细胞外信号调节的蛋白激酶对糖尿病大鼠心肌缺血预处理的影响

目的：观察缺血预处理（IPC）对糖尿病大鼠心脏缺血/再灌注心律失常和心功能的影响以及与心肌细胞外信号调节的蛋白激酶1/2(ERK1/2)的关系。方法： 利用四氧嘧啶复制糖尿病大鼠模型。8周后，采用冠脉结扎及放松的方法复制心肌IPC及缺血再灌注模型 。动物分为非糖尿病IPC组（A组）、非糖尿病非IPC组（B组）、糖尿病IPC（C组）及糖尿病非IPC组（D组）。观察标准肢体导联（Ⅱ）心电图、左心室发展压（LVDP）、收缩期和舒张期左心室内压的最大变化速率（±dp/dtmax%）及心肌磷酸化细胞外信号调节的蛋白激酶1/2(ERK1/2)表达。结果： （1）A组心律失常评分显著低于B组和C组（均P<0.01），而其余各组间均无显著差异（均P>0.05）。（2）A组LVDP值和+dp/dtmax %明显高于B组和C组（均P<0.01），而其余各组间均无显著差异；-dp/dtmax% A组显著高于B组（P<0.01），而其余各组间均无显著差异（均P>0.05）。（3）A组心肌ERK1/2磷酸化表达明显高于B组和C组，而C组与D组比较没有明显差异。结论： IPC可以减轻非糖尿病大鼠缺血再灌注心律失常的严重程度，改善心功能，而在糖尿病大鼠中，这种保护作用并不明显。ERK1/2激活可能是IPC心肌保护作用的产生机制之一；糖尿病大鼠IPC保护作用减弱可能与其不能明显激活ERK1/2有关。     

苯那普利和坎地沙坦对自发性高血压大鼠心肌肥厚过程中血流动力学及TGF-β1的影响

目的 研究苯那普利和坎地沙坦单用或联用对自发性高血压大鼠心肌肥厚过程中血流动力学及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响.方法 给予12周龄自发性高血压大鼠苯那普利10 ms/(kg·d)、坎地沙坦4 mg/(kg·d)或半剂量联合治疗,12周后,利用超声心动图检测射血分数,测定血流动力学参数,同时检测左室质量指数和左室后壁厚度,HE染色观察心肌病理学改变,免疫组化和蛋白印迹法测定心肌中TGF-β1蛋白的表达.结果 苯那普利和坎地沙坦均可降低LVMI和左室后壁厚度(P<0.01),改善血流动力学参数,降低心肌小动脉中膜面积与管腔面积比值(P<0.01),减少心肌TGF-β1表达(P<0.01),联合应用具有协同作用,且能增加射血分数(P<0.01).结论 苯那普利和坎地沙坦联用对于逆转心肌肥厚,调节心脏血流动力学参数以及心功能具有协同作用,可能与下调TGF-β1的表达有关.     

不同年龄高血压大鼠心肌中MKP-1的表达及对心肌肥厚的影响

目的：研究不同年龄的自发性高血压大鼠（SHR）和Wistar Kyoto大鼠（WKY）心室肌组织中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）及其磷酸酶（MKP-1）的表达以及与心肌肥厚的关系。方法： 用左心室重量与体重的比值作为心肌肥大指数并以此指标反映心肌肥厚；分别用Western blotting方法和RT-PCR法半定量测定心室肌组织中磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）的蛋白表达和MKP-1 mRNA的含量。结果： （1）SHR的血压自8周龄起明显高于WKY（P<0.01），心肌肥大指数明显大于WKY（P<0.05），ERK和MKP-1的表达均比WKY高（P<0.05）；（2）SHR的血压随年龄增长而升高（P<0.05），至14周趋于稳定，心肌肥大指数则在24周时出现激增（P<0.01）；（3）p-ERK随年龄增长呈递增趋势，而MKP-1呈递减趋势，且与心肌肥大指数和ERK的表达呈负相关（P<0.01）。结论： MKP-1在高血压大鼠随年龄和血压增加的心肌肥厚过程中起重要作用，其表达逐渐下降可能是导致ERK激活增加，进而引起心肌细胞肥大的重要原因。     

激活的细胞外调节激酶及磷酸酶在房颤中的作用研究

目的:研究心房颤动患者心房肌细胞外调节激酶及磷酸酶基因表达的改变,探讨房颤发生时细胞信号转导途径的变化。方法:30例接受开胸手术者(包括房颤20例、窦性心律患者10例),手术时取左心房组织约200mg,采用RT-PCR、Westernblot技术,检测心房肌钙调磷酸酶调节亚单位(calcineurinB)、丝裂原激活的蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)mRNA表达量,细胞外调节激酶1(ERK1)、磷酸化细胞外调节激酶1(P-ERK1)蛋白表达量的改变。结果:房颤者calcineurinB、MKP-1mRNA、P-ERK1蛋白表达量显著高于窦性心律者,而ERK1蛋白表达无差异。结论:房颤患者心房肌细胞外调节激酶及磷酸酶呈激活状态,可能与心房颤动的发生与维持有关。     

细胞外信号调节激酶在TPPB促进PC12产生可溶性淀粉样前体蛋白中的作用

目的：观察在蛋白激酶C(PKC)激动剂TPPB促进可溶性淀粉样前体蛋白(sAPPα)释放过程中参与的信号转导通路。方法:以1 μmol/L的TPPB作用于PC12细胞3 h，同时加入信号转导通路的抑制剂，Western印迹法检测上清液内sAPPα的含量和细胞外信号调节激酶(p42/44MAPK)及磷酸化的p42/44MAPK的表达。结果:1 μmol/L的TPPB作用于PC12细胞3 h可以显著增加上清液内sAPPα的含量，细胞外信号调节激酶抑制剂U0126、c-Jun氨基末端激酶抑制剂SP600125和蛋白酪氨酸激酶抑制剂genistein可以部分消除此作用；而p38MAPK抑制剂SB203580对sAPPα的含量无显著影响。1 μmol/L的TPPB可以使磷酸化的p42/44MAPK表达增加，而对总的p42/44MAPK无显著影响。结论:细胞外信号调节激酶、c-Jun氨基末端激酶和蛋白酪氨酸激酶可能参与TPPB促进sAPPα生成的过程。     

不同年龄高血压大鼠血管平滑肌中ERK和MKP-1的表达

目的：研究不同年龄的自发性高血压大鼠（SHR）和Wistar Kyoto大鼠（WKY）主动脉平滑肌中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）及其磷酸酶（MKP-1）的表达及其与高血压的关系。 方法： 用tail-cuff测量大鼠尾动脉血压；分别用Western blotting法和RT-PCR法半定量测定血管平滑肌中磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）和MKP-1的蛋白表达以及MKP-1 mRNA的含量。 结果： （1）SHR的血压自8周龄起明显高于WKY（P<0.01），且随年龄增长而升高（P<0.05）至14周以后趋于稳定；（2）SHR主动脉平滑肌中的p-ERK表达明显高于同年龄的WKY（P<0.01），随年龄增长而递增（P<0.05），与血压呈正相关；（3）SHR主动脉平滑肌中MKP-1蛋白明显高于同龄WKY，而mRNA的表达在5周龄时明显高于WKY，之后均随年龄的增长而递减（P<0.05），与血压和ERK呈负相关，而WKY下降不明显。 结论： MKP-1在高血压的发生和发展过程中起重要作用，其表达逐渐下降可能是导致ERK激活增加，从而导致血管平滑肌细胞增殖、血压升高的重要原因。     

苯那普利对自发性高血压大鼠肾脏Aquaporin 2表达的影响

目的：观察苯那普利对水孔蛋白2（AQP2）表达的影响。 方法： 雄性自发性高血压大鼠（SHR）16只，8周龄，体重200-300 g，随机分成2组，每组8只，分别给予生理盐水（SHRctrl）、苯那普利（SHRben）灌胃。灌胃8周后断头取血，放免法测定血浆血管升压素（AVP）浓度。取肾脏近髓组织100 mg，RT-PCR法检测大鼠肾脏AQP2 mRNA的表达，另取相应组织以免疫组化法检测AQP2的表达情况。 结果: SHRctrl组和SHRben组大鼠药物干预前血压无明显差异，大鼠苯那普利灌胃8周后，血压明显下降，显著低于SHRctrl组大鼠血压［（112±17）mmHg vs (169±9) mmHg，P<0.05］。SHRben组大鼠肾脏AQP2 mRNA（0.48±0.11 vs 0.72±0.17，P<0.05）、AQP2蛋白表达水平（0.47±0.09 vs 0.62±0.12, P<0.05）、血浆AVP浓度［（61.79±9.19）ng/L vs (87.16±8.20)ng/L, P<0.05］均显著低于SHRctrl组。 结论： 苯那普利抑制SHR肾脏水孔蛋白2的高表达。     

磷酸化ERK1/2对大鼠体外血小板聚集的可能作用

目的：观察两种激动剂诱导下，MEK1/2抑制剂PD098059对大鼠体外血小板聚集及磷酸化ERK1/2的影响。方法： 采用比浊法测定血小板最大聚集率，并观察最大聚集率发生时间，以及PD098059对血小板聚集的抑制率；采用Westernblot测定ERK1/2磷酸化表达。结果： 凝血酶和ADP均可诱导血小板聚集及 ERK1/2磷酸化的表达；PD098059ADP降低血小板最大聚集率及ERK1/2磷酸化表达；凝血酶与ADP诱导的血小板最大聚集率、最大聚集率发生时间及对PDO98059的反应均有差异。结论： ERK1/2为血小板聚集的信号转导途径之一；但在不同激活剂引起的血小板聚集中所起的作用不尽相同。     

苯那普利对糖尿病大鼠肾皮质JAK/STAT信号蛋白磷酸化的影响

目的: 探讨血管紧张素Ⅱ转换酶抑制剂苯那普利对糖尿病大鼠肾皮质p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3信号蛋白表达的影响。方法: 雄性Wistar大鼠随机分为对照组、糖尿病组和苯那普利治疗组。腹腔注射STZ诱发糖尿病大鼠模型，治疗组每日灌胃给予苯那普利10 mg/kg，共2周。采用免疫沉淀和Western blotting检测JAK2磷酸化，Western blotting检测肾皮质p-STAT1、p-STAT3和TGF-β₁蛋白的表达，半定量RT-PCR检测肾皮质细胞TGF-β₁ mRNA的表达。结果: 糖尿病组肾皮质p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3及其TGF-β₁表达明显高于对照组，同时TGF-β₁ mRNA表达亦明显强于对照组；苯那普利治疗组p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3表达低于糖尿病组，同时TGF-β₁ 蛋白及其mRNA 表达亦低于糖尿病组。结论: JAK/STAT信号途径可能参与糖尿病早期肾脏变化的过程，苯那普利的肾脏保护作用可能部分是通过影响JAK/STAT信号途径的激活而实现。     

苯那普利对兔主动脉粥样硬化斑块和血脂的影响

目的 苯那普利是否具有抑制实验性动脉粥样硬化斑块形成的作用。方法 血清TC、TG、LDL－C、HDL-C，定性定量分析主动脉病变面积。结果 高脂组（AS组）和给药组（L组）血脂水平比正常对照组（C组）明显升高（P＜0.01)，L组动脉粥样硬化斑块面积／血管内膜面积、平均最大内膜厚度、平均最大内膜／中膜均明显低于AS组（P＜0.01)。结论 苯那普利能有效抑制动脉粥样硬化的形成和发展。     

2-Methoxyestradiol attenuates hypertension and coronary vascular remodeling in spontaneously hypertensive rats

Objectives

Accumulating data provide evidence that some metabolites of 17β-estradiol are biologically active and mediate multiple effects on the cardiovascular and renal systems. We investigated the effect of 2-methoxyestradiol (an active metabolite of estradiol with non-feminizing activity) on the development of hypertension and myocardial vascular remodeling in male and female ovarectomized SHR.

Methods

Rats were divided into five groups: intact females, ovarectomized (OVX), OVX+ 2-methoxyestradiol (2ME), control males, and male + 2ME. Systolic blood pressure was determined from 10 to 18 weeks. Structural changes in coronary vessels were quantified by an image analyzer. Immunoblotting of phosphorylated ERK1/2 and NADPH oxidase activity were performed on mesenteric arteries.

Results

Treatment with 2ME reduced the increase in systolic blood pressure in male and ovarectomized rats to values not different from those obtained in intact females. Myocardial arterioles and small arteries showed significant increases in wall-to-lumen ratio and perivascular fibrosis in male and ovarectomized rats when compared with intact females. NADPH oxidase activity was increased in mesenteric arteries from males and ovarectomized females as compared with intact females. Finally, the expression of phosphorilated ERK1/2 were significantly higher in mesenteric arteries from male and ovariectomized animals than in those from intact females. Those effects of ovarectomy and gender differences were totally or partially prevented by treatment with 2-methoxyestradiol.

Conclusions

These data demonstrate that 2-methoxyestradiol protects the vasculature from hypertension-induced myocardial arterial remodeling in male and ovarectomized SHR, and that might be in part related to decreased superoxide generation and ERK1/2 activation.     

人类心房利钠肽基因在自发性高血压大鼠体内表达及其对血压的影响

目的研究人类心房利钠肽（hANP）基因在自发性高血压大鼠（SHRs）体内表达、持续时间和对血压的影响。方法 12只8周龄雄性SHRs,随机分为两组,于左腿股四头肌注射pcDNA3.1-hANP质粒的为实验组,在同一部位注射pcDNA3.1空质粒的为对照组,每周测量大鼠尾动脉收缩压,及利用放射免疫方法监测血中hANP水平。结果转基因后第1周起与对照组比较,实验组血压开始下降,两组动物一直相差（13±3.1）mmHg（P〈0.05）,其作用可持续10周;且放射免疫方法监测实验组血中hANP水平较高;RT-PCR和Western印迹杂交技术检测显示实验组hANP基因在肌肉组织中高效表达,对照组则未见表达。结论肌肉注射法将hANP基因导入SHRs,hANP基因可在肌肉组织中高效表达,且hANP可释放入血,降低SHRs的血压,显示了hANP基因对高血压患者治疗的可能性。     

人类心房利钠肽基因在自发性高血压大鼠体内表达及对血压和肾脏的组织学影响

目的研究人类心房利钠肽（hANP）基因在自发性高血压大鼠（SHR）体内表达、持续时间和对血压及肾脏的组织学影响。方法 12只8周龄雄性SHR,随机分为两组,于左腿股四头肌注射pc DNA3.1-h ANP质粒的为实验组,在同一部位注射pc DNA3.1空质粒的为对照组,每周测量大鼠尾动脉收缩压,及利用放射免疫方法监测血中h ANP水平;10周后处死动物,RT-PCR和Western印迹杂交技术检测h ANP基因表达情况;HE染色和Masson染色观察对肾脏的组织形态学的影响。结果转基因后第1周起与对照组比较,实验组血压开始下降,两组动物一直相差（12±3.1）mm Hg（P〈0.05）,其作用可持续10周;且放射免疫方法监测实验组血中hANP水平较高;RT-PCR和Western印迹杂交技术检测显示实验组hANP基因在肌肉组织中高效表达,对照组则未见表达;组织形态学分析结果显示实验组肾脏组织细胞形态基本正常,胶原沉积明显减少。结论肌肉注射法将hANP基因导入SHR,hANP基因可在肌肉组织中高效表达,且hANP可释放如血,降低SHR的血压并对高血压靶器官肾脏的损害起到了治疗及预防作用。显示了hANP基因对高血压患者治疗的可能性。     

人类心房利钠肽基因在自发性高血压大鼠体内表达及其对血压、心脏、血管的影响

目的研究人类心房利钠肽（hANP）基因在自发性高血压大鼠（SHR）体内表达、持续时间和对血压及心脏、血管的影响。方法12只8周龄雄性SHR,随机分为两组,于左腿股四头肌注射pcDNA3．1-hANP质粒的为实验组,在同一部位注射pcDNA3．1空质粒的为对照组,每周测量大鼠尾动脉收缩压,及利用放射免疫方法监测血中hANP水平;10周后处死动物。RT—PCR和Western印迹杂交技术检测hANP基因表达情况;分别称量体重、全心脏和左心室重量,大体评价对心肌重构的影响;苏木素-伊红（HE）染色和胶原组织学（VG）染色观察对心脏、血管组织形态学的影响。结果转基因后第1周起与对照组比较,实验组血压开始下降,两组动物一直相差（12±3．1）mmHg（P〈0．05）,其作用可持续10周;且放射免疫方法监测实验组血中hANP水平较高;RT—PCR和Western印迹杂交技术检测显示实验组hANP基因在肌肉组织中高效表达,对照组则未见表达;实验组心脏重量／体重比和左心室重量／心脏重量比明显低于对照组。组织形态学分析结果显示实验组心肌、血管组织细胞形态基本正常,胶原沉积明显减少。结论肌肉注射法将hANP基因导入SHR,hANP基因可在肌肉组织中高效表达,且hANP可释放如血,降低SHR的血压并对心脏、血管高血压靶器官的损害起到了预防作用。显示了hANP基因对高血压患者治疗的可能性。     

Development of immunoreactive atrial natriuretic peptide in fetal hearts of spontaneously hypertensive and Wistar-Kyoto rats

Summary The development of immunoreactive atrial natriuretic peptide (ANP) was studied in fetal hearts of spontaneously hypertensive (SHR) and compared to normotensive Wistar-Kyoto (WKY) rats. While SHR fetal hearts were noticeably less developed than those of WKY at 10 and 11 days gestation, both strains showed ANP immunoreactive cells in some but not all primitive heart tubes. At 12 days additional ANP immunoreactive cells appeared in formative trabeculae of the ventricle and atrium. ANP cells were also observed in the myogenic layer of the truncus and bulbus arteriosus and their derivatives from 11 through 16 days, but not at 18 days. In both strains, there were more ANP cells in the left ventricle than in right beginning at day 13. There were no obvious strain differences in the developmental pattern and timing of ANP producing cells. However, on the day of birth, staining was reduced in hearts from some WKY newborn pups compared with hearts from SHR newborns and ventricular staining was reduced in both strains when compared to fetal hearts. These observations indicate that ANP is one of the earliest peptide hormones produced and that the predisposition to genetic hypertension does not appear to influence the development of ANP.     

葛根素对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响及其机制

 目的：观察葛根素对自发性高血压大鼠（SHR）心肌局部血管紧张素II (Ang II)、巨噬细胞及心肌组织形态学的影响,探讨其保护心肌的可能机制。方法：35只12周龄SHR随机分为葛根素高、中、低剂量组（100 mg/kg、50 mg/kg、25 mg/kg,腹腔注射）、卡托普利组（30 mg/kg灌胃）和SHR对照组（生理盐水腹腔注射）。另设WKY空白对照组（生理盐水腹腔注射）。每组7只,给药6周。给药6周后麻醉下迅速处死取出心脏,称量左心室湿重后,备做Masson染色、组织匀浆和RT-PCR。结果：与WKY大鼠相比,SHR左室质量指数增高（P<0.01）,心肌组织Ang II含量上升（P<0.01）,单核细胞趋化蛋白1 （MCP-1）和蛋白酶激活受体2（PAR2） mRNA表达增加（P<0.01）,巨噬细胞浸润明显（P<0.01）,间质纤维化严重（P<0.01）。高剂量葛根素和卡托普利明显降低左室质量指数（P<0.01）,降低心肌Ang II含量（P<0.01）,下调MCP-1和PAR2 mRNA表达（P<0.01）,减少巨噬细胞浸润（P<0.01或P<0.05）,减轻心肌间质纤维化（P<0.01）。结论:葛根素具有治疗自发性高血压大鼠心肌纤维化作用,其机制可能与降低心肌局部Ang II含量、下调MCP-1和PAR-2 mRNA表达及减少巨噬细胞浸润有关。     

STAT3、ERK、NF-κB在黄芪保护病毒感染心肌细胞中的作用

目的： 研究STAT3、ERK、NF-κB在黄芪保护感染病毒的心肌细胞中的作用。 方法: 体外分离培养心肌细胞并分为对照组；病毒感染组：病毒孵育；黄芪干预组：病毒孵育后分别给予黄芪培养浓度为300 mg/L、500 mg/L、700 mg/L。采用RT-PCR检测各组病毒RNA，采用Westen blotting检测P-STAT3、P-ERK、NF-κB p65表达。MTT法观察细胞活性。 结果： 在各组中STAT3、ERK总蛋白没有明显变化（P>0.05）,病毒组P-STAT3、P-ERK、NF-κB p65明显高于对照组（P<0.01），黄芪组P-STAT3、P-ERK、NF-κB p65明显低于病毒组（P<0.01）。黄芪组细胞存活率明显高于病毒组（P<0.01）。 结论： 在病毒性心肌炎中黄芪可以通过抑制STAT3、ERK、NF-κB保护心肌细胞。     

Alterations in tissue concentration and gene expression of adrenomedullin in spontaneously hypertensive rats

In order to elucidate the role of adrenomedullin in hypertension, we have compared concentrations of immunoreactive rat adrenomedullin and adrenomedullin messenger RNA levels in tissues of 8-week-old spontaneously hypertensive rats (SHR) with those of age-matched Wistar-Kyoto rats (WKY). The adrenomedullin immunoreactivity concentrations in adrenal gland and cardiac atrium were significantly higher in SHR than in WKY. The adrenomedullin content of cardiac ventricle was also significantly higher in SHR than in WKY. The rat adrenomedullin messenger RNA levels in adrenal gland and heart of SHR were also higher than those of WKY. These results suggest that adrenomedullin participates in the mechanism to counteract the blood pressure elevation in SHR.     

Electron microscopic study on regression of cardiac hypertrophy in spontaneously hypertensive rats

In this electron microscopic study of cardiocytes during regression of left ventricular hypertrophy (LVH) in spontaneously hypertensive rats (SHR), nifedipine (SHR-N) and lisinopril (SHR-L) were given to 15-week-old SHR (SHR-C₁₅) for 20 weeks. In untreated SHR, cardiocytes were enlarged, lateral branches (LBs) multiplied and intracellular organelles became degenerated between 15 and 35 weeks of age. In SHR-N, despite a slight reduction in blood pressure (BP), LVH regressed and cell width and the number of LBs were preserved at the level found in SHR-C₁₅. In SHR-L, LVH regressed with moderate suppression of BP; cell width, cell length and the number of LBs reverted to those in agematched Wistar Kyoto rats. In both SHR-N and SHR-L, intracellular ultrastructures were nearly normalized. These findings suggest that, in addition to BP reduction, other pharmacological factors play a role in structural repair of hypertrophied cardiocytes.     

阿托伐他汀对自发性高血压大鼠细胞色素P450羟化酶基因表达的影响

目的： 评价阿托伐他汀对自发性高血压大鼠（SHR）血压和细胞色素P450羟化酶(CYP)4A1的调节作用。方法： 18只SHR随机分为3组：SHR对照组、阿托伐他汀50 mg组(HATV组)和10 mg组(LATV组)；6只Wistar-Kyoto大鼠(WKY)作为正常对照组。给药共10周,分别于给药前和给药后每2周测量大鼠尾动脉收缩压(SBP)；RT-PCR、Western blotting法检测心、肝、肾及主动脉中CYP4A1 mRNA和蛋白质表达；并测定血脂含量。结果： 用药前SHR各组SBP均显著高于WKY组(P<0.01)；HATV组在给药后第6、8、10周和LATV组在给药后第10周SBP明显低于SHR对照组(P<0.05或P<0.01)。在CYP4A1 mRNA及其蛋白质表达中，SHR对照组4种组织均明显高于WKY组(P<0.01或P<0.05)；给药10周后，HATV组心、肾及主动脉和LATV组肾和主动脉的表达均明显低于SHR对照组(P<0.01或P<0.05)；同时，用药2组血脂水平亦明显低于SHR对照组(P<0.01或 P<0.05)。结论： 阿托伐他汀可下调CYP4A1基因的表达，这可能是其降低血压的作用机制之一。