吡咯喹啉醌与神经干细胞的增殖

背景：目前国内外学者主要应用生长因子样物质来促进神经干细胞的分裂与增殖,所以作者推测吡咯喹啉醌小分子化合物也能促进神经干细胞的分裂增殖。目的：体外观察氧化还原酶辅酶吡咯喹啉醌促进鼠成体神经干细胞增殖的作用。方法：体外培养Wistar胎鼠成体神经干细胞成球体后,于培养液中加入1×10-8mol/L吡咯喹啉醌,对照组加入同等剂量的Hanks溶液。应用流式细胞仪测细胞周期增殖率,应用免疫组化法和WesternBlot测周期蛋白激酶（CDK2）和周期蛋白激酶抑制剂（P27）的表达。结果与结论：与对照组相比,吡咯喹啉醌处理16h和24h后,S期和G2期细胞数的比例显著增高,而细胞的凋亡率降低;CDK2蛋白的表达显著增强,而P27的表达显著降低。结果显示低浓度的吡咯喹啉醌即能促进鼠成体神经干细胞的增殖。     

吡咯喹啉醌对许旺细胞增殖及So×10表达的影响

背景:许旺细胞是神经组织工程的种子细胞,但其体外增殖缓慢,难以满足科研与临床对其的需要,而吡咯喹啉醌可以对多种细胞的增殖产生促进作用.目的:观察吡咯喹啉醌对许旺细胞的增殖作用并探讨其对许旺细胞So×10基因表达的影响.方法:体外培养及纯化大鼠许旺细胞,S-100免疫荧光罄定许旺细胞;细胞经无血清培养12 h后,加入10 nmol/L吡咯喹啉醌继续培养24 h 观察其形态学改变:加入不同浓度(0,1,10,100,1 000,10 000 nmol/L)吡咯喹啉醌于许旺细胞培养24 h,利用RT-PCR技术检测So×10的mRNA表达.结果与结论:吡咯喹啉醌促使许旺细胞发牛形态学改变,多数呈束状或并排生长,且细胞数日增多:1～1 000 nmol/L吡咯喹啉醌可使许旺细胞So×10mRNA表达增高,100 nmol/L时表达最高:10000 nmol/L时对So×10的表达表现为抑制作用(P<0.05).     

吡咯喹啉醌对许旺细胞增殖及Sox10表达的影响

背景：许旺细胞是神经组织工程的种子细胞,但其体外增殖缓慢,难以满足科研与临床对其的需要,而吡咯喹啉醌可以对多种细胞的增殖产生促进作用。目的：观察吡咯喹啉醌对许旺细胞的增殖作用并探讨其对许旺细胞Sox10基因表达的影响。方法：体外培养及纯化大鼠许旺细胞,S-100免疫荧光鉴定许旺细胞;细胞经无血清培养12h后,加入10nmol/L吡咯喹啉醌继续培养24h观察其形态学改变;加入不同浓度（0,1,10,100,1000,10000nmol/L）吡咯喹啉醌于许旺细胞培养24h,利用RT-PCR技术检测Sox10的mRNA表达。结果与结论：吡咯喹啉醌促使许旺细胞发生形态学改变,多数呈束状或并排生长,且细胞数目增多;1~1000nmol/L吡咯喹啉醌可使许旺细胞Sox10mRNA表达增高,100nmol/L时表达最高;10000nmol/L时对Sox10的表达表现为抑制作用（P〈0.05）。     

他克莫司对人肾小球系膜细胞细胞周期相关蛋白表达的影响

目的探讨他克莫司对体外培养的人肾小球系膜细胞细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin E及p27kip1的影响及可能机制。方法设正常对照组和他克莫司处理组,他克莫司组设为三个组(浓度分别为10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L)。四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测他克莫司组处理12h后肾小球系膜细胞的增殖情况;流式细胞仪检测他克莫司组分别作用12、24、48h后系膜细胞的上述三种蛋白质及与其结合的CDK2和CDK4的表达情况;选择有明显抑制作用的时间点(12h),Westernblot检测上述三种蛋白质的表达情况。结果 (1)作用12h,他克莫司组均能抑制系膜细胞的增殖。(2)作用12、24、48h,与对照组相比,浓度为10μmol/L他克莫司对细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin E及抑制因子p27kip1的表达无明显影响,而浓度为25、50μmol/L时,cyclin D1及cyclin E明显降低,p27kip1表达明显升高,呈一定的剂量效应关系;且相同浓度的他克莫司在作用三个时间点后,cyclin D1、cyclin E及p27kip1的表达无明显差异。(3)作用12h,与对照组相比,浓度为10μmol/L他克莫司对周期蛋白依赖性激酶CDK2、CDK4的表达无明显影响,而浓度为25、50μmol/L时,CDK2、CDK4的表达明显降低。结论一定浓度的他克莫司可抑制系膜细胞的增殖,其作用机制至少部分与其影响细胞周期相关蛋白的表达有关。     

无血清培养大鼠胚胎向神经干细胞的分化

背景:体外培养扩增获取大量、高纯度的神经干细胞是其移植应用的前提,无血清培养主要目的是去除血清中可能诱导神经干细胞分化的生长因子等干扰因素.目的:在无血清条件下体外分离培养大鼠胚胎神经干细胞,并观察其生物学特性.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-03/2006-03在河北医科大学第三医院中心实验室完成.材料:14～16 d龄SD胎鼠2只,由河北医科大学实验动物中心提供.方法:无菌条件下取胎鼠大脑皮质,剪碎后机械分离法制作单细胞悬液,加入含B27神经营养添加剂的无血清MEM/F12培养基进行培养,1周后传代.主要观察指标:免疫荧光染色鉴定神经干细胞巢蛋白的表达及传代能力,加入含血清的MEM/F12培养基诱导分化1周后免疫组化检测细胞分化情况.结果:培养48～72h细胞聚集悬浮生长,形成典犁的神经球,呈神经干细胞特异性抗原巢蛋白阳性表达.传代的神经干细胞置于BrdU培养液中5～7d形成次代神经球,呈BrdU阳性,表明次代神经球中绝大部分细胞为传代后细胞分裂而来,具有传代能力,传代后加入含血清的培养基后可以分化为微管相关蛋白2阳性细胞和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞.结论:利用无血清培养技术可成功从胎鼠脑皮质中分离培养出具有分裂增殖能力及多向分化潜能的神经干细胞.     

ODNMT01促进骨髓间充质干细胞增殖机制的研究

目的探究寡核苷酸MT01(ODN MT01)促进人骨髓间充质干细胞(h BMSCs)增殖的机制。方法将第三代h BMSCs以6.0×103/cm2接种于6孔板,实验组和对照组各3个孔,实验组加入ODN MT01使其终浓度为2.0 mg/L,对照组加入等量PBS,连续检测3 d,应用MuseTM Cell Analyzer进行细胞周期检测;并根据细胞周期检测结果,分组同上,对相应处理后第1、2、3天的h BMSCs进行Cyclin A、Cyclin D1、CDK2和CDK4四种蛋白的实时荧光定量检测。结果细胞周期检测结果显示:与对照组相比,实验组处于G0/G1期的细胞百分比降低,而处于S期和G2/M期的细胞百分比升高,差异具有统计学意义(P<0.01);实时荧光定量检测显示:与对照组相比,实验组中Cyclin A、Cyclin D1、CDK2和CDK4四种蛋白的表达有明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论与对照组相比ODN MT01降低了G0/G1期的细胞百分比,提高了S期、G2/M期的细胞百分比;其分子机制可能但不局限于通过调高Cyclin A、Cyclin D1、CDK 2和CDK 4四种蛋白的表达而实现的。     

超声联合微泡抑制血管平滑肌细胞增殖机制的研究

目的观察超声联合微泡对血管平滑肌细胞(VSMCs)周期分布及细胞周期调节蛋白激酶(CDK2)和抑制物p27表达的影响,探讨超声联合微泡抑制VSMCs增殖的作用机制。方法体外培养的VSMCs经血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)刺激后,以低频连续波超声(频率1MHz、声强为0.3W/cm2)联合脂质微泡(1μl/ml)辐照VSMCs60s。分别用流式细胞仪、免疫细胞化学法检测细胞周期分布和细胞周期调控蛋白CDK2、p27的表达。结果与对照组比较,PDGF-BB刺激组细胞G0～G1期细胞比例下降而S期细胞比例增高(P<0.01),CDK2表达上调而p27表达降低(P<0.01);与PDGF-BB组相比,超声联合微泡组G0～G1期细胞比例增高,S期细胞比例降低(P<0.01),CDK2表达下调而p27表达增高(P<0.01)。结论超声联合微泡下调CDK2蛋白和上调p27蛋白的表达,阻滞细胞周期进程,可能是抑制VSMCs增殖的机制之一。     

无血清条件下体外分离培养鼠胚胎脑组织神经干细胞

背景:神经干细胞的体外培养成功为治疗中枢神经系统疾病提供了新的思路,但神经干细胞的分化和功能修复机制尚不甚清楚.移植后的细胞能否与体内细胞结合以及建立起正常的神经系统突触联系急需解决.目的:在无血清条件下体外分离培养胚鼠神经干细胞,观察其生长及分化情况.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-03/2008-01在天津市环湖医院神经干细胞室完成.材料;孕14～16 d的SD大鼠,由北京维通利华实验动物中心提供.方法:取孕鼠胚胎的脑海马组织.通过机械分离和胰蛋白酶消化结合法体外分离培养神经干细胞,在含有碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子及B27的无血清DMEM/F12培养基中传代扩增.取原代培养7 d的神经干细胞,制备单细胞悬液,接种后加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液诱导3 d.主要观察指标:倒置显微镜下观察神经干细胞的增殖分化过程,并行免疫荧光染色鉴定.通过细胞免疫化学染色检测诱导分化后的细胞类犁.结果:分离培养的神经干细胞在无血清培养基中不断分裂增殖,8 d左右即可形成胞体透亮、折光性好的干细胞球,悬浮生长,免疫荧光染色巢蛋白呈阳性表达.神经干细胞球诱导5 d,免疫细胞化学染色后可见胶质纤维酸性蛋白及神经元特异性烯醇酶呈阳性表达的细胞.结论:体外无血清条件下,分离培养的神经干细胞生长状态良好,且具有自我更新和增殖能力.诱导后能够向神经元及星形胶质细胞方向分化.     

三氧化二砷阻滞人Burkitt淋巴瘤细胞增殖和细胞周期作用及其相关机制

本研究探讨As2O3 对人Burkitt淋巴瘤细胞增殖和细胞周期的影响及相关的分子机制,为As2O3临床应用于Burkitt淋巴瘤的治疗提供依据。以人Burkitt淋巴瘤Namalwa细胞株为模型,用不同浓度As2O3作用不同时间,以MTT法、流式细胞术、RQ—PCR和Western—blot分别检测As2O3对细胞增殖、增殖周期和凋亡发生及细胞周期重要调节基因CyclinE、CDK2和P2I表达的影响。结果表明：As2O3显著抑制Namalwa细胞的生长增殖,并显示明显的浓度和时间依赖性;As20,明显阻滞Namalwa细胞于G1期,并显示明显的量效关系;As2O3诱导Namalwa细胞凋亡,呈现明显的作用浓度和作用时间依赖性;As2O3明显下调Namalwa细胞CyclinE、CDK2基因的转录及蛋白表达,明显上调CDK抑制蛋白P2j基因的转录及蛋白表达,且呈现出浓度依赖性。结论：As2O3明显抑制人Burkitt淋巴瘤细胞株Namalwa的生长增殖,此作用与As2O3阻滞细胞周期于G1期及诱导细胞凋亡有关,而As2O3对细胞周期的阻滞与其下调细胞周期的重要驱动基因CyclinE和CDK2的表达、上调CDK抑制因子P2I基因的表达密切相关。     

人与鼠神经干细胞体外培养特性的比较

目的:比较分析人及鼠神经干细胞体外培养的生长特性。方法:实验于2004-04/12在华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉科实验室完成。孕14d及新生Wistar大鼠由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供,孕9周及孕16周水囊引产胎儿经胎儿家属同意捐赠,用1×1010L-1或1×108L-1的起始密度分离培养人和鼠神经干细胞。原代培养出现大量悬浮神经干细胞球后,一部分细胞继续悬浮培养,另一部分细胞种入用0.001%多聚鸟氨酸和0.2%明胶包被的培养瓶中贴壁培养。在培养9代左右的人神经干细胞及4代左右的鼠神经干细胞培养液中加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷或5%胎牛血清继续培养1周。应用抗巢蛋白及抗5-溴脱氧尿嘧啶核苷作为人及鼠神经干细胞初步鉴定,应用抗神经胶质酸性蛋白、微管相关蛋白2和2,3-环核苷酸磷酸二脂酶抗体检测其分化,SABC法进行免疫细胞化学染色。结果:①用较高(1×1010L-1)起始密度可有效的分离培养原代人神经干细胞,较低(1×108L-1)的起始密度对鼠神经干细胞分离有利,贴壁培养的人及鼠神经干细胞保持干细胞的特性长期增殖。②人神经干细胞自发聚集能力强、培养维持时间长,相比较而言,鼠神经干细胞单个细胞体积大、分裂增殖快、对起始密度依赖性小、贴壁能力强。③悬浮培养及贴壁培养的人和鼠神经干细胞,经抗巢蛋白及抗5-溴脱氧尿嘧啶核苷免疫细胞化学染色,均显示阳性。血清诱导分化后,免疫细胞化学染色可显示出微管相关蛋白2、神经胶质酸性蛋白染色阳性的细胞,人与鼠神经干细胞分化后2,3-环核苷酸磷酸二脂酶的染色效果不佳。结论:人神经干细胞和鼠神经干细胞体外培养时生长特性有较大差异。表现为前者需要较高的起始培养密度、聚集能力强、培养维持时间长,后者单个细胞体积大、分裂增殖较快、贴壁能力强。     

磁刺激对大鼠神经干细胞CDK5基因表达的影响

目的：研究脉冲磁刺激对离体神经干细胞内CDK5蛋白和基因表达的影响。方法：神经干细胞克隆在体外培养传代后，置于0．5Hz，1．44T的磁刺激，每天1次，30个脉冲；作用3d后诱导分化，用CDK5的特异性引物对诱导分化后0、48和72h的神经干细胞进行RT—PCR分析，并用Western—Blot法检测神经干细胞中CDK5蛋白的表达。结果：通过RT-PCR可见，对照组CDK5在分化前已有表达，随着分化的进展，CDK5的表达逐渐增强，至48h达高峰，然后逐渐减低；磁刺激组与对照组呈现相同的趋势，但在不同时间点CDK5的表达均高于对照组。Western-Blot显示神经干细胞中CDK5蛋白的表达与RT-PCR的结果一致。结论：0．5Hz，1．44T磁刺激能够促进神经干细胞分化时CDK5基因和蛋白表达，这可能是磁刺激促进神经干细胞向神经元方向分化的机制之一。     

促红细胞生成素体外培养鼠胚脑皮质神经干细胞的分化

背景:促红细胞生成素最早作为生长因子被认识,近些年来其对中枢神经系统保护作用的体内研究较多。目的:观察促红细胞生成素对体外培养大鼠胚脑皮质神经干细胞凋亡及分化的影响。方法:无菌条件下取孕14dSD大鼠胚脑皮质,体外先悬浮增殖培养后贴壁诱导分化。巢蛋白免疫细胞荧光染色检测神经干细胞,以微管相关蛋白2、神经胶质原纤维酸性蛋白检测神经干细胞分化。取第3代神经干细胞向培养基中添加0.5,5,50,500U/mL的促红细胞生成素,另设不添加促红细胞生成素的对照组。应用半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3检测神经干细胞凋亡,微管相关蛋白2检测神经干细胞向神经元方向的分化。结果与结论:加入≥5U/mL促红细胞生成素,神经球内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达显著下降(P<0.01),分化培养后微管相关蛋白2阳性细胞较对照组明显升高(P<0.01)。提示促红细胞生成素可降低体外培养鼠胚脑皮质神经干细胞的凋亡率,促进其神经干细胞向神经元方向分化。     

新生大鼠全大脑组织分离诱导分化神经干细胞的体外实验

背景：神经干细胞的供体一股以胎鼠和成年鼠为主，利用细胞培养技术分离步骤较繁琐。目的：以新生大鼠为神经干细胞供体，拟建立一种较为简便、细胞获得率较高的分离培养方法。设计、时间及地点：以细胞为对象观察性实验，于2006—10／2007—03在重庆医科大学完成。材料：新生1～3d的Wistar大鼠全大脑。方法：以胰蛋白酶消化、无血清、悬浮培养原代细胞，并加含体积分数为0．10胎牛血清的DMEM／F12培养液诱导其分化。主要观察指标：应用相差显微镜观察神经干细胞的生长特点及分化后的细胞形态学变化。应用间接免疫细胞化学染色法鉴定神经千细胞及其分化后神经元和胶质细胞标志蛋白的表达。以BrdU标记神经干细胞，观察其增殖情况。结果：新生大鼠脑组织分离的细胞具有连续传代和增殖的能力，能稳定表达神经干细胞特异性巢蛋白。诱导分化后的细胞能表达神经元细胞、旱形胶质细胞、少突胶质细胞的特异性蛋白。结论：从新生大鼠脑组织分离培养出的神经干细胞获得率高，保持了干细胞的未分化属性，具有自我更新和多项分化潜能。     

胚胎大鼠原代神经干细胞培养方法的改进

背景:神经干细胞增殖分化受体内外微环境的影响,不同细胞培养液对细胞的增殖分化有不同的作用.目的:改进传统上应用无血清培养液培养原代神经干细胞的方法,寻找一种快速便捷的培养方式.设计、时间和地点:随机对照细胞实验,于2005-11/2006-09在青岛大学医学院脑科研究所完成.材料:选用孕后12～16 d 的Wistar大鼠10只,取胎鼠脑组织制成细胞悬液.方法:将配置的细胞密度约1×109个/mL滤液接种入4个50 mL细胞培养瓶,分为2组:对照组和实验组,每组2个培养瓶.对照组加入DMEM/F12、2?7型人类白细胞抗原、20 mg/L的碱性成纤维细胞生长因子,20 mg/L的表皮生长因子无血清培养液,实验组加入DMEM/F12、5%胎牛血清,两三天后换为与对照组相同的无血清培养液.主要观察指标:应用倒置显微镜和免疫细胞化学法观察两组神经干细胞的增殖生长状况.结果:神经干细胞生长状态:①两组大多数细胞表达神经干细胞的特征性标志抗原神经巢蛋白,免疫染色呈阳性反应.②实验组神经干细胞的聚球速度明显快于对照组,可提前三四天观察到神经干细胞球.③两组细胞数量基本无差异,实验组细胞球体较对照组大.经血清培养液诱导分化后部分呈神经元特异性烯醇酶阳性,部分呈神经胶质酸性蛋白阳性,表明神经干细胞已分化为神经元样细胞和神经胶质细胞.结论:含血清培养液预先培养可以加快神经干细胞增殖生长速度.     

和厚朴酚对HL-60细胞增殖抑制作用及其相关机制研究

本研究旨在探讨和厚朴酚（honokiol,HNK）对急性髓系白血病细胞HL-60增殖和凋亡的影响及其作用机制。MTT法检测HNK对HL-60细胞增殖抑制作用。流式细胞术检测细胞周期变化。Annexin V/PI法检测细胞凋亡情况。Western blot检测细胞周期蛋白（cyclins）、细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）、P53、P21、P27、BCL-2、BCLXL、BAX、caspase-3、-9、M APK信号通路蛋白。结果表明：HNK能够抑制HL-60细胞增殖,呈时间剂量依赖性。HNK阻滞HL-60细胞于G0/G1期,S期细胞显著减少（P〈0.05）。HNK作用HL-60细胞24 h后,cyclin D1、cyclin A、cyclin E、CDK2、4、6表达显著下调（P〈0.05）,P53、P21表达显著上调（P〈0.05）。HNK作用24 h后HL-60细胞凋亡增加,活化的caspase-3、-9表达显著增加;BCL-2和BCL-XL表达下调,而BAX表达上调。MAPK亚族P38、JNK表达无明显变化;而M EK1/2-ERK1/2的表达显著下调（P〈0.05）。结论：HNK通过干预M EK1/2-ERK1/2信号通路阻滞HL-60细胞于G0/G1期并诱导HL-60细胞凋亡。     

Embryonic neural progenitor cells: the effects of species, region, and culture conditions on long-term proliferation and neuronal differentiation

One of the major obstacles to the use of neural stem/progenitor cells in neuronal replacement therapy is the limited ability of these cells to generate sufficient numbers of specific neuronal phenotypes either in the culture dish or after transplantation in animal models of neurodegenerative disease. It is not yet fully understood whether embryonic neural stem and progenitor cells show species-specific or regional identities, or if current culture paradigms select for a particular subset of stem cells/progenitors with similar proliferation and differentiation capacities. To investigate this issue, we isolated embryonic neural progenitors derived from the developing rat and mouse central nervous system for in vitro culture to assess the regional, species-specific, and temporal effects on both cell proliferation and generation of neurons. Neurosphere cultures were derived from E13-15 mouse or rat developing striatum (medial, lateral, or whole ganglionic eminence), ventral mesencephalon, and cortex. We compared basic fibroblast growth factor and epidermal growth factor for their influence on cell proliferation and neuronal differentiation under defined differentiation paradigms. Seeding density and conditioned media were also tested for their effects on maintenance of cell proliferation over protracted time periods. Results showed that embryonic neural stem/progenitor cells maintained defined patterns of proliferation and neuronal differentiation, with both declining with time in vitro. Proliferation rate was more dependent on species and region than the neurotrophins or conditions used for culture. These results suggest that the appropriate selection of embryonic neural stem cells and culture conditions may be crucial for the optimization of their neurogenic potential.     

外源性碱性成纤维细胞生长因子对大鼠肌源性干细胞增殖的影响

背景:肌源性干细胞在体外培养过程中存在纯化、扩增、定向分化等难题,碱性成纤维细胞生长因子作为生物活性因子的一员,因其生物活性的多效性而备受关注.目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子对大鼠肌源性干细胞体外增殖的影响.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-04/07在沈阳医学院完成.材料:健康雄性Wister大鼠5只,由沈阳医学院实验动物中心提供.碱性成纤维细胞生长因子为珠海生物制品有限公司产品.方法:无菌条件下取大鼠左前肢肱三头肌,采用酶消化法分离肌源性干细胞,应用密度梯度离心法和差速贴壁法进行纯化.取第2代肌源性干细胞,分别用终浓度为6.25,12.50,25.00,50.00,100.00μg/L碱性成纤维细胞生长因子进行干预;以单纯加入200 μL生长培养基作为空白对照组,以加入200μL生长培养基+肌源性干细胞作为阴性对照组.分别于培养24,48,72,96 h加入MTT溶液.主要观察指标:免疫细胞化学法鉴定大鼠肌源性干细胞,MTT比色法检测细胞增殖情况.结果:肌源性干细胞多呈Sca-1阳性反应,少数呈Desmin阳性反应.①不同浓度碱性成纤维细胞生长因子对肌源性干细胞的促增殖效应:与阴性对照组比较,各浓度碱性成纤维细胞生长因子组对肌源性干细胞均有明显的促增殖效应(P<0.05);浓度为6.25-50.00 μg/L时促增殖作用随其质量浓度升高而显著增强(P<0.01),至50.00 μg/L时其促增殖作用接近顶峰.②碱性成纤维细胞生长因子在不同培养时间点对肌源性干细胞的促增殖效应:随培养时间的延长肌源性干细胞明显增殖,与阴性对照组比较,碱性成纤维细胞生长因子组出现显著促增殖效应(P<0.01)的时间为培养96 h.结论:碱性成纤维细胞生长因子可促进体外培养的大鼠肌源性干细胞增殖,且呈浓度一时间依赖性增加,50.00 μg/L与96 h为较佳的体外培养质量浓度和时间.     

新生小鼠海马神经干细胞体外培养条件下的增殖与分化

背景：神经干细胞移植可用于中枢神经损伤的临床治疗。目的：观察新生小鼠海马神经干细胞在体外培养条件下的增殖和分化。方法：从新生昆明小鼠海马取材,采用机械分离法对原代细胞进行无血清培养,采用机械法复合酶消化法对原代细胞进行传代,以体积分数为10%胎牛血清诱导分化。免疫荧光行巢蛋白、β-微管蛋白Ⅲ和胶质纤维酸性蛋白染色,对培养的细胞进行鉴定。CCK-8法检测神经干细胞增殖能力。结果与结论：从新生小鼠海马分离得到的细胞具有连续传代形成克隆球的能力,克隆球呈巢蛋白免疫反应阳性;加入胎牛血清可诱导分化为β-微管蛋白Ⅲ和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞。提示实验成功建立了体外培养新生小鼠海马组织分离和培养神经干细胞的方法,培养的神经干细胞在体外培养条件下保持着自我增殖和分化的潜能。