肾上腺髓质素真核表达载体对皮瓣缺血再灌注损伤的影响

背景：肾上腺髓质素可在心、脑、肾、肝等器官的缺血再灌注过程中起保护作用。目的：观察肾上腺髓质素真核表达载体对大鼠腹部皮瓣缺血再灌注损伤的影响及其作用机制。方法：构建大鼠肾上腺髓质素真核表达载体,将SD大鼠随机分假手术组、模型组、维拉帕米组、重组质粒组。重组质粒组腹部皮内注射肾上腺髓质素真核表达载体,其余各组注射等量生理盐水,各组注射4次后建立缺血再灌注模型,维拉帕米组于皮瓣内注射维拉帕米。结果与结论：与模型组相比,重组质粒组皮瓣组织中丙二醛、血管内皮素1的含量分别降低了38.50%（P〈0.01）,54.73%（P〈0.01）,超氧化物歧化酶的含量增加了50.67%（P〈0.05）。皮瓣组织学检查结果显示重组质粒组皮瓣炎性细胞浸润与水肿程度也较模型组明显减轻。结果证实肾上腺髓质素真核表达载体对大鼠皮瓣缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制与减轻脂质过氧化及减少炎症细胞浸润有关。     

肾上腺髓质素基因注入大鼠骨骼肌对肢体缺血再灌注肝脏的影响

背景:以往研究直接采用肾上腺髓质素药物来研究多种器官缺血再灌注损伤后肾上腺髓质素的保护作用,但转肾上腺髓质素基因对肢体缺血再灌注后引起的肝脏损伤是否有保护作用却少见报道.目的:探讨大鼠肾上腺髓质素真核表达载体对大鼠肢体缺血再灌注后肝脏的作用.方法:成年雄性SD大鼠32只,随机分成4组,假手术组、缺血再灌注模型组、转肾上腺髓质素基因组和空载体组,每组8只,除假手术组其余各组大鼠制成缺血再灌注模型.转肾上腺髓质素基因组和空载体组采用直接注射法于腓肠肌分别注射肾上腺髓质素真核表达载体和肾上腺髓质素(700 μg/kg)盐水溶液1 mL;假手术组和缺血再灌注模型组注射生理盐水1 mL心脏采血测定血浆谷丙转氨酶、谷草转氨酶和乳酸脱氢酶的活性,测定肝组织总超氧化物歧化酶、丙二醛的含量;免疫组化检测术侧腓肠肌中肾上腺髓质素的表达情况;显微镜观察肝组织的形态学变化.结果与结论:与假手术组比较:缺血再灌注模型组血浆谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶水平及肝组织丙二醛含量均明显升高(P＜0.01),肝组织超氧化物歧化酶活性明显降低(P＜0.01),显微镜下可见肝细胞水肿、结构紊乱等组织损伤明显;与缺血再灌注模型组比较:转肾上腺髓质素基因组血浆谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶及肝组织丙二醛含量明显降低(P＜0.01),肝组织超氧化物歧化酶活性明显升高(P＜0.01),显微镜下可见肝细胞水肿等组织损伤有所改善.免疫组化结果显示转肾上腺髓质素基因组腓肠肌中肾上腺髓质素表达上调.结果表明,转肾上腺髓质素基因对大鼠肢体缺血再灌注后肝脏具有保护作用,其机制可能与提高抗氧化能力、降低肝酶渗出相关.     

肾上腺髓质素对骨骼肌缺血再灌注损伤的影响

背景:作为一种新发现的内分泌激素,研究表明肾上腺髓质素能在多种重要器官的缺血再灌注损伤中起到保护作用,是否能对骨骼肌缺血再灌注有保护作用有待研究.目的:观察肾上腺髓质素对大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-03/07在湖南师范大学医学院机能实验室、分子生物学实验室完成.材料:健康雄性SD大鼠30只,随机分为对照组,缺血再灌注组,0.1,0.5,1.0 nmol/kg肾上腺髓质素处理组,每组6只.方法:无创动脉夹夹闭右侧股动脉4 h,再灌注3 h,建立后肢骨骼肌缺血再灌注损伤模型.对照组仅暴露出股动静脉,不做血管夹闭和环扎.肢体再灌沣前肾上腺髓质素处理组分别自尾静脉注射0.1,0.5,1.0 nmol/kg肾上腺髓质素生理盐水溶液,对照组及缺血再灌注组注射等量生理盐水.主要观察指标:测定各组血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶活性;取术侧腓肠肌,测定组织中超氧化物歧化酶、髓过氧化物酶的活性、丙二醛水平并观察骨骼肌组织形态学变化.结果:30只大鼠均进入结果分析.①与对照组比较,缺血再灌注组肌酸激酶、乳酸脱氯酶、丙二醛、髓过氧化物酶值增高(P<0.01),超氧化物歧化酶值降低(P<0.01);腓肠肌超微结构损伤明显加重.②与缺血再灌注组比较,肾上腺髓质素处理组肌酸激酶、乳酸脱氢酶、丙二醛、髓过氧化物酶值减低,超氧化物歧化酶值增高.0.1 nmol/kg肾上腺髓质素处理组与缺血再灌注组比较,肌酸激酶、丙二醛的变化无统计学意义(P>0.05),其他均有统计学意义(P<0.05～0.01).③0.5 nmol/kg肾上腺髓质素处理组肌酸激酶、髓过氧化物酶、丙二醛值低于0.1 nmol/kg肾上腺髓质素处理组(P<0.05),1.0 nmol/kg肾上腺髓质素处理组肌酸激酶值低于0.1 nmol/kg肾上腺髓质素处理组(P<0.05).0.1 nmol/kg肾上腺髓质素处理组腓肠肌超微结构损伤相对加重.结论:肾上腺髓质素可减轻缺血再灌注对骨骼肌造成的损伤,对缺血再灌注骨骼肌具有保护作用.     

肾上腺髓质素对缺血再灌注大鼠心肌血管细胞黏附分子1表达的抑制作用

背景降钙素基因相关肽可减轻心肌缺血再灌注损伤.肾上腺髓质素与降钙素基因相关肽有一定的同源性,因此,一些研究推测肾上腺髓质素也可能对心肌有保护作用.目的探讨肾上腺髓质素对缺血再灌注大鼠心肌组织血管细胞黏附分子1表达的抑制及其对心肌缺血的保护作用.设计实验对象为SD大鼠心脏缺血再灌注模型,完全随机分组,随机设计.材料本实验于2003-12/2004-05在咸宁学院医学院实验动物中心完成.实验选用健康雄性SD大鼠24只.方法24只雄性SD大鼠心脏制成离体心脏缺血再灌注模型,随机分为对照组和肾上腺髓质素1-50(1×10-9),(1×10-8),(1×10-7)mol/L组.心脏缺血60 min,对照组用氧合KHB液再灌注60min,其他3组分别用氧合KHB液加肾上腺髓质素1-50(1×10-9),(1×10-8),(1×10-7)mol/L再灌注15 min,再用KHB液灌注45 min.收集冠状动脉流出液,检测肌酸激酶同工酶含量.留取左室心尖部心肌进行总RNA提取,采用RT-PCR法测定血管细胞黏附分子1mRNA的表达.主要观察指标对照组及不同浓度肾上腺髓质素1-50组心肌组织VCAM-1 mRNA的表达.结果电泳后,各组在194 bp处均可见一明显的扩增条带,此为甘油醛-3-磷酸脱氢酶mRNA扩增片段,各组间甘油醛-3-磷酸脱氢酶mRNA的表达基本一致.对照组、肾上腺髓质素1-50(1×10-9)mol/L组在334bp处可见亮度强、边界明显清楚的条带为血管细胞黏附分子1 mRNA扩增片段.肾上腺髓质素1-50(1×10-8)mol/L组血管细胞黏附分子1 mRNA扩增条带亮度明显减弱.肾上腺髓质素1-50(1×10-7)mol/L组仅为亮度微弱且模糊的扩增条带.肾上腺髓质素1-50(1×10-8),(1×10-7)mol/L组扩增的血管细胞黏附分子1mRNA与甘油醛-3-磷酸脱氢酶mRNA的灰度值比值(0.6±0.31,0.5±0.36)明显低于对照组(1.2±0.52)(P＜0.05).结论心肌缺血再灌注时,肾上腺髓质素1-50可呈浓度依赖性地抑制心肌组织血管细胞黏附分子-1mRNA的表达.     

钙拮抗剂减轻大鼠皮瓣缺血再灌注损伤的效应

目的:对照应用与不应用钙离子拮抗剂大鼠皮瓣缺血再灌注损伤后某些特异性化学物质的含量,探讨钙离子拮抗剂对皮瓣缺血再灌注损伤的保护作用。方法:实验于2003/2004在哈尔滨医科大学动物实验室进行。实验大鼠33只,随机分成3组,每组11只。对照组:术前3d腹腔注射生理盐水,2mL/d,共用3d。维拉帕米组:术前3d腹腔注射维拉帕米16mg/(kg·d),共用3d。汉防已甲素组:术前3d腹腔注射汉防已甲素40mg/(kg·d),共用3d。在缺血前和缺血5h和再灌注20min后,检测皮瓣脂肪组织中超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化酶活性和丙二醛含量的变化。结果:实验大鼠33只均进入结果分析。①大鼠腹壁皮瓣超氧化物歧化酶活性:对照组再灌注20min低于缺血前[(228.92±22.4),(312.76±47.77)mmol/L,P<0.01],维拉帕米组和汉防己甲素组缺血5h低于对照组[(293.30±28.5),(290.47±29.3),(265.74±29.3)mmol/L,P<0.05],维拉帕米组和汉防己甲素组再灌注20min高于对照组[(332.94±41.5),(334.89±41.6)mmol/L,P<0.01]。②大鼠皮瓣脂肪组织中的谷胱甘肽过氧化酶活性:对照组皮瓣在缺血5h,再灌注20min的谷胱甘肽过氧化酶活性,比缺血前明显降低(P<0.05或0.01)。再灌注20min时,维拉帕米和汉防己甲素组的谷胱甘肽过氧化酶活性均较对照组明显升高。③大鼠皮瓣脂肪中的丙二醛含量:对照组皮瓣缺血5h时脂肪中丙二醛的含量与缺血前相比无明显差异(P>0.05),再灌注20min时,丙二醛含量比缺血前明显增高(P<0.01)。维拉帕米和汉防己甲素组再灌注20min时丙二醛含量比对照组明显下降(P<0.01)。结论:维拉帕米和汉防己甲素可以明显地提高皮瓣的超氧化物歧化酶活性和谷胱甘肽过氧化酶活性,并可显著降低丙二醛的含量。钙离子拮抗剂能减轻大鼠腹部皮瓣缺血再灌注损伤的脂质过氧化作用。应用钙离子拮抗剂在组织缺血再灌注损伤过程中可以抑制钙离子内流,降低组织细胞的破坏程度。     

钙拮抗剂减轻大鼠皮瓣缺血再灌注损伤的效应

目的：对照应用与不应用钙离子拮抗剂大鼠皮瓣缺血再灌注损伤后某些特异性化学物质的含量，探讨钙离子拮抗剂对皮瓣缺血再灌注损伤的保护作用。 方法：实验于2003／2004在哈尔滨医科大学动物实验室进行。实验大鼠33只，随机分成3组，每组11只。对照组：术前3d腹腔注射生理盐水，2mL/d，共用3d。维拉帕米组：术前3d腹腔注射维拉帕米16mg／（kg&;#183;d）．共用3d。汉防已甲素组：术前3d腹腔注射汉防已甲素40mg／（kg&;#183;d），共用3d。在缺血前和缺血5h和再灌注20rain后，检测皮瓣脂肪组织中超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化酶活性和丙二醛含量的变化。 结果：实验大鼠33只均进入结果分析。①大鼠腹壁皮瓣超氧化物歧化酶活性：对照组再灌注20rain低于缺血前[（228．92&;#177;22．4），（312．76&;#177;47．77）mmol／L，P〈0.011，维拉帕米组和汉防己甲素组缺血5h低于对照组[（293．30&;#177;28．5），（290．47&;#177;293），（265．74&;#177;293）mmol／L，P〈0．051，维拉帕米组和汉防己甲素组再灌注20rain高于对照组[（332．94&;#177;41．5），（334．89&;#177;41．6）mmol／L，P〈0．01]。②大鼠皮瓣脂肪组织中的谷胱甘肽过氧化酶活性：对照组皮瓣在缺血5h，再灌注20min的谷胱甘肽过氧化酶活性，比缺血前明显降低（P〈0．05或0．01）。再灌注20min时，维拉帕米和汉防己甲素组的谷胱甘肽过氧化酶活性均较对照组明显升高。③大鼠皮瓣脂肪中的丙二醛含量：对照组皮瓣缺血5h时脂肪中丙二醛的含量与缺血前相比无明显差异（P〉0．05），再灌注20min时。丙二醛含量比缺血前明显增高（P〈0．01）。维拉帕米和汉防己甲素组再灌注20min时丙二醛含量比对照组明显下降（P〈0．01）。 结论：维拉帕米和汉防己甲素可以明显地提高皮瓣的超氧化物歧化酶活性和谷胱甘肽过氧化酶活性，并可显著降低丙二醛的含量。钙离子拮抗剂能减轻大鼠腹部皮瓣缺血再灌注损伤的脂质过氧化作用。应用钙离子拮抗剂在组织缺血再灌注损伤过程中可以抑制钙离子内流，降低组织细胞的破坏程度。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后血浆肾上腺髓质素的表达及与内皮素的关系

目的：探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后血浆肾上腺髓质素含量的变化及其与内皮素的相互关系。方法：54只SD大鼠分为正常组（A组）6只、假手术组（B组）6只和模型组（C组）42只。C组大鼠制作成局灶性脑缺血2h再灌注模型并应用放射免疫分析法检测不同时间段血浆肾上腺髓质素和内皮素的含量，同时与A、B组进行比较分析。结果：C组再灌注后血浆肾上腺髓质素和内皮素的含量均升高，与A、B组比较，差异有显著性意义（均P〈0．01）。肾上腺髓质素的含量与大鼠局灶性神经功能缺损症状的严重程度、梗死体积及内皮素含量均呈显著正相关（均P〈0．01），且高峰值出现在缺血再灌注后2h，随后逐渐下降，约166h又有所上升，但与A、B组比较仍差异有显著性意义（P〈0．01）。结论：局灶性脑缺血再灌注后血浆肾上腺髓质素含量变化可有助于判断病情严重程度、梗死灶的体积大小及病情预后。     

灯盏花素对大鼠岛状皮瓣血液流变学和氧化应激的影响

目的观察灯盏花素对大鼠岛状皮瓣丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、总抗氧化能力（T—AOC）和血液流变学的影／响,探讨灯盏花素对皮瓣缺血再灌注损伤后的保护机制。方法健康清洁雄性SD大鼠108只,平均分为假手术组（SO组）、缺血再灌注组（IR组）和灯盏花素干预组（BR组）。建立大鼠腹部岛状皮瓣缺血再灌注损伤模型。术前30min分别一次性给予生理盐水（SO组、IR组）和灯盏花素注射液（BR组）腹腔注射。术后检测各组大鼠血液中MDA含量、SOD活性、T—AOC活性及血液流变学指标,并观察皮瓣成活率。结果IR组、BR组再灌注后4、8及24h3个时点MDA含量均高于SO组,SOD、T—AOC活力和血液流变学状态低于s0组（P〈0．05）;并且BR组在这3个时点的各项指标优于IR组（P〈0．05）。皮瓣成活率缺血再灌注组〈灯盏花素组〈假手术组,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论灯盏花素能通过改善微循环和提高机体航氧化的能力,减轻皮瓣缺血再灌注损伤,促进皮瓣成活。     

新生大鼠缺氧缺血模型脑组织中肾上腺髓质素含量变化及其对脑细胞凋亡的影响

目的:观察新生大鼠缺氧缺血后脑内肾上腺髓质素含量变化,以及给予外源性肾上腺髓质素对缺氧缺血大鼠脑细胞凋亡的影响。方法:实验于2003-11-01/30在延边大学附属医院儿科疾病研究室进行。①脑组织肾上腺髓质素测定:选用7日龄Wistar大鼠29只单纯随机分为正常组9只、模型组及肾上腺髓质素组各10只,正常组不干预,另外2组大鼠结扎左侧颈总动脉,并吸入含体积分数为0.08氧气制备缺氧缺血性脑病模型,造模后肾上腺髓质素组即刻腹腔注射肾上腺髓质素2.0nmol/kg(浓度为82μmol/L),48h后将大鼠断头处死,取左侧脑组织测肾上腺髓质素含量。②细胞凋亡测试:7日龄Wistar大鼠39只分4组,正常组9只,模型组、肾上腺髓质素组和胰岛素样生长因子1组各10只,正常组不干预,另外3组同前造模,造模后即刻后2组分别腹腔注射肾上腺髓质素2.0nmol/kg、胰岛素样生长因子11.5μg/kg。48h后心脏灌注处死,取脑组织,行TUNEL法及苏木精-伊红染色,测定细胞凋亡数,凋亡百分率,凋亡面密度及数密度。结果:68只大鼠全部进入结果分析。①脑组织肾上腺髓质素含量:肾上腺髓质素组高于正常组和模型组[(1.81±0.43),(0.41±0.02),(1.07±0.27)ng/g,F=34.81,P<0.01],模型组高于正常组(P<0.01)。②凋亡细胞数:正常组显著低于其他3组(P<0.001),肾上腺髓质素组显著低于模型组[(9.20±0.53),(23.43±5.11)个/视野,P<0.001]。③凋亡细胞数密度和面密度:模型组高于正常组(P<0.001),肾上腺髓质素组低于模型组(数密度:0.0016±0.0007比0.0049±0.0009;面密度:0.043±0.018比0.131±0.044,P<0.001),胰岛素样生长因子1组与肾上腺髓质素组差异不显著(P>0.05)。④凋亡细胞百分率:模型组明显高于正常组[(55.5±5.1)%,(7.6±3.6)%,P<0.01],肾上腺髓质素组明显低于模型组[(21.8±1.8)%,P<0.01]。结论:①肾上腺髓质素在缺氧缺血后脑组织内含量明显升高。②肾上腺髓质素可降低缺氧缺血后的脑细胞凋亡,对脑细胞有保护作用,其效果与胰岛素样生长因子1相似。     

CRMP2真核表达质粒在大鼠缺血/再灌注脑皮质 转染效率的对比研究

目的:筛选Collapsin反应调节蛋白2(CRMP2)真核表达质粒转染大鼠脑皮质的适宜注射部位。方法:成年雄性SD大鼠150只随机分为空白质粒(VP)组、侧脑室(LV)组、海马(H)组、皮质(C)组及嗅球(OB)组。选定质粒注射部位后,20只大鼠随机分为假手术(sham)组、缺血再灌注(MCAO)组、缺血再灌注+空白质粒(MCAO+GFP)组、缺血再灌注+CRMP2真核质粒干预(MCAO+CRMP2/GFP)组。大鼠脑缺血/再灌注模型成功后,分别于相应4个部位立体定向注射CRMP2真核表达质粒/空白质粒,转染后24 h和48 h,采用Western blot及RT-PCR检测缺血区皮质CRMP2蛋白及m RNA的表达;激光共聚焦检测GFP的表达。TTC检测脑梗死体积,同时行神经功能评估。结果:不同部位注射CRMP2真核表达质粒后,皮质CRMP2的表达均有增高,其中LV组及H组的转染效率明显高于C组及OB组(P0.05),LV组与H组之间差异无统计学意义(P0.05)。与MCAO及(MCAO+GFP)组相比,CRMP2真核质粒干预之后能缩小脑梗死体积,促进神经功能恢复(P0.05)。结论:CRMP2真核表达质粒能够成功转染大鼠脑组织,使缺血区皮质CRMP2蛋白及m RNA的表达明显增高。侧脑室的转染效率较其他三个部位更高。     

丙泊酚对大鼠肾缺血再灌注损伤细胞凋亡信号通路的影响

背景:肾移植中肾缺血再灌注损伤能引发凋亡程序的执行,丙泊酚可能的肾保护作用及其与细胞凋亡通路间的关系,有助于探讨丙泊酚的作用机制.目的:探讨丙泊酚对大鼠肾缺血再灌注损伤细胞凋亡通路的影响及可能的作用机制.设计,时间及地点:动物实验,细胞形态学观察,于2004/2005在北京友谊医院泌尿外科研究所实验室共同设计和完成.材料:选取封闭群SD成年雄性大鼠99只.兔抗鼠Bcl-2、Bax、caspase3、cytochrome C均为武汉博士德生物工程有限公司产品.方法:将动物随机分为对照组26只、缺血再灌注组35只、缺血再灌注+丙泊酚组38只.建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型,术前单次静脉缓慢输注乳酸林格液5 mL/kg,逐层正中切口开骏,切除右肾,用无创血管夹夹闭左侧肾蒂,缺血时间45 min,松夹再灌注后全层缝合腹壁,取再灌注0,3,12,24,72 h左侧肾脏,取肾同时采血处死动物.缺血再灌注+丙泊酚组在缺血前15 min用药,丙泊酚1 mg/(kg·min)直至再灌注后30 min,共用药75 min.对照组和缺血再灌注组以乳酸林格液等量输注.主要观察指标:观察损伤肾的形态学改变,用免疫组织化学观察细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase 3和细胞色素C的表达情况.结果:光镜可观察到肾缺血再灌注引起的肾损害,程度依次为近曲小管、远曲小管、集合管、肾小球;免疫组化图像分析观察到缺血再灌注组与对照组相比,Bax、caspase 3,细胞色素C表达增加,Bcl-2表达未见明显变化;缺血再灌注+丙泊酚组与对照组比较,前者Bax、caspase 3和细胞色素C表达下降,Bcl-2表达增高(P＜0.05).结论:丙泊酚对肾缺血再灌注损伤引起的细胞凋亡可能具有保护作用,可能机制是抑制促凋亡蛋白Bax、caspase 3和细胞色素C的表达,对Bcl-2的表达无影响,与细胞凋亡的线粒体通路途径有关.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注时c－fos、bcl－2蛋白的动态变化

目的:探讨细胞凋亡在脑缺血再灌注时脑损伤过程中的作用。方法 :采用免疫组化法检测大鼠脑缺血再灌注不同时间内c -fos、bcl -2蛋白表达的水平。结果 :(1)脑缺血再灌注时在缺血侧皮层和基底节区可见c -fos阳性表达 ,并于缺血30min再灌注1h时阳性表达达高峰 ;(2)脑缺血再灌注时缺血侧皮层和基底节区均有bcl-2阳性表达 ,并随再灌注时间不同 ,其阳性表达率亦不同。于缺血2h再灌注3h时阳性表达达高峰。结论 :c -fos和bcl-2参与大鼠脑缺血再灌注时缺血性细胞损伤(包括细胞凋亡)的发生     

Myod1和Myog真核共表达载体构建及鉴定

背景：目前研究发现，生肌调节因子家族的各成员之间具有相互协同和相互促进的作用。因此，联合应用Myodl和Myog两个成员进行基因治疗，可能会取得更好的疗效，能够为防治失神经支配骨骼肌萎缩寻找新的思路。目的：构建Myodl和Myog基因的真核共表达载体。方法：通过RT—PCR的方法克隆大鼠Myodl和Myog基因的全长cDNA，酶切后依次插入到pVAXl载体中，以构建重组的Myodl和Myog真核共表达载体pVAXl-Myodl-IRES2-Myog·IRES2-EGFP，采用基因测序的方法进行鉴定。将pVAXl．Myodl．IRES2-Myog-IRES2-EGFP对体外培养的3T3细胞进行转染，利用Westernblot检测3T3细胞中Myodl蛋白和Myog蛋白的表达，验证其能否正确表达目的蛋白。结果与结论：基因测序结果表明，真核共表达载体pVAXl-Myodl—IRES2一Myog—IRES2一EGFP内的Myodl和MyogcDNA的序列长度及碱基顺序均与所公布的序列相同。将该载体转染到体外培养的3T3细胞内，Westernblot能够检测到3T3细胞中Myodl和Myog蛋白的条带。结果证实，实验成功构建了重组Myodl和Myog真核共表达载体pVAXl．Myodl-IRES2一Myog-IRES2·EGFP。     

卡巴胆碱对肠缺血-再灌注大鼠外周血白细胞凋亡及细胞因子表达的影响

目的观察拟胆碱药卡巴胆碱对肠缺血-再灌注大鼠外周血淋巴细胞和中性粒细胞凋亡及细胞因子mRNA表达的影响，探讨拟胆碱药的抗炎作用机制。方法36只大鼠随机分为手术对照组、肠缺血1h组、肠缺血1h后再灌注1h和2h组、卡巴胆碱 肠缺血1h组及卡巴胆碱 肠缺血1h后再灌注2h组。复制大鼠肠缺血-再灌注模型；肠缺血前10min经肠袋给予卡巴胆碱。检测不同时间点大鼠外周血白细胞计数及分类、淋巴细胞和中性粒细胞凋亡率及白细胞中细胞因子mRNA表达水平。结果肠缺血1h，大鼠外周血白细胞计数减少，淋巴细胞比例增加，中性粒细胞比例减少，再灌注后上述指标均呈反向变化；卡巴胆碱可抑制肠缺血引起的外周血淋巴细胞凋亡率的增加，但增加中性粒细胞的凋亡率。外周血白细胞中致炎细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF—α)和抗炎细胞因子白细胞介素-10(IL-10)表达在肠缺血1h时均增加，但再灌注后2h，IL-10、IL-4和γ干扰素(IFN-7)表达则明显减少，与TNF—α表达明显增加的趋势相反；卡巴胆碱可改善这一变化。结论卡巴胆碱能减少肠缺血时淋巴细胞的凋亡，调节肠缺血-再灌注时外周血白细胞中致炎和抗炎细胞因子表达失衡，在防治失控炎症反应、脓毒症和多器官功能障碍综合征中具有潜在临床应用价值。     

Peroxisome proliferator-activated receptor gamma mediates protection against cyclooxygenase-2-induced gut dysfunction in a rodent model of mesenteric ischemia/reperfusion

Cyclooxygenase (COX)-2 has been identified as an important mediator elaborated during ischemia/reperfusion, with pro- and anti-inflammatory properties having been reported. As the role of COX-2 in the small intestine remains unclear, we hypothesized that COX-2 expression would mediate mesenteric ischemia/reperfusion-induced gut injury, inflammation, and impaired transit and that these deleterious effects could be reversed by the selective COX-2 inhibitor, N-[2-(cyclohexyloxy)-4-nitrophenyl] methanesulphanamide (NS-398). Additionally, we sought to determine the role of peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARgamma) in mediating protection by NS-398 in this model. Rats underwent sham surgery or were pretreated with NS-398 (3, 10, or 30 mg/kg) intraperitoneally 1 h before 60 min of superior mesenteric artery occlusion and 30 min to 6 h of reperfusion. In some experiments, NS-398 (30 mg/kg) was administered postischemia. Ileum was harvested for COX-2 mRNA and protein, PGE2, myeloperoxidase (inflammation), histology (injury), intestinal transit and PPARgamma protein expression, and DNA-binding activity. COX-2 expression and PGE2 production increased after mesenteric ischemia/reperfusion and were associated with gut inflammation, injury, and impaired transit. Inhibition of COX-2 by NS-398 (30 mg/kg, but not 3 or 10 mg/kg) not only reversed the deleterious effects of COX-2, but additionally induced expression and nuclear translocation of PPARgamma. NS-398 given postischemia was equally protective. In conclusion, COX-2 may function as a proinflammatory mediator in a rodent model of mesenteric ischemia/reperfusion. Reversal of gut inflammation, injury, and impaired transit by high-dose NS-398 is associated with PPAR activation, suggesting a potential role for PPAR-gamma in shock-induced gut protection.     

Gabexate mesilate, a synthetic protease inhibitor, reduces ischemia/reperfusion injury of rat liver by inhibiting leukocyte activation.

OBJECTIVE: To investigate whether gabexate mesilate, a synthetic protease inhibitor with anticoagulant properties, prevents hepatic damage by inhibiting leukocyte activation, we examined its effect on ischemia/reperfusion injury of rat liver in which activated leukocytes play a critical role. DESIGN: Prospective, randomized, controlled study. SETTING: Research laboratory at a university medical center. SUBJECTS: Male Wistar rats weighing 220 to 280 g. INTERVENTIONS: Hepatic damage was evaluated by changes in bile flow and serum transaminase concentrations after ischemia/ reperfusion. Rats received continuous intravenous infusions of gabexate mesilate (10 mg/kg/hr) or intravenous administration of an inactive derivative of activated factor X (Xa), a selective inhibitor of thrombin generation (3 mg/kg), immediately before the induction of ischemia in the median and left lobes of the liver. To determine whether gabexate mesilate inhibits leukocyte activation, we examined the effects of gabexate mesilate on hepatic concentrations of tumor necrosis factor-alpha and rat interleukin-8 and on hepatic myeloperoxidase activity after ischemia/reperfusion. MEASUREMENTS AND MAIN RESULTS: Hepatic dysfunction, observed after 60 mins of ischemia/reperfusion, showed a reduction in bile flow. The ischemia/reperfusion-induced decrease in bile flow was prevented by administration of gabexate mesilate. Serum transaminase concentrations increased after hepatic ischemia/reperfusion, peaking 12 hrs after reperfusion. Gabexate mesilate significantly inhibited the ischemia/reperfusion-induced increase in serum transaminase levels seen 12 hrs after reperfusion. Although an inactive derivative of factor Xa inhibited the increases in serum levels of fibrin and fibrinogen degradation products 6 hrs after reperfusion, it did not prevent ischemia/ reperfusion-induced liver injury. Hepatic levels of tumor necrosis factor-alpha, rat interleukin-8, and myeloperoxidase were significantly increased after ischemia/reperfusion. These increases were significantly inhibited by gabexate mesilate but unaffected by an inactive derivative of factor Xa. CONCLUSION: Gabexate mesilate reduced ischemia/reperfusion-induced hepatic injury not by inhibiting coagulation, but by inhibiting leukocyte activation.     

银杏叶提取物对大鼠肾脏缺血-再灌注损伤热休克蛋白表达的影响

目的　探讨银杏叶提取物通过诱导热休克蛋白的合成 ,保护大鼠肾脏缺血 再灌注损伤作用与机理。方法　 34只SD大鼠随机分为假手术组 (n =10 )、单纯缺血 再灌注组 (n =12 )、缺血再灌注 +银杏叶提取物处理组 (n=12 )。通过免疫组织化学方法观察诱导型HSP70的表达情况。结果　与假手术组相比 ,单纯缺血 再灌注组肾小管上皮细胞呈明显的缺血性改变 ,HSP70表达明显增强 ,两组差异有显著性(P <0 0 1) ;缺血再灌注 +银杏叶提取物处理组与单纯缺血 再灌注组相比 ,肾小管上皮细胞缺血性改变减轻 ,HSP70表达增强 (P <0 0 5 )。结论　银杏叶提取物诱导大鼠肾缺血 再灌注组织中HSP70表达 ,减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤     

局灶脑缺血再灌注成年模型大鼠大脑髓鞘相关蛋白的基因表达

背景:髓鞘蛋白是少突胶质细胞的主要成分,研究脑缺血再灌注后大脑髓鞘相关蛋白基因表达的变化有助于探讨少突胶质前体细胞在缺血性脑损伤和修复中的作用。目的:观察脑缺血再灌注后成年模型大鼠大脑髓鞘蛋白相关基因,在脑缺血后不同时间及部位表达变化和差异。方法:以线栓法制作成年SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,采用5′末端标记地高辛的寡核苷酸探针荧光原位核酸分子杂交检测模型大鼠再灌注后早期大脑梗死中心区、梗死周边区和梗死对侧区皮质髓鞘蛋白脂质蛋白mRNA、髓鞘碱性蛋白mRNA和髓鞘转录因子1mRNA表达变化。结果与结论:在梗死中心区,脑缺血再灌注后早期3种髓鞘相关蛋白基因表达均明显减少;在梗死周边区,再灌注后1d时3种髓鞘相关蛋白基因表达与对照组比较无明显变化,之后逐渐增加,至14d时均高于对照组(P<0.05,0.01),以髓鞘转录因子1mRNA阳性细胞数升高最早(7d)最为显著(P<0.01)。因此,成年SD大鼠脑缺血再灌注后急性期梗死周边区皮质髓鞘相关蛋白的基因表达增加,提示少突胶质前体细胞对脑缺血性损伤敏感,其可能参与了脑缺血后损伤的修复过程。     

ICAM-1在脊髓缺血再灌注损伤后表达变化及意义

目的　探讨细胞间粘附分子 1在大鼠脊髓缺血再灌注损伤后表达变化及其意义。方法　采用Zivin法建立脊髓缺血再灌注损伤模型。以GAPDH为内参照物 ,应用半定量RT PCR方法、免疫组化及免疫荧光激光共聚焦显微镜定性、定量测定脊髓微血管内皮细胞表面ICAM 1mRNA表达变化。结果　正常脊髓微血管内皮细胞表面仅有微量的ICAM 1表达 ,单纯缺血不引起ICAM 1表达。再灌注后损伤区ICAM 1表达发生了改变 ;再灌注 4h ,ICAM 1mRNA表达量明显升高 ,再灌注 12h其在单位微血管面积上的荧光强度约比单纯缺血组增加了 1 2。提示脊髓损伤后微血管内皮细胞初始ICAM 1表达增加是由再灌注损伤激发 ,其后延迟递增表达增强 ,说明ICAM 1参与了脊髓再灌注损伤的炎症病理过程。结论　ICAM 1可做为脊髓I R后炎症反应程度的监测指标。