6-羟基多巴胺制备帕金森病大鼠模型的神经行为学特点

目的：采用在大鼠脑右侧黑质注射6-羟基多巴胺制备帕金森病模型，观察帕金森病模型大鼠神经行为学的特点。方法：实验于2001—03／12在上海中医药大学病理学实验室完成。将62只Wistar大鼠随机分为3组。模型组：采用6-羟基多巴胺（溶于含0．2g／L抗坏血酸的生理盐水中，浓度为2叽。以1．0mm／min速度缓慢进针。3μL／孔，注射速度为1μL／min。注射完毕后留针5min，然后以1．0mm／min速度缓慢退针）。注射于大鼠脑右侧黑质造成偏侧帕金森病模型。假手术组：注射含0．2g／L抗坏血酸的等量生理盐水，其余条件与模型组相同。正常对照组：不进行任何处理。在模型制备后第10天，以腹腔注射阿朴吗啡0．5mg/kg诱发大鼠向一侧旋转，记录开始旋转至30min内的旋转圈数。以旋转圈数平均每分钟超过7次者为合格的帕金森病模型。并观察各组大鼠在第45天的旋转行为。结果：62只大鼠中有23只大鼠造模不成功，39只大鼠进入结果分析。①正常对照组、假手术组无旋转行为。模型组在腹腔注射阿朴吗啡后0．5-4min，均开始出现旋转行为，即以左侧后肢为支点原地旋转，头尾相接，身体成环状，同时还伴有觅食、嗅探动作。②42只模型组大鼠中，造模成功19只，成功率为45％（19／42）。向左旋转的大鼠显著多于向右旋转及向左一圈，右一圈旋转的大鼠[14只，4只，1只，（P〈0．05）]。③模型组在第45天的旋转圈数与第10天时接近[（526．10&;#177;173．96），（538．52&;#177;187．88）圈／h。（t=1．448，P〉0．05）1。结论：①模型大鼠具有典型的神经行为学特点。主要表现为以健侧后肢为支点原地旋转。②该模型不能自行恢复，是研究帕金森病的稳定、可靠模型。     

6-羟基多巴胺帕金森病模型大鼠氧化应激反应

目的:观察6-羟基多巴胺帕金森病大鼠模型的氧化应激反应及其可能的机制。方法:实验于2005-06/12在上海中医药大学科研实验中心完成。实验分组:Wistar雄性大鼠18只,随机分为正常对照组、假手术组、模型组,每组6只。实验干预:采用6-羟基多巴胺(溶于0.2g/L抗坏血酸的生理盐水中)注射于脑右侧黑质,10d后以腹腔注射阿朴吗啡0.5mg/kg诱发大鼠向一侧旋转,记录开始旋转至30min内的旋转圈数,以平均每分钟旋转圈数超过7次者为合格的帕金森病模型。假手术组6只大鼠只注射含0.2g/L抗坏血酸的等量生理盐水,其余条件与造模组手术相同。正常对照组6只大鼠只进行大鼠固定,不进行任何处理。在旋转诱发实验完成后,动物每天自由饮水与进食,共45d。实验评估:应用化学比色法测定大鼠中脑黑质纹状体部位活性氧、丙二醛、谷胱甘肽含量,谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶的活性。结果:18只大鼠均进入结果分析。①活性氧含量:模型组明显高于正常对照组和假手术组[(451.13±73.42),(135.62±53.46),(161.15±61.16)U/mg,P<0.01]。②谷胱甘肽含量:模型组明显低于正常对照组和假手术组[(4.26±0.75),(7.03±1.39),(7.03±1.42)mg/g,P<0.05]。③谷胱甘肽过氧化物酶活性:模型组明显低于正常对照组和假手术组[(3.05±0.38),(3.96±0.39),(3.77±0.38)NU/g,P<0.01]。④超氧化物歧化酶活性:模型组明显低于正常对照组和假手术组[(137.74±4.65),(190.77±8.47),(199.73±8.23)NU/mg,P<0.01]。⑤丙二醛含量:模型组明显高于正常对照组和假手术组[(10.90±2.17),(4.18±2.88),(4.52±2.45)μmol/g,P<0.01]。结论:帕金森病模型大鼠的氧化反应被激活,处于氧化应激状态,氧化应激反应增强可能是帕金森病的发病机制之一。     

含NURR1基因腺病毒修饰神经干细胞移植治疗帕金森病的试验

目的:观察含NURR1基因腺病毒修饰的C17.2神经干细胞移植治疗对帕金森病模型症状和组织学的改善。方法:实验于2004-03/2005-01在中山大学附属第二医院林百欣实验中心完成。6-羟基多巴脑内立体定向及单侧纹状体两点定位注射制作SD大鼠帕金森病模型,1周后,行阿朴吗啡行为学检测,即阿朴吗啡(0.5mg/kg)腹腔内注射后30min内,计数大鼠平均每分钟身体旋转360°的次数,达到6圈/min及以上者为合格帕金森病模型,每周测1次,连续4周,获取稳定动物模型共31只,分为帕金森病模型对照组10只、帕金森病 C17.2组11只、帕金森病 C17.2 腺病毒组10只,无菌收集所需的C17.2神经干细胞、含NURR1基因腺病毒载体修饰C17.2神经干细胞,浓度为(1.0～4.0)×109L-1细胞,对入组的帕金森病模型进行无菌细胞注射移植,注射点与造模时注射点相同,每点约3μL,帕金森病模型对照组注射生理盐水。细胞移植后10d和4周进行阿朴吗啡诱发的帕金森病模型旋转试验,免疫组化检测帕金森病模型纹状体内酪氨酸羟化酶阳性神经元数量。结果:在实验过程中又有4只死亡,共有27只帕金森病模型鼠进入试验。①帕金森病模型旋转圈数:移植后10d和4周帕金森病 C17.2组和帕金森病 C17.2 腺病毒组均少于帕金森病模型对照组,帕金森病 C17.2 腺病毒组少于帕金森病 C17.2组(移植后10d:帕金森病模型对照组21.57±5.26,帕金森病 C17.2组3.90±0.90,帕金森病 C17.2 腺病毒组1.56±0.58;移植后4周:帕金森病模型对照组18.40±5.84,帕金森病 C17.2组3.60±0.67,帕金森病 C17.2 腺病毒组1.00±0.55,P<0.05)。②纹状体内酪氨酸羟化酶阳性细胞数:移植后10d帕金森病 C17.2组和帕金森病 C17.2 腺病毒组多于帕金森病模型对照组,帕金森病 C17.2 腺病毒组多于帕金森病 C17.2组(帕金森病模型对照组3.50±0.67,帕金森病 C17.2组13.17±1.89,帕金森病 C17.2 腺病毒组20.50±1.67,P<0.05)。结论:NURR1基因结合神经干细胞有效改善了帕金森病模型症状,提高移植后酪氨酸羟化酶阳性神经元细胞的数量。     

应用6-羟基多巴胺建立帕金森病大鼠模型的稳定性评价

背景应用6-羟基多巴胺(6-Hydroxydopamine,6-OHDA)损毁黑质多巴胺神经元(nigral dopaminergic neuron,NDN)制作的大鼠模型,在目前帕金森病的研究中应用最广,但由于黑质致密部体积狭小,技术难度大,故模型制备成功率一般仅为30％～40％左右.目的探讨提高6-羟基多巴胺帕金森病大鼠模型成功率的方法,并对模型进行评价.设计完全随机的实验研究.地点和材料实验在安徽中医学院第一附属医院中心实验室完成,实验材料包括SD大鼠,6-OHDA,阿朴吗啡,兔抗TH血清,ABC试剂盒,SR-6N大鼠脑立体定向仪,JEM-100CX电镜.干预取SD大鼠90只,将6-OHDA立体定向微量注射于左侧黑质区及黑质纹状体通路,观察大鼠行为及黑质细胞形态学变化.主要观察指标旋转行为,免疫组织化学观察多巴胺能神经元数量,电镜观察多巴胺能神经元形态改变.结果90只大鼠中经阿朴吗啡诱导后有64只(占71％)恒定转向右侧且结果稳定,旋转圈数30 min＞210 r,被视为成功大鼠模型;免疫组化观察发现注射侧黑质区多巴胺能神经元较对侧明显减少,电镜观察发现其普遍存在凋亡及坏死样改变.结论应用本方法可较快建立稳定的成功率较高的大鼠模型,但在病理和行为学等方面同自然患者仍有较多差异.     

改良帕金森病大鼠模型的建立及评价

目的:建立一种改进的帕金森病大鼠模型制作方法,并对模型进行综合评价。方法:实验于2004-02/2005-06在军事医学科学院干细胞研究中心完成。①选取Wistar大鼠60只,随机分为3组,传统组20只,改良组30只,对照组10只。②传统组向右侧中脑黑质致密部和中脑腹侧被盖区两点各注射6-羟基多巴胺8μg制作传统帕金森病大鼠模型,改良组向中脑腹侧被盖区单点6-羟基多巴胺12μg制作改良帕金森病大鼠模型。对照组向右侧中脑黑质致密部和中脑腹侧被盖区两点各注射含2g/L抗坏血酸的生理盐水4μL。③检测各组大鼠行为学变化及黑质多巴胺能神经元变化。结果:对照组和传统组术后分别有1只和4只动物在1周内死亡,改良组无动物死亡。行为学和免疫组化检测显示:①改良组30只大鼠有22只旋转稳定,平均转数>7r/min,成功率超过70%,与传统组相当。改良组大鼠死亡率低于传统组(20%)和对照组(10%)。②术后传统组和改良组均有部分动物出现震颤、活动迟缓、易激惹、竖毛、尾僵等异常行为。③成功帕金森病模型大鼠中脑黑质注射侧神经元数量明显减少,达90%以上,改良组与传统组比较差异无显著性(P>0.05),与对照组比较注射侧黑质多巴胺能神经元显著减少(P<0.001)。结论:改良帕金森病大鼠模型方法简便实用,动物死亡率低,模型成功率高,可以较快建立稳定的帕金森病大鼠模型。     

应用6-羟基多巴胺建立帕金森病大鼠模型的稳定性评价

背景：应用6-羟基多巴胺(6-Hydroxydopamine，6-OHDA)损毁黑质多巴胺神经元(nigral dopaminergic neuron，NDN)制作的大鼠模型，在目前帕金森病的研究中应用最广，但由于黑质致密部体积狭小，技术难度大，故模型制备成功率一般仅为30％-40％左右。目的：探讨提高6-羟基多巴胺帕金森病大鼠模型成功率的方法，并对模型进行评价。设计：完全随机的实验研究。地点和材料：实验在安徽中医学院第一附属医院中心实验室完成，实验材料包括SD大鼠，6-OHDA，阿朴吗啡，兔抗TH血清，ABC试剂盒，SR-6N大鼠脑立体定向仪，JEM-100CX电镜。干预：取SD大鼠90只，将6-OHDA立体定向微量注射于左侧黑质区及黑质纹状体通路，观察大鼠行为及黑质细胞形态学变化。主要观察指标：旋转行为，免疫组织化学观察多巴胺能神经元数量，电镜观察多巴胺能神经元形态改变。结果：90只大鼠中经阿朴吗啡诱导后有64只(占71％)恒定转向右侧且结果稳定，旋转圈数30min&;gt;210r，被视为成功大鼠模型；免疫组化观察发现注射侧黑质区多巴胺能神经元较对侧明显减少，电镜观察发现其普遍存在凋亡及坏死样改变。结论：应用本方法可较快建立稳定的成功率较高的大鼠模型，但在病理和行为学等方面同自然患者仍有较多差异。     

帕金森病大鼠模型的行为学及神经元形态学评价

背景由于黑质致密部体积狭小,应用6-羟基多巴胺(6-Hydroxydopamine,6-OHDA)损毁黑质多巴胺神经元(Nigral dopaminergic neuron,NDN)制作帕金森病大鼠模型的成功率较低,一般仅为30%～40%左右.目的探讨帕金森病大鼠模型建立后的行为学及神经元形态学改变.设计完全随机的实验研究.地点和材料安徽省药物研究所,SD大鼠,6-OHDA,阿朴吗啡,兔抗TH血清,SR-6N大鼠脑立体定向仪等.干预将6-OHDA立体定向注射于90只SD大鼠的左侧黑质区及黑质纹状体通路,观察大鼠行为及多巴胺神经元形态学变化.主要观察指标旋转行为,震颤及其他异常行为,免疫组织化学观察,电镜观察.结果经阿朴吗啡诱导共筛选出64只成功大鼠模型(占71%);免疫组化观察发现注射侧黑质区NDN较对侧明显减少,电镜观察发现其普遍存在凋亡及坏死样改变.结论本方法是建立帕金森病大鼠模型的有效方法,在行为学和神经元形态学等方面同帕金森病人有许多相似之处.     

帕金森病大鼠模型的行为学及神经元形态学评价

背景：由于黑质致密部体积狭小，应用6-羟基多巴胺(6-Hydroxydopamine，6-OHDA)损毁黑质多巴胺神经元(Nigral dopaminergic neuron，NDN)制作帕金森病大鼠模型的成功率较低，一般仅为30％～40％左右。目的：探讨帕金森病大鼠模型建立后的行为学及神经元形态学改变。设计：完全随机的实验研究。地点和材料：安徽省药物研究所，SD大鼠，6-OHDA，阿朴吗啡，兔抗TH血清，SR-6N大鼠脑立体定向仪等。干预：将6-OHDA立体定向注射于90只SD大鼠的左侧黑质区及黑质纹状体通路，观察大鼠行为及多巴胺神经元形态学变化。主要观察指标：旋转行为，震颇及其他异常行为，免疫组织化学观察，电镜观察。结果：经阿朴吗啡诱导共筛选出64只成功大鼠模型(占71％)；免疫组化观察发现注射侧黑质区NDN较对侧明显减少，电镜观察发现其普遍存在凋亡及坏死样改变。结论：本方法是建立帕金森病大鼠模型的有效方法，在行为学和神经元形态学等方面同帕金森病人有许多相似之处。     

帕金森病大鼠发病过程中黑质神经元的缺失形式

目的:帕金森病最终都表现为患者中脑黑质多巴胺能神经元缺失,观察帕金森病发病过程中黑质神经元的缺失形式。方法:实验于2003-05/12在北京市神经外科研究所完成。取SD大鼠25只,按随机数字表法分为2组:①帕金森病模型组大鼠(n=21)立体定向下于右侧内侧前脑束区注射6-羟多巴(2g/L),术后皮下注射阿扑吗啡05mg/kg诱导旋转行为,大于7r/min视为成功偏侧帕金森病大鼠模型。②对照组大鼠(n=4)注射等剂量含0.2g/L抗坏血酸的生理盐水。分别于术后7d,2周、4周随机抽取帕金森病模型组大鼠(n=7)处死,取中脑组织切片进行Nissl染色,检测切片黑质致密区灰度值;应用DNA原位末端标记技术检测凋亡细胞,并与对照组对比。结果:死亡大鼠作随机补充,进入结果分析仍为25只大鼠。①实验成功复制出21只符合临床特点的帕金森病大鼠模型,多数大鼠于术后一两周出现旋转行为,2周时达到高峰,显著高于术后3,7d[(13.83±2.69,2.67±1.00,9.33±4.07)r/min(P<0.05)]。②术后7d,2周、4周模型组大鼠损毁侧黑质致密区的灰度值分别为149.50±13.14,117.29±10.62,110.41±17.34,均显著低于对照组(169.56±7.13)(P<0.05),模型2周组显著低于模型7d组(P<0.05)。③模型组大鼠术后2周的凋亡细胞最多,显著高于术后7d和4周组(3.60±0.27,3.07±0.39,2.27±0.43,P<0.05)。对照组未见到明显凋亡细胞。结论:6-羟多巴诱导的帕金森病大鼠损毁侧中脑组织黑质致密区中存在多巴胺能神经元凋亡,细胞凋亡在帕金森发病中可能起关键作用。     

胎鼠中脑细胞移植对帕金森病鼠纹状体感觉门控的影响

目的:在帕金森病鼠纹状体内移植孕14～18d同种胎鼠中脑细胞,观察植入细胞对纹状体感觉门控的影响及对大鼠旋转行为的改善。方法:①实验于2004-04/2005-05在昆明医学院生理教研室神经生理室完成。取孕龄14～18d的SD胚胎鼠,无菌条件下分离出中脑腹侧区组织,调整细胞浓度为1×1011L-1,取细胞成活率大于85%的细胞悬液用于移植。②选取3月龄健康成年雌性SD大鼠25只,制备帕金森病模型,于纹状体内埋置记录电极,坐标为AP:-0.8mm,ML:2.6mm,DV:4.2mm。25只模型大鼠皮下注射阿朴吗啡1mL/kg,以雌鼠首尾相接向损伤对侧旋转360°为1圈,定向旋转大于7r/min、持续时间大于30min为帕金森病模型成功的标志,未达到标准的动物舍弃不用。共17只造模成功,随机数字表法分成两组:中脑细胞移植组12只、DMEM培养液移植组5只。③中脑细胞移植组注入已制备好的中脑腹侧细胞悬液,每点注射3μL,注射速度为0.5μL/min,注射完毕留针5min。DMEM培养液移植组按同方法操作,每点注射DMEM培养液3μL。④记录清醒、自由活动状态下帕金森病鼠纹状体感觉门控的变化,以第2个声音诱发的峰-峰值/第1个声音诱发的峰-峰值(T/C)作为评价指标,并观察帕金森病鼠旋转行为的改变。结果:实验选取25只成年雌性SD大鼠进行造模,共17只造模成功而进入结果分析。①胎鼠中脑细胞移植对帕金森病大鼠纹状体感觉门控的影响:中脑细胞移植组大鼠移植后第3～19天,纹状体感觉门控的T/C值较DMEM培养液移植组明显增大(66.74±11.83,43.23±7.99,P<0.05)。而第21～27天中脑细胞移植组纹状体感觉门控的T/C值明显减小,两组基本相似(46.28±9.86,43.23±7.99,P>0.05)。②帕金森病大鼠旋转行为的评价结果:与移植前比较,DMEM培养液移植组大鼠于移植后第3,6,10,14,21,28天的旋转行为未见改善(P>0.05);中脑细胞移植组移植后第1周其旋转行为亦无明显变化(P>0.05),但第9～21天大鼠的旋转行为明显改善[(5.32±1.56)r/min,(8.78±2.19)r/min,P<0.05],第24天起大鼠每分钟的旋转次数出现逆转,为(8.33±2.19)r/min,与移植前基本相似(P>0.05)。结论:①接受胎鼠中脑细胞移植的帕金森病鼠,在一定时间内可使纹状体感觉门控的T/C值显著回升,且21d内可显著改善帕金森病鼠的旋转行为。②黑质-纹状体多巴胺系统功能的修复与多巴胺能神经元及其存活状况有关,移植较成熟的胚胎中脑细胞可使该系统功能的修复提前。