT mRNA表达水平降低,纹状体中DA、DOPAC和HVA含量降低(P<0.01)。PSP预处理组与模型组相比,TH和DAT免疫阳性细胞数目增加,TH和DAT mRNA表达升高,DA、DOPAC和HVA含量升高(P<0.05)。结论PSP对MPTP所致C57BL小鼠PD模型的多巴胺能神经元有保护作用。     

二苯乙烯苷对帕金森病模型大鼠行为学及多巴胺能神经元的影响

［摘要］　目的：观察何首乌主要有效成分二苯乙烯苷（TSG）对帕金森病（PD）模型大鼠行为学及脑内黑质多巴胺能神经元的影响。方法：采用6-羟基多巴胺（6-OHDA）单侧脑内黑质致密部（SNC）和中脑腹侧被盖区（VTA）两点注射法制备PD大鼠模型后，灌胃给予TSG低、中、高剂量 (50，100，200 mg&#8226;kg-1)，qd，连续5周。实验同时设正常对照组和美多芭阳性对照组（125 mg&#8226;kg-1），每组10只。用旋转行为检测及Rotarod试验观察各组大鼠的行为学变化，用免疫组化法观察大鼠脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元的表达，用高效液相色谱-电化学法（HPLC-ECD）测定大鼠脑黑质多巴胺（DA）及3,4-二羟基苯乙酸（DOPAC）含量。结果：行为学检测结果表明，模型组大鼠旋转次数及运动协调性均低于正常对照组(P<0.01)，而TSG与美多芭给药可改善大鼠旋转行为及运动协调性。TH免疫组化检测结果显示，TSG处理组脑黑质部位损毁较轻，有较多残存的TH阳性细胞；而模型组黑质大部损毁，几乎无残存的TH阳性细胞；从HPLC-ECD测定结果可以看出，与正常对照组比较，模型组DA及DOPAC含量下降显著(P<0.05)，与模型组相比，TSG处理组脑内DA及DOPAC含量明显增加(P<0.05)。结论：TSG可改善PD大鼠的行为学改变，增加黑质-纹状体多巴胺及其代谢物含量并提高黑质多巴胺能神经元的残存率，提示TSG对PD可能具有一定的神经保护作用。     

依达拉奉对大鼠癫痫持续状态后脑自由基代谢及海马神经元凋亡的影响

目的观察依达拉奉对大鼠癫痫持续状态后脑内自由基及海马神经元凋亡的影响及可能机制。方法采用氯化锂-匹罗卡品大鼠癫痫持续状态模型,成年雄性Wistar大鼠54只随机分为实验组48只和对照组6只,实验组分为模型组、依达拉奉治疗组,每组按照时间点分为4个亚组(12、24、72 h,7 d)。化学比色法测定脑组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)的含量,免疫组织化学法检测大鼠脑组织c-fos蛋白表达。结果与对照组相比,模型组的SOD活性在12 h开始下降,72 h时最低(P<0.01),7 d时恢复正常;依达拉奉治疗组与之趋势相同,但各时间点均高于模型组。模型组的MDA含量和大鼠脑组织的c-fos蛋白表达在各时间点均高于对照组(P<0.05);依达拉奉治疗组与之趋势相同,但在24、72 h低于模型组(P<0.05)。结论依达拉奉可以清除自由基,减少海马神经元的凋亡,对癫痫持续状态后的脑损伤有一定的保护作用。     

莱菔硫烷对帕金森病大鼠脑内多巴胺能神经元的保护作用及机制

目的 观察莱菔硫烷(sulforaphane,SF)对帕金森(PD)病大鼠模型脑内黑质多巴胺能神经元的保护作用.方法 健康成年雄性Wistar大鼠背部皮下注射鱼藤酮制备PD大鼠模型,药物治疗组同时给予大鼠腹腔注射EGCG.采用分光光度法检测大鼠脑内丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH),免疫细胞化学和免疫印记检测大鼠中脑黑质及纹状体中络氨酸羟化酶(TH)的表达变化.结果 Western blot结果显示试验组大鼠脑内中脑和纹状体中TH蛋白表达都比对照组有明显降低(P<0.05);莱菔硫烷药物干预后TH蛋白在中脑和纹状体比试验组明显增高(P<0.05),但是较对照组仍有明显减少(P<0.05).实验组大鼠在给予鱼藤酮背部皮下注射后导致大鼠脑内纹状体中脂质代谢产物MDA含量比对照组明显增加(P<0.01).莱菔硫烷药物干预组大鼠脑内纹状体中MDA明显减少(P<0.05),但较对照组仍明显增加(P<0.05).同时我们发现鱼藤酮背部皮下注射可以导致实验组大鼠脑内纹状体中GSH的含量比对照组明显减少(P<0.01);莱菔硫烷药物干预后大鼠脑内纹状体中GSH含量较实验组明显增加(P<0.05),但较对照组仍明显减少(P<0.05).结论 氧化应激在PD发病中起着非常重要的作用,抗氧化治疗能有效减轻大鼠脑内多巴胺能神经元损伤情况,同时改善PD样症状,为PD的治疗提供了新的靶点.     

依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血后神经元凋亡的影响

目的探讨依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血后神经细胞的保护作用。方法采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型(MCAO),将动物随机分为假手术组、生理盐水组和依达拉奉组,采用比色法测定脑组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力,免疫组化法检测caspase-3的表达水平,原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡水平。结果依达拉奉治疗组与生理盐水组相比,脑组织中MDA含量显著降低(P<0.05),SOD活力显著升高(P<0.05);同时依达拉奉治疗组的脑神经元caspase-3的表达水平及细胞凋亡水平比生理盐水组显著减少(P<0.05)。结论依达拉奉可有效提高大鼠局灶性脑缺血时脑组织中SOD活力,降低MDA水平,并且有效抑制caspase-3表达,对抗神经细胞凋亡。     

类叶升麻苷对MPTP所致帕金森病小鼠模型的神经保护作用

目的研究类叶升麻苷在MPTP诱导的C57小鼠的帕金森病(PD)模型中的神经保护作用及机制。方法通过自主活动实验和滚筒实验研究动物的行为表现,通过高效液相电化学检测方法观察脑纹状体多巴胺的变化,通过脑黑质酪氨酸羟化酶(tyroxinehydroxylase,TH)免疫组化染色观察多巴胺能神经元的损伤程度。并对黑质纹状体进行α-突触核蛋白(α-synuclein)的免疫印迹分析以探讨药物作用机制。结果①经MPTP诱导的C57小鼠,其自主活动次数、滚筒运动潜伏期均低于对照组(P<0·01);纹状体多巴胺含量明显降低(P<0·01);多巴胺能神经元数量明显减少;黑质纹状体α-synuclein蛋白水平下降。②经类叶升麻苷(10、30mg·kg-1)预处理后能明显改善MPTP诱导的C57小鼠的行为学表现,增加脑内多巴胺递质的含量,增加多巴胺能神经元的数量,增加黑质纹状体α-synuclein蛋白水平。结论类叶升麻苷具有神经保护作用,能对抗MPTP诱导的C57小鼠PD模型中的神经损伤。其机制可能与上调α-synuclein蛋白水平有关。