硫化氢对肢体缺血再灌注所致大鼠急性肺损伤的作用及机制

目的: 探讨内、外源性硫化氢(H₂S)在肢体缺血再灌注(IR)所致大鼠急性肺损伤(ALI)中的作用并初探其机制。方法: 应用双大腿根部止血带复制大鼠双后肢缺血及再灌注后肺损伤模型。将120只SD大鼠随机分为对照组(control)、IR组、NaHS+IR组和抑制H₂S生成的炔丙基甘氨酸(PPG)+IR组。肢体缺血再灌注后4 h处死动物, 测定肺系数;光镜下观察肺组织形态学改变;化学法检测血浆H₂S、NO、CO含量,肺组织丙二醛(MDA)含量、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和血红素加氧酶(HO)活性以及支气管肺泡灌洗液(BALF)中中性粒细胞(PMN)数目和蛋白含量变化,并对血浆H₂S含量与上述指标进行相关性分析。结果: 大鼠肢体IR可引起肺组织明显的形态学改变、肺系数和肺组织MDA含量增加、BALF中PMN数目和蛋白含量增加、血浆H₂S含量和肺组织CSE活性下降、肺组织iNOS活性和HO活性及血浆中NO含量和CO含量增加。预先给予NaHS可显著减轻IR所致上述指标的改变; 而预先给予PPG可加重IR所致肺损伤, 使BALF中PMN数目和蛋白含量、血浆NO含量和肺组织iNOS活性进一步增加, 但对血浆CO含量和肺组织HO活性无明显影响。H₂S含量与CSE活性、血浆CO含量、肺组织HO活性呈正相关(均P<0.01);与其它指标呈负相关(均P<0.01)。结论: H₂S/CSE体系的下调参与介导了大鼠肢体IR所致大鼠ALI的发生, 内、外源性H₂S具有抗肢体IR所致ALI的作用, 该作用可能与其抗氧化效应、减轻PMN所致肺部过度炎症反应以及下调NO/iNOS体系、上调CO/HO体系有一定关系。     

金纳多对内毒素诱导小鼠急性肺损伤保护作用机制的初步研究

目的：初步探讨银杏叶提取物金纳多（Ginaton）对内毒素（lipopolysaccharide, LPS）诱导小鼠的急性肺损伤(acute lung injury, ALI)保护作用的可能机制。方法：于小鼠腹腔注射LPS（10 mg/kg）复制ALI动物模型。将小鼠随机分为对照组、LPS组、Ginaton组和Ginaton＋LPS组。观察各组肺组织病理学改变,测量肺湿/干重比,支气管肺泡灌洗液蛋白含量及乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）活性,测量丙二醛（malondialdehyde, MDA）、一氧化氮合酶（nitric oxide synthase, iNOS）和髓过氧化物（myeloperoxidase,MPO),免疫组织化学方法检测血红素加氧酶（heme oxygenase HO-1）及iNOS蛋白表达。结果： 金纳多可有效减轻LPS所致肺组织病理学变化,并降低肺湿/干重比和肺泡灌洗液中蛋白含量,降低肺泡灌洗液中LDH活性、肺组织MPO和iNOS活性,同时MDA和NO含量下降。免疫组织化学结果显示,LPS组iNOS表达上升（P＜0.01）,而血红素加氧酶（HO-1）蛋白表达未见明显变化;而预先给予Ginaton可显著提高HO-1的表达,降低iNOS的表达（P＜0.01）。结论：Ginaton可减轻LPS所致急性肺组织损伤,其机制可能与诱导HO-1的表达,下调iNOS的表达和活性有关。     

HO-1在CCK-8减轻脂多糖所致的急性肺损伤中的作用

目的： 探讨血红素氧合酶（HO）-1在八肽胆囊收缩素（CCK-8）减轻脂多糖（LPS）所致急性肺损伤（ALI）中的作用。方法: 将大鼠随机分为5组：正常对照组、LPS组、CCK-8+LPS组、LPS+Hm（氯血红素，CO供体）组、LPS+ZnPP（锌原卟啉，HO-1特异性阻断剂）组。各组给药后2 h、6 h、12 h行支气管肺泡灌洗、检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中中性粒细胞（PMN）数目；进行肺组织的形态学观察；测定肺组织中丙二醛（MDA）含量和HO-1蛋白活性；应用RT-PCR和Western blotting技术检测给药后6h肺组织中HO-1 mRNA和蛋白的表达情况。结果: LPS组肺组织出现损伤性变化，同时BALF中PMN数目、肺组织中MDA含量、HO-1蛋白活性、HO-1 mRNA和蛋白的表达均高于相应对照组（均P<0.05）；CCK-8+LPS和LPS+Hm组肺组织损伤程度、BALF中PMN数目和肺组织中MDA含量低于相应LPS组，而肺组织中HO-1蛋白活性、HO-1 mRNA和蛋白的表达均高于相应LPS组（均P<0.05）；LPS+ZnPP组肺组织损伤程度、BALF中PMN数目和肺组织中MDA含量分别高于相应LPS组，而肺组织中HO-1蛋白活性、HO-1 mRNA和蛋白的表达分别低于相应LPS组（均P<0.05）。结论: CCK-8可部分通过HO-1介导的抗氧化、抑制PMN聚集等效应来发挥减轻LPS所致的肺损伤作用。     

内源性H2S在CCK-8减轻脂多糖所致急性肺损伤中的作用

目的：探讨内源性硫化氢(H₂S)在八肽胆囊收缩素(CCK-8)减轻脂多糖（LPS）所致急性肺损伤(ALI)中的作用。方法: 将84只SD大鼠随机分为正常对照组、LPS组（经气管内滴注LPS复制ALI）、NaHS(H₂S供体)+LPS组、炔丙基甘氨酸［胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）抑制剂，PPG］+LPS组、CCK-8+LPS组、PPG+CCK-8+LPS组和CCK- 8组。给药后分别于4 h和8 h处死动物，测定肺湿/干比值；光镜观察肺组织形态学改变；化学法检测血浆H₂S含量，肺组织MDA含量、MPO活性和CSE活性；放免法检测肺组织P-selectin含量；RT-PCR检测肺组织CSE mRNA的表达；并行支气管肺泡灌洗，检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量。结果: 气管内滴注LPS可引起肺组织明显的形态学改变；肺湿/干比值、BALF中蛋白含量及肺组织MDA、MPO活性和P-selectin水平增高；血浆H2S含量、肺组织CSE活性及CSE mRNA表达下降。预先给予NaHS或CCK-8可显著减轻LPS所致的上述改变，且血浆H₂S含量、肺组织CSE活性及CSE mRNA表达高于相应的LPS组；预先给予PPG可加重LPS所致的肺损伤，而血浆H₂S含量、肺组织CSE活性及CSE mRNA表达分别低于相应的LPS组和CCK-8+LPS组。结论: CCK-8可通过内源性H₂S介导的抗氧化、抑制PMN黏附聚集等效应发挥减轻LPS所致肺损伤的作用。     

Ang-2在大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用

目的:探讨促血管生成素2 (Ang-2 )在不同程度急性肺损伤(ALI)中的作用.方法:清洁级SD大鼠共40只, 随机分为4组: 正常对照组, 不同剂量大肠杆菌脂多糖(LPS)组(3个剂量组: 2 mg/kg、 4 mg/kg及8 mg/kg), 每组平均10只.HE染色光镜观察肺组织标本病理改变并进行肺损伤评分, Western blot检测各组大鼠血浆中Ang-2的表达情况.结果:LPS可致肺泡间隔增宽、出血及大量炎性细胞浸润等急性肺损伤病理改变, LPS各组的肺损伤评分明显高于正常对照组(P<0.01);LPS不同剂量与肺损伤评分呈量效依赖关系(P<0.05).LPS不同剂量组的血浆中Ang-2蛋白表达较空白对照组增高(P<0.01), LPS不同剂量与Ang-2蛋白表达水平呈量效依赖关系(P<0.05).血浆中Ang-2的蛋白表达与肺组织炎症程度积分呈正相关(r=0.862, P<0.05).结论:Ang-2参与大鼠内毒素性急性肺损伤的病理过程, 且血浆Ang-2水平与急性肺损伤程度呈正相关.     

大黄对内毒素诱导急性肺损伤大鼠的保护作用

探讨脂多糖（LPS）致急性肺损伤（ALI）的作用机制及大黄的保护作用。用Wistar大鼠复制LL的的动物模型,观察组织病理学变化,测定ALI生物学指标及NO和iNOs。结果显示：LPS组肺间质水肿,肺泡腔内可见大量细胞润滑和血浆蛋白渗出;肺管内皮细胞损伤。肺湿干重比,肺泡灌洗液中中性粒细胞比例,蛋白含量及肺泡通透指数,肺毛细管通透性均显著升高,NO和iNOs也显著升高。地塞米松和大黄组,上述指标均较LPS组显著。LPS致LI的机制主要是直接损伤肺泡上和血管内皮细胞,大黄及地塞米松对血管内皮和肺泡上皮具有保护作用,其机制可能是通过抑制NO和iNOs活性实现。     

透明质酸含量在浓烟吸入所致大鼠急性肺损伤中的变化

观察浓烟吸入所致大鼠急性肺损伤与透明质酸(Hyaluronic Acid,HA)、层粘蛋白（Laminin, LN）含量的关系。将SD大鼠随机分成正常对照组和吸烟后不同时间观察组。分别测定血清、肺组织和支气管肺泡灌洗液中HA及LN含量，支气管肺泡灌洗液中炎性细胞数及比例，并用光镜和电镜观察肺组织病变。结果显示，吸烟后血清和肺组织中HA含量升高，12h达到高峰。血清和肺组织中HA含量分别为（470.4±97.5）μg/L和（697.5±115.1）μg/L；对照组分别是（186.4±31.5）μg/L和（202.6±39.4）μg/L。支气管肺泡灌洗液HA在18h显著升高，而LN各组无明显变化。支气管肺泡灌洗液中细胞数在12h最多，主要是中性粒细胞。提示HA升高似可作为浓烟吸入急性肺损伤的病理指标。     

银杏叶提取物对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤的保护作用

探讨银杏叶提取物（GBE）对脂多糖（LPS）诱导大鼠急性肺损伤（ALI0的保护作用。给大鼠静脉LPS复制ALI动物模型。首先动态观察ALI的形成过程，注LPS后2h已形成明显的ALI。另批大鼠随机分成：对照组（静注生理盐水），LPS组（静注LPS，5mg/kg体重），CBE＋LPS组（注LPS前三天开始每天灌胃给GBE一次，按黄酮甙8mg/kg体重计算，当日在给LPS前h再给一次GBE），每组6只大鼠。注LPS或盐水后2h收集标本，进行测定。发现：注LPS后肺湿／干重量比，肺泡灌洗液中蛋白含量及肺血管通透指数均升高（均P＜0．01）；血中乳酸（LD），一氧化氮（NO），内皮素－1（ET－1），肿瘤坏死因子－α（TNF－α）含量及血乳酸脱氢酶（LDH）活性，均有显著升高（P＜0．01，P＜0．001）。而肺组织细胞膜Na^ -K^ ATPase活性显著下降（P＜0．01）。预先给予GBE可显著缓解上述变化（P＜0．05，P＜0．01）。提示GBE在防治肺的急性炎症性疾病中有一定的应用前景。     

CCK-8对脂多糖性肺损伤大鼠肺组织中硫化氢生成的抑制作用

目的： 探讨硫化氢（H2S）在八肽胆囊收缩素(CCK-8)改善脂多糖性肺损伤中的作用。方法：用静脉注射脂多糖（LPS,5 mg/kg）法制备大鼠肺损伤模型,将雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、LPS组、LPS+CCK-8组及CCK-8组。给药后6 h测定大鼠动脉血氧分压（PaO2）;检测肺组织中H2S含量和胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)活性;RT-PCR检测肺组织CSE mRNA的表达;光镜观察肺组织的形态学变化。结果：与正常对照组相比,LPS组大鼠PaO2显著下降并出现肺组织结构损伤,而肺组织中H2S含量、CSE活性和mRNA表达显著增高（均P<0.05）;与LPS组相比,LPS+CCK-8组大鼠PaO2显著升高,肺组织结构损伤明显减轻,肺组织中H2S含量和CSE活性及mRNA表达显著下降（均P<0.05）;CCK-8组大鼠上述各指标与正常对照组相比无明显差异。结论：CCK-8可通过抑制内源性H2S的生成减轻脂多糖性肺损伤。     

基于Nrf2通路探讨阿里红三萜酸减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的作用

目的:探讨阿里红总三萜酸(Fomes officinalis Ames triterpenic acid,FOTa)对脂多糖(lipopolysac?charide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的预防作用及核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-relat...     

Cystathionine-gamma-lyase inhibitor attenuates acute lung injury induced by acute pancreatitis in rats

Introduction

Acute pancreatitis (AP) is known to induce injuries to extrapancreatic organs. Because respiratory dysfunction is the main cause of death in patients with severe AP, acute pancreatitis-associated lung injury (APALI) is a great challenge for clinicians. This study aimed to investigate the potential role of hydrogen sulfide (H₂S) in the pathogenesis of APALI.

Material and methods

Fifty-four SD rats were randomly divided into three groups: the AP group of rats that received injection of sodium deoxycholate into the common bile duct, the control group that underwent a sham operation, and the treatment group made by intraperitoneal injection of propargylglycine (PAG), an inhibitor of cystathionine-γ-lyase (CSE), into rats with AP. Histopathology of the lung was examined and the expression of CSE and TNF-α mRNA in lung tissue was detected by real-time polymerase chain reaction. The H₂S level in the serum was detected spectrophotometrically.

Results

The serum concentration of H2S and CSE and TNF-α expression in the lung were increased in AP rats modeled after 3 h and 6 h than in control rats (p < 0.05). Intraperitoneal injection of PAG could reduce the serum concentration of H₂S, reduce CSE and TNF-α expression, and alleviate the lung pathology (p < 0.05).

Conclusions

Taken together, our findings suggest that the H₂S/CSE system is crucially involved in the pathological process of APALI and represents a novel target for the therapy of APALI.     

油酸-脂多糖介导大鼠急性肺损伤及肺组织AP-1活性的变化

本文探讨了在油酸－内毒素（OA＋LPS）介导的大鼠急性肺损伤（ALI）模型肺组织中，转录因子AP－1活性变化的意义。有用OA＋LPS序贯性两次致伤，复制ALI大鼠模型；采用凝胶迁移率分析法（EMSA）检测肺组织AP－1活性。结果显示：OA＋LPS模型组大鼠呼吸窘迫，PaO2早期低于8kPa，死亡率升高，肺含水量显著增加，肺水肿、浸润等病变严重，伴透明膜形成，肺组织AP－1活性显著升高；并且，间隔4h两次致伤后，P aO2降低幅度最大，死亡率高达78.57%，肺含水量最大，肺病理改变最重，肺组织AP－1活性最高。结果表明：OA＋LPS序贯性两次致伤，可以介导大鼠发生严重的ALI；ALI的发生、发展与AP－1活性异常升高有关。     

内毒素性急性肺损伤大鼠内源性H2S/CSE体系的变化

目的：观察内毒素性急性肺损伤（ALI）大鼠内源性硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶（H2S/CSE）体系、IL-1β和IL-10的动态变化。方法:健康雄性SD大鼠共80只，随机分为Ⅰ（对照）组；Ⅱ（LPS 1 h）组；Ⅲ（LPS 3 h）组；Ⅳ（LPS 6 h）组；Ⅴ（LPS 9 h）组；Ⅵ（LPS 12 h）组。给予LPS复制内毒素性ALI大鼠模型，分别于1、3、6、9、12 h处死，观察光镜和电镜下肺组织形态学改变，检测肺系数、肺湿/干重比、血浆中H2S含量、肺组织CSE活性、血清中IL-1β和IL-10的动态变化。结果:⑴LPS 1 h组，光镜和电镜下肺组织形态学无明显改变，肺系数、肺湿/干重比、血浆中H2S的含量和肺组织CSE活性与对照组比较无明显变化，血清中IL-1β和IL-10含量明显高于对照组(IL-1β，P<0.05；IL-10，P<0.01)。⑵LPS 3、6、9、12 h组，光镜和电镜下肺组织明显受损，超微结构明显改变，肺系数和肺湿/干重比明显高于对照组(P<0.05或P<0.01)，血浆中H2S的含量和肺组织CSE活性明显低于对照组（P<0.05 或P<0.01) ，血清中IL- 1β和IL-10的含量明显高于对照组(P<0.01)。结论:内源性H2S/CSE体系、IL-β和IL-10参与内毒素性ALI的病理生理过程。     

胍丁胺对内毒素诱导的大鼠急性肺损伤的治疗效果

目的 :研究胍丁胺对内毒素(LPS)诱导的急性肺损伤治疗效果及其机制。方法 :采用LPS诱导大鼠急性肺损伤模型并予以胍丁胺治疗,分为对照组,单纯模型组,低、高剂量胍丁胺治疗组。绘制Kaplan-Meier生存曲线观察胍丁胺治疗后大鼠生存率差异,并检测肺组织湿干比及组织炎症情况;检测肺组织中抗氧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量;收集肺泡灌洗液并提取肺组织总蛋白,检测肺组织及肺泡灌洗液中炎症因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。结果 :胍丁胺可提高LPS诱导的大鼠急性肺损伤模型的生存率、显著降低肺组织的湿重/干重比。H-E染色结果显示胍丁胺可改善肺组织炎症状况。与单纯模型组相比,低、高剂量胍丁胺治疗组的肺组织MDA含量下降、SOD活性上调,差异具有统计学意义。ELISA结果表明,低、高剂量胍丁胺治疗组的肺组织及肺泡灌洗液中IL-6、TNF-α分泌降低。结论 :胍丁胺可抑制肺部过度氧化应激及炎症反应,发挥对急性肺损伤的保护作用。     

移植骨髓间充质干细胞减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤

目的 观察移植骨髓间充质干细胞 （MSCs） 对脂多糖 （LPS） 诱导小鼠急性肺损伤 （ALI）的治疗修复作用。方法 全骨髓培养法培养小鼠骨髓MSCs;细胞免疫化学染色鉴定MSCs特异表面标记;小鼠咽后壁吸入LPS制造小鼠肺损伤;尾静脉注射引入MSCs;称重计算肺水肿指数;肺组织切片HE染色观察组织病理改变;ELISA检测肺泡灌洗液和肺组织匀浆中IL-1β含量;Brdu（5-Bromo-2-Deoxyuridine）标记供体MSCs,免疫组织化学染色及双染色观察移植细胞的迁移和分化状态。结果 培养的MSCs细胞表面标记CD44阳性,而造血系表面标记CD34阴性。吸入LPS后,小鼠出现典型的肺损伤病理改变,肺水肿指数和肺组织匀浆IL-1β含量明显增加。标记的MSCs移植入同种异体的肺损伤小鼠,其肺部出现标记的MSCs,并表达上皮细胞标志抗原-细胞角蛋白（CK）。治疗后小鼠的肺水肿指数和肺组织匀浆IL-1β含量下降。结论 外源性MSCs移植到肺损伤小鼠体内,可迁移至肺损伤部位,并表达上皮细胞标志;减轻肺水肿程度,减少炎症因子释放。