研制甲型肝炎疫苗的可能途径

十多年前,甲型肝炎病毒(HAV)在细胞培养中增殖成功,开创了研制减毒活疫苗和灭活疫苗的途径。非人灵长目动物实验证实,HAV在细胞培养中连续传代可导致减毒。连续传代获得的几个候选活疫苗已在志愿者中进行评价.感染细胞培养中的病毒抗原产量显著提高促进了灭活疫苗的研制.这类福尔马林灭活的HAV疫苗含有装配成病毒颗粒的病毒核壳抗原。HAV疫苗候选株的免疫原性主要取决于是否保持核壳蛋白构型。含VP1的免疫原序列的合成肽以及在大肠杆菌中以融合蛋白形式表达的可溶性核壳蛋白,高浓度注射家兔仅表现为微弱的免疫原性.另一方面,用表达P1的重组活痘苗免疫狮猴,可防御病毒攻击.然而活痘苗病毒作为载体使用,仍有很大缺陷。已构建出脊髓灰质炎-HAV VP1嵌合病毒,这类杂交病毒不能诱生免疫应答,可能由于脊髓灰质炎病毒对插入的HAV表位的构型限制.最近有人报道在杆状病毒和痘苗病毒系统中表达空病毒颗粒。     

重组痘病毒活疫苗研究进展

痘病毒特别是痘苗病毒已成功地表达了数十种外来抗原。但由于痘苗病毒的神经毒性等原因，对重新使用该病毒作为活疫苗的载体仍有争议，从而限制了痘苗病毒重组活疫苗在人类及其他哺乳动物中广泛使用。为了解决这些问题，近年来许多研究者进行了深入研究，并取得了重要进展，本文从四个方面进行阐述：（１）痘苗病毒毒力基因的研究；（２）高度减毒重组体及兽用口服疫苗的研究；（３）多价重组体的构建；（４）禽痘病毒非复制性活疫苗     

在被动抗体存在情况下的重组痘苗免疫接种

作者将表达流感血凝紊HI的重组痘苗病毒（Vac／HI）兔疫已注射抗痘苗和抗流感（H1N1）病毒免疫血清的小鼠，测定免疫后血清IgG抗体应答及被动抗体对它的影响。     

表达甲型H5N1禽流感病毒结构蛋白的重组痘苗病毒的构建与鉴定

目的  构建表达甲型H5N1禽流感病毒（H5N1 avian influenza A virus,H5N1 AIAV）NIBRG14株结构蛋白的重组痘苗病毒,为研制新型人用流感疫苗奠定基础。方法  通过反转录PCR扩增H5N1 AIAV NIBRG14株的血凝素（hemagglutinin,HA）和神经氨酸酶（neuraminidase,NA）编码基因,并将改造的HA、NA基因克隆至痘苗病毒穿梭质粒 pSCCK。在重组质粒与痘苗病毒天坛株（vaccinia virus Tiantan,VTT）于Vero细胞中发生同源重组后,筛选同时表达HA和NA的重组痘苗病毒（rVTT-HA/NA）,并对其进行鉴定。结果  反转录PCR扩增的HA和NA基因大小约分别为1 700和1 400 bp,与预期相同。DNA测序证实,改造的HA和NA序列正确。对获得的rVTT-HA/NA进行PCR及测序表明,HA和NA基因正确插入VTT。蛋白质印迹显示,rVTT-HA/NA感染的Vero细胞表达的HA和NA能与相应的抗体发生反应。表达的HA具有血凝活性,血凝滴度为1∶32。结论  重组痘苗病毒rVTT-HA/NA可稳定表达H5N1 AIAV NIBRG14株的HA和NA。     

重组体表达的病毒样颗粒准型可作为疫苗研制的新途径

作者用表达逆转录病毒gag蛋白与单纯疱疹病毒(HSV)糖蛋白的痘苗病毒重组体共感染细胞,可产生病毒样颗粒准型(pseudotype)。这种准型颗粒是以非感染性的颗粒状态模拟天然抗原提呈过程来提呈病毒糖蛋白抗原的一种新方法。 先将猿猴免疫缺陷症病毒(SIVmac251)gag-pol区的全部4800个碱基对(bp)插入质粒pAbT4587得pAbT4660,将含2型HSV糖蛋白gD基因完整序列的1400个bp插入     

重组体痘苗预防乙型肝炎

自从Paoletti和Moss等在1982年开始研究痘苗重组体以来,应用牛痘病毒作为携带其他免疫原的手段用于接种的想法具有很大的吸引力。此种活病毒被接种到动物中,能表达插入其DNA中的外来基因,随后动物对外来基因产物产生免疫应答。利用DNA重组技术在痘苗中表达成功的抗原有HBsAg、疟疾子孢子抗原、流感和疱疹病毒糖蛋白,预计将可能有更多的抗原。     

HAV抗原检测ELISA试剂盒的验证及应用

目的  验证甲型肝炎灭活疫苗（人二倍体细胞）（甲肝疫苗）生产场地变更后原生产场地制备的ELISA试剂盒对HAV抗原检测的一致性。方法  用原生产场地制备的抗HAV多克隆抗体包被的酶标板、辣根过氧化物酶标记的抗HAV抗体制备ELISA试剂盒,并对该试剂盒进行线性、精密度、准确度、专属性和稳定性验证,同时用该试剂盒检测甲肝疫苗中间品的HAV抗原浓度,考察其适用性。结果  在新生产场地中ELISA试剂盒的检测线性范围为0.2～6.4 IU/ml,线性决定系数R2>0.99。该试剂盒的精密度良好,检测结果的变异系数均小于15%。不同HAV抗原浓度样品的回收率为84%～104%。该试剂盒可特异性检测HAV,不与非HAV及HAV培养基质发生反应。包被抗体的酶标板于37 ℃放置7 d对检测结果没有影响。用该试剂盒检测显示,HAV收获液、HAV纯化液和甲肝疫苗半成品的平均HAV抗原浓度分别为213.25、146.70和48.91 IU/ml,符合在生产过程中HAV抗原含量下降的规律。结论  原生产场地制备的ELISA试剂盒可用于检测新生产场地生产的甲肝疫苗。     

用重组麻疹病毒血凝素蛋白检测疫苗免疫状况的简化免疫试验[英]

用重组抗原进行简化试验,对监测抗麻疹病毒（MV）免疫力很重要。抗血凝素（H）蛋白抗体具有中和保护能力,作者在含有西门利克森林病毒复制子的哺乳动物表达系统中高效表达了重组MV-H。用单克隆抗体对该重组蛋白的抗原进行了研究,并通过ELISA（H-ELISA）对大样本人群检测了用该蛋白测定疫苗免疫状况的可行性。用中和（NT）试验、血凝抑制（HI）试验检测抗体水平及用市售全病毒ELISA（MV-ELISA）试剂盒检测MV特异性IgG,并与H-ELISA检测结果进行比较。     

重组痘病毒活疫苗研究进展

痘病毒特别是痘苗病毒已成功地表达了数十种外来抗原。但由于痘苗病毒的神经毒性等原因,对重新使用该病毒作为活疫苗的载体仍有争议,从而限制了痘苗病毒重组活疫苗在人类及其他哺乳动物中广泛使用。为了解决这些问题,近年来许多研究者进行了深入研究,并取得了重要进展,本文从四个方面进行阐述:(1)痘苗病毒毒力基因的研究;(2)高度减毒重组体及兽用口服疫苗的研究;(3)多价重组体的构建;(4)禽痘病毒非复制性活疫苗的研制。     

表达Epstein-Barr病毒壳抗原gp125重组痘苗病毒的免疫原性

目的研究基因重组Ｅｐｓｔｅｉｎ Ｂａｒ病毒ｇｐ１２５蛋白的免疫原性。方法用表达ｇｐ１２５的重组痘苗病毒免疫中国本兔,用免疫荧光法检测免疫血清的抗体效价并研究其特异性。结果重组痘苗病毒在感染细胞内特异性地表达ｇｐ１２５,活病毒能够刺激兔产生高滴度的特异性抗体,经２次免疫,免疫荧光效价达１∶３２０。结论基因重组ｇｐ１２５和天然的该蛋白一样,有较强的免疫原性。     

痘菌病毒在疫苗释放中的应用

痘苗诱导人体产生免疫力的机理以及以前接触痘苗对非痘苗抗原免疫应答的影响方面资料的缺乏,阻碍了痘苗载体疫苗的构建.近来的研究探讨了该病毒在人体中诱导的免疫应答以及重组病毒诱导对不同感染途径的不同病原体的免疫力的能力.痘菌病毒除能在实验动物中诱导免疫应答外,还能编码免疫功能调节剂,将来可用于诱导对异种抗原的性质不同的免疫应答.     

疟疾疫苗:7种抗原优于1种抗原吗?

含恶性疟原虫不同生活期抗原基因的减毒痘苗病毒不能预防恶性疟。而与HBsAg融合的部分环子孢子蛋白（CSP）具有高度免疫原性,单个抗原的多个抗原性变体似可诱导各种保护性抗体应答。     

被动获得抗体抑制痘苗-麻疹重组病毒诱导麻疹病毒抗体产生

麻疹在发展中国家1岁以下儿童中引起很高的死亡率。在该年龄组儿童中。母体抗体限制了麻疹活疫苗病毒的复制。本文作者应用痘苗病毒(VV)重组体表达的麻疹病毒(MV)血凝素(VV-H)和融合蛋白(VV-F),以小鼠为模型,研究了在被动获得的抗MV抗体存在时对MV抗原的免疫应答情况。 对Balb/c小鼠注射不同剂量抗MV多克隆血清,1天后再用VV-H或VV-F免疫。     

痘苗病毒-汉滩病毒疫苗能保护仓鼠抵抗汉滩和汉城病毒的攻击

作者构建了能表达汉滩（HTN）病毒M和S片段产物的重组痘苗,这种疫苗能诱导     

候选乙型脑炎颗粒疫苗能诱导小鼠产生持久特异性记忆T淋巴细胞应答

作者曾报告,细胞感染编码乙型脑炎病毒(JEV)前膜(prM)和包膜(E)蛋白基因的重组痘苗病毒后可释放出prM和E构成的胞外颗粒(EP)。本研究评估了EP诱导小鼠产生JEV特异性中和抗体和特异性T淋巴细胞的能力。     

痘苗病毒在疫苗释放中的应用

痘苗诱导人体产生免疫力的机理以及以前接触痘苗对非痘苗抗原免疫应答的影响方面资料的缺，阻碍了痘苗载体疫苗的构建。近来的研究讨论了该病毒在人体中诱导的免疫应答以及重组病毒诱导对不同感染途径的不同病原体的免疫力的能力。     

病毒性感染快速诊断的进展:一篇备忘录

在前一备忘录中,注意到免疫荧光与免疫过氧化酶技术可用以检测人细胞标本中病毒抗原,酶免疫测定技术(EIA)[也称酶标免疫吸附测定(ELISA)]可从临床材料中检出病毒抗原与从人的血清中检出病毒抗体。经考虑未包括放射测定技术,对今后的研究     

表达JEV prM和E基因的高度减毒痘苗病毒MVA株免疫小鼠后对致死性JEV感染的防御作用

作者将韩国分离的乙型脑炎病毒（JEV）野毒株K94P05的糖基化膜前体（PrM）和包膜(E）蛋白的基因插入到高度减毒的宿主范围限定的痘苗病毒MVA株基因组内,获得两个重组病毒vJH6和vJH9,分别由合成的痘病毒启动子Psyn和修饰的痘苗病毒H5启动子控制。JEV野毒株K94P05的核苷酸序列与JEV原型中山株有88％相同,但是K94P05株的E基因内没有痘菌病毒早期终止信号。应用转移载体将目的JEV基因转移至MVA基因组内的缺失位点组成重组病毒并用JEV抗体免疫染色进行检测,结果表明两个重组体都稳定地表达prM和E蛋白。但vJH9的滴度较vJH6高3～5倍。vJH6和vJH9感染的CEF细胞与抗JEV K94P05株E蛋白表位的单克隆抗体NBl的免疫荧光反应强度与K94P05野毒株相似,而非重组MVA感染的细胞则未显示这种染色结果。用JEV多克隆抗体的结果与单克隆抗体相似。     

以DNA、痘苗病毒和蛋白免疫接种提呈HIV Env蛋白的新方法

重组ＤＮＡ、痘苗病毒载体（ＶＶ）作为人类免疫缺陷症病毒（ＨＩＶ）抗原的送递系统因其能同时诱导细胞免疫和体液免疫而受到重视,作者对表达ＨＩＶ包膜（Ｅｎｖ）蛋白的ＤＮＡ和ＶＶ载体（ＤＮＡ－Ｅｎｖ和ＶＶ－Ｅｎｖ）及纯化的Ｅｎｖ蛋白的免疫效果进行了检测。 将ＨＩＶ－ⅢＢ株的 ｇｐ１４０ Ｅｎｖ编码序列插入含有巨细胞病毒增强子／启动子的质粒中,用基因枪将包被于金粒上的重组质粒注入８～１２周龄的Ｃ５７ＢＬ／６小鼠腹部;或腹腔接种表达 ＨＩＶ－ⅢＢ株蛋白的重组 ＶＶ感染细胞的裂解物;纯化蛋白疫苗则由ｇｐ １２０（１…     

菌苗载体和卡介苗

生物技术的最近进展给疫苗（尤其是重组疫苗）的开发提供了新方法。菌苗载体优于病毒载体的地方是前者能够表达大量不同的抗原。尽管目前尚没有重组菌苗载体投入应用,卡介苗（BCG）、沙门菌和大肠杆菌作为菌苗载体正在研制之中,本文综述了用于表达外源抗原的质粒系统和突变株（着重于与BCG有关的质粒系统和突变株）的建立,还介绍了抗原表达系统方面的进展,以及重组BCG菌株诱导的对细菌抗原和人类免疫缺陷症病毒（HIV）抗原的免疫应答,并提出能稳定维持重组DNA（rDNA）的改良的重组BCG载体的选择。