血红素加氧酶1在间充质干细胞上调哮喘患者外周血调节性T细胞中的作用

背景：上调CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞是目前治疗哮喘的新靶点。骨髓间充质干细胞在体外可上调正常人外周血的调节性T细胞,但机制尚未明确。目的：观察血红素加氧酶1对间充质干细胞上调哮喘患者外周血CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞的影响。方法：分别加入0,15,30,45,60μmol/L氯化高铁血红素和0,5,10,15,20μmol/L锌-原卟啉对骨髓间充质干细胞进行预处理,荧光定量PCR检测各组间充质干细胞中血红素加氧酶1mRNA的表达量。密度梯度离心法分离哮喘急性发作期患者和健康对照者的外周血单个核细胞,分别与经氯化高铁血红素预处理、经锌-原卟啉预处理、不经预处理的间充质干细胞共孵育,加入植物血凝素反应72h,流式细胞仪检测各组CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞占CD4＋T细胞的比例。结果与结论：人骨髓间充质干细胞中有血红素加氧酶1表达,其表达在体外可被诱导和抑制。间充质干细胞中血红素加氧酶1mRNA的表达量随氯化高铁血红素浓度增加而增加（P〈0.05）,随锌-原卟啉浓度增加而减少（P〈0.05）,具有剂量依赖性。间充质干细胞在体外可提高哮喘患者和健康对照者CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞的水平（P〈0.01）,诱导间充质干细胞中血红素加氧酶1的表达可使共孵育后CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞水平提高（P〈0.01）,抑制间充质干细胞中血红素加氧酶1的表达可使共孵育后CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞的水平降低（P〈0.01）,但仍高于对照组（P〈0.01）。提示骨髓间充质干细胞部分通过血红素加氧酶1上调哮喘患者外周血CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞。     

骨髓间充质干细胞对哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞及气道炎症的影响

背景：CD4^＋CD25^＋调节性T细胞功能降低、数量下降已被公认为是哮喘患者免疫失调的重要表现。间充质干细胞具有免疫调节功能，可上调CD4^＋D25^＋调节性T细胞，抑制淋巴细胞增殖，并已在许多免疫性疾病方面成功应用。目的：观察骨髓间充质干细胞移植对哮喘小鼠外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞及气道炎症的影响。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2006—09／2008—05在中山大学附属第二医院中心实验室完成。材料：SPF级BALB／c小鼠34只，其中3-4周龄雄鼠4只，用于制备骨髓间充质干细胞：6周龄雌鼠30只，随机分为正常对照组、模型对照组、细胞移植组，10只，组。方法：模型对照组、细胞移植组以500mg/L卵白蛋白溶液0．2mL腹腔注射致敏，以50g/L卵白蛋白溶液雾化吸入激发建立小鼠哮喘模型。正常对照组以生理盐水代替卵白蛋白溶液，细胞移植组在诱导哮喘的第10天经尾静脉注入体外分离培养的小鼠骨髓间充质干细胞。主要观察指标：流式细胞仪检测小鼠外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞占淋巴细胞的比例，并检测小鼠支气管肺泡灌洗液中的炎症细胞总数，计数嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞，结合病理切片分析气道炎症情况。结果：与正常对照组比较，模型对照组外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞占淋巴细胞的比例明显降低（t=7．742，P〈0．05）；与模型对照组比较，细胞移植组该比例明显升高（t=-7．455，P〈0．05）。3组小鼠支气管肺泡灌洗液炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞计数比较差异显著（P均〈0．05）：两两比较，模型对照组支气管肺泡灌洗液炎症细胞总数高于正常对照组（P〈0．05），细胞移植组支气管肺泡灌洗液炎症细胞总数低于模型对照组（P〈0．05）。正常对照组小鼠气道无明显炎症改变：模型对照组小鼠支气管、血管粘膜下和周围肺组织有明显炎症细胞浸润、气道上皮增生、气道黏液增多、气道上皮部分断裂脱落；细胞移植组小鼠气道炎症明显减轻。结论：静脉输注骨髓间充质干细胞能上调哮喘小鼠外周血CD4^＋D25^＋调节性T细胞比例，同时可一定程度上抑制哮喘小鼠气道炎症。     

骨髓间充质干细胞对哮喘小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞及气道炎症的影响

背景：CD4^＋CD25^＋调节性T细胞功能降低、数量下降已被公认为是哮喘患者免疫失调的重要表现。间充质干细胞具有免疫调节功能，可上调CD4^＋D25^＋调节性T细胞，抑制淋巴细胞增殖，并已在许多免疫性疾病方面成功应用。目的：观察骨髓间充质干细胞移植对哮喘小鼠外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞及气道炎症的影响。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2006—09／2008—05在中山大学附属第二医院中心实验室完成。材料：SPF级BALB／c小鼠34只，其中3-4周龄雄鼠4只，用于制备骨髓间充质干细胞：6周龄雌鼠30只，随机分为正常对照组、模型对照组、细胞移植组，10只，组。方法：模型对照组、细胞移植组以500mg/L卵白蛋白溶液0．2mL腹腔注射致敏，以50g/L卵白蛋白溶液雾化吸入激发建立小鼠哮喘模型。正常对照组以生理盐水代替卵白蛋白溶液，细胞移植组在诱导哮喘的第10天经尾静脉注入体外分离培养的小鼠骨髓间充质干细胞。主要观察指标：流式细胞仪检测小鼠外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞占淋巴细胞的比例，并检测小鼠支气管肺泡灌洗液中的炎症细胞总数，计数嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞，结合病理切片分析气道炎症情况。结果：与正常对照组比较，模型对照组外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞占淋巴细胞的比例明显降低（t=7．742，P〈0．05）；与模型对照组比较，细胞移植组该比例明显升高（t=-7．455，P〈0．05）。3组小鼠支气管肺泡灌洗液炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞计数比较差异显著（P均〈0．05）：两两比较，模型对照组支气管肺泡灌洗液炎症细胞总数高于正常对照组（P〈0．05），细胞移植组支气管肺泡灌洗液炎症细胞总数低于模型对照组（P〈0．05）。正常对照组小鼠气道无明显炎症改变?     

间充质干细胞对T细胞的影响及其机制

间充质干细胞除(MSCs)具有自我更新和多向分化能力外,还拥有多种免疫调节能力和低免疫原性,其临床应用前景十分广阔.资料显示,MSCs一方面可抑制毒性效应性T细胞的增殖及功能,另一方面还可使调节性T细胞的生长及活性增强.本文就MSCs对调节T细胞免疫的研究进展作一综述.     

TLRs在间充质干细胞调节T细胞免疫应答中的作用

间充质干细胞(MSCs)不仅具有自我更新和多向分化潜能,而且具有免疫调节能力,参与T细胞免疫应答的调节.资料显示,不同来源MSCs上Toll样受体(TLRs)的表达存在差异.配体结合试验揭示TLRs及其信号传导通路与MSCs调节T细胞免疫应答能力存在密切联系.尽管有关报道结果存在争议,甚至相互矛盾,但在展现免疫调节复杂性的同时,打开了一条探索MSCs调节T细胞免疫应答机制的途径.已知MSCs是来源与功能均具多样性的异质性细胞群体,难以分类定性.目前,已有学者根据MSCs上TLRs的表达差异,结合免疫调节能力尝试,将其分为MSC1与MSC2两个亚型取得一定的效果.     

间充质干细胞对T细胞免疫调节作用的研究进展

间充质干细胞(MSC)是备受关注的一类成体干细胞,具有高度自我更新及多向分化潜能.MSC可通过分泌细胞因子及细胞外基质维持骨髓造血微环境的稳定,同时,可通过多种途径调节活化的淋巴细胞,但其机制尚不十分明确.     

间充质干细胞调节Treg/TH17细胞研究进展

在炎症和肿瘤微环境中间充质干细胞(MSC)的作用备受关注,而调节性T细胞(Treg)、辅助性T细胞17(T helper cell17,TH17)对炎症和肿瘤的发展也起着重要作用,但这3者之间的相互作用及机制尚未明确。MSC可以通过旁分泌或直接接触的方式参与免疫反应的调节,在移植物抗宿主病或某些炎症反应中MSC可以上调Treg细胞并抑制TH17细胞的活化,最终抑制炎症的发展。在某些肿瘤环境中的MSC对Treg/TH17细胞的极化均起重要作用。MSC对CD4+T细胞的调节作用因环境而异。MSC可以作为调节免疫反应的诊断、治疗靶点。     

人骨髓间充质干细胞对T淋巴细胞的免疫调节作用

为了探讨人骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）体外对T淋巴细胞的免疫调节作用，从人骨髓液中分离培养MSC，通过细胞形态、免疫组织化学及流式细胞术检测其表面标记进行鉴定；将植物血凝素（PHA）及从人脐血中分离培养的树突状细胞（dendritic cell，DC）作为刺激因素，经磁珠分选的人CD2^＋ T淋巴细胞作为反应细胞．用^3H—TdR标记β液体闪烁计数仪检测与MSC共培养前后T淋巴细胞增殖能力的变化；用流式细胞术检测与MSC共培养10天后的CD2^＋ T细胞内各亚群Th1、Th2、Tc1、Tc2比例的变化。结果表明：MSC能明显抑制由DC诱导的T淋巴细胞增殖（P=0．004），同时MSC抑制由PHA引起的T细胞增殖，但不具有显著性差异（P=0．26），MSC培养上清液单独并不具备抑制T细胞增殖的作用，与MSC共培养后的T细胞亚群中，Th2及Tc2亚群含量较共培养前明显增加（P〈0．05）。结论：MSC对由DC和PHA诱导的淋巴细胞增殖反应均具有抑制作用，并且这种作用可能与细胞间相互作用及诱导T细胞亚群的改变有关。     

血红素加氧酶-1修饰的骨髓间充质干细胞减轻脂多糖诱导的肺微血管内皮细胞氧化应激

目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)修饰的骨髓间充质干细胞(MSC-HO-1)对脂多糖(LPS)刺激下肺微血管内皮细胞(PVEC)氧化应激的影响.方法 实验分组:A组(PVEC+LPS),PVEC仅予LPS刺激;B组(PVEC/MSC+LPS),PVEC细胞与MSC共培养于Transwell体系过夜后予LPS刺激;C...     

血红素加氧酶和CO在维持CD4+CD25+调节性T细胞介导的外周耐受中的作用

在过去几十年里，人们对共同表达CD4^＋和CD25^＋的调节性T细胞进行了大量研究。Treg的特征性表型在于其能有效地维持外周免疫耐受和改变天然免疫的能力。但是，到目前为止，Treg的作用机制以及它和其他细胞间相互作用以提供免疫调节的机制仍然不清楚。最近的研究表明，血红素加氧酶-1（HO-1）有调节免疫反应的作用，并且HO-1催化产生的副产物一氧化碳，也被证实在Treg抑制性作用中有重要功能。因此，现结合这些研究新进展，对Treg的作用机制作一综述，为Treg的未来研究方向提出新的思路。     

肾移植患者外周血中的CD4+ CD25+ CD127low/-调节性T细胞

背景:越来越多的实验在分析免疫耐受标志,以期能够更好地辅助患者进行移植后免疫抑制治疗。目的:分析肾移植后患者外周血中CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞在肾移植免疫耐受中的作用。方法:采集62例肾移植后患者(急性排斥反应组22例,移植稳定组40例)及20例健康对照者的外周抗凝血,经免疫染色,应用流式细胞仪分析CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞所占CD4+T细胞百分含量,同时采用ELISA方法检测患者血清中白细胞介素2和白细胞介素10的质量浓度。结果与结论:移植稳定组中CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞所占CD4+T细胞百分含量显著高于健康对照组和急性反应排斥组(P<0.01);CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞百分含量与白细胞介素2呈显著负相关(P<0.05),与白细胞介素10呈显著正相关(P<0.01)。提示CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞在肾移植后免疫耐受的机制中发挥了一定作用。     

半乳凝素-10在CD4^＋CD25^＋CD127^low／-调节性T细胞中的表达与意义

目的探讨半乳凝素-10(galectin-10)在CD4 CD25 CD127low/-调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)中的表达及其与Foxp3的相关性。方法通过流式细胞术分选健康人外周血和胃癌患者癌旁淋巴结中Treg细胞与CD4 CD25-CD127 T细胞,经微量抽提RNA后,用RT-PCR检测galectin-10和Foxp3的mRNA表达水平。结果galectin-10和Foxp3的mRNA显著表达于Treg细胞,几乎不表达于CD4 CD25-CD127 T细胞。健康人外周血和胃癌患者癌旁淋巴结中的结果一致。结论ga-lectin-10基因高表达于Treg细胞中,可以作为Treg细胞一项新的标志物。     

大肠癌患者外周血CD4^＋CD25^＋CD127^lo/-调节性T细胞的含量及临床意义

目的探讨大肠癌患者外周血CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-调节性T细胞（Treg）的变化及意义。方法流式细胞术检测36例大肠癌患者及30例健康人外周血中CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg的变化；ELISA检测同一标本血清中转化生长因子β（TGF—β）的表达水平。结果36例大肠癌患者外周血中CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg占CD4^＋、淋巴细胞的比例为（6．92±1．31）％，与正常对照组（4．91±1，24）％相比差异有显著性（P〈0．05）。20例腺癌、7例黏液癌、9例未分化癌患者外周血中CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg比例分别为（6．81±1．52）％、（6.99±1．21）％、（7．08±1．17）％，各组间比较差异无显著性（P〉0．05），均高于对照组的（4．91±1．24）％，差异有显著性（P〈0，05）。IV期大肠癌患者外周血CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg高于Ⅱ期大肠癌患者（P〈0．05）。大肠癌组外周血清中TGF—β水平显著高于正常对照组，随着TGF—β水平增加，CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg比例逐渐增高，两者呈正相关。结论大肠癌患者外周血中CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg表达增高，与临床分期相关，但与组织学分类无关，导致机体免疫抑制，可能参与大肠癌发生。     

调节性T细胞CD4~+CD25~+CD127~(low)在抗多耐药肺结核治疗中的意义

目的探讨调节性T细胞CD4+CD25+CD127low在西药联合中药复方"益肺通络方"抗多耐药结核患者中的免疫调节作用。方法选取多耐药结核病(MDR-TB)住院患者34例,随机分成标准化疗(西药)组12例作为对照组,中药复方联合西药组22例作为试验组,并签署知情同意书,按临床试验方案抗结核治疗,第0、3、6、9个月时分别采集2mL肝素抗凝外周静脉血,经CD4、CD25、CD127流式抗体标记后,Beckman流式细胞仪(FCM)计数各组CD4+CD25+CD127low百分比。结果随服药时间推移,对照组MDR-TB患者CD4+CD25+CD127low调节性T细胞百分比下降,差异无统计学意义(P0.05);试验组MDR-TB患者CD4+CD25+CD127low调节性T细胞百分比下降明显,差异有统计学意义(P=0.007);与对照组MDR-TB患者比较,试验组MDR-TB患者CD4+CD25+CD127low调节性T细胞百分比下降,差异有统计学意义(P=0.047)。结论经过9个月的抗结核治疗,试验组能有效降低MDR-TB患者CD4+CD25+CD127low调节性T细胞百分比,中药复方可能协同西药下调调节性T细胞的免疫抑制,恢复结核病患者机体免疫平衡状态。因此,中药复方联合西药抗多耐药结核患者治疗也许是一个有益的帮助。     

CD4+CD25+CD127Low调节性T细胞在原发性肝癌患者外周血的表达及临床意义

目的观察原发性肝癌患者经治疗前、后外周血CD4+CD25+CD127(CD127Low)调节性T细胞(Treg)的数量变化。方法采用流式细胞术检测30例原发性肝癌患者外周血CD4^+CD25^+CD127^LowTreg在CD4+T细胞的比例,以180例体检健康者作为健康对照组,分析肝癌患者治疗前、后CD4^+CD25^+CD127^Low Treg细胞表达的变化。结果原发性肝癌治疗前CD4^+CD25^+CD127^LowTreg细胞百分比为(6.21±1.53)%(<50岁)和(6.68±1.53)%(≥50岁),均显著高于健康对照组(同年龄段),差异有统计学意义(P=0.001、0.000),原发性肝癌患者治疗1个月有效者CD4^+CD25^+CD127^LowTreg细胞比例显著下降,差异有统计学意义(P=0.001)。结论CD4^+CD25^+CD127^LowTreg水平异常增高可能与原发性肝癌免疫功能调节紊乱有关,且其变化水平与临床病情的进展存在一定的相关性。     

调节性T细胞的新标记CD4+CD25+CD127low/-在类风湿性关节炎中的应用

目的 选择用膜表面标志CD4+CD25+CD127low/-作为检测调节性T(Treg)细胞的指标,探讨其在类风湿性关节炎(RA)中的可能临床应用价值.方法 用流式细胞术检测正常人及RA患者外周血CD4+CD25high、CD4+ CD25+ FoxP3+ 和CD4+CD25+CD127low/- T细胞占CD4+T细胞的比例,分析CD4+CD25+CD127low/-与CD4+ CD25+ FoxP3+ 2群细胞比例之间的相关性.结果 正常人及RA患者外周血CD4+CD25+CD127low/-T细胞比例与CD4+ CD25+ FoxP3+T细胞比例之间呈显著正相关(r=0.694、0.768,P均＜0.01).RA患者外周血CD4+CD25high、CD4+ CD25+ FoxP3+及CD4+CD25+CD127low/-T细胞比例均显著低于正常人(P均＜0.01).结论 膜表面标志CD4+CD25+CD127low/-可以用来鉴定Treg细胞,RA患者外周血CD4+CD25+CD127low/-T细胞的明显减少可能是RA的发病机制之一.     

CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞异常表达与多发性骨髓瘤的关联性分析

目的 检测多发性骨髓瘤(MM)患者和良性单克隆丙种球蛋白血症(MGUS)患者外周血及骨髓组织中CD4+CD25+CD127low/-调节性T(Treg)细胞表达水平,初探MM中调节性T细胞免疫功能状态以及与疾病发生、发展的关联性.方法 采用流式细胞术分别检测33例MM患者、44例MGUS患者和30例健康者外周血以及6例MM患者骨髓CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞水平.分别采用溴甲酚绿法、免疫散射比浊法检测MM患者血清清蛋白(Alb)、β2-微球蛋白(β2-MG)水平.结果 MM组外周血中CD4+CD25+CD127low/-细胞表达高于MGUS组及健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);MM中稳定期患者组外周血细胞水平较初诊患者组和复发、难治患者组升高,差异有统计学意义(P<0.05);但不同ISS分期的MM患者外周血细胞表达差异无统计学意义(P>0.05);而进展期MM患者中,CD4+CD25+CD127low/-T细胞表达在Ⅲ期高于Ⅰ期+Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0.05);进一步研究发现,同一初诊MM患者骨髓CD4+CD25+CD127low/-T细胞水平低于其外周血T细胞水平,差异有统计学意义(P<0.05).结论 外周血CD4+CD25+CD127low/-T细胞表达异常可辅助鉴别良、恶性单克隆丙种球蛋白血症;监测MM的进展以及疾病的活跃程度,并为进展期MM患者及时进行临床干预提供实验依据.     

肿瘤患者中高表达人白细胞分化抗原25的调节T细胞检测及其临床意义

目的探讨肿瘤患者外周血高表达人白细胞分化抗原(CD)25的CD4+调节T细胞(CD4+CD25highTr)比率变化特点及其临床意义。方法用流式细胞术检测62例肿瘤患者外周血CD4+CD25high调节T细胞水平,并分层分析。结果62例肿瘤患者外周血中CD25highTr细胞占CD4+T细胞的百分比率(4·2%±1·9%)明显高于15名健康体检者(2·0%±1·0%,P<0·001);CD4+CD25highTr细胞且具有调节性T细胞的表面标记特征,即CD45-RA(-),CD69(-)。随疾病进展外周血D25highT细胞占CD4+T细胞百分比率逐渐升高,15例恶性肿瘤Ⅰ+Ⅱ期患者外周血D25highT细胞占CD4+T细胞的百分比率(2·4%±0·6%)与健康体检者比,差异无统计学意义(P>0·05)。21例Ⅲ期(3·5%±1·5%)、26例Ⅳ期(4·9%±1·7%)患者外周血D25highT细胞占CD4+T细胞的百分比率显著升高,与健康体检者比,差异有统计学意义(P<0·001)。Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ期比较,Ⅲ期与Ⅳ期比较,差异均有统计学意义(P<0·05,P<0·01)。提示外周血CD4+CD25highTr细胞比率高者预后较差。结论肿瘤患者外周血CD4+CD25highTr细胞水平明显升高,与肿瘤免疫功能低下及肿瘤发生发展密切相关。监测外周血CD4+CD25highTr细胞比率可评价肿瘤患者预后。     

骨髓间充质干细胞上调再生障碍性贫血患者CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞的临床研究

目的:初步探讨再生障碍性贫血(AA)患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)的表达及临床意义;探讨临床使用异体骨髓间充质干细胞(MSC)治疗对CD4+CD25+Foxp3+Treg表达的影响。方法:(1)流式细胞仪检测13例重型再生障碍性贫血(SAA),17例慢性再生障碍性贫血(CAA)及10例健康对照者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达;(2)检测7例AA患者MSC治疗前后外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达。结果:(1)AA患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达明显低于健康对照者(P<0.01);(2)SAA患者CD4+CD25+Foxp3+Treg表达较CAA者低(P<0.05);(3)MSC治疗后AA患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达升高(P<0.05)。结论:(1)AA患者存在外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达减低,其表达异常可能参与AA的发病;(2)CD4+CD25+Foxp3+Treg表达在SAA患者更低,提示其表达水平可能可以作为判断AA病情轻重的指标;(3)MSC治疗可上调AA患者CD4+CD25+Foxp3+Treg表达,为MSC纠正AA患者的免疫异常提供了临床依据。