基于Smads信号通路探讨止消通脉宁干预TGF-β1诱导HK-2细胞转分化的研究

目的:探讨止消通脉宁含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化Smad信号通路的影响。方法:将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为6组:空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、中药含药血清低剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清中剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清高剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁含药血清)。药物干预24小时后,荧光定量PCR检测TβRI、TβRⅡ的mRNA表达,Western blot检测Smad 2、Smad 3的蛋白表达。结果:HK-2细胞经TGF-β1诱导后,TβRI、TβRⅡ的mRNA表达和Smad 2、Smad 3的蛋白表达显著上升,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),经止消通脉宁含药血清干预后,其表达逐步下降,与单纯TGF-β1诱导组相比差异有统计学意义(P<0.05)。而空白血清无此作用。结论:止消通脉宁能够调控TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化Smad信号通路,在一定程度上具有抑制肾间质纤维化的作用。     

止消通脉宁对TGF-β1诱导的HK-2细胞Smad 2、3、7 mRNA表达的影响

目的：探讨止消通脉宁对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)Smad 2、Smad 3、Smad 7的影响。方法：将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1：1)培养基培养;实验分为6组：空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、中药含药血清低剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清中剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清高剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁含药血清)。药物干预24小时后,荧光定量PCR检测Smad 2、smad 3、Smad 7的mRNA表达。结果：HK-2细胞经TGF-β1诱导后, Smad 2、smad 3的mRNA表达显著上升,Smad 7的mRNA表达下降,与空白对照组相比有显著性差异(P＜0.05),但经止消通脉宁含药血清干预后, Smad 2、smad 3的mRNA表达逐步下降,Smad 7的mRNA表达上调,与单纯TGF-β1诱导组相比有显著性差异(P＜0.05)。而空白血清无此作用。结论：止消通脉宁能够调控TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化Smad信号通路mRNA表达的作用,在一定程度上具有抑制肾间质纤维化的作用。     

蕲艾提取液对免疫性肝纤维化大鼠细胞增殖和凋亡的影响

目的观察蕲艾提取液对肝纤维化大鼠肝组织中TGF-β1、CyclinD1和Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响,探讨其对肝纤维化作用及相关机制。方法 Wister大鼠72只被随机分为正常对照组、肝纤维化模型组、小、中、大剂量蕲艾提取液处理组和丹参对照组,采用猪血清腹腔内注射法构建肝纤维化大鼠模型;采用荧光定量PCR和Western blot检测大鼠肝脏组织TGF-β1、CyclinD1和Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平。结果各蕲艾提取液处理组与肝纤维化模型组相比,肝组织中TGF-β1、CyclinD1和Bcl-2 mRNA和蛋白水平均明显降低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论蕲艾提取液可显著抑制肝组织中TGF-β1、Cyclin D1mRNA及其蛋白表达,抑制细胞增殖与活化;同时下调抗凋亡基因Bcl-2的表达,促进肝星状细胞的凋亡,降低细胞外基质合成,从而达到抗纤维化的作用。     

糖耐康对TGF-β1诱导的HK-2细胞Smads通路的影响

目的:探讨糖耐康(TNK)含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化Smad信号通路的影响。方法:将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为6组:空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110μg·L-1)、空白血清对照组(TGF-β110μg·L-1+10%空白血清)、TNK高浓度组(TGF-β110μg·L-1+20%糖耐康含药血清)、TNK中浓度组(TGF-β110μg·L-1+10%糖耐康含药血清)、TNK低浓度组(TGF-β110μg·L-1+5%糖耐康含药血清)。药物干预24 h后,荧光定量PCR检测TGF-β1及其Ⅰ,Ⅱ受体(TβRI,TβRⅡ)的mRNA表达,Western blot检测Smad 2、Smad 3的蛋白表达。结果:HK-2细胞经TGF-β1诱导后,TβRⅠ,TβRⅡ的mRNA表达和Smad 2,Smad 3的蛋白表达显著上升,与空白对照组相比有显著性差异(P<0.05),但经TNK含药血清干预后,其表达逐步下降,与单纯TGF-β1诱导组及TGF-β1+空白血清对照组相比有显著性差异(P<0.05)。而空白血清无此作用。结论:TNK能够调控TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化Smad信号通路,在一定程度上具有抑制肾间质纤维化的作用。     

鳖甲煎丸及罗格列酮药物血清对大鼠肝星状细胞TβRⅡ和Smad3mRNA表达的影响

目的:观察鳖甲煎丸和罗格列酮对由TGF-β1刺激的大鼠肝星状细胞(HSC)内TβRⅡ和Smad3mRNA表达的影响,探讨药物抗肝纤维化的作用机制。方法:采用中药血清药理学的方法,在HSC培养体系中添加外源性TGF-β1,运用反转录聚合酶联反应(RT-PCR)法检测不同剂量鳖甲煎丸和罗格列酮药物血清对由TGF-β1刺激的HSC TβRⅡ和Smad3mRNA表达的影响。结果:TGF-β1上调HSC TβRⅡ和Smad3mRNA的表达,鳖甲煎丸和罗格列酮均下调TGF-β1刺激下的HSC TβRⅡ和Smad3mRNA的表达,鳖甲煎丸作用随剂量增加逐渐增强。结论:鳖甲煎丸和罗格列酮可能是通过在不同位点抑制TGF-β1/Smad信号转导达到抗肝纤维化目的;鳖甲煎丸作用呈剂量依赖性。     

芪连扶正胶囊调控TGF-β/smad信号通路抑制肺癌转移的研究

目的:观察芪连扶正胶囊对TGF-β/smad通路相关分子表达的影响,探讨其相关机制。方法:体外培养肺癌A549细胞,制备芪连扶正胶囊含药血清,按实验分组干预,Western blotting检测TβRⅠ、TβRⅡ、Smad2/3、Smad4、Smad7的表达,RT-PCR检测TGF-β1 mRNA表达。结果:芪连扶正胶囊含药血清可上调TβRⅠ、TβRⅡ、Smad2/3、Smad4表达,下调Smad7、TGF-β1mRNA在肺癌A549细胞中的表达,其中,各药组分子表达量除芪连扶正胶囊低剂量组外,与对照组相比均有显著性差异(P0.01),与化疗组相比,联合组及芪连扶正胶囊各组亦有显著性差异(P0.05或P0.01)。结论:芪连扶正胶囊含药血清可通过纠正TGF-β/smad通路紊乱发挥抗肺癌转移作用。     

蕲艾提取液对免疫性肝纤维化大鼠Smad3、Smad7表达的影响

目的 观察蕲艾提取液对肝纤维化大鼠肝组织中Smad3、Smad7 mRNA和蛋白表达的影响,探讨其对肝纤维化作用及相关机制.方法 Wister大鼠72只被随机分为正常对照组、肝纤维化模型组、小、中、大剂量蕲艾提取液处理组和丹参对照组,采用猪血清腹腔内注射法构建肝纤维化大鼠模型;病理切片HE染色评价各组大鼠肝组织纤维化程度;采用荧光定量PCR和Western blot检测大鼠肝脏组织Smad3、Smad7 mRNA和蛋白表达水平.结果 各蕲艾提取液处理组与肝纤维化模型组相比,组织病理学上肝纤维化程度显著减轻;肝组织中Smad3 mRNA和蛋白水平均明显降低,Smad7 mRNA和蛋白水平均明显升高,差异有统计学意义.结论 蕲艾提取液可以降低肝纤维化大鼠肝组织Smad3的表达,上调Smad7的表达,从而发挥抗肝纤维化作用.     

乳移平含药血清对乳腺癌4T1细胞增殖和侵袭影响的实验研究

  目的：研究乳移平含药血清对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖与侵袭的影响,并探讨其作用机制。  方法：①制备不同浓度的乳移平含药血清(10%、20%、30%、40%),并以10%、20%、30%、40%空白血清作对照,采用噻唑蓝(MTT)方法测定含药血清对4T1细胞存活率的影响,筛选最佳作用浓度和最佳作用时间。②设空白对照组、TGF-β1对照组、TGF-β1 10%乳移平含药血清组、TGF-β1 20%乳移平含药血清组;除空白对照组外,其他组细胞都用2 mg/L的TGF-β1预处理3 h,再分别选择空白血清或含药血清作用48 h。采用Transwell侵袭实验检测含药血清对TGF-β1预处理的4T1细胞侵袭率的影响;Western blotting及Real-time PCR检测乳移平含药血清对经TGF-β1预处理的4T1细胞Smad4和Smad7表达的影响。  结果：①乳移平含药血清显著抑制4T1细胞的增殖活性;选择10%和20%作用浓度,48 h作用时间用于后续实验。②乳移平含药血清显著抑制TGF-β1诱导的4T1高侵袭能力,并且存在浓度依赖性;Western blotting和Real-time PCR结果显示,乳移平含药血清明显逆转了TGF-β1诱导的Smad4蛋白及mRNA的高表达,但对TGF-β1诱导的Smad7蛋白及mRNA表达量上调没有影响。  结论：乳移平含药血清能够抑制4T1的增殖和侵袭能力,其作用机制可能与调控TGF-β/Smads信号通路相关因子的表达有关。     

扶肝化纤汤含药血清对TGF-β1诱导HSC-T6细胞增殖及TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨扶肝化纤汤抗肝纤维化的可能作用机制。方法将40只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、扶肝化纤汤组,每组20只,扶肝化纤汤组以16. 78g/kg扶肝化纤汤灌胃,正常对照组予等体积生理盐水灌胃,每日1次,连续7天,末次给药后于大鼠腹主动脉取血制备含药血清。培养大鼠肝星状细胞HSC-T6,设置空白对照组及1%、2%、5%、8%、10%、15%、20%扶肝化纤汤含药血清组,检测不同浓度扶肝化纤汤含药血清对转化生长因子β1 (TGF-β1)诱导的HSC-T6活化增殖的影响,确定15%扶肝化纤汤含药血清为最佳给药浓度。细胞实验分为空白对照组(HSC-T6细胞)、正常组(HSC-T6细胞+正常对照血清+TGF-β1)、中药组(HSC-T6细胞+15%扶肝化纤汤含药血清+TGF-β1);阻断组1 (HSC-T6细胞+SIS3)、阻断组2 (HSC-T6细胞+正常对照血清+TGF-β1+SIS3)及阻断组3 (HSC-T6细胞+15%扶肝化纤汤含药血清+TGF-β1+SIS3),培养24 h后比较各组HSC-T6细胞增殖抑制率及细胞中Smad 3、Smad 7、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原mRNA表达。结果与空白对照组比较,正常组、中药组、阻断组2、阻断组3 HSC-T6细胞增殖抑制率差异有统计学意义(P 0. 01)。与正常组比较,中药组、阻断组2、阻断组3HSC-T6细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(P 0. 01)。与中药组比较,阻断组3抑制率明显升高(P 0. 01)。与空白对照组比较,中药组、阻断组2、阻断组3均可下调Smad 3、Ⅰ型胶原mRNA表达,上调Smad 7、α-SMA mRNA表达(P 0. 01);正常组可上调Smad 3、α-SMA、Ⅰ型胶原mRNA表达,下调Smad 7mRNA表达(P 0. 01)。与正常组比较,中药组、阻断组2、阻断组3均可下调Smad 3、α-SMA、Ⅰ型胶原mRNA表达,上调Smad 7 mRNA表达(P 0. 01)。与中药组比较,阻断组3可下调Smad 3、α-SMA、Ⅰ型胶原mRNA表达,上调Smad 7 mRNA表达(P 0. 01)。结论扶肝化纤汤能够抑制TGF-β1诱导的HSC-T6细胞的活化增殖,其可能通过影响TGF-β1/Smad信号转导通路发挥抗肝纤维化作用。     

镰形棘豆提取物对人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:本实验通过观察镰形棘豆提取物含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的作用,探讨其在肾间质纤维化方面的作用及机制。方法:采用镰形棘豆提取物(300mg/kg)给大鼠灌胃,每天2次,连续3天。3天后大鼠股动脉采血,分离血清,即得镰形棘豆提取物含药血清。体外培养HK-2细胞,培养基为含10%胎牛血清的DMEM/F12(1:1);细胞分为4组:空白对照组、空白血清对照组(TGF-β1 10 ng/ml+10%空白血清)、镰形棘豆提取物组(TGF-β1 10 ng/ml+10%镰形棘豆提取物含药血清)、转化生长因子-β1诱导组(TGF-β1 10 ng/ml)。药物干预细胞后,采用免疫组化技术测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达,ELISA技术测Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和纤连蛋白(FN)的含量,荧光定量PCR检测转化生长因子-β受体I(TβRI)、受体II(TβRII)的mRNA表达,Western blot检测Smad 2、smad 3的蛋白表达。结果:正常的HK-2细胞只表达E-cadherin,不表达α-SMA。但经TGF-β1诱导后细胞转分化,E-cadherin的表达开始减弱,α-SMA表达逐渐增强,药物干预后,α-SMA表达明显减弱,E-cadherin表达增强。与空白对照组相比,TGF-β1诱导组ColⅠ、ColⅢ、FN的含量显著增加,在24h时分别为(197.4±0.7)、(32.7±0.2)、(754.5±4.1),72h时分别为(216.4±0.8)、(38.3±0.1)(995.4±1.5),P﹤0.05;与TGF-β1诱导组相比,镰形棘豆提取物组ColⅠ、ColⅢ、FN的分泌显著下降,72h时作用更为显著,含量分别为(205.5±0.7)、(35.0±0.3)、(892.4±0.9),P﹤0.05。与空白对照组相比,TGF-β1诱导组TβRI(11.08±0.10)、TβRII(11.57±0.12)的mRNA表达和Smad 2(0.971±0.017)、smad 3(0.972±0.011)的蛋白表达显著上升,P﹤0.05;与TGF-β1诱导组相比,镰形棘豆提取物组TβRI(9.788±0.379)、TβRII(8.452±0.250)mRNA表达和Smad 2(0.536±0.013)、Smad3(0.530±0.035)蛋白表达也减少,P﹤0.05。空白血清则无此作用。结论:镰形棘豆提取物能够减少细胞外基质成分分泌,调控Smads信号通路,抑制肾小管上皮细胞转分化,在一定程度上具有防治肾间质纤维化的作用。     

姜黄素对肝星状细胞转化生长因子β1及受体和Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的探讨姜黄素对体外培养大鼠肝星状细胞(HSC)增殖、转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体、下游信号通路及效应的影响。方法培养HSC细胞,给予不同浓度姜黄素处理,采用MTT比色法检测HSC细胞增殖;Hoechst 33342染色检测姜黄素对HSC凋亡的影响;采用免疫细胞化学法检测Smad3、Smad7蛋白表达;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β1及其I、II受体(TβRI、TβRII)和I、III型胶原(Col-I、Col-III)mRNA的表达。结果姜黄素能抑制HSC细胞增殖,诱导HSC细胞凋亡,免疫组化结果显示姜黄素能抑制HSC表达Smad3,并提高Smad7表达,RT-PCR结果显示姜黄素使HSC细胞TGF-β1及其I、II受体、Col-I、Col-III mRNA表达降低。结论姜黄素能抑制HSC增殖和活化,抑制TGF-β1及其受体和信号通路,是其抗肝纤维化的作用机制之一。     

小柴胡汤含药血清对HSC-T6细胞增殖及TGF-β/Smad信号通路的影响

目的:研究小柴胡汤抑制TGF-β1/Smad信号通路介导肝星状细胞活化的作用机制。方法:用蒸馏水、水飞蓟宾悬液、小柴胡汤颗粒溶剂对大鼠连续灌胃6 d,末次灌胃后2 h腹主动脉取血,提取各组含药血清,并设置2.5%、5%、10%3个浓度梯度,用DMEM培养基配置成含药培养基,对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)进行培养。用CCK-8法测定小柴胡汤、水飞蓟宾细胞毒性,RT-PCR法测定各组HSC-T6细胞中TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA表达,Weston Blot法检测各组HSC-T6细胞中TGF-β1、Smad2、Smad3、磷酸化Smad2/3、Smad7蛋白表达。结果:与空白对照组相比,小柴胡汤和水飞蓟宾含药血清处理24、36、48和60 h后,HSC-T6细胞存活率明显降低;在含药血清处理60 h后,TGF-β1、Smad2、Smad3的mRNA水平明显下降,Smad7明显增强,同时TGF-β1、Smad2、Smad3、磷酸化Smad2/3的蛋白表达明显下调,Smad7上调,具有统计学意义。结论:小柴胡汤可抑制肝星状细胞增殖活化,其机制与下调TGF-β1的mRNA表达,抑制Smad2/3的磷酸化,上调Smad7的蛋白表达有关。     

糖耐康对转化生长因子-β1诱导人肾小管上皮细胞Smad 2、3、7 mRNA表达的影响

目的观察糖耐康药物血清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)Smad 2、3、7 mRNA的表达,探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL＋10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL＋5%糖耐康药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL＋10%糖耐康药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL＋20%糖耐康药物血清)。药物干预24 h后,荧光定量PCR检测Smad 2、3、7 mRNA的表达。结果 HK-2细胞经TGF-β1诱导后,Smad 2、3 mRNA的表达显著上升,而Smad 7的表达减弱,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),经糖耐康药物血清干预后,Smad 2、3 mRNA的表达逐步下降,而Smad 7 mRNA的表达逐步上升,与单纯TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。结论糖耐康在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能与调节纤维化信号通路Smad 2、3、7mRNA表达有关。     

加味茵陈四逆汤含药血清对TGF-β1干预的大鼠肝星状细胞TGF-β1/Smads通道及胶原蛋白的影响

目的:探讨加味茵陈四逆汤含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)干预的大鼠肝星状细胞TGF-β1/Smad通道相关蛋白及胶原蛋白3(Collagen3)生成量的影响。方法:以大鼠肝星状细胞HSC-T6为研究对象,将细胞分为空白组,模型组,阳性药物组(甲强龙,10%含药血清),加味茵陈四逆汤高、中、低剂量组(10%含药血清),共6组。除空白组外,其余均给予TGF-β1(10 g·L-1)并采用相应10%的含药血清培养,并采用蛋白质免疫印迹(Western blot)的方法检测各研究组含药血清对大鼠肝星状细胞HSC-T6 Smad3,Smad7,Collagen3蛋白表达的影响。结果:与空白组比较,模型组HSC-T6细胞Smad3,Smad7,Collagen3蛋白表达升高,Collagen3蛋白表达升高较为明显(P0.05);与模型组比较,加味茵陈四逆汤低剂量明显降低Smad3蛋白表达(P0.05),加味茵陈四逆汤中剂量明显降低Collagen3蛋白表达(P0.05)。结论:加味茵陈四逆汤含药血清使Smad3,Collagen3蛋白表达下调,Smad7未见明显变化,提示本药在离体条件下可以延缓肝纤维化的进程。     

大黄虫丸经旁分泌途径对早期肝纤维化的干预作用

目的 观察大黄(庶虫)虫丸经旁分泌途径对大鼠肝星状细胞增殖及其表达TGF-β_1 基因的影响. 方法采用Nycodenz 分离液非连续密度梯度离心法同步分离急性CCl_4 损伤模型大鼠和正常大鼠肝的枯否细胞(KC)和星状细胞(HSC).在制备正常鼠血清和大黄(庶虫)虫丸药物血清的基础上,将它们分别加入KC 培养板内作用48 h 后制备成正常鼠KC 条件培养液(NKCCM)和损伤鼠KC 条件培养液(KCCM).将NKCCM 和KCCM 作用于活化的HSC 24 h 后,采用MTT 法和3H-TdR 掺入法检测HSC 增殖的变化;采用半定量RT-PCR 法扩增TGF-β_1 mRNA 以检测HSC 表达TGF-β_1 基因的情况. 结果旁分泌组各组的HSC 增殖幅度及TGF-β_1 基因的相对表达量较正常对照组NKCCM 组均明显增加(P<0.05或0.01).同时旁分泌组中,含药血清作用的5%,10%和20% KCCM 组较无药物血清作用的0% KCCM 组HSC 的增殖能力及TGF-β_1 基因的相对表达量则下降,且随药物浓度的升高逐渐降低,其组间差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 大黄(庶虫)虫丸可明显抑制经旁分泌途径活化的大鼠HSC 的增殖及TGF-β_1 基因的表达,且其抗肝纤维化效应与药物剂量间存在一定的依赖关系.     

半夏泻心汤人含药血清对HP感染GES-1细胞TGF-β/Smad信号通路的影响

目的:探讨半夏泻心汤人含药血清对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)感染人胃黏膜上皮GES-1细胞转化生长因子-β(TGF-β)/信号转导蛋白(Smad)信号通路的影响,以揭示该方治疗消化性溃疡可能的作用机制。方法:GES-1细胞分为空白组,HP感染模型组,健康人血清组,雷贝拉唑血清组,用药前血清组,10%半夏泻心汤血清组,20%半夏泻心汤血清组。除空白组外,其余各组均接种HP造成幽门螺杆菌感染模型,采用雷贝拉唑、半夏泻心汤含药血清及用药前、健康人血清进行干预,24 h后收集细胞及其上清液,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测Smad2/3,Smad7,TGF-β1及磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3),磷酸化Smad7(p-Smad7)蛋白的表达。结果:与空白组比较,HP可明显抑制GES-1细胞的增殖,降低GES-1细胞内Smad2/3,TGF-β1及p-Smad2/3蛋白表达,增加Smad7及p-Smad7蛋白表达(P0.05,P0.01);与HP感染模型组比较,雷贝拉唑血清组及10%,20%半夏泻心汤血清组可明显降低HP对GES-1细胞增殖的抑制,增加GES-1细胞内Smad2/3,TGF-β1,p-Smad2/3蛋白表达,并明显降低Smad7,p-Smad7蛋白表达(P0.05,P0.01);与用药前血清组比较,加入雷贝拉唑、半夏泻心汤含药血清后均可降低HP对GES-1细胞增殖的抑制,其中雷贝拉唑血清组及20%半夏泻心汤血清组可增加GES-1细胞内Smad2/3,TGF-β1,p-Smad2/3蛋白表达,降低Smad7,p-Smad7蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:半夏泻心汤能够减轻HP诱导GES-1细胞的损伤,促进GES-1细胞增殖,治疗HP相关性消化性溃疡,提高溃疡愈合质量,其机制可能与其调控TGF-β/Smad信号通路有关。     

蕲艾提取液对免疫性肝纤维化大鼠肝组织Bcl-2表达的影响

目的 研究蕲艾提取液对免疫性肝纤维化大鼠肝组织Bcl-2表达的影响.方法 72只Wister大鼠被随机分为正常对照组、肝纤维化模型组、蕲艾提取液低、中、高剂量组和丹参组.猪血清腹腔内注射法构建肝纤维化大鼠模型.采用荧光定量PCR和Western blot检测大鼠肝脏组织Bcl-2蛋白和,mRNA表达水平.结果 与肝纤维化模型组比较,蕲艾提取液组可下调Bcl-2 mRNA及蛋白表达(P<0.05,P<0.01).结论 蕲艾提取液可下调Bcl-2的表达,促进细胞凋亡,这可能是蕲艾提取液药物血清抗肝纤维化作用机制之一.     

清肝活血方对肝星状细胞TGF-β1表达及细胞内信号传递的影响

目的:研究清肝活血方抗肝纤维化疗效及其机理。方法:以不同浓度清肝活血方含药血清干预HSC-T6细胞株,RT-PCR法检测TGF-β1、Smad3、Smad7mRNA表达,免疫细胞化学法检测TGF-β1蛋白的表达。结果:清肝活血方含药血清能抑制HSC-T6细胞株的增殖,下调TGF-β1、Smad3mRNA的表达以及TGF-β1蛋白表达水平,上调Smad7mRNA的表达,TGF-β1表达变化与Smad3表达改变的趋势一致。不同浓度的清肝活血方含药血清作用强度虽有一定的量效关系趋势,但无统计学差异。结论:清肝活血方的抗肝纤维化作用可能是通过非特异性作用于TGF-β1和Smad,从而抑制HSC的增殖。     

丹芍化纤胶囊含药血清对大鼠肝星状细胞Gremlin和BMP7表达的影响

目的:观察丹芍化纤胶囊(DSHX)含药血清对大鼠肝星状细胞(HSC)Gremlin和骨形态发生蛋白7(BMP7)表达的影响,探讨该药治疗肝纤维化的可能机制。方法:将20只雄性Wistar大鼠随机分为4组,每组5只,分别经DSHX低剂量(0.5 g·kg-1),DSHX高剂量(1.0 g·kg-1),扶正化瘀胶囊(0.8 g·kg-1)及生理盐水ig 5 d,2次/d,其后股动脉取血制备大鼠DSHX含药血清、扶正化瘀胶囊含药血清及生理盐水血清,4组血清分别干预体外培养的HSC-T6,用MTT比色法测定各组HSC的增殖效应,ELISA法测培养液上清Ⅰ型胶原(ColⅠ),Ⅲ型胶原(ColⅢ)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的含量,免疫细胞染色法检测各组HSC内转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达,采用RT-PCR法检测各组HSC Gremlin,BMP7 mRNA的表达,Western blot检测各组HSC Gremlin,BMP7蛋白的表达。结果:与生理盐水血清组比较,DSHX低、高剂量组含药血清均可显著抑制大鼠HSC的增殖(P0.05),抑制率与扶正化瘀胶囊血清组相当;DSHX低、高剂量血清组培养液上清ColⅠ,ColⅢ与α-SMA的含量明显减少(P0.01,P0.05);HSC内TGF-β1蛋白的表达强度显著降低(P0.01),与扶正化瘀胶囊血清组相当。与生理盐水血清组比较,DSHX低、高剂量血清组Gremlin mRNA及蛋白表达显著下降,而BMP7 mRNA及蛋白表达显著增多(P0.01),与扶正化瘀胶囊血清组相当。结论:丹芍化纤胶囊可抑制体外培养的大鼠HSC增殖与活化,减少细胞外基质的合成,对大鼠肝纤维化有潜在的治疗作用,其机制可能与下调HSC Gremlin,上调BMP7的表达有关。     

肾浊清颗粒含药血清对肾小管上皮细胞TGF-β/Smads信号传导的影响

目的:探讨肾浊清颗粒对TGF-β刺激后小鼠肾小管上皮细胞的影响。方法:将肾小管上皮细胞用含10%胎牛血清进行细胞培养,至80%融合后,分为正常对照组、模型组、肾浊清低、中、高剂量组及贝那普利组。检测肾浊清含药血清对肾小管上皮细胞增殖及TGF-β干预下肾小管上皮细胞增殖、肾小管上皮细胞Smad2/Smad7蛋白表达的影响。结果:TGF刺激后,肾小管上皮细胞增殖明显抑制,以不同浓度肾浊清含药血清干预肾小管上皮细胞对TGF刺激细胞增殖抑制具有逆转作用。TGF刺激后Smad2 mRNA表达显著增加,而Smad7 mRNA表达明显降低,给予不同浓度含药血清干预后,5%肾浊清含药血清、10%贝多普利含药血清可显著下调Smad2 mRNA表达;5%、10%肾浊清含药血清均可显著上调Smad7mRNA表达。结论:肾浊清颗粒含药血清可以对受损的小鼠肾小管上皮细胞起到一定的修复作用;可以通过抑制Smad2 mRNA的表达,上调Smad7 mRNA的表达来影响TGF-β/Smads信号传导通路,进而参与延缓肾纤维化。