中国狂犬病固定毒aG株N,NS和M蛋白基因的核苷酸序列测定

报告了中国狂犬病固定毒ａＧ株核衣壳蛋白（Ｎ蛋白），核蛋白壳磷酸蛋白（ＮＳ蛋白，又称Ｍ１蛋白）和基质蛋白（Ｍ蛋白，又称Ｍ２蛋白）蛋白基因的核苷酸序列和氨基酸推导序列。各基因编码区的全长分别是：Ｎ基因１３５２，ＮＳ基因８９４和Ｍ基因６０９个核苷酸。ａＧ和ＣＶＳ株的Ｎ，ＮＳ和Ｍ基因的核苷酸序列都具有高的同源性，分别为９１．９５％，９０．２７％和９０．８０％。     

我国登革2型病毒43株非结构蛋白NS1基因的特征

对我国１９８７年从广西分离的登革２型病毒４３株非结构蛋白ＮＳ１基因的核苷酸序列进行了分析，结果表明登革２型病毒４３株非结构蛋白ＮＳ１基因含有１０５６核苷酸编码３５２个氨基酸，并就其核苷酸序列及其相应的氨基酸序列与我国１９８５年海南流行高峰期分离的Ｄ２－０４株、国际参考株新几内亚Ｃ株（ＮＧＣ）、牙买加株（ＪＡＭ）、候选疫苗株（Ｓ１）和马来西亚流行株Ｍ１（登革出血热）、Ｍ２（登革休克综合征）、Ｍ３（登革热）进行比较，发现核苷酸序列的同源性分别为９２．２％，９３．７％，９３．３％，９０．７％，８９．９％，８９．５％，８９．３％，氨基酸的类似性分别为８９．８％，９２．６％，９３．３％，９１．２％，９０．６％，９０．１％，８９；９％，推断的氨基酸序列含有两个糖基化位点，分别位于氨基酸残基的１３０和２０７位，一个可能的蛋白裂解位点３５０～３５２和１０个保守的半胱氨酸残基。     

中国登革2型病毒分离株乳鼠致病性差异与基因变化关系的研究

本文报道１９８７年从广西病人血清中分离的登革２型（Ｄ２）病毒Ｄ２－４３株和１９８５年从海南病人血清中分离的Ｄ２－０４株乳鼠致病性的差异与基因变化的关系。结果表明Ｄ２－４３株对乳鼠致病，Ｄ２－０４株不致病。Ｄ２－４３株和Ｄ２－０４株Ｃ到ＮＳ１基因的读码框架基本相同，均由３３８１核苷酸组成，编码氨基酸总数１１２７。包含三个结构蛋白Ｃ．ＰｒＭ（Ｍ）、Ｅ和一个非结构蛋白ＮＳ１。该两株病毒核苷酸序列同源性为９３．８％，氨基酸序列的类似性为９１．３％。Ｃ和Ｅ基因同源性为９５．０％～９５．８％，ＮＳ１基因为９２．２％，Ｍ基因为８６．７％，两株之间核苷酸序列的主要差异是在Ｍ基因。两株病毒的Ｃ－ＮＳ１基因与国际参考毒株比较，４３株与ＪＡＭ株类侧性最高，其次是ＮＧＣ株，与Ｓ１株类似性最小。而０４株只有Ｃ、Ｅ和ＮＳ１与ＪＡＭ株最高，ＰｒＭ（Ｍ）都与ＮＧＣ株最高。４３株与０４株的Ｍ基因相比较，０４株的ＰｒＭ（Ｍ）基因的同源性低于４３株，说明两株与国际参考毒株比较，主要差异也在Ｍ基因，乳鼠致病性差异可能与Ｍ基因变化有关。     

中国广西狂犬病毒野毒株（CGX89－1株）糖蛋白基因核酸序列测定和分析

本文报告了中国广西狂犬病毒野毒株（ＣＧＸ８９－１株）糖蛋白基因ｃＤＮＡ的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列。ＣＧＸ８９－１株的糖蛋白基因从起始密码ＡＴＧ到终止密码ＴＡＡ共有１５７５个核苷酸残基，可编码形成５２４个氨基酸残基的多肽链，经修饰后形成具有５０５个氨基酸残基构成的狂犬病毒糖蛋白。ＣＧＸ８９－１株的糖蛋白基因和核苷酸组成分别为：Ａ占２７．１１％，Ｔ占２６．２９％，Ｃ占２１．９７％和Ｇ占２４．６３％。核苷酸序列和巴斯德株（ＰＶ株），国际标准攻击毒株（ＣＶＳ株），中国狂犬病毒疫苗株（３ａＧ株）相比，同源性分别为８４．１％，８３．１％和８４．５％。其推导的氨基酸序列和ＰＶ株、ＣＶＳ株和３ａＧ株相比其同源性分别为９２．４％，８９．７％和８９．５％。ＣＧＸ８９－１株也具有３个Ｎ－糖基化位点，分别位于第３７位、１５７位和３１９位的氨基酸残基上。糖蛋白的膜外区部分重要抗原位点和ＰＶ株、ＣＶＳ株及３ａＧ株具有较高的一致性。     

2型登革病毒04株基因组结构特点的研究

报告了２型登革病毒０４株结构蛋白Ｃ，ＰｒＭ（Ｍ）、Ｅ和非结构蛋白ＮＳ１基因的核苷酸及氨基酸序列，并与国际参考株新几内亚Ｃ株、牙买加株和候选疫苗Ｓ１株进行了比较。结果表明，从壳体蛋白Ｃ到主要非结构蛋白ＮＳ１，这一开放读码框架核苷酸总数为３３８１，编码１１２７个氨基酸；在Ｅ蛋白区有３个保守的氨基酸序列，分别位于Ｅ区的９８－１１１、３７１－３７８、４１６－４２２；有２个潜在的糖基化位点，分别位于Ｅ区的Ａｓｎ－６７和Ａｓｎ－１５３位；有１２个保守的半胱氨酸残基。非结构蛋白ＮＳ１有两个糖基化位点，位于ＮＳ１区的１３０和２０７位，有１０个保守的半胱氨酸残基。在结构蛋白Ｃ、ＰｒＭ（Ｍ）、Ｅ和非结构蛋白ＮＳ１中，Ｅ蛋白表现最为保守，其次是Ｃ蛋白。Ｄ２－０４株病毒在核苷酸水平与氨基酸水平上与其他２型病毒株比较，我国０４株较类似于牙买加株，其次是ＮＧＣ株，与Ｓ１株类似性最小。说明我国病毒株与牙买加株相关性较大，与Ｓ１株相关性较小。     

华南地区HGV的流行状况和同源性分析

目的了解华南地区庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的流行状况及ＨＧＶ不同株和不同基因区的同源性。方法采用逆转录聚合酶链反应技术（ＲＴ－ＰＣＲ）检测来自广东、香港、云南的不同人群血清标本共１９９１份。对其中２０份的５端非编码区（５ＵＴＲ）２３８ｂｐ和３份非结构蛋白５区（ＮＳ５）６２１ｂｐ进行了序列测定和同源性分析。结果一般人群ＨＧＶＲＮＡ阳性率为（０．７３～１．３４）％,献血员（２．５２～２．９０）％,静脉吸毒者１７．８６％,血液透析患者１４．１３％,接受骨髓移植者４１．６７％,在非甲～戊型肝炎病人为２５．３０％,肝细胞癌１４．４８％,乙型肝炎７．２２％,丙型肝炎（８．３３～１６．１３）％。不同株５ＵＴＲ同源性介乎（９０．４０～１００）％;不同株ＮＳ５区核苷酸同源性（９３．３０～９４．００）％,氨基酸为（９７～９９．２）％。结论接受骨髓移植、血液透析、静脉吸毒者,乙型、丙型、非甲～戊型肝炎病人及肝细胞癌患者是ＨＧＶ的高感染人群。不同ＨＧＶ株存在一定的地区性差异;同一地区不同人群的ＨＧＶ株变异不明显;序列中存在高度保守区及较大变异区     

5株呼吸道合胞病毒地方株F蛋白基因序列分析

目的呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）Ｆ蛋白是ＲＳＶ感染免疫中最重要的病毒蛋白，为了解我国ＲＳＶ地方株Ｆ蛋白的基因状况和变异特征，随机选取北京、广州、长春和河北四个地区具有不同流行特征的ＲＳＶ地方株（Ａ亚型）５株，进行ＲＳＶＦ蛋白全基因的核苷酸序列分析。方法以提取的病毒ｍＲＮＡ为模板进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增、目的基因的克隆及序列测定，对地方株及原型株的序列进行比较分析。结果地方株Ｆ蛋白基因与原型株Ａ２株有很高的同源性，核苷酸全序列的同源性为９５．１％～９６．１％，氨基酸同源性为９６．７％～９７．４％。核苷酸有义突变率为２２．６％～２５．９％。３非编码区的核苷酸序列比蛋白编码区变异显著。河北地方株（Ｅ７３株）在３非编码区有６个核苷酸的插入。Ｆ２亚单位的氨基酸变异高于Ｆ１亚单位。在北京地方株（ＺＨＳ１３株）Ｆ１亚单位内，由具有中和能力单克隆抗体所识别的抗原表位区中存在一个氨基酸的变异。结论我国ＲＳＶ地方株与原型株之间的Ｆ蛋白基因尽管存在一定的变异，但仍有很高的同源性。地方株间Ｆ蛋白的核苷酸、氨基酸变异的位置及形式很相似，提示我国ＲＳＶ的不同流行特征可能并非由于Ｆ蛋白的基因变异所致。     

丙型肝炎病毒E2／NS1区基因cDNA的克隆及序列分析

从北京地区１份丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者血清中提取ＲＮＡ，经逆转录和套式聚合酶链反应扩增ＨＣＶＥ２／ＮＳ１区基因约９３０ｂｐ，将其插入至ｐＧＥＭ－Ｔ质粒载体中，利用双脱氧链末端终止法测出该基因５’端４３１ｂｐ的核苷酸序列，将此序列与其它９个ＨＣＶ分离株的相应序列进行比较分析，结果表明，此序列与ＨＣＶⅡ型序列同源性较高，核苷酸水平同源性在８０％以上。由其编码的ＨＣＶ外膜蛋白Ｎ端存在两个高变部位（ＨＶＲ），在ＨＶＲ内、外具有几个保守氨基酸残基和氨基酸区域，它们与外膜蛋白空间构型的维持有关。     

日本血吸虫大陆株26kDa谷胱甘肽S—转移酶编码区基因的克隆…

从日本血吸虫大陆株成分离ＲＮＡ，逆转录合成ｃＤＮＡ第一链，根据菲律宾株２６５ｋＤａ谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）的ｃＤＮＡ序列，设计并合成引物，扩增出２６ｋＤａ的编码区基因，并克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ质粒，初步酶切鉴定后，从两端对插入片段进行核苷酸序列测定。结果与菲律宾株比较，核苷酸同源性为９９．８％，仅第５８２位碱基不同，菲律宾为Ａ，而大陆株为Ｇ。比较从ｃＤＮＡ推导出的氨基酸序列，两者１００％     

庚型肝炎病毒NS5区基因序列测定和分析

目的为了研究哈尔滨市庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）非结构（ＮＳ５）区基因结构特征。方法对阳性标本进行了庚型肝炎病毒ＮＳ５区１８６核苷酸的基因扩增、分子克隆和序列分析，并利用基因分析软件处理结果。结果分离出的２株ＨＧＶＮＳ５区基因序列之间同源性为９５２％，而与国外报道的３株ＨＧＶ序列比较同源性在８４４％～９２４％，变异较大。结论提示ＨＧＶ有不同的基因型，这有待于对各区基因序列进行全面检测，综合判断之后才能确定。分离出的阳性株为从１９８４年肝炎患者血中分离，肯定了我市在８０年代就有庚型肝炎病毒感染存在     

汉滩病毒Z10株G1糖蛋白编码区克隆及序列分析

目的 汉滩病毒浙１０（Ｚ１０）株Ｇ１糖蛋白编码区的克隆、核苷酸序列分析，提供我国应用最为广泛的肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）疫苗株序列资料。方法 反转录ＰＣＲ法扩增Ｇ１基因片段，克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体，双脱氧链终止法测定核苷酸序列。结果 测定１４４９个核苷酸，可编码４８３个氨基酸。与Ｉ型７６／１１８、Ｌｅｅ、Ｈｏｊｏ株比较核苷酸同源性分别为８７％、８６％、８６％，与Ⅱ型Ｒ２２株同源性为６７％。比较氨基     

用聚合酶链反应—银染单链构象多态性鉴别腮腺炎病毒株

用腮腺炎病毒小疏水蛋白（ＳＨ）基因及其旁侧区的逆转录（ＲＴ）套式聚合酶链反应（Ｎ－ＰＣＲ）产物进行银染单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析，建立了较适的样品变性和聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）条件。根据单链电泳模式可将所测６株腮腺炎病毒分为四种ＳＳＣＰ模式，３株兰州野毒株Ｗｌｚ１，Ｗｌｚ２，Ｗｌｚ３呈现一种模式，这３株病毒的ＳＨ基因及其旁侧区ｃＤＮＡ序列之间平均差异仅为０．９６％；两株上海野毒株Ｗｓｈ１和Ｗｓｈ２株的相应序列之间差异为４％，呈现另两种模式。Ｅｎｄｅｒｓ株呈现一种与野毒株差别较大的特殊模式。３株兰州野毒与２株上海野毒相应区域序列之间差异为３．４％～４．５％，故本法可区别ＳＨ基因及其旁侧区ｃＤＮＡ序列之间差异为３．４％的野毒株，且ＳＳＣＰ模式的相近程度与相应区域中核苷酸序列同源性大小一致。此法可用于腮腺炎病毒株分子特性和遣传变异的初步鉴定和分子流行病学研究     

日本血吸虫大陆株26kDa谷胱甘肽S┐转移酶编码区基因的克隆及序列测定

从日本血吸虫大陆株成虫分离总ＲＮＡ，逆转录合成ｃＤＮＡ第一链，根据菲律宾株２６ｋＤａ谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）的ｃＤＮＡ序列，设计并合成引物，扩增出２６ｋＤａ的编码区基因，并克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ质粒。初步酶切鉴定后，从两端对插入片段进行核苷酸序列测定。结果与菲律宾株比较，核苷酸同源性为９９．８％，仅第５８２位碱基不同，菲律宾株为Ａ，而大陆株为Ｇ。比较从ｃＤＮＡ推导出的氨基酸序列，两者１００％相同。测序结果也与曼氏血吸虫进行了比较。     

阴道加德纳菌ITS-23S rRNA部分基因克隆及序列分析

目的 分析深圳地区阴道国纳菌（Ｇ．ｖａｇ）ＩＴＳ（ｉｎｔｅｒｎａｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ ｓｐａｃｅｒ）－２３Ｓ ｒＲＮＡ部分基因序列。方法 设计特异性引物,建立检测Ｇ．ｖａｇ的ＰＣＲ方法,对临床病人阴道分泌物标本进行检测,并对分离出的４株ＰＣＲ产物进行分子克隆和序列分析。结果 分离出的４株Ｇ．ｖａｇＩＴＳ－２３ｓ ｒＲＡＮ基因的核苷酸同源性的９９．５％以上,与Ｂｅｌｄｕｍ报道株同源性在８９％以     

斑点热群立克次体HL-93株ompA蛋白基因片段的克隆及序列分析

以根据立氏立克次体（Ｒ．ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ，Ｒｒ）分子量为１９０×１０~３蛋白抗原基因序列设计的一对引物Ｒｒ １９０．７０ｐ和Ｒｒ １９０．６０２ｎ，用聚合酶链反应技术从斑点热群立克次体ＨＬ－９３株染色体ＤＮＡ中扩增出了１９０×１０~３蛋白基因的部分片段。通过载体质粒ｐＧＥＭ－Ｔ将该部分基因片段克隆进入了大肠杆菌ＪＭ１０１，并进行了核苷酸序列分析。通过与已报道的立氏立克次体、日本立克次体１９０×１０~３蛋白基因该部分片段的ＤＮＡ序列进行比较发现：ＨＬ－９３株立克次体与立氏和日本立克次体该部分ＤＮＡ分别有３１和２４个核苷酸不同，与这两种立克次体该部分ＤＮＡ的同源性分别为９４％和９５．４％。根据改变的核苷酸推定的与这两种立克次体的氨基酸序列的同源性分别为８７％和８９％。序列分析表明ＨＬ－９３株立克次体属于斑点热群立克次体新成员。     

与人精子抗原交叉的大肠埃希菌506株M_r36000蛋白的提取与纯化

以ＳＤＳ和超声波处理大量培养的Ｅ．ｃｏｌｉ５０６株制备全菌蛋白。首先采用（ＮＨ４）２ＳＯ４分段盐析对Ｍｒ３６０００蛋白进行初步纯化。发现与人精子交叉抗原的Ｍｒ３６０００蛋白位于６０％８０％和８０％９０％两个饱和硫酸铵盐析段中，并经与兔抗人精子抗体（ＲＡＨＳＡｂ）进行Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹得以证实。将上述含Ｍｒ３６０００蛋白的盐析物合并，进行ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２００柱层析，获得较纯的Ｍｒ３６０００蛋白，并对Ｍｒ３６０００纯化蛋白的特性进行了研究。用ＳＤＳＰＡＧＥ法测出纯化蛋白的Ｍｒ为３６０００；用Ｒｏｔｏｆｏｒ制备型等电聚焦电泳测定Ｍｒ３６０００蛋白的等电点为３８。     

广州地区散发性戊型肝炎病毒基因片段序列分析

目的对广州地区散发性戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）作基因片段序列分析。方法用逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）检测了８例广州地区散发性戊肝患者粪便和血清中的ＨＥＶＲＮＡ，其中３例粪便阳性。对阳性ＰＣＲ产物进行基因克隆、核酸序列分析。结果广州地区Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３株与缅甸株（Ｂ）、巴基斯坦株（Ｐ）、墨西哥株（Ｍ）、中国新疆株（Ｃｈ１．１）和广州血清株（Ｇ－９）的核苷酸和氨基酸的同源性均值分别为８０．６７％和８８．６０％（Ｂ）、８１．２５％和８９．２０％（Ｐ）、７７．４５％和８４．８１％（Ｍ）、８１．２５％和８９．２０％（Ｃ）、９７．８５％和９６．２０％（Ｇ）。结论广州ＨＥＶ株有一定程度的变异。     

中国狂犬病毒疫苗株（5aG株）糖蛋白基因的克隆与序列分析

用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法从中国狂犬疫苗株（５ａＧ株）病毒感染细胞中扩增得到该株病毒糖蛋白基因，并进行序列测定。结果表明该基因开放阅读框架全长１５７５ｂｐ，编码５０５个氨基酸的成熟糖蛋白及Ｎ－端１９个氨基酸的信号肽，该基因与其他株系相应基因比较，核酸序列同源性为８８％～９１％，氨基酸序列同源性为８７％～９０％，其中膜外区同源性高于膜内区及跨膜区同源性。糖蛋白中重要功能区段嗜乙酰胆碱受体区段、抗原位点３等在个株系间高度保守。     

中国广西狂犬病毒野毒株（CGX89—1株）糖蛋白基因核…

本报告了中国广西狂犬病毒野毒株（ＣＧＸ８９－１株）糖蛋白基因ｃＤＮＡ的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列。ＣＧＸ８９－１株的糖蛋白基因从起始密码ＡＴＧ到终止密码ＴＡＡ共有１５７５个核苷酸残基，可编码形成５２４个氨基酸残基的多肽链，经修饰后形成具有５０５个氨基酸残基构成的狂犬病毒糖蛋白。ＣＧＸ８９－１株的糖蛋白基因和核苷酸组成分别为：Ａ占２７．１１％，Ｔ占２６．２９％，Ｃ占２１．９７％和Ｇ占２４．６３％     

肝癌病人血清中庚型肝炎病毒非结构基因（NS）5区cDN …

通过逆转录－套式－聚合酶链反应，从２例肝癌患者血清中扩增出长９９４ｂｐ的庚型肝炎病毒（ＨＧＦ）ｃＤＮＡ序列，聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物纯化后以双脱氧末端终止法从双向直接测定其序列。结果，所分离的２株ＨＧＶ ＮＳ５区９９４ｂｐ核苷酸与国外已发表的３株ＨＧＶ序列比较，同源性为８７．２１％￣９３．６７％；２株间的同源性为９３．９２％。根据所测得的ｃＤＮＡ序列推导出其编码的３１３氨基酸序列，在氨基酸水平上